CC BY
112
Химия растительного сырья. 2012. №2. С. 111-117.
УДК 630.187:630.425
ЗАВИСИМОСТЬ СОСТАВА ЭФИРНОГО МАСЛА ЕЛИ КАНАДСКОЙ PICEA GLAUCA (MOENCH) VOSS. ОТ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ ОБСТАНОВКИ РЕГИОНА ПРОИЗРАСТАНИЯ
© С.А. Ламоткин , Д.С. Владыкина, Е.Д. Скаковский
Белорусский государственный технологический университет, ул. Свердлова, 13а, Минск, 220050 (Республика Беларусь), e-mail: jossby@rambler.ru
Методом гидродистилляции получено эфирное масло ели канадской, произрастающей на территории с различным уровнем загрязнения. Измерено содержание серы и тяжелых металлов в отобранных образцах хвои. Газохроматографическим методом исследован компонентный состав масел. Установлена зависимость количественного содержания компонентов эфирного масла от уровня загрязнения хвои ели.
Ключевые слова: ель канадская, эфирное масло, терпены, тяжелые металлы,
Введение
На развитии древесных растений, произрастающих в городе, сказывается влияние многих негативных атмосферных факторов, которые отражаются на метаболизме растений, прежде всего ассимиляционного аппарата, проявляются в его морфометрических показателях и компонентном составе [1],
Взаимодействие растений с металлами, которые находятся в атмосфере и почвогрунтах, с одной стороны, обеспечивает миграцию элементов в пищевых цепях, с другой - происходит перераспределение избытков некоторых элементов, в основном техногенного происхождения, в биосфере. Способность растений концентрировать в своих органах и тканях часть промышленных эксгалатов получила широкое распространение в практике создания санитарно-защитных лесополос, однако механизмы устойчивости растений к промышленным поллютантам и их адаптационный потенциал исследованы недостаточно [2],
Наиболее удобными биоиндикаторами атмосферного загрязнения среды являются хвойные деревья, так как они отличаются высокой чувствительностью к повышенным концентрациям токсических веществ в окружающей среде, а также возможностью проведения исследований в течение всего года [3],
Учитывая тот факт, что хвойные насаждения составляют свыше 60% лесов Республики Беларуси и одним из видов интродуцированных хвойных растений, используемых в системе лесоустройства, является ель канадская (Picea glauca), в данной работе изучен терпеноидный состав эфирного масла ели канадской в
качестве метода фитоиндикации городской среды.
Экспериментальная часть
Ель канадская относится к семейству Pina-ceae род Picea, Ареал произрастания и родина вида -Северная Америка от Северной Аляски на западе до Ньюфаундленда на востоке. На севере территория распространения ограничена лесотундрой, на юге -штатами севером Монтаны, Мичигана, Мэна, Вис-
* Автор, с которым следует вести переписку,
Ламоткин СергейАлександроеич - доцент кафедры физико-химических методов сертификации продукции, кандидат химических наук, e-mail: jossby@rambler.ru
Владыкина Дарья Сергеевна - магистр биологических наук, аспирант кафедры химической переработки древесины, e-mail: laj-za@yandex.ru
Скаковский ЕвгенийДоминикович - доцент кафедры физико-химических методов сертификации продукции, кандидат химических наук, e-mail: spektr@ifoch.bas-net.by
консина, также изолированные популяции встречаются в Южной Дакоте и Вайоминге. Представляет собой вечнозеленое хвойное дерево, высотой 15-20 м, редко до 40 м. Диаметр ствола - до 1 м. Кора тонкая, чешуйчатая. Крона узкоконическая у молодых деревьев, у старых деревьев становится цилиндрической. Хвоя длиной 12-20 мм, ромбической формы в сечении, сине-зеленая сверху и сине-белая снизу. Шишки слабо цилиндрические, длиной 3-7 см и шириной до 2,5 см. Цвет шишек зеленый или красноватый, зрелая шишка коричневая. Семена черные, длиной 2-3 мм со светло-коричневым крылом длиной 5-8 мм. Синонимы -ель сизая, ель белая (Picea canadensis (Mill.) Britton, Stems & Poggenb).
Образцы еловой хвои отбирали в лесоохранной зоне Минской области, свободной от промышленных объектов, расположенной на расстоянии 70 км от города (№1), в центральном ботаническом саду Минск (№2) и промышленной зоне Минска (№3). Образцы древесной зелени отбирали с деревьев 20-30летнего возраста, в осенние и зимние месяцы - период максимального содержания эфирного масла в хвое [4]. Каждую пробу помещали в маркированную бумагу и полиэтиленовые пакеты для минимизации потерь наиболее летучих компонентов.
Из отобранных образцов хвои по методике, предложенной в работе [5], составляли сборную пробу от 10-15 деревьев, с которой и осуществляли дальнейшие эксперименты.
Процесс выделения эфирного масла проводили не позднее чем через 4-6 ч после отбора [6]. Отобранную хвою отделяли от стволиков, измельчали до размера 3-5 мм, составляли навеску от 200 до 250 г и из нее методом гидродистилляции отгоняли эфирное масло в течение 4-х ч. Содержание эфирного масла в древесной зелени ели канадской составляло 2% из расчета на абсолютно сухое сырье согласно ГОСТу [7]. Также для выделенных эфирных масел была измерена такая интегральная характеристика качества, как коэффициент рефракции при 20 °С [8]. Качественный и количественный анализ состава масел осуществляли методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) без предварительного фракционирования и спектроскопии ЯМР.
Хроматографический анализ выполняли на хроматографе Кристалл 5000.1 с использованием кварцевой капиллярной колонки длиной 60 м с нанесенной фазой - 100%-ным диметилсилоксаном. Условия хроматографирования: изотермический режим при 70 °С в течении 20 мин, затем программированный подъем температуры со скоростью 2 °С/мин до 150 °С с выдержкой при конечной температуре 40 мин. Температура испарителя 250 °С.
Запись спектров ЯМР проводилась на спектрометре AVANCE-500 (Германия) с рабочими частотами для ядер и 13С - 500 и 125 МГц соответственно. Для количественного анализа образцов готовились растворы эфирных масел определенной концентрации в CDCl3 (1 + 10%). Химические сдвиги сигналов протонов соединений определяли по сигналу хлороформа (СНС13, 5 = 7,27 м.д.), который присутствует в качестве примеси в дейтерированном растворителе. Запись спектров проводили с учетом релаксации протонов всех соединений.
Идентификацию отдельных компонентов осуществляли с использованием эталонных соединений, спектров ЯМР, а также на основании известных литературных данных по индексам удерживания [9].
При записи спектров 13С в качестве реперного также использовали сигнал растворителя (5 = 77,7 м.д.). Для количественного анализа спектры записывали с подавлением взаимодействия с протонами с использованием импульсных последовательностей, исключающих проявление эффекта Оверхаузе-ра, и с задержками между импульсами >5 Ть где Ti - время спин-решеточной релаксации наиболее медленно релаксирующих ядер. Для уменьшения времени спин-решеточной релаксации в растворы добавляли трис-ацетилацетонат хрома. Поскольку релаксант незначительно изменяет химические сдвиги ядер 13С компонентов эфирных масел, для контроля были записаны спектры доступных соединений, присутствующих в этих маслах: а-пинена, Д3-карена, ß-пинена, а-терпинеола, камфена, лимонена, борнилацетата, и-цимола, мирцена, ß-фелландрена, а-фелландрена, ß-кариофиллена, борнеола, у-терпинена, терпинолена, камфары. Отнесение сигналов проводилось с использованием методики записи спектров с переносом поляризации (DEPT).
Минерализацию образцов хвои выполняли на приборе микроволновой подготовки МС-6 по методике, описанной в инструкции к прибору. Анализ содержания тяжелых металлов в хвое проводили на атомноабсорбционном спектрометре с Avanta GM с электротермическим атомизатором по стандартной методике.
Обсуждениерезулътатов
Известно, что хвоя древесных пород основную часть загрязнений получает из окружающего воздуха и дождевых вод, а не через корневую систему, ствол и ветви. Поэтому основными токсикантами, воздействующими на ели и накапливающимися в них, являются соединения серы, в основном диоксид серы, и тяжелые металлы [10]. Как видно, содержание токсичных элементов существенно отличается в районах отбора образцов хвои (табл. 1.). При этом следует отметить, что содержание токсичных элементов в хвое ели, отобранной в ботаническом саду (№2), достаточно высокое по отношению к экологически чистой зоне и находится практически на уровне городских насаждений.
Наиболее токсичными элементами являются РЬ и Сё, которые не участвуют в метаболизме растений и токсичны даже в очень низких концентрациях. В условиях Минска данные тяжелые металлы накапливаются в хвое еловых насаждений, однако полученные результаты не выходят в целом за пределы ПДК, которые для свинца равны 10-20 мг/кг; для кадмия составляют 1-6 мг/кг. Количество 2п также не достигает пороговых значений для растений (300 мг/кг), хотя обнаружено на отдельных участках повышенное содержание 100-200 мг/кг. Концентрация никеля и хрома также, как правило, не превышает 10 мг/кг, что значительно ниже порога токсичности по N1 50 мг/кг. Исходя из анализа загрязненности образцов хвои токсичными элементами, следует, что на исследуемой территории присутствуют различные источники загрязнений, что хорошо согласуется с большим разнообразием предприятий в промзоне Минска, а также вокруг ботанического сада.
Полученные данные по содержанию эфирного масла в хвое еловых насаждений, произрастающих на лесных и городских территориях, свидетельствуют о сложном характере его накопления. Содержание выделенного масла в «чистых» образцах составляет 2%, эфирного масла в более загрязненных образцах - от
0,7 до 1%, уменьшение содержания эфирного масла с увеличением загрязнения также подтверждаются данными работы [11]. Следует отметить, что такая закономерность характерна как для ели канадской, так и для других видов елей, что свидетельствует о подобии путей биосинтеза эфирных масел [12]. Следует отметить, что содержание эфирного масла в ассимиляционном аппарате ели канадской значительно выше, чем для ели европейской, наиболее широко используемой для озеленения городских территорий. При этом хорошо известно, что именно высокое содержание эфирного масла благотворно сказывается на оздоровле-нии промышленных и бытовых объектов [13].
Традиционно суммарной характеристикой эфирного масла считается показатель преломления. Величина коэффициента рефракции эфирного масла незначительно зависит от степени загрязненности образ -цов хвои и меняется при переходе от «чистых» образцов №1 к загрязненным №2 и 3 от 1,4730 до 1,4734 и
1,4736 соответственно.
Не менее чувствительным индикатором аэротехногенного загрязнениям воздушной среды служит варьирование компонентного состава эфирного масла ассимиляционного аппарата елей. По-видимому, оно обусловлено некоторым изменением метаболизма, возникающим в растении под влиянием аэротехноген-ных выбросов.
Как отмечалось ранее, одним из современных методов, позволяющим наглядно и экспрессно проанализировать состав эфирных масел, является спектроскопия ЯМР [14]. На рисунке 1 представлены спектры 'Н ЯМР эфирного масла ели канадской образцов №1 и 2. Качественно спектры подобны, однако интенсивности линий, принадлежащих отдельным соединениям, существенно отличаются, что указывает на различное количественное их содержание. Так, интегральные интенсивности для наиболее характеристических линий камфена (4,46 и 4,69 м.д.) и лимонена (4,67 и 5,36 м.д.) различаются в несколько раз. Исходя из анализа спектров очевидно, что в образце №1 содержится значительно больше пиненов и камфена, а в образце №2 их содержание снижается и возрастает содержание лимонена. В обоих образцах наблюдается высокое содержание борнилацетата.
Таблица 1. Содержание токсичных элементов в хвое ели канадской
Место
Содержание элементов в хвое, мг/кг абс. сух. массы
отбора Б еа Со Си N1 РЬ 7п Мп Сг
№1 895,0 0,043 0,167 2,81 2,61 0,267 74,5 107,8 0,045
№2 1016,1 0,068 0,131 3,73 4,05 0,701 92,6 209,8 0,320
№3 1690,1 0,040 0,201 6,20 9,72 1,422 194,1 286,3 1,430
7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0
ppm (t1)
7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0
ppm (t1)
Рис. 1. Спектры 1Н ЯМР эфирного масла ели канадской: а - образец №1; б - образец №2 (1 - камфен, 2 - лимонен, 3 - борнилацетат, 4 - мирцен, 5 - р-пинен, 6 - а-пинен)
Компонентный состав эфирного масла ели канадской представлен в таблице 2. В составе эфирного масла методом ГЖХ было идентифицировано 38 соединений, что в количественном выражении составило более 90% от общего числа компонентов масла. Как видно из таблицы 2, качественно состав масла постоянен для всех проанализированных образцов. Однако количественно содержание отдельных компонентов существенно зависит от степени загрязненности образцов. Наиболее интересно отметить закономерности изменения количества таких компонентов, как а-пинен и камфен, содержание которых значительно ниже в загрязненных образцах, а также лимонена, содержание которого возрастает с увеличением загрязненности хвои. Поскольку установлено, что процесс образования монотерпеноидов имеет определенную очередность и тормозится в зависимости от рода семейства Ртасвав для сосны после а-пинена, а у пихты после борнилацетата [15], логично предположить, что для ели канадской основным соединением, через которое проходит биосинтез монотерпеноидов, является лимонен. Согласно общей схеме образования монотерпеноидов, первоначально по реакции циклизации геранил-катион образует катион циклогексановой структуры с последующим образованием лимонена и а-терпинеола [16]. Как видно из таблицы 2, содержание этих компонентов возрастает в загрязненных образцах. Образованию а-пинена, камфена и других бицикличе-ских монотерпенов предшествуют реакции, связанные с гидридным сдвигом, меняющим положение катионного центра в интермедиате. Логично предположить, что увеличение техногенной нагрузки, а именно присутствие токсичных элементов, ингибирует протекание данных реакций и тем самым приводит к изменению механизма биосинтеза компонентов эфирных масел.
Таблица 2. Состав эфирного масла хвои в зависимости от района произрастания
№ п/п Время удерживания, мин Компонент Содержание, % масс.
№1 №2 №3
1 18,45 Сантен 5,08 0,11 0,04
2 22,35 Трицикл ен 2,01 0,33 0,24
3 22,65 а-туйен 0,01 0,02 0,01
4 23,55 а-пинен 8,99 2,32 2,42
5 25,03 Камфен 20,81 5,84 6,59
6 25,23 а-фенхен 0,03 - 0,01
7 27,18 Сабинен 0,07 0,16 0,06
8 27,67 Р-пинен 1,11 0,80 0,72
9 28,97 Мирцен 3,01 2,03 1,14
10 30,43 а-фелландрен 0,17 0,14 0,08
11 31,29 Д3-карен 0,18 0,16 0,07
12 31,74 а-терпинен 0,07 0,16 0,15
13 32,05 и-цимол 0,08 0,10 0,07
14 33,11 Лимонен 4,08 6,58 8,27
15 34,81 транс-оіщмен 0,03 0,12 0,02
16 35,97 у-терпинен 0,06 0,25 0,21
17 39,02 Терпинолен 0,59 0,69 0,68
18 39,64 Линалоол 0,24 0,64 0,16
19 41,07 Фенхол 0,03 0,06 0,04
20 43,20 Камфара 0,11 24,48 45,71
21 43,96 Р-терпинеол 0,03 0,03 0,03
22 45,87 Борнеол 1,09 3,49 2,41
23 46,96 Терпинен-4-ол 0,13 1,25 1,07
24 47,94 а-терпинеол 0,31 2,48 1,12
25 48,61 у-терпинеол 0,01 0,06 0,03
26 51,77 Метилтимол 0,02 0,04 0,05
27 56,55 Борнилацетат 38,91 33,50 20,39
28 61,10 а-терпинеолацетат 0,20 0,11 0,03
29 64,05 а-кубебен - 0,09 -
30 65,72 а-иланген 0,19 0,06 0,05
31 68,65 Р-кариофиллен 0,22 0,13 0,03
32 72,01 а-гумулен 0,15 0,06 0,01
33 74,91 у-мууролен 1,05 0,12 0,16
34 75,59 Р-селинен 0,02 0,01 0,01
35 76,10 а-селинен 0,22 0,08 0,06
36 77,00 а-мууролен 0,54 0,24 0,18
37 78,68 у-кадинен 0,76 0,26 0,20
38 79,85 5-кадинен 2,69 1,22 0,85
Всего 93,30 88,26 93,37
Увеличение содержания в загрязненных образцах камфары и терпеновых спиртов хорошо согласуется с предположением об увеличении доли окислительных процессов в данных образцах и наблюдаемым снижением соответствующих им предшествующих терпенов.
В составе эфирного масла принято выделять три фракции: монотерпеновую, сесквитерпеновую и кислородсодержащие производные. Перераспределение вклада отдельных фракций представлено на рисунке 2. Следует отметить, что для ели канадской, как и для ели европейской, с увеличением техногенной нагрузки наблюдается общее снижение монотерпеновой фракции. В то время как вклад кислородсодержащих соединений увеличивается, что предположительно связано с активацией окислительных процессов и хорошо соответствует данным работы [17].
и Всего монотериеноидов
Всего
кислородсодержащих соединений
Рис. 2. Распределение отдельных
Всего
сесквитерпеноидов фракций в эфирном масле ели
канадской
Выводы
Таким образом, проведенные исследования показали, что состав эфирного масла ели канадской может использоваться в качестве фитоиндикатора состояния окружающей среды. Высокое содержание эфирного масла в ассимиляционном аппарате еловых насаждений способствует более высокому насыщению атмосферы биологически активными веществами и оздоровлению окружающей среды, по сравнению с традиционно используемыми для озеленения городов видами елей. Загрязнение хвои ели токсичными элементами существенно влияет на процессы биосинтеза терпеноидов эфирного масла и на их количественное содержание.
Список литературы
1. Кравкина И.М. Влияние атмосферных загрязнителей на структуру листа // Ботанический журнал. 1991. Т. 76, №1. С. 3-9
2. Derome J., Lindroos A.J. Effects of heavy metal contamination on macronutrient availability and acidification parameters in forest soil in the vicinity of the Harjavalta Cu-Ni Smelter, SW Finland // Environmental pollution. 1998. Vol. 99. Pp.141-148.
3. Собчак P.O. Диагностика состояния видов хвойных в зонах техногенного загрязнения Республики Алтай // Вестник Томского государственного университета. 2009. №325. С. 185-191.
4. Есякова О.А., Степень Р.А. Индикация загрязнения атмосферы Красноярска по морфометрическим и химическим показателям хвои ели сибирской // Химия растительного сырья. 2008. №1. С. 143-148.
5. Чернодубов А.И., Дерюжкин Р.И. Эфирные масла сосны: состав, получение, использование. Воронеж, 1990. 112 с.
6. Стародубов А.В., Домрачев Д.В., Ткачев А.В. Состав эфирного масла кедрового стланика (Pinus Pumila) из Хабаровского края // Химия растительного сырья. 2010. №1. С. 81-86.
7. ГОСТ 24027.2-80. Сырье лекарственное растительное. Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирного масла.
8. ГОСТ 14618.10-78. Масла эфирные, вещества душистые и полупродукты их синтеза. Методы определения плотности и показателя преломления. М., 1994. С. 109-114.
9. Mardarowicz M., Wianowska D., Dawidowicz A.L., Sawicki R. Comparison of terpen composition in Engelmann spruce (Picea Engelmann) using hydrodistillation, SPME and PLE // A journal of biosciences. 2004. C. 641-648.
10. Сарнацкий В.В. Ельники: формирование, повышение продуктивности и устойчивости в условиях Беларуси. Минск, 2009. 334 с.
11. Сотникова О.В., Степень Р.А. Эфирное масло сосны как индикатор загрязнения среды // Химия растительного сырья. 2001. №1. С. 79-84.
12. Tholl D. Terpene synthases and the regulation, diversity and biological roles of terpene metabolism // Current option in plant biology. 2006. №9. C. 1-8.
13. Рогов A.B., Рогов В.А., Степень Р.А. Оздоровление воздушной среды производственных помещений зелеными растениями // Химия растительного сырья. 2008. №4. С. 181-184.
14. Скаковский Е.Д., Ламоткин С.А., Шпак С.И., Тычинская Л.Ю., Гайдукевич O.A., Ламоткин А.И. Применение спектроскопии ЯМР для анализа состава эфирного масла хвои сосны // Журнал прикладной спектроскопии. 2006. Т. 73, №2. С.246-249
15. Левин Э.Д., Репях С.М. Переработка древесной зелени. М., 1984. 120 с.
16. Племенков В.В. Химия изопреноидов. Глава 3. Биосинтез изопреноидов // Химия растительного сырья. 2005. №3. С. 91-108.
17. Степень Р.А. Экологическая и ресурсная значимость летучих терпенов сосняков Средней Сибири // Химия растительного сырья. 1999. №2. С. 125-129.
Поступило в редакцию 5 июня 2011 г. После переработки 28 сентября 2011 г.
Lamotkin S.A.*, Vladykina D.S., Skakovsky E.D. DEPENDENCE OF COMPOSITION OF ESSENTIAL OIL OF A WHITE SPRUCE PICEA GLAUCA (MOENCH) VOSS. FROM AN ECOLOGICAL SITUATION OF REGION OF GROWTH
Belarusian State Technological University, Sverdlova str., 13a, Minsk, 220006 (Belarus), e-mail: jossby@rambler.ru
Essential oil from a white spruce, growing on terrain with a various level of pollution, is received by the method of hydrodistillation. The maintenance of sulphur and heavy metals is measured in the culled samples of needle. The componental composition of essential oils is investigated by the method of gas-liquid chromatography. Dependence of the quantitative maintenance of ingredients of essential oil on a level of pollution of spruce needle is positioned.
Keywords: a white spruce, essential oil, terpenes, heavy metals.
References
1. Kravkina I.M. Botanicheskii zhurnal, 1991, vol. 76, no. 1, pp. 3-9. (in Russ.).
2. Derome J., Lindroos A.J. Environmental pollution, 1998, vol. 99, pp.141-148.
3. Sobchak R.O. Vestnik Ttomskogo gosudarstvennogo universiteta, 2009, no. 325, pp. 185-191. (in Russ.).
4. Esiakova O.A., Stepen' R.A. Khimiia rastitel’nogo syr’ia, 2008, no. 1, pp. 143-148. (in Russ.).
5. Chernodubov A.I., Deriuzhkin R.I. Efirnye masla sosny: sostav, poluchenie, ispol’zovanie. [Essential oil of pine:
structure, production, use]. Voronezh, 1990, 112 p.
6. Starodubov A.V., Domrachev D.V., Tkachev A.V. Khimiia rastitel’nogo syr’ia, 2010, no. 1, pp. 81-86. (in Russ.).
7. GOST 24027.2-80. Syr'e lekarstvennoe rastitel'noe. Metody opredeleniia vlazhnosti, soderzhaniia zoly, ekstraktiv-nykh i dubil'nykh veshchestv, efirnogo masla. [Raw medicinal plant. Methods for determination of moisture, ash, extractives and tannins, volatile oil]. Moscow, 1994. (in Russ.).
8. GOST 14618.10-78. Masla efirnye, veshchestva dushistye i poluprodukty ikh sinteza. Metody opredeleniia plotnosti i pokazatelia prelomleniia. [Essential oils, aromatic substances and intermediates for their synthesis. Methods for determining the density and refractive index]. Moscow, 1994, pp. 109-114. (in Russ.).
9. Mardarowicz M., Wianowska D., Dawidowicz A.L., Sawicki R. A journal of biosciences, 2004, pp. 641-648. (in Russ.).
10. Sarnatskii V.V. El'niki: formirovanie, povyshenie produktivnosti i ustoichivosti v usloviiakh Belarusi. [Spruce: formation, productivity and sustainability in Belarus]. Minsk, 2009. 334 p. (in Russ.).
11. Sotnikova O.V., Stepen' R.A. Khimiia rastitel'no-go syr'ia, 2001, no. 1, pp. 79-84. (in Russ.).
12. Tholl D. Current option in plant biology, 2006, no. 9, pp. 1-8.
13. Rogov A.V., Rogov V.A., Stepen' R.A. Khimiia rastitel'nogo syr'ia, 2008, no. 4, pp. 181-184. (in Russ.).
14. Skakovskii E.D., Lamotkin S.A., Shpak S.I., Tychinskaia L.Iu., Gaidukevich O.A., Lamotkin A.I. Zhurnalprikladnoi spektroskopii, 2006, vol. 73, no. 2, pp. 246-249. (in Russ.).
15. Levin E.D., Repiakh S.M. Pererabotka drevesnoi zeleni. [Recycling wood greens]. Moscow, 1984. 120 p.
16. Plemenkov V.V. Khimiia rastitel'nogo syr'ia, 2005, no. 3, pp. 91-108. (in Russ.).
17. Stepen' R.A. Khimiia rastitel'nogo syr'ia, 1999, no. 2, pp. 125-129. (in Russ.).
Received June 5, 2011 Revised September28, 2011
* Corresponding author.
