CC BY
35
КЛИНИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА КАЗАХСТАНА №3,4 (22,23) 2011
7. СОВРЕМЕННАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ
СТАТЬИ
УДК 616.3;616-07:061.62
ЗАВИСИМОСТЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ МЕТОДОМ ИФА ОТ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ АНАЛИТИЧЕСКИХ СИСТЕМ
Н.В. Попова, Е.В. Светличная, А.Д. Ким, А.Б.Токбергенова, Л.В. Козина Национальный научный медицинский центр, Астана, Казахстан Центр по профилактике и борьбе со СПИД, Астана, Казахстан
Рост показателей заболеваемости вирусными гепатитами, высокий уровень хронизации процесса с возможным исходом в цирроз и первичный рак печени определяют повышенное внимание к этой группе заболеваний, актуальность и важность подбора рациональных методов диагностики, лечения и профилактики [1].
При диагностике гепатитов основными направлениями лабораторной службы являются: разработка и выбор наиболее информативных методов выявления маркеров инфицирования, определение критериев объективной оценки полученных результатов, разработка оптимальных алгоритмов проведения лабораторных исследований, внедрение системы повышения качества выявления маркеров инфицирования [2]. Сложность в диагностике вирусных гепатитов связана с тем, что антигены гепатита циркулируют в чрезвычайно низких концентрациях, поэтому тест-системы, необходимые для диагностики должны обеспечивать максимально полное выявление носителей вируса [3]. Одна из наиболее важных проблем при проведении исследований на наличие остаются ложнопозитивные результаты. Их появление может быть связано с неспецифическим взаимодействием компонентов реакции, возможными перекрестными реакциями с другими вирусными антигенами и многими другими факторами. Уровень ложнопозитивных результатов при выявлении гепатитов с применением различных диагностических тест-систем может достигать 10-20%. Существование ложнопозитивных результатов ставит перед лабораторным работником задачу их разграничения с истинным выявлением вируса [4,5].
Лабораторная диагностика вирусного гепатита основана на выявлении специфических антигенов и соответствующих антител в крови, а также вирусных нуклеиновых кислот. Наиболее широко в диагностике вирусного гепатита В (ВГВ) используется определение HBsAg, анти-HBs класса IgM, НВеАд. Все применяемые методы исследования для определения специфических маркеров ВГВ можно разделить на 2 группы - иммунохимический и молекулярно-биологические. В иммунохимиче-ских методах основное место принадлежит иммуноферментному анализу (ИФА) с его высокой чувствительностью и специфичностью, простотой проведения [6,7].
В настоящее время исследования на маркёры вирусного гепатита проводятся в любой лаборатории, имеющей отдел ИФА. Интерес к более детальному изучению вопроса диагностики вирусных гепатитов и аналитических ошибок, которые могут возникнуть на этапе выполнения лабораторных исследований, был связан с обращением пациентов, прошедших исследования на эти маркёры в разных лабораториях города Астаны. У ряда пациентов имелись противоречивые результаты лабораторных исследований.
Нашей задачей было провести сравнительный анализ на выявление таких маркёров ВГВ как HBsAg, anti-HBcor IgM и anti-HCV методом ИФА, с использованием различных тест-систем и методов. Для исследования маркёров были использованы тест-системы «Вектогеп HBsAg» и «Бест anti-HCV», производства фирмы «Вектор-Бест» (Россия), выполняемые полуавтоматическим методом и тест-системы «HBsAgll» и «А^ЖСМ> фирмы «Roche Diagnostics» (Швейцария, Германия) для анализатора закрытого типа «Elecsys - 2010» фирмы «Roche Diagnostics» методом электроиммуннохемилюминис-ценции (ЭИХЛ).
Для тестирования были отобраны 9 проб, которые имели отрицательные результаты HBsAg как полуавтоматическим, так и автоматическим методами, но при исследовании методом ЭИХЛ были позитивными по другим серологическим маркерам гепатита В: аnti-HBcor IgM - 1 проба, а^ЖВ^г total - 5 проб, а^ЖВе IgG - 3 пробы и аnti-HBs - 2 пробы. Получение позитивных результатов тестирования опытных образцов на эти маркёры ВГВ, выполненные методом ЭИХЛ побудило нас продолжить проведение сравнений методов и тест-систем с целью изучения и устранения аналитических ошибок, улучшения качества диагностических исследований нашей лаборатории. Проведённые нами исследования 5 образцов на маркёр ВГС показал, что все 5 сывороток, исследованных по данному параметру тест-системами «Бест anti-HCV», производства фирмы «Вектор-Бест», имели положительный результат. В то время, 4 сыворотки из 5, исследованных с помощью тест-системы «А^ЖСМ> (Roche
Diagnostics), на анализаторе «Elecsys 2010» были отрицательными, а в одной имели положительный результат.
Следующим этапом нашего исследования было определение маркёра HBcorAg-IgM в опытных образцах. С использованием тест-систем «Векто HBcorAg-IgM», производства фирмы «Вектор-Бест» было исследовано 6 проб, из которых 5 имели положительный результат, а 1-отрицательный. Необходимо отметить, что тест-система «Векто HBcorAg-IgM» предназначена для выявления иммуноглобулинов класса М к core-антигену ВГВ в сыворотке крови методом твердофазного анализа. Специфичность набора при исследовании отрицательных сывороток стандартной панели предприятия составляет 100%. Чувствительность набора - выявление специфичности IgM к HBcorAg в стандартном образце предприятия (СОП+) в титре не менее 1:3200. Исследования этих же образцов методом ЭИХЛ показали, что во всех 6 сыворотках результат был отрицательный.
При проведении анализа маркеров ВГВ методом ИФА рекомендуется проведение первичного исследования минимум на двух тест-системах от разных производителей, а в случае выявления хотя бы одного положительного или сомнительного результата - проведение третьего подтверждающего исследования на специальных подтверждающих тестах (реакция нейтрализации), либо тест-системах третьей фирмы, (либо другой серии) [8,9]. Положительный результат при тестировании на специфические антитела класса IgM с использованием диагностикумов, не предусматривающих предварительную сорбцию ревматоидного фактора, должен выдаваться только после исключения его присутствия в тестируемой пробе. Подобный подход к проведению анализа сопровождается увеличением себестоимости проводимого исследования и затратой дополнительного рабочего времени персонала. Но самое главное, что даже эти дополнительные затраты, не всегда приводят к получению в итоге правильного результата исследования.
Необходимо отметить, что при определении маркёров вирусного гепатита возможно получение не только ложноположительного результата, но и ложноотрицательного. Проведенные нами исследования показали, что при тестировании образцов полуавтоматическим методом с использованием тест-систем «Бест anti-HCV» («Вектор-Бест») были получены коэффициенты позитивности 0,06-0,08, которые позволяют результат исследования считать отрицательным. Для подтверждения результата были проведены подтверждающие тесты «Anti-HCV-спектр-ОМ» производства «Диагностические системы» (Россия) и тест-система «Anti-HCV Monolisa Ultra» фирмы «BioRad» (США) методом полуавтоматического ИФА. Полученные результаты подтвердили отрицательный результат в исследуемых образцах как с применением тест-системы «Anti-HCV-спектр-ОМ», так и с тест-системой «Anti-HCV Monolisa Ultra» (коэффициенты позитивности 0,18-0,26). Далее эти опытные пробы были проанализированы на автоматическом анализаторе с использованием тест-систем «Anti-HCV»(Roche Diagnostics). Результат исследования показал, что в этих образцах имелись значения коэффициентов позитивности 1,05-1,24, которые были выше 1,0 и поэтому не могли быть приняты как отрицательные. Результаты исследования с получением таких пограничных значений объясняются наличием еще недостаточно высокого титра антител в крови, но однозначно указывают на их наличие, поэтому считаются положительными. Таким образом, сравнение тест-систем и методов показало, что более чувствительными тестами определения маркёров гепатитов являются тест-системы, разработанные для автоматических анализаторов. Кроме этого, при выполнении полуавтоматических методов процент аналитических ошибок выше, чем при выполнении автоматическим методом.
Неоспоримые преимущества плашечного иммуноферментного анализа: относительная дешевизна, возможность массовых скрининговых постановок, значительно более высокая чувствительность в сравнении с тест-системами, основанными на реакциях гемагглютинации, в настоящее время уступают все более часто выявляемой неудовлетворенности в специфичности и чувствительности стандартных ИФA-систем к "низкотитражным" сывороткам [10,11].
Многочисленные данные сравнительного тестирования иммунодиагностикумов свидетельствуют о реальном расхождении фактически выявляемых параметров специфичности и чувствительности с паспортными данными фирм-изготовителей. Хотя, сама по себе, импортная марка диа-гностикума далеко не всегда гарантирует его высокое качество [12]. Более того, даже действительно высококачественные диагностикумы на этапе преаналитики подвергаются на пути от производителя к лаборатории нарушениям температурного режима хранения, а в самих лабораториях - многочисленным отступлениям от "идеального" технологического режима (качество воды, посуды, наконечников, автоматических пипеток, вошеров, ридеров, термостатов и т.д.) значительно теряют свои исходные параметры. Наличие даже одного из этих несоответствий оказывает своё негативное влияние на проведение анализа и, как правило, на результат исследования, а следовательно на диагноз и тактику лечения [13]. .
Необходимость гарантированной уверенности в результате иммуноферментного выявления маркеров вирусных гепатитов диктует важность внедрения и совершенствования системы контроля качества иммуноферментных исследований, складывающейся из следующих основных мероприятий: тестирование иммунодиагностикумов с использованием референтных стандартных панелей сывороток и (или) референтных тест-систем; контроль "на рабочем месте" за соблюдением всех метрологи-
НAУЧНО-ПРAКТИЧЕСКИЙ ЖУРНAЛ
311
ческих параметров технологического режима проведения анализа, включая контроль качества воды, температурного режима и времени инкубации, работы автоматических пипеток и вошера, чистоты используемой посуды и пластика, за правильностью расчетов и выпиской результатов анализа; вну-трилабораторный контроль воспроизводимости результатов с использованием контрольных индивидуальных сывороток, а также методом случайных и повторных проб; внешний межлабораторный контроль качества осуществляющийся путем регулярного участия в системах внешней оценки качества клинических лабораторных анализов; создание банка "сомнительных" сывороток и направление проб для исследования в референтные лаборатории [14].
Таким образом, выявлена разница в результатах исследования маркеров гепатитов методом ИФА различными аналитическими системами и типами анализаторов. Для совершенствования диагностики вирусных гепатитов и обеспечения качества при оказании медицинской помощи населению Республики Казахстан необходимо объединить усилия менеджеров здравоохранения, клиницистов и специалистов лабораторной службы.
Литература
1. Кузин С.Н., Лисицина Е.В., Самохвалов Е.И и др. Распространение гепатита С и отдельных генотипов вируса гепатита С в регионе с умеренной активностью эпидемического процесса// Вопросы вирусологии, 1999, N2, с.79-82.
2. Сорисон С.Н. Вирусные гепатиты, С-Пб. ,Теза, 1997, 309с.
3. Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы), С-Пб., «Интермедика», 1997 г.,С.113 - 136.
4. Михайлов М.И. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов.- Лаборатория, 1999 г.,№1,С.3-6.
5. Pawlotsky J.M. Diagnostic tests for hepatitis C. Journal of Hepatology, Suppl. 1, Vol 31,1999,71-79.
6. Yuasa T., Ishikawa G., Manabe S., et al. The particle size of hepatitis В virus estimated by fil-tration through microporous regenerated cellulose fibre. J Gen Virol 1991 Aug;72 ( Pt 8):2021-4.
7. Kato N., Ootsuyama Y., Tanaka T., et al.. Marked sequence diversity in the putative envelope proteins of hepatitis С viruses. Vims Res 1992 Feb;22(2):107-23.
8. Georg S., Klinzman D., Schmidt W.N. et al. Antibody negative HCV infection in HIV-positive individuals. Antiviral Therapy., 2000; 5 (Suppl. 1), 10th International, Symposium on Viral Hepatitis and Liver Disease: p. 70.
9. Мукомолов С.Л., Колобов А.А., Плотникова В.А. с соавт. Использование метода серотипи-рования для определения генотипов вируса гепатита. Тезисы международного Фальк симпозиума № 92, СПб, .266с.
10. Афанасьев А.Ю.,Зубов С.В., Жданов Ю.Е., Кривопускова А. В. ИФА-диагностика в разграничении гепатита С острого и хронического течения//Росс. журн. гастроэнтер., колопрокт., 1995, 5, № 3, С.12-14.
11. Peterson J., Green G., lida K., et al., Detection of hepatitis C core antigen in the antibody negative 'window' phase of hepatitis C infection. Vox Sang 2000;78(2):80-5.
12. Hernandez-Aguado I., Bolumar F., Moreno R., et al., False-positive tests for syphilis associated with human immunodeficiency virus and hepatitis В virus infection among intravenous drug abusers. Valencian Study Group on HIV Epidemiology. EurJ Clin Microbiol Infect Dis 1998 Nov;17(ll):784-7.
13. Бондаренко И.Г. Актуальные вопросы контроля качества иммунодиагностики вирусных гепатитов// Лабораторная медицина, №1, 1998, С.15 -18.
14. Момыналиев K.T, Говорун В.М.. Перспективы применения методов ИФА-диагностики в лабораторной службе//Клиническая лабораторная диагностика, 2000, № 4., С.25-32.
УДК 616 - 002.3 - 031. 2 -02
МОНИТОРИНГ ЭТИОЛОГИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ ХИРУРГИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ
Н.М. Бисенова, Н.М. Митус, Э.А. Тулеубаева, А.С. Ергалиева, А.Б. Куанышбекова, Р.Т. Тайшикова Национальный научный медицинский центр, Астана, Казахстан
За последние годы под влиянием селективного действия антибактериальных препаратов произошли изменения в этиологической структуре гнойной хирургической инфекции. Возрос удельный вес различных микроорганизмов - представителей семейства Е^егоЬайепасеае, группы не ферментирующих грамотрицательных бактерий [1,2,3]. Полиэтиологичность современных гнойно-воспалительных процессов требует постоянного контроля за микрофлорой очагов нагноения и продолжения дальнейших исследований в этом направлении [4,5].
В связи с вышеизложенным, целью настоящего исследования явилось изучение динамики этиологической структуры хирургической инфекции за 2006 -2010 годы
