Застосування наноаквахелатів металів для тривалого зберігання грамнегативних бактерій Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

Occupational Health and Safety", 199B; "Профессиональное здоровье в Украине. Эпидемиологический аналіз", 2007; "Гігієна праці. Методи досліджень та санітарно-епідеміологічний нагляд", 2005; "Гігієна праці". Підручник. За ред. Ю.І. Кундієва,

О.П. Явороського, 2011).

За керівництва В.І. Чернюка захищені і отримали дипломи ВАК 3 докторські та 3 кандидатські дисертації, підготовлені та готуються до захисту ще 3 кандидатські дисертації.

Володимир Іванович Чернюк бере активну участь у науково-організаційній роботі. Він є членом Наукової ради з теоретичної і профілактичної медицини НАМНУ, заступником голови Проблемної комісії МОЗ та АМН України "Гігієна праці та профзахворювання"; членом Спеціалізованої вченої ради Д 26.554.01 при Інституті медицини праці АМН України, членом Експертної ради ДАК України з профілактичної медицини; головою конкурсної комісії НАМН України з присудження премій за кращу роботу з профілактичної медицини; вченим секретарем конкурсної комісії НАМН України з присудження премій молодим вченим, головним спеціалістом МОЗ України за фахом "Гігієна праці"; головою комісій з гігієнічного регламентування фізичних чинників, важкості і напруженості праці Комітету МОЗ з гігієнічного регламентування; членом редколегій журналів "Український журнал з проблем медицини праці", "Інформаційний бюлетень з охорони праці".

Володимир Іванович Чернюк нагороджений Почесною грамотою Верховної Ради України, медалями "За доблестный труд", "У пам'ять 1500-ліття Києва", знаком "Отличнику здравоохранения".

Національна академія медичних наук України, Інституту медицини праці,

ДУ "Інститут гігієни та медичної екології ім. О.М. Марзєєва НАМН України",

редколегія журналу "Довкілля та здоров'я".

APPLICATION OF NANOAQUAHELATES OF METALS FOR LONG- TERM STORAGE OF GRAM-NEGATIVE BACTERIA

Brych O.I., Polishchuk O.I., Synetar E.A., Kolesnikov M.M., Kaplunenko V.G.

ЗАСТОСУВАННЯ НАНОАКВАХЕЛАТІВ МЕТАЛІВ ДЛЯ ТРИВАЛОГО ЗБЕРІГАННЯ ГРАМНЕГАТИВНИХ БАКТЕРІЙ

узеї патогенних для людини і тварин мікроорганізмів мають важливе наукове і практичне значення у пізнанні природи патогенного паразитизму, в отриманні та використанні виробничих штамів у різних біо-технологіях, зокрема приготування препаратів для імунізації, отриманні лікарських, харчових та інших біологічно активних речовин. Науковий прогрес у різних областях інфекто-логії від популяційного до молекулярного рівнів (якісна і кількісна характеристика епідемічних штамів збудника, персистенція, інфектонний підхід, концепція генного паразитизму та екологічне культивування патогенних бактерій, управління фазами росту і розвитку мікрокультур, генна інженерія, нанотехнології тощо) необхідно застосувати для удосконалення методів зберігання і вирощування культур патогенних та умовно патоген-

БРИЧ О.І, ПОЛІЩУК О.І., СИНЕТАР Е.О., КОЛЕСНИКОВ М.М., КАПЛУНЕНКО В.Г.

ДУ "Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського НАМНУ", м. Київ, Національний медичний університет ім. О.О. Богомольця, м. Київ, ТОВ "Наноматеріали і нанотехнології", м. Київ УДК:

544.182+661.419.1+543.272]:5

79.84+621.796

ПРИМЕНЕНИЕ НАНОАКВАХЕЛАТОВ МЕТАЛЛОВ ДЛЯ ДЛИТЕЛЬНОГО ХРАНЕНИЯ ГРАМНЕГАТИВНЫХ БАКТЕРИЙ Брич О.И., Полищук Е.И., Синетар Э.А., Колесников М.М., Каплуненко В.Г.

Целью работы было изучение влияния наноаквахелатов металлов Cu, Zn, Mg, Mn, Fe, Se, Ge в составе стабилизирующих сред на жизнеспособность, рост и биологические свойства эталонных штаммов Escherichia coli ATCC 25922 и Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 в процессе длительного хранения.

Исследования проводили с применением бактериологических, биохимических и статистических методов. Установлено, что хранение музейных штаммов микроорганизмов в наномодифицированной среде с селеном эффективнее в сравнении с хранением в традиционной среде, поскольку улучшаются обменные и репаративные процессы грамнегативных бактерий, можно получить значительно большую биомассу жизнеспособных штаммов без потери и изменения их биологических свойств. Для длительного хранения эталонного штамма P. aeruginosa можно использовать глицериновую среду с добавлением наноавахелата германия.

Ключевые слова: наноаквахелаты металлов, жизнеспособность штаммов, биологические свойства.

© Брич О.І, Поліщук О.І., Синетар Е.О., Колесников М.М., Каплуненко В.Г. СТАТТЯ, 2013.

APPLICATION OF NANOAQUAHELATES OF METALS FOR LONG- TERM STORAGE OF GRAM-NEGATIVE BACTERIA

Brych O.I., Polishchuk O.I., Synetar E.A., Kolesnikov M.M., Kaplunenko V.G.

The objective was to study the impact of nanoaquahelates of metals Cu, Zn, Mg, Mn, Fe, Se, Ge in the stabilizing media on viability, growth, and biological properties of reference strains Escherichia coli ATCC 25922 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 during long-term storage.

The study was performed with the help of bacteriological, biochemical and statistical methods.

We determined that a storage of museum microorganism strains in the nanomodified media with selenium was more effective in comparison with a storage in traditional medium as it enhanced a metabolism and reparative processes of Gram-negative bacteria and provided a significantly greater biomass of viable strains without loss and changes in their biological properties. A glycerol supplemented medium with germanium nanoaquahelate can be used for a long-term storage of Pseudomonas aeruginosa reference strain.

Keywords: nanoaquahelates of metals, viability of strains, biological properties.

них мікроорганізмів, які підтримуються у лабораторних або промислових умовах [1].

Для збереження культур у колекціях застосовують різні методи залежно від біологічних особливостей конкретного штаму [2]. Найбільш поширеними методами тривалого зберігання бактерій у практиці роботи мікробіологічних лабораторій науково-дослідних інститутів є методи л іофіл ізації та кріоконсервації. Необхідно також враховувати, що ліофі-лізація та заморожування здатні викликати метаболічні та структурні пошкодження клітин, а також мутаційні зміни їх [3, 4].

Нині перспективним є застосування нанотехнологій у мікробіологічній галузі з метою створення середовищ на основі водного розчину наноак-вахелатів металів для прискорення росту бактерій, збільшення продукції бактеріальної маси, тривалого зберігання різних видів штамів бактерій діагностичного та контрольного значення [5]. Наноаквахела-ти металів являють собою розчин карбоксилованих наноча-стинок металів у деіонізованій воді з слабокислою реакцією (рН 7.0-6.5). Розчин, отриманий фізичним методом (ерозійно-вибуховим способом за методом Каплуненка-Косіно-

ва), за ефективністю і токсичністю значно відрізняється від розчинів металів, отриманих хімічним або електролізним способом, в яких іони металів діють токсично і тому використовуються досить обмежено. Метали у наноаквахелатній формі є значно активнішими, ніж їхні класичні молекулярні форми. Особливістю наноак-вахелатів біогенних металів (міді, цинку, магнію, заліза, селену) є їхня здатність виражено активувати фізіологічні і біохімічні процеси внаслідок прояву корпускулярних, хвильових, квантових та інших властивостей. Крім того, вони мають високу дифузійну рухли-

Вплив стабілізуючих середовищ на життєздатність еталонного штаму

E. coli ATCC 25922 (n=3)

Таблиця 1

Концен- трація препарату Життєздатність (М±т у КУО)? за 3, 7 та 11 місяців зберігання у гліцериновому середовищі з додаванням наноаквахелатів Контроль (за 3, 7 та 11 місяців)

Cu Zn Fe Mg Mn Ge Se

10-1 240±8,9 220±8,6 120±6,3 230±8,8 120±6,3 140±6,8 160±7,3 200±8,2

160±7,3 130±6,6 220±8,6** 280±9,7** 2Б0±9,1** 320±10,3** 140±6,8 1Б0±7,1

0 0 500±12,9** 20±2,6 40±3,7 0 30±3,2 50±4,1

10-2 110±6,1 160±7,3 170±7,Б 210±8,4 1Б0±7,1 190±8,0 140±6,8

100±5,8 180±7,7 230±8,8** 330±10,Б** 2Б0±9,1** 350±10,8** 200±8,2**

0 0 6±1,4 0 20±2,6 0 80±Б,2**

10-3 160±7,3 1Б0±7,1 210±8,4 170±7,5 110±6,1 110±6,1 110±6.1

130±6,6 200±8,2 290±9,8** 280±9,7** 220±8,6** 260±9,3** 210±8,4**

0 0 2±0,8 0 30±3,2 0 1Б0±7,1**

10-4 110±6,1 180±7,7 200±8,2 80±Б,2 100±Б,8 120±6,3 160±7,3

100±5,8 170±7,5 310±10,2** 200±8,2** 250±9,1** 270±9,Б** 210±8,4**

0 0 1±0,6 1±0,6 20±2,6 0 180±7,7**

10-Б 220±8,6 220±8,6 180±7,7 1Б0±7,1 140±6,8 100±Б,8 180±7,7

80±5,2 60±4,5 2Б0±9,1** 2Б0±9,1** 300±10,0** 2Б0±9,1** 280±9,7**

0 0 0 2±0,8 7±1,Б 3±1,0 160±7,3**

Примітка: *КУО — колонієутворююча одиниця на середовищі Ендо;

**p<0,001 — вірогідна різниця між показниками кількості КУО після зберігання у складі наномодифікованого гліцеринового середовища порівняно з контролем.

вість, що також інтенсифікує перебіг процесів обміну речовин. Водні розчини карбокси-лованих наночастинок біогенних металів вже промислово виробляються в Україні (ТУ У 24.1-35291116-004:2009) [6].

Таким чином, розробка стабілізуючих поживних середовищ

з додаванням карбоксилова-них розчинів наноаквахелатів як альтернативного методу тривалого зберігання музейних штамів, особливо за відсутності умов застосування методів ліофілізації та кріокон-сервації, має важливе практичне значення.

Мета роботи — вивчити вплив наноаквахелатів металів у складі середовищ для тривалого зберігання мікроорганізмів на життєздатність, ріст і біологічні властивості музейних еталонних штамів.

Матеріали і методи. Об'єктом дослідження були музейні еталонні штами Escherichia coli ATCC 25922 і Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 та зразки наноаквахелатних розчинів (виробництва компанії "Нано-матеріали і нанотехнології", м. Київ), які містили наночастинки міді у концентрації 1000 мг/л, цинку 2000 мг/л, заліза 1000 мг/л, магнію 3000 мг/л, марганцю 2000 мг/л, германію 1000 мг/л, селену 200 мг/л та являли собою карбоксиловані наночастинки відповідних металів. З представлених зразків наноаквахелатів готували препарати концентрацій 10-1-10-5 та вносили до епендорфів зі стерильним гліцериновим середовищем у кількості 0,1 мл [7]. З добових культур зазначених вище еталонних штамів E. coli і P. aeruginosa, вирощених на середовищі Мюллер-Хінтон за температури 37°С, готували завись у фізіологічному розчині, встановлювали концентрацію 108 КУО/мл за допомогою приладу денситометру DENSI-MAT, вносили у приготовані на-номодифіковані гліцеринові середовища та зберігали за температури 20?С протягом року. За 3, 7 та 11 місяців після заморожування проводили висів культур мікроорганізмів по

0,1 мл за допомогою стерильної піпетки та шпателя на відповідні поживні середовища, які інкубували у термостаті за t 37°С. Оцінку росту та облік кількості життєздатних мікроорганізмів проводили на другу добу

БІОЛОГІЧНІ ФАКТОРИ ДОВКІЛЛЯ

[2]. В якості контролю проводили висів та облік росту вказаних еталонних штамів із середовищ без додавання розчинів наноаквахелатів. Дослідження біологічних властивостей еталонних штамів проводили з використанням автоматичного баканалізатору VITEK 2-compact 1Б (виробництва bioMerieux, Франція).

Результати та їх обговорення. Результати росту еталонних культур E. coli ATCC 2Б922 і P aeruginosa ATCC 278Б3 та їхні біологічні властивості після 3, 7 та 11-місячного терміну зберігання у гліцериновому середовищі з додаванням наноаквахелатів відображені у таблицях 1-3.

Інтенсивність висіву колоній E. coli за три місяці зберігання у гліцериновому середовищі з додаванням частинок Fe, Mg, Mn, Ge та Se була меншою або такою ж, як у контрольному зразку, проте за 7 місяців зберігання у зазначених наномо-дифікованих середовищах (за винятком зразків з додаванням селену у концентраціях 10-110-3) інтенсивність висіву культури E. coli збільшується в 1,5-

3 рази порівняно з контролем. Культура E. coN за 11 місяців кріоконсервації виявилася нежиттєздатною у середовищі з додаванням Cu, Zn, Ge, Fe (щоправда, останній у концентрації 10-1 у складі середовища стимулював інтенсивність висіву колоній E. coN у 10 разів). У 2,5 рази зменшилася кількість біомаси у разі висіву із середовища з додаванням Mg та Mn порівняно з контролем. Найбільша кількість кУо E. coli після висіву за 11 місяців із середовища з додаванням селену спостерігалась у концентрації 10-4 та 10-5 наночастинок, що перевищувало контрольний рівень у 3,6 рази (p<0,001). Очевидно, що у процесі тривалого зберігання інтенсивність висіву

колоній штаму залежить від виду та концентрації препарату наноаквахелату у складі гліцеринового середовища.

Таким чином, внесення нано-аквахелату селену (Se) у концентрації 10-4 та 10-5 за сім місяців після заморожування стимулювало ріст грамнега-тивних мікроорганізмів E.coli ATCC 25922 в 1,4 та 1,8 рази відповідно. За 11 місяців зберігання спостерігалося зростання біомаси еталонного штаму E. coli у 3,0-3,6 разів у дослідних зразках, що містили нано-аквахелат селену у концентраціях 103 — 10-5.

Результати досліджень біологічних властивостей дослідного та контрольного зразків еталонного штаму Escherichia coli ATCC 25922 свідчать про стабільність біохімічних характеристик культур, які зберігали традиційним та запропонованим нами способом (табл. 2).

Отже, результати біохімічної ідентифікації дослідної та контрольної культур свідчать про стабільність біохімічних властивостей еталонного штаму E. coli ATCC 25922 у разі зберігання у складі гліцеринового середовища з додаванням наноак-вахелату селену, що дозволяє рекомендувати зазначене на-номодифіковане гліцеринове середовище для тривалого зберігання вказаного штаму.

Для зберігання культури Pae-ruginosa ATCC 27853 найбільш ефективним виявилось гліцеринове середовище з додаванням наночастинок германію в усіх концентраціях та селену у концентрації 10-4 та 10-5 (p<0,001) (табл. 3).

Так, за 3 місяці зберігання у складі середовища з додаванням германію кількість життєздатної біомаси збільшилася в 1,5-2,7 рази, а за 7 місяців — у 4-8 разів порівняно з контролем. Висока життєздатність еталонної культури P aerugino-

к

3-

s

v§

£

sa, внесеної у середовище з германієм, спостерігалася за 11 місяців (у 15-40 разів), тоді як у контрольних зразках культура була майже нежиттєздатною.

Суттєве зростання біомаси культури P. aeruginosa, внесеної у середовище з додаванням селену у концентраціях 10-

4 та 10-5, спостерігалося за 7 та 11 місяців (у 6,0-35,0 разів порівняно з контролем). Під час перевірки стабільності біохімічних характеристик культури за 11 місяців у складі середовища з додаванням германію, селену та контрольних зразків не виявлено змін біохімічних властивостей еталонного штаму. Усі інші наночастинки практично в усіх концентраціях у складі гліцеринового середовища справляли біоцидний ефект на життєздатність еталонного штаму P. aeruginosa.

Висновки

1. Додавання розчинів нано-аквахелатів металів селену та германію у традиційне гліцеринове середовище у концентраціях 10-4 та 10-5 покращує перебіг обмінних та репаратив-них процесів штамів грамнега-тивних мікроорганізмів у процесі їх тривалого зберігання та дозволяє отримати значно більшу біомасу життєздатних мікроорганізмів у процесі періодичного відновлення життєздатності штамів без втрати і зміни їхніх біологічних властивостей, що має велике значення у практиці роботи мікробіологічних лабораторій медичних закладів та наукових установ.

2. Для тривалого зберігання штаму P. aeruginosa ATCC 27853 можна рекомендувати гліцеринове середовище з додаванням наноаквахелату германію та селену у концентраціях 10-4 та 10-5.

3. Наномодифіковані середовища з додаванням селену (Se) у концентраціях 10-4 та 10-5

а

3

и

в

о

4

е

р

е

с

о

о

н

а

в

о

к

4

о

5

о

н

а

н

'5

а

ц

к

с

>

в

н

н

а

|_

а

е

б

п

а

ц

о

'ЕЕ

см

см

О)

ю

см

а

а

0 с

ш

>

2

а

т

3

о

о

н

н

о

ц

а

т

е

н

с

о

в

и

т

с

а

ц

в

1 У

X

о

ш

№ лунки Тест Біохімічні характеристики штаму після зберігання у гліцериновому середовищі з додаванням наночастинок у концентрації 10-4 та 10-5

Селен Контроль

2 АІа-РИе-Рго-ариламідаза - -

3 Адонітол - -

4 L-піролідон-ариламідаза - -

5 L-арабіт - -

7 D-целлобіоза - -

9 Бета-галактозидаза + +

10 Продукція Н2Б - -

11 Бета^-ацетил-глюкозамінідаза - -

12 Глютамілариламідаза pNA - -

13 D-глюкоза + +

14 Гамма-плютамілтрансфераза - -

15 Зброджування глюкози + +

17 Бета-плюкозидаза - -

18 D-мальтоза + +

19 D-маніт + +

20 D-манноза + +

21 Бета-ксилозидаза - -

22 Бета-аланінариламідаза pNA - -

23 L-пролінариламідаза - -

26 Ліпаза - -

27 Палатиноза - -

29 Тирозинариламідаза - -

31 Уреаза - -

32 D-сорбіт + +

33 Сахароза - -

34 D-тагатоза - -

35 D-трегалоза + +

36 Цитрат (натрію) - -

37 Малонат - -

39 5-кето- D-глюконат - -

40 L-лактат, олужнювання + +

41 Альфа-глюкозидаза - -

42 Сукцинат, олужнювання + +

43 Бета^-ацетилгалактозамінідаза - -

44 Альфа-галактозидаза + +

45 Фосфатаза - -

46 Гліцинариламідаза - -

47 Орнітиндекарбоксилаза + +

48 Лізиндекарбоксилаза + +

53 L-пістидін, асиміляція - -

56 Кумарат + +

57 Бета-глюкуронідаза + +

58 О/129 стійкість + +

59 ОІи-ОІу-Агд-ариламідаза - -

61 L-малат, асиміляція - -

62 Елман - -

64 L-лактат, асиміляція - -

-е

можна використовувати для зберігання еталонного штаму E. coli ATCC 25922 за низькотемпературних умов.

ЛІТЕРАТУРА

1. Колесников М.М., Скричев-ская В.М., Скричевский М.В. и др. Концепция генного паразитизма в эпидемиологии инфекционных болезней. — В кн.: Клі-ніко-епідеміологічні аспекти боротьби та профілактики інфекційних і неінфекційних хвороб серед дітей і дорослих: матер. Між нар. наук.-практ. конф. — Харків, 2010. — С. 27-28.

2. Герхард Ф. и др. Методы общей бактериологии. — М.: Мир, 1983. — С. 458-464.

3. Войда Ю.В., Бірюкова С.В. Біологічні властивості і плаз-мідна характеристика бактерій Escherichia coli в умовах низькотемпературного зберігання // Експериментальна медицина та морфологія. — 2011. — Т. 15, № 3 (59). — С. 73-76.

4. Высеканцев И.П., Степа-нюк Л.В. Влияние н. сови хранения на сахаролитические свойства криоконсервирован-ных и лиофилизированных н. сови Escherichia coli // Проблемы криобиологии. — 1999. — № 4. — С. 48-52.

5. н. сович В.Б., Каплуненко В. Г., Косінов М.В. та ін. Нано-модифіковане живильне сере-

довище для культивування мікобактерій. — В н..: Наномате-ріали у біології. Основи нано-ветеринарії. — К.: Авіценна, 2010. — С. 336-342.

6. Косінов М.В., Каплуненко В.П Аквахелат нанометалу. Патент України № 29280; опубл.

10.01.2008, бюл. № 1/2008.

7. Поліщук О.І., Міроненко Л.П, Плушкевич ТП та ін. Методи виділення та ідентифікації ентерококів: метод. рек. — К.: Знання України, 2009. — С. 22-23.

REFERENCES

1. Kolesnikov M.M., Skrichev-

ska V.M., Skrichevsky M.V. et al. In: Kliniko-epidemiolohichni

aspekty borotby ta profilaktyky in-fektsiikh i neinfektsiinykh khvorob sered ditei i doroslykh [Clinical-Epidemiological Aspects of Struggle and Prophylaxis Infectious and Non-infectious Diseases Among Children and Adults]. Kharkiv ; 2010 : 27-28. (in Ukrainian)

2. Herkhard F. et al. (eds.) Me-tody obshchei bakteriologii [Methods of General Bacteriology]. Moscow : Mir ; 1983 : 458464. (in Russian)

3. Voida Yu.V., Biriukova S.V. Eksperymentalna medytsyna ta morfolohiia. 2011 ; 15, 3(59) : 73-76. (in Ukrainian)

4. Vysekantsev I.P., Stepaniuk L.V. Problemy kriobiologii. 1999 ;

4 : 48-52. (in Russian)

5. Borysevych V.B., Kaplunen-ko V.H., Kosinov M.V. et al. In: Nanomaterialy v biolohii. Osnovy nanoveterynarii [Nanomaterials in Biology. Background of Nano-veterinary]. Kyiv : Avitsena ; 2010 : 336-342. (in Ukrainian)

6. Kosinov M.V., Kaplunenko V.H. Akvakhelat nanometalu [Aquachelate of Nanometal]. Patent of Ukraine No 29280 ; opubl.

10.01.2008, biul. No 1/2008. (in Ukrainian).

7. Polishchuk O.I., Mironenko L.H., Hlushkevych T.H. et al. Me-tody vydilennia ta identyfikatsii enterokokiv : metodychni reko-mendatsii [Methods of Extraction and Identification of Enterococci: Methodical Recommendations]. Kyiv : Znannia Ukrainy ; 2009 : 22-23. (in Ukrainian)

Надійшла до редакції 27.01.2013.

Вплив стабілізуючих середовищ на життєздатність еталонного штаму P. aeruginosa ATCC 27853 (n=3)

Таблиця 3

Концен- трація препарату Життєздатність (М±т у КУО)* за 3, 7 та 11 місяців зберігання у гліцериновому середовищі з додаванням наноаквахелатів Контроль (за 3, 7 та 11 місяців)

Cu Zn Fe Mg Mn Ge Se

10-1 80±5,2 170±7,5 170±7,5 150±7,1 150±7,1 200±8,2** 150±7,1 110±6,1

0 100±5,8 2±0,8 180±7,7 94±5,6 250±9,1** 62±4,5 50±4,1

0 100±5,8 0 120±6,3 30±3,2 200±8,2** 50±4,1** 10±1,8

10-2 90±5,5 120±6,3 30±3,2 200±8,2 88±5,4 240±8,9** 130±6,6

9±1,7 10±1,8 0 55±4,3 7±1,5 400±11,5** 90±5,5

0 300±10,0 0 0 0 150±7,1** 110±6,1**

10-3 140±6,8 80±5,2 62±4,5 130±6,6 50±4,1 300±10,0** 60±4,5

1±0,6 9±1,7 28±3,1 32±3,3 2±0,8 260±9,3** 160±7,3**

0 0 0 0 0 300±10,0** 50±4,1**

10-4 110±6,1 110±6,1 120±6,3 80±5,2 41±3,7 170±7,5** 110±6,1

2±0,8 11±1,9 6±1,4 25±2,9 0 230±8,8** 400±11,5**

0 0 0 0 0 400±11,5** 200±8,2**

10-5 120±6,3 180±7,7 54±4,2 70±4,8 150±7,1 230±8,8** 160±7,3**

1±0,6 18±2,4 11±1,9 20±2,6 1±0,6 210±8,4** 330±10,5**

0 0 0 0 0 150±7,1** 350±10,8**

Примітка: *КУО — колонієутворююча одиниця на середовищі Мюллер-Хінтон; **p<0,001 — вірогідна різниця між показниками кількості КУО після зберігання у складі наномодифікованого гліцеринового середовища порівняно з контролем.