CC BY
33
СЖКТ, возможно, откроет путь применения данного типа клеток для аутологических и аллогенных транстлантаций. АсОДН в настоящее время считаются перспективными и высокоточными агентами для подавления экспрессии конкретно выбранных белков. Однако данные об эффективности их проникновения в клетки как in vivo так и in vitro, полученные различными группами исследователей, существенно различаются. В нашей работе мы сравнивали способность АсОДН проникать в СЖКТ мыши в системе in vitro. В ходе выполнения работы нами было проведено исследование проникновения и распределения АсОДН в СЖКТ с применением методов лазерной сканирующей конфокальной микроскопии. Были подобраны АсОДН к мРНК eGFP, не образующие вторичной структуры, и образующие вторичную структуру «шпилька». На модели культивируемых СЖКТ eGFP+-мышей линии C57BL/6-Tg(ACTB-EGFP)1Osb/J) была изучена эффективность проникновения «неструктурированных» и «структурированных», флуоресцентномеченых АсОДН в клетки. «Неструктурированные» АсОДН почти не проникали в СКЖТ. «Структурированные» АсОДН, образующие вторичную структуру «шпилька», интенсивно проникали в клетки. После проникновения в СЖКТ АсОДН локализовались в цитоплазме, преимущественно в околоядерной зоне, не проникали в ядра. Специфичность действия «структурированных» АсОДН к мРНК eGFP была подтверждена в культуре СКЖТ методом иммуноблота: после 6-ти сут. инкубации клеток с этими олигонуклеотидами количество белка eGFP в них существенно снижалось.
Полученные нами данные о влиянии наличия вторичной структуры, «шпильки» на проникновение АсОДН сходной длины в СЖКТ, а также данные о перинуклеарной локализации АсОДН в клетках дают возможность предполагать существование рецептор-опосредованного транспортного механизма проникновения АсОДН в СЖКТ. Результаты этого исследования могут быть использованы для разработки методов направленной дифференцировки СЖКТ и дадут возможность использовать АсОДН в клеточной терапии.
Литература
1. ТимченкоМ.А.. и др.) // Биохимия.2006.Т. 71, С. 561-569.
2. Трактуев Д.О. и др. () // Цитология. 2006.Т. 48, С. 83-94.
3. CormackB. et al. () // Gene. 1996. Vol. 173. P.33-38.
4. Geller B.L. (2005) Antibacterial antisense. Curr Opin Mol Ther.,Vol. 7, P. 109-113.
5. Kausch I. et al., (2003) // Cancer, Vol. 105, P.710-716.
6. Mukherjee S., Ghosh R.N., Maxfield F.R. (1997) // Endocy-tosis. Physiol. Rev., Vol. 77, P.759-803.
7. Mullen P., McPhillips F., MacLeod K., et al., (2004) // Clinical cancer research. Vol. 10. P.2100-2108
8. Nakagami H, Morishita R, Maeda K, et al., (2006) // Athero-scler Thromb; Vol. 13, P.77-81.
9. O'Rear L., Longobardi L., Torello M., et al., (2005) // J of Molecular Endocrinology, Vol. 34, P.723-737.
10. Zhang G., Gurtu V., Kain S.R. (1996) // Biochemical and Biophysical Research Communications, Vol. 227, P.707-711.
11. Zuk, P., Zhu M., Mizuno H., et al., (2001) // Tissue Eng. Vol. 7, P.211-226.
Работа поддержана грантом компании Сarl Zeiss Inc., Германия
№2-13.
УДК 616.36-004+616.36-002
ЗАКОНОМЕРНОСТИ ИЗМЕНЕНИЙ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПРОБ ПЕЧЕНИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЦИРРОЗЕ В УСЛОВИЯХ ВВЕДЕНИЯ ФЕТАЛЬНЫХ ТКАНЕЙ
Э.М. ШЕНДЕР, А.Е. КОЛОСОВ*
Ключевые слова: функциональная проба печени
Циррозы занимают ведущее место среди хронических диффузных поражений печени [6,9,10]. Диагностика цирроза печени сопряжена с проведением комплекса биохимических проб, которые указывают на степень ее поражения. Анализируя ряд научных данных на эту тему, мы не увидели среди них результатов о закономерностях изменений биохимических показателей функциональных проб печени в случае экспериментального цирроза печени при введении фетальных тканей [1,2,8].
Цель исследования — изучение изменения функциональных биохимических показателей печени при циррозе, а так же установление их связей с регенераторными процессами в ней в условиях введения фетальных тканей.
Объект и метод. Объектом хронического эксперимента служили 340 беспородных половозрелых крыс средней массой 200 г. Во всех экспериментах соблюдены требования, предъявляемые при проведении экспериментальных работ на животных.
Подопытные крысы разделены на группы: 1 - контрольная; 2 - с экспериментальным ЦП;3 - с экспериментальным ЦП, которым проводилась стимуляция регенерации печени с помощью трансплантации суспензии фетальных тканей печени, селезенки и тимуса 18-19-дневных плодов крыс; 4 - с экспериментальным ЦП, которым проводилась стимуляция регенерации печени с помощью трансплантации суспензии тканей печени, селезенки и тимуса 18-19-дневных плодов крыс после воздействия на эти ткани низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) [3,4].
В качестве излучателя использовался гелий-неоновый полупроводниковый аппарат с длиной волны 633 нм. Облучение осуществлялось двукратно по 1,8 мин с перерывом в 5 минут при плотности излучения 75 мВт/см2 [5].
Модель ЦП у крыс воспроизводилась путем длительного введения гепатотропного яда - четыреххлористого углерода [7].
В течение 3 месяцев под кожу спины вводили 50% масляный раствор четыреххлористого углерода в дозе 0,4 мл на 100 гр. веса животного 4 раза в неделю. Трансплантат готовился из органов плодов самок крыс со сроком беременности 18-19 суток. Беременных самок выводили из эксперимента путем декапита-ции. Использован метод гомогенизации фрагментов фетальных тканей печени, селезенки и тимуса в равных количествах. При окраске трипановым синим гомогенат представлял суспензию жизнеспособных ядросодержащих клеток 3-5х105.
Трансплантацию осуществляли посредством внутрибрю-шинной инъекции. Во всех группах животных трансплантация фетальной взвести осуществлялась сразу после создания модели ЭЦП (на 91 сутки эксперимента). Содержание общего билирубина измерялось по методу Йендрашика; тимоловая проба, АСТ, АЛТ, щелочная фосфатаза и у-глутаматтрансфераза определялись с использованием соответствующих биохимических наборов фирмы «Лабсист» и на биохимическом анализаторе ФП-901М (Финляндия). Животных 2-4 групп выводили из эксперимента через 75 суток путем декапитации. Активность репаративных процессов оценивали с учетом морфо-функционального состояния печени. Для микроскопического исследования срезы печени фиксировали в 10% растворе формалина, обезвоживали и заливали в парафин. Гистологические срезы окрашивались гематоксилином и эозином, по Ван Гизону, ШИК-реакцией.
Морфометрическое исследование осуществлялось с помощью компьютерной системы анализа цветового изображения ДиаМорф-Ско (Россия). На условной единице площади в ткани печени подсчитывались диаметры клеток и их ядер, а так же митотический индекс гепатоцитов. Все результаты обрабатывали с помощью ЕХСБЬ-2007; вычислялся ^критерий Стьюдента.
У животных 2 экспериментальной группы (с экспериментальным ЦП) достоверно возрастали по сравнению с контролем уровни общего билирубина (рис.1), тимоловой пробы (рис.2) и активность у- глутаматтрансферазы (рис.3), АСТ, АЛТ, а так же щелочной фосфатазы (рис.4), достигая максимальных значений. При этом морфологически регистрировались дистрофия и некроз гепатоцитов, их извращенная регенерация, диффузный фиброз, деформация органа. Через 75 суток после введения фетальных тканей (3- я группа) отмечалось достоверное снижение значений функциональных проб печени, не достигающих показателей контрольной группы (рис.1-4). При морфологическом исследовании печени определялось неравномерное восстановление структур органа, в частности, доли соединительной и паренхиматозной ткани по отношению к контрольной серии (рис.5; рис.6), изменения числа клеток Купфера (рис.7), а также колебания митотического индекса гепатоцитов (рис.8).
У животных 4 экспериментальной группы значения функциональных проб печени на 75 сутки достоверно не отличались от показателей контрольной группы (рис.1-4), а гистологически обнаруживалось восстановление гистоархитектоники печени, сходное с печенью животных контрольной группы (рис.6).
* 610027, г. Киров, ул. К. Маркса, 112, Кировская ГМА
Рис.1. Динамика содержания общего билирубина в сыворотке крови (мкм/л). *Р<0,05 по сравнению с контролем
Рис.2. Динамика изменений тимоловой пробы (ед). *P<0,05 по сравнению с контролем
Рис.3. Динамика содержания у-глутаматтрансферазы в сыворотке крови (ед./л). *Р<0.05 по сравнению с контрольной группой
900 -, * ■ дет одпт «uno» і
800 - ““ *
700 -600 -S00 400 -300 -200 100
ш
■л
Рис.4. Динамика ЛCT, ЛЛT, ЩФ в сыворотке крови (ед./л). *P<0, 05 по сравнению с контрольной группой
Рис.5. Площадь соединительной ткани в печени (мкм2), P<0,05
6OOOOO 500000 -400000 -300000 -200000 -1OOOOO - п п п
а Паренхима Контр 43525! ЦП L Î 218626 3 (П+Ф 7436 Т ЦП+ФТ +НИЛИ 3 484187
Рис.б. Площадь паренхиматозной ткани в печени (мкм2), P<0,05
Рис.8. Митотический индекс гепатоцитов печени крыс(%о), P<0, 05
Внутрибрюшинное введение крысам с экспериментальным ЦП комплекса фетальных тканей, облученного низкоинтенсивным лазером в сравнении с необлученным, приводило к более выраженной активации регенераторных процессов в печени, что сопровождалось нормализацией ее функциональных проб.
Литература
1. Грищенко И.В. и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины, 2001. Т1., №10. С. 394-397.
2. Западнюк И.П. и др. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Киев: Вища школа, 1983. С 24-280.
3. Курбатова Г.Р., . Гиниатуллин Р.У., Козель А.И., Игнатьева Е.Н. Способ приготовления суспензии фетальных клеток, предназначенных для трансплантации при хронических заболеваниях печени (реферат изобретения к патенту РФ №2203072): Лазерные новости. 2004. №1-2.С.107.
4. Курбатова Г.Р., Гиниатуллин Р.У., Козель А.И., Игнатьева Е. Н. Способ патогенетического лечения хронических заболеваний печени в эксперименте (реферат изобретения к патенту РФ №2204399): Лазерные новости. 2004. №1-2. С.107.
5. Курбатова Г.Р., Гиниатуллин Р.У., Козель А.И., Игнатьева Е. Н. Способ патогенетической терапии хронических заболеваний печени (реферат изобретения к патенту РФ №2203675): Лазерные новости. 2004. №1-2. С.107.
6. Пауков В.С., Ерохин Ю.А. //Арх. Пат. 2004, №4, С.3-9.
7. Саркисов Д.С. // Эксперим. хир. 1960. Т.3, № 1. С. 3-8.
8. Ammori J.B. et.al. // J. Surg. Res., 2007, 140(2):227-33.
9. Broelsch C.E., Malago M., Frilling A. //Chirurg. 2008.
10. Concejero A., Chen C.L., Liang C.D. et al. // Transplantation. 2007, Aug. 27;84(4):484-9.
УДК 615.47, 004.891, 519.23
СПОСОБ КОМБИНИРОВЛННОЙ TЕРМQМЕTРИИ И МАTЕМАTИЧЕCKИЕ МОДЕЛИ ВЕРОЯШОСТНОЙ ДИЛГНОСТИКИ ЗЛБОЛЕВЛНИЙ ВЕН НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ
Ключевые слова: термометрия, математическая модель
Заболевание вен нижних конечностей представляет собой серьезную медицинскую и социальную проблему. По данным ВОЗ, у 25% трудоспособного населения и более чем у 50% пенсионеров Европы выявляется хроническая венозная недостаточность (ХВН). В России страдают от 35 до 38 млн. граждан, 15% из которых имеют трофические нарушения кожи, открытые или многократно рецидивирующие трофические язвы. В большинстве случаев даже при начальных формах болезни утрачивается привычное ощущение «здорового благополучия».
Несмотря на широкий арсенал диагностических мероприятий, существующих на сегодняшний день в практической медицине, процент ошибок в диагностике ХВН остается высоким. Многие флебологи указывают на недостаточную информативность отдельно взятого метода обследования и отмечают повышение информативности комплекса диагностических мероприятий [5]. Изучение температурных изменений в тканях нижних конечностей могло бы дать новую информацию как для определения состояния мягких тканей при формировании ХВН, так и при наблюдении за больными в процессе лечения [9,11, 13]. Изучение термограмм поверхностных и глубоких температур у пациентов с варикозной болезнью (ВБ), острым венозным тромбозом (ОВТ) и посттромботической болезнью (ПТБ) вен нижних конечностей и их сравнение с термограммами здоровых имеют весьма серьезное диагностическое значение.
^*Волгоградский ГМУ, 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1, тел. Волгоградский ГУ, г. Волгоград, пр-т Университетский, 100, тел. 460261
ТВ ЗЛМЕЧНИК., С.И.ЛЛРИН , Л.Г. ЛОСЕВ, Н.С.ОВЧЛРЕНКО
