CC BY
3©Коллектив авторов, 2017 Вопросы онкологии, 2017. Том 63, № 1
УДК 616.61-006
А.А. Савченко1, А.г. Борисов1, и.В. Кудрявцев2,3, А.В. Мошев1
Взаимосвязь количества Т-регуляторных клеток с уровнями содержания цитотоксических Т-лимфоцитов и NKT-клеток у больных раком почки
1ФгБНу «Нии медицинских проблем севера», красноярск; 2ФгБНу «институт экспериментальной медицины», санкт-петербург; 3Фгбу «Нии онкологии им. Н.Н. петрова» Минздрава россии, санкт-петербург
Целью исследования явилось изучение особенностей зависимости количества и фенотипа цитотоксических Т-лимфоцитов и NKT-клеток от содержания Т-регуляторных клеток в крови у больных раком почки. Обследованы больные раком почки (Т3ШМ0, светлоклеточный тип) в возрасте 40-55 лет до хирургического лечения. Иммунофено-типирование лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии. Установлено, что в периферической крови у больных раком почки на фоне повышения относительного содержания Т-регуляторных клеток наблюдается снижение содержание ци-тотоксических Т-лимфоцитов и увеличение уровня NKT-клеток. Предполагается, что отсутствие изменений в количестве активированных Т-регуляторных и цитотоксиче-ских Т-лимфоцитов определяется миграцией клеток из крови. Повышение количества NKT-клеток при раке почки определяется увеличением эффекторных и активированных клеток, но при снижении уровня регу-ляторной субпопуляции. У здоровых людей содержание Т-регуляторных клеток слабо взаимосвязано с эффекторными субпопуляциями Т-лимфоцитов. У больных раком почек количество активированных Т-регуляторных клеток тесно взаимосвязано с различными фракциями NKT-лимфоцитов. Причем, если с регуляторной и зрелой субпопуляцией NKT-клеток выявляются отрицательные связи, то с NKT-клетками, экспрессирующими маркеры CD28 и CD57, - положительные, что характеризует сонаправленную динамику уровней активированных регуляторных и эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов на фоне опухолевого роста. С помощью канонического анализа доказано, что наибольшей значимостью у больных раком почек обладают активированные Т-регуляторные клетки, цитотоксические Т-лимфоцитов и NKT-клетки.
Ключевые слова: рак почки, Т-регулятор-ные клетки, цитотоксические Т-лимфоциты, NKT-клетки, субпопуляции, взаимосвязь
Т-регуляторные клетки (Tregs) представляют собой отдельную фракцию CD4+ Т-лимфоцитов, конститутивно экспрессирующих а-субъединицу рецептора интерлейкина-2 (CD25) [3,8]. Установлено, что при активации Tregs не проли-ферируют и не продуцируют ^-2, но приобретают способность подавлять пролиферацию Т-лимфоцитов и синтез ими цитокинов. Доказана супрессирующая роль Tregs в системе противоопухолевого иммунитета, которая также реализуется преимущественно через ингибиро-вание функции цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) [1,5,13].
Значительный интерес в рамках развития противоопухолевого иммунитета вызывают NKT-клетки. Данную популяцию лимфоцитов относят к клеткам врожденного иммунитета, они представляют собой минорную популяцию Т-лимфоцитов, которая благодаря своей ауторе-активности и способности быстро продуцировать различные цитокины, обеспечивает связь между врожденным и адаптивным звеньями иммунитета и играет важнейшую роль в регуляции иммунного ответа при различных патологических состояниях, в том числе, и при опухолевом росте [2,6]. Доказано, что NKT-клетки помимо цитотоксической функции выполняют роль основного источника цитокинов (в первую очередь, №N7) на начальных этапах развития иммунного ответа [9,20].
Супрессорная активность Tregs на эффекторы противоопухолевого иммунитета реализуется тремя механизмами: прямой контакт активированными эффекторными клетками, секреция ингибирующих цитокинов (трансформирующий ростовой фактор-Р и интерлей-кин-10) и цитолитическая активность [3,19]. Т-регуляторные клетки могут снижать эффективность проявления функциональной активности эффекторных Т-лимфоцитов: синтез и секреция цитокинов, экспрессия активацион-ных, адгезионных и хемокиновых рецепторов, цитолитическое действие на клетки-мишени [1,20]. В целом, особенности взаимодействия Tregs с эффекторными клетками определяет активность противоопухолевого иммунитета, а
также эффективность терапии и, соответственно, исход заболевания.
Целью исследования явилось изучение особенностей зависимости количества и фенотипа цитотоксических Т-лимфоцитов и NKT-клеток от содержания Tregs в крови у больных раком почки.
Материалы и методы
На базе КГБУЗ «Красноярский краевой клинический онкологический диспансер имени А.И. Крыжановского» обследованы больные ПКР (T3N0M0, светлоклеточный тип) в возрасте 40-55 лет до хирургического лечения (n=92). Диагноз ПКР у всех больных верифицирован гистологически. В качестве контрольной группы были обследованы 78 практически здоровых людей аналогичного возрастного диапазона.
Иммунофенотипирование лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии (пятицветная иммунофлуорес-ценция) цельной периферической крови с использованием моноклональных антител (Beckman Coulter, USA), меченных FITC (fluoresceinisothiocyanate), PE (phycoerythrin), ECD (phycoerythrin-TexasRed-X), PC5 (phycoerythrin-cyanin 5) и PC7 (phycoerythrin-cyanin 7) в следующих панелях: CD62L-FITC/CD127-PE/CD3-ECD/CD25-PC5/CD4-PC7, CD16-FITC/CD56-PE/CD8-ECD/CD3-PC5/CD11b-PC7, CD57-FITC/CD28-PE/CD3-ECD/CD16+56-PC5/CD45-PC7. Распределение антител по каналам флуоресценции проводили в соответствие с принципами формирования панелей для многоцветных цитофлуориметрических исследований [4]. Подготовку образцов периферической крови для анализа осуществляли по стандартной методике [7]. Лизис эритроцитов проводили по безотмывочной технологии с использованием реагента VersaLyse (Beckman Coulter, США). Анализ окрашенных клеток проводили на проточном ци-тофлуориметре FC-500 (Beckman Coulter, USA) [14]. В каждой пробе анализировали не менее 50000 лимфоцитов.
Все исследования выполнены с информированного согласия испытуемых и в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266.
Описание выборки производили с помощью подсчета медианы (ме) и интерквартильного размаха в виде 1 и 3 квартилей (Qj и Q3). Достоверность различий между показателями независимых выборок (сравнение с показателями контрольной группы) оценивали по непараметрическому U-критерию Манна-Уитни. Для исследования силы взаимосвязей показателей вычислялся коэффициент ранговой корреляции по Спирмену. Для оценки комплексной взаимосвязи уровней Т-регуляторных клеток с количеством цитотоксических Т-лимфоцитов и NKT-клеток использовали канонический анализ с подсчетом коэффициента канонической корреляции (R) и канонических весов коррелируемых параметров. Статистическая значимость коэффициента канонической корреляции оценивалась по с2. Статистический анализ осуществляли в пакете программ Statistica 7.0 (StatSoftlnc. 2004).
Результаты и обсуждение
При исследовании содержания Tregs и эф-фекторных фракций Т-лимфоцитов обнаружено, что в периферической крови больных ра-
ком почки повышено относительное количество CD3+CD4+CD25HlghCD127Low-клеток (табл. 1). У обследованных пациентов снижено абсолютное и относительное содержание CD3+CD8+-лимфоцитов.
Значительные изменения при раке почки обнаружены в фенотипическом составе NKT-клеток (см. табл. 1). Так, на фоне повышения абсолютного количества CD3+CD16/56+-лимфоцитов увеличивается процентное содержание клеток с данным фенотипом, а также CD3+CD16/56+CD28+-, CD3+CD16/56+CD57+- и CD3+CD56-CD16+-клеток. При этом у больных лиц в крови снижается относительный уровень CD3+CD56+CD16+- и CD3+CD56+CD16--лимфоцитов.
Анализируя количественные изменения при раке почек, можно заключить, что в периферической крови больных повышается содержание т-регуляторных клеток с фенотипом CD3+CD4+CD25HlghCD127Low Однако уровень Tregs с экспрессией CD62L остается неизмененным относительно контрольных значений. CD62L является мембранным гликопротеином, принадлежащим к семейству L-селектинов, который экспрессируется на широком спектре клеток иммунной системы [5,18,21]. Рецептор обеспечивает слабые межклеточные взаимодействия, благодаря которым движение клеток вдоль сосудистой стенки замедляется и происходит их миграция из сосудистого русла. Можно предположить, что регуляторные клетки, экс-прессирующие CD62L, мигрируют из крови в лимфоидную ткань, что и приводит к стабилизации количества активированных Tregs в крови на контрольном уровне.
В крови больных раком почки снижается процентное и абсолютное количество цитоток-сических Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+CD8+. Содержание цитотоксических клеток, экспресси-рующих CD11b, остается на уровне контрольного диапазона. Молекула CD11b представляет собой аМ цепь интегрина Мас-1, которая повышает миграционный и эффекторный потенциал цитотоксических клеток [6,12].
При исследовании фенотипического состава NKT-клеток обнаружено, что у больных раком почки повышено абсолютное и процентное содержание общих NKT-клеток и NKT-клеток, экспрессирующих молекулы маркеров CD28 и CD57. CD28 - мембранный белок, участвующий в костимуляции необходимой для активации лимфоцитов. Доказано, что стимуляция клеток через CD28 в дополнении к стимуляции Т-клеточного рецептора обеспечивает сильный костимулирующий сигнал, приводящий к выработке различных цитокинов, активации и запуску пролиферации клона антиген-специфических Т-клеток [10,16,17]. Рецептор CD57
обеспечивает клеточную миграцию посредством выполнения контактов клетка-клетка и клетка-матрикс. Доказано, что лимфоциты, экспресси-рующие на своей мембране CD57, не способны входить в пролиферативный цикл даже под влиянием сильнейших стимуляторов, эта молекула является маркером зрелости клона. Кроме того, экспрессия CD57 на поверхности цитотоксиче-ских клеток связана со способностью этих клеток накапливать в составе цитоплазматических гранул перфорин и гранзимы [5,11,15].
Исследование субпопуляционного состава NKT-клеток позволило установить, что у больных раком почки снижено содержание зрелых (CD3+CD56+CD16+) и регуляторных фракций ^3^56^16-) ЖГ-клеток, но при повышении количества эффекторной субпопуляции (CD3+CD56-CD16+).
С помощью корреляционного анализа исследованы особенности взаимосвязи количества Т-регуляторных клеток с уровнем ци-тотоксических Т-лимфоцитов и NKT-клеток. Обнаружено, что у лиц контрольной группы выявляется единственная корреляционная связь - между относительным уровнем CD3+CD4+CD25HlghCD127Low-клеток и процентным количеством CD3+CD16/56+-лимфоцитов (г=-0,32, р=0,015). В то же время у больных раком почек выявляются взаимосвязи только между количеством активированных Tregs и содержанием NKT-клеток. Так, относительный уровень CD3+CD4+CD25HlghCD127LowCD62L+-клеток отрицательно коррелирует с процентным количеством CD3+CD56+CD16+- (г=-0,28, р=0,007) и CD3+CD56+CD16--лимфоцитов (г=-0,23, р=0,026), а также положительно с CD3+CD16/56+CD28+-(г=0,24, р=0,023) и CD3+CD16/56+CD57+-клеток (г=0,21, р=0,047).
С помощью канонического анализа исследованы особенности комплексной взаимосвязи уровней Т-регуляторных клеток с количеством цитотоксических Т-лимфоцитов и NKT-клеток. Выбор канонического анализа связан с тем, что данный метод позволяет оценить взаимосвязь двух наборов показателей с определением значимости вклада каждого параметра в каноническую корреляцию, выраженную в каноническом весе. Установлено, что все канонические корреляции Tregs с фенотипическим составом цитотоксических Т-лимфоцитов и N0" клеток являются статистически значимыми и с характерным распределением весов по исследуемым показателям у лиц контрольной группы и больных раком почек (табл. 2 и 3). Так, если у лиц контрольной группы Tregs вносят отрицательный вклад в каноническую корреляцию с количеством ци-тотоксических Т-клеток, а активированные Tregs - положительный, то у больных раком почек обе
фракции Tregs вносят отрицательный вклад (см. табл. 2). При этом в обеих обследуемых группах вес цитотоксических Т-лимфоцитов в системе канонической корреляции является положительным, тогда как активированных клеток - отрицательный. У лиц контрольной группы Tregs с фенотипом CD3+CD4+CD25HlghCD127Low вносят больший вклад (по величине весов) в каноническую корреляцию, тогда как цитотоксические Т-лимфоциты - практически равный. У больных раком почки наибольший вклад в данную каноническую корреляцию вносят активированные Tregs и более выраженное - активированные цитотоксические Т-лимфоциты.
Аналогичный вклад Tregs с фенотипом CD3+CD4+CD25HlghCD127Low вносят в каноническую корреляцию с фракциями NKT-клеток: у лиц контрольной группы - положительный вклад, у больных раком почки - отрицательный (см. табл. 3). У лиц контрольной группы и больных раком почки значительно различается вклад NKT-клеток в данную каноническую взаимосвязь. Так, если у лиц контрольной группы активированные NKT-клетки вносят отрицательный вклад в каноническую корреляцию с Т-регуляторными клетками, то у больных раком почки - положительный. Зрелые и регуляторные NKT-клетки у лиц контрольной группы также вносят отрицательный вклад в указанную каноническую корреляцию, у больных раком почки
- положительный. У лиц контрольной группы обе фракции Т-регуляторных клеток вносят равный вклад (по величине весов) в каноническую корреляцию с NKT-клетками, с другой стороны
- максимальные значения весов выявляются у регуляторных (CD3+CD56+CD16-), активированных клеток (с экспрессией CD28 и CD57) и общей фракции (CD3+CD16/56+) NKT-клеток. У больных раком почки наибольший вклад в каноническую корреляцию вносят активированные Tregs с одной стороны, а с другой - только N0-клетки с фенотипом CD3+CD16/56+CD28+.
Исходя из результатов корреляционного и канонического анализа, можно сделать следующие заключения. Взаимосвязь уровней Т-регуляторных клеток с количеством N0-клеток более выражена, чем с содержанием ци-тотоксических Т-лимфоцитов. Корреляционные связи между Т-регуляторными клетками и цито-токсическими Т-лимфоцитами отсутствуют как у здоровых людей, так и у больных раком почки. Вес Т-регуляторных клеток в канонической корреляции с цитотоксическими Т-лимфоцитами значительно ниже и сама каноническая корреляция слабее, чем с NKT-клетками (также в обеих обследуемых группах). Кроме того, если у здоровых людей с содержанием N0-клеток взаимосвязан уровень Tregs с фенотипом
Таблица 1. Количество Т-регуляторных, цитотоксических Т- и NKT-клеток у больных раком почки (Ме, Q1 - Q3)
Показатели Контроль п=78 Больные раком почки п=92 Р
Ме Q, -Qз Ме Q1 -Qз
Т-регуляторные клетки
CD3+CD4+, 109/л 0,83 0,57 - 1,16 0,82 0,60 - 1,00
CD3+CD4+CD25Hi0h CD127Low, % 5,4 4,0 - 6,8 6,3 4,3 - 8,3 0,048
CD3+CD4+CD25Hi0h CD127LowCD62L+, % 3,8 2,9 - 4,8 4,2 2,6 - 7,3
Цитотоксические Т-лимфоциты
CD3+CD8+, 109/л 0,55 0,38 - 0,80 0,40 0,31 - 0,53 <0,001
CD3+CD8+, % 27,0 21,6 - 32,0 20,8 16,3 - 27,5 <0,001
CD3+CD8+CD11b+, % 23,4 17,7 - 28,1 24,6 19,3 - 37,7
ЫКТ-клетки
CD3+CD16/56+, 109/л 0,046 0,018 - 0,101 0,072 0,019 - 0,120 0,049
CD3+CD16/56+, % 2,6 0,8 - 5,4 4,1 1,5 - 6,4 0,026
CD3+CD16/56+CD28+, % 1,5 0,8 - 3,2 2,8 0,9 - 5,6 0,021
CD3+CD16/56+CD57+, % 1,3 0,6 - 2,3 2,2 0,8 - 5,8 0,012
CD3+CD56+CD16+, % 3,7 2,1 - 5,7 2,7 1,1 - 4,7 0,022
CD3+CD56-CD16+, % 4,1 2,8 - 5,3 5,4 2,5 - 9,6 0,039
CD3+CD56+CD16-, % 10,3 7,5 - 15,2 8,0 3,4 - 15,3 0,017
Таблица 2. Каноническая корреляция между количеством Т-регуляторных клеток и цитотоксических Т-лимфоцитов
в контроле и у больных раком почки
Показатели Веса показателей
Контроль, п=78 Рак почки, п=92
Слева
CD3+CD4+CD25Hi0hCD127Low, % -1,925 -0,053
CD3+CD4+CD25Hi0hCD127LowCD62L+, % 1,093 -0,980
Справа
CD3+CD8+, % 1,799 0,617
CD3+CD8+CD11b+, % -1,921 -0,932
Показатели канонической корреляции
Каноническая R 0,46 0,83
С2 12,146 56,441
Р 0,016 <0,001
Таблица 3. Каноническая корреляция между количеством Т-регуляторных клеток и NKТ-лимфоцитов в контроле и у больных раком почки
Показатели Веса показателей
Контроль, п=78 Рак почки, п=92
Слева
CD3+CD4+CD25Hi0hCD127Low, % 2,612 -0,024
CD3+CD4+CD25Hi0hCD127LowCD62L+, % -2,621 -0,991
Справа
CD3+CD16/56+, % 0,708 0,146
CD3+CD16/56+CD28+, % -0,809 1,137
CD3+CD16/56+CD57+, % -0,829 0,130
CD3+CD56+CD16+, % -0,008 0,035
CD3+CD56-CD16+, % -0,006 -0,038
CD3+CD56+CD16-, % -1,454 0,259
Показатели канонической корреляции
Каноническая R 0,70 0,96
С2 33,698 215,924
Р 0,002 <0,001
CD3+CD4+CD25HlghCD127Low, то при раке почек с данной популяцией эффекторных клеток коррелируют только активированные Tregs, причем с активированными NKT-клетками (с экспрессией CD28- и CD57-молекул) выявляется положительные корреляционные связи. Результаты канонического анализа также показывают, что у больных раком почек наибольший вес имеют активированные регуляторные и эффекторные Т-лимфоциты: активированные Tregs в обеих канонических корреляциях, активированные ци-тотоксические Т-лимфоциты и NKT-клетки, экс-прессирующие CD28.
Таким образом, в периферической крови у больных раком почки на фоне повышения количества Т-регуляторных клеток наблюдается снижение содержания цитотоксических Т-лимфоцитов и увеличивается уровень NKT-клеток. Предполагается, что отсутствие изменений в количестве активированных Т-регуляторных и цитотокси-ческих Т-лимфоцитов определяется миграцией клеток. Повышение количества NKT-клеток при раке почки определяется увеличением эффек-торных и активированных клеток, но при снижении уровня регуляторных популяций. С помощью корреляционного анализа установлено, что у здоровых людей содержание Т-регуляторных клеток слабо взаимосвязано с эффекторными субпопуляциями Т-лимфоцитов. В то же время, у больных раком почек количество активированных Т-регуляторных клеток тесно взаимосвязано с различными фракциями NKT-лимфоцитов. Причем, если с регуляторной и зрелой субпопуляцией NKT-клеток выявляются отрицательные связи, то с NKT-клетками, экспрессирующими маркеры CD28 и CD57, - положительные, что характеризует сонаправленную динамику уровней активированных регуляторных и эффектор-ных субпопуляций Т-лимфоцитов на фоне опухолевого роста. Аналогичные результаты получены с помощью канонического анализа. Доказано, что наибольшей значимостью в канонических корреляциях у больных раком почек обладают активированные Т-регуляторные клетки, цитотокси-ческие Т-лимфоциты и NKT-клетки. Выявленные особенности взаимосвязи Т-регуляторных клеток с цитотоксическими Т-лимфоцитами и N0-клетками характеризуют иммунопатогенез рака почек и могут быть использованы при разработке иммунотерапевтических методов, направленных на стимуляцию противоопухолевой активности иммунной системы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Жулай Г.А., Олейник Е.К. Регуляторные Т-клетки и канцерогенез // Иммунология. - 2013. - № 1. - С. 61-64.
2. Кадагидзе З.Г., Черткова А.И., Славина Е.Г. ШКТ-клетки и противоопухолевый иммунитет // Россий-
ский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10.
- № 3. - С. 9-15.
3. Кадагидзе З.Г., Черткова А.И., Славина Е.Г. Регуляторные Т-клетки и их роль в противоопухолевом иммунном ответе // Вопросы онкологии. - 2009. - Т. 55. - № 3. - С. 269-277.
4. Кудрявцев И.В., Субботовская А.И. Опыт измерения параметров иммунного статуса с использованием шестицветного цитофлуоримерического анализа // Медицинская иммунология. - 2015. - Т. 17. - № 1.
- С.19-26.
5. Савченко А.А., Борисов А.Г., Кудрявцев И.В., Мошев А.В. роль Т- и В-клеточного иммунитета в патогенезе онкологических заболеваний // Вопросы онкологии. -2015. - Т. 61. - № 6. - С. 867-875.
6. Савченко А.А., Модестов А.А., Мошев А.В. и др. Цито-метрический анализ NK- и NKT-клеток у больных по-чечноклеточным раком // Российский иммунологический журнал. - 2014. - Т. 8 (17). - № 4. - С. 1012-1018.
7. Хайдуков С.В., Байдун Л.А., Зурочка А.В., Тотолян Арег А. Стандартизованная технология «Исследование суб-популяционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов» (Проект) // Медицинская иммунология.
- 2012. - Т. 14. - № 3. - С. 255-268.
8. Banerjee A., Vasanthakumar A., Grigoriadis G. Modulating T regulatory cells in cancer: how close are we? // Immunol. Cell Biol. - 2013. - Vol. 91. - P. 340-349.
9. Emoto M., Yoshida T., Fukuda T. et al. Alpha-galactosylce-ramide promotes killing of Listeria monocytogenes within the macrophage phagosome through invariant NKT-cell activation // Infect. Immun. - 2010. - Vol. 78. - P. 26672676.
10. Esensten J.H., Helou YA., Chopra G. et al. CD28 Costimu-lation: From Mechanism to Therapy // Immunity. - 2016.
- Vol. 44. - № 5. - P. 973-988.
11. Kared H., Martelli S., Ng T.P. et al. CD57 in human natural killer cells and T-lymphocytes // Cancer Immunol. Immu-nother. - 2016. - Vol. 65. - № 4. - P. 441-452.
12. Lin D., Lei L., Zhang Y et al. Secreted IL-1 promotes T-cell activation and expansion of CD11b(+) Gr1(+) cells in carbon tetrachloride-induced liver injury in mice // Eur. J. Immunol. - 2015. - Vol. 45. - № 7. - P. 2084-2098.
13. Liu S., Sun X., Luo J. et al. Effects of radiation on T regulatory cells in normal states and cancer: mechanisms and clinical implications // Am. J. Cancer Res. - 2015. - Vol. 15. - P. 3276-3285.
14. Maecker H., McCoy P., Nussenblatt R. Standardizing im-munophenotyping for the human immunology project // Nat. Rev. Immunol. - 2012. - Vol. 12. - P. 191-200.
15. Onyema O.O., Njemini R., Forti L.N. et al. Aging-associated subpopulations of human CD8+ T-lymphocytes identified by their CD28 and CD57 phenotypes // Arch. Gerontol. Geriatr. - 2015. - Vol. 61. - № 3. - P. 494-502.
16. Porciello N., Tuosto L. CD28 costimulatory signals in T lymphocyte activation: Emerging functions beyond a qualitative and quantitative support to TCR signaling // Cytokine Growth Factor Rev. - 2016. - Vol. 28. - P. 11-19.
17. Schildberg F.A., Klein S.R., Freeman G.J., Sharpe A.H. Coinhibitory Pathways in the B7-CD28 Ligand-Receptor Family // Immunity. - 2016. - Vol. 44. - № 5. - P. 955972.
18. Schlub T.E., Badovinac V.P., Sabel J.T. et al. Predicting CD62L expression during the CD8+ T-cell response in
vivo // Immunol. Cell Biol. - 2010. - Vol. 88. - № 2. - P. 157-164.
19. Tselios K., Sarantopoulos A., Gkougkourelas I., Boura P. T regulatory cells: a promising new target in atherosclerosis // Crit. Rev. Immunol. - 2014. - Vol. 34. - P. 389-397.
20. Wang H., Feng D., Park O. Et al. Invariant NKT cell activation induces neutrophil accumulation and hepatitis: opposite regulation by IL-4 and IFN-y // Hepatology. - 2013. - Vol. 58. - P. 1474-1485.
21. Yang S., Liu F., Wang Q.J. et al. The Shedding of CD62L (L-Selectin) Regulates the Acquisition of Lytic Activity in Human Tumor Reactive T Lymphocytes // PloS oNE. -2011. - Vol. 6. - E22560.
Поступила в редакцию 18.07.2016 г.
AA.Savchenko1, A.G.Borisov1, I.V Kudryavtsev2,3, A.V.Moshev1
Relationship of the T-regulatory cells number with the cytotoxic T-lymphocytes and NKT-cells levels in patients with renal cancer
1Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk;
institute of Experimental Medicine, St.Petersburg; 3N.N.Petrov Research Institute of Oncology, St.Petersburg
The aim of the study was to investigate the features of the relation to the number and the phenotype of the cytotoxic T-lymphocytes and NKT-cell from regulatory T-cells content in the blood by patients with renal cell carcinoma. The study included patients with renal cell carcinoma (T3N0M0, clear cell type) at the age of 40-55 years before surgery. Lymphocyte immunophenotyping was performed by flow cytometry. It is found that in the peripheral blood of the patients with renal cell carcinoma accompanied by increased number of T-regulatory cells observed decrease content of the cytotoxic T-lymphocytes and increased levels of the NKT-cells. It is assumed that no change in the number of activated T-regulatory cells and cy-totoxic T-lymphocyte determined migration from the blood. Increasing the amount of the NKT-cells in renal cancer is determined by the increase of activated and effector cells but at lower levels of the regulatory subpopulation. The content of the T-regulatory cells in healthy people weakly correlated with the effector subpopulations of T-lymphocytes. In patients with renal cancer the number of the activated T-regulatory cells is closely correlated with the various NKT-lymphocytes fractions. Moreover, if the mature and regulatory NKT-cells subset detected negative relations, so with the NKT-cells expressing CD28 and CD57 markers found positive correlations that characterizes the codirectional dynamics the activated of the regulatory and effector T-lymphocyte subpopulations levels in the background of tumor growth. A canonical analysis demonstrated that the highest significance kidney cancer patients have activated regulatory T-cells, cytotoxic T cells and NKT-cells. A canonical analysis demonstrated that the highest significance by renal cancer patients have activated regulatory T-cells, cytotoxic T-cells and NKT-cells.
Key words: renal cancer, T-regulatory cells, cytotoxic T-cells, NKT-cells, subset, relationship
