CC BY
130
Медицинская иммунология 2011, Т. 13, № 2-3, стр. 181-188 © 2011, СПб РО РААКИ
Оригинальные статьи
ВЗАИМОСВЯЗЬ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ И СТЕПЕНИ ВИРУСНОЙ НАГРУЗКИ ПРИ ОСТРОМ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ В
Савченко А.А., Цуканов В.В., Родина Д.В., Борисов А.Г.
НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, г. Красноярск
Резюме. С целью изучения иммунологических показателей и способности мононуклеаров крови к синтезу цитокинов в зависимости от степени вирусной нагрузки обследовано 76 больных с острым вирусным гепатитом В (ОВГВ). Наименее выраженные изменения величин иммунологических показателей выявляются при низкой степени вирусной нагрузки. Наиболее выраженные изменения исследуемых показателей обнаружены у больных со средней и высокой степенью вирусной нагрузки. Причем, если у больных ОВГВ со средней степенью вирусной нагрузки выявляется повышение функциональной активности В-лимфоцитов и снижение содержания NK-клеток, то при высокой степени вирусной нагрузки обнаружено максимальное содержание В-лимфоцитов в периферической крови и повышенный уровень CD25-экспрессирующих лимфоцитов. У больных ОВГВ выявляется исходная повышенная активность мононуклеарных клеток к синтезу цитокинов, но при снижении активности мононуклеаров при дополнительной функциональной индукции. С увеличением степени вирусной нагрузки наблюдается снижение уровня спонтанного синтеза TNFa.
Ключевые слова: гепатит B, иммунный статус, у-интерферон, фактор некроза опухолей-а, уровень синтеза.
SavchenkoA.A., Tsukanov V.V., Rodina D.V., BorisovA.G.
INTERRELATIONS BETWEEN IMMUNOLOGICAL ALTERATIONS AND VIRAL LOAD IN ACUTE HEPATITIS B
Abstract. A group of seventy-six patients with acute viral hepatitis B (HB) was under study, in order to evaluate immunological parameters, and ability of blood mononuclear cells to produce cytokines, as dependent on individual viral loads. The immune parameters were less affected in cases of low viral load. Meanwhile, the immune profiles exhibited maximal alterations in the patients with medium and high viral loads. Most expressed changes of immune parameters are found in patients with moderate and high virus load. Meanwhile, moderate HB viral loads are associated with higher functional activity of B-cells and lower NK numbers, whereas high viral loads correlated with increased amounts of peripheral B cells and higher CD25+ lymphocyte levels. Increased background cytokine synthesis is revealed in mononuclear cells of the patients with acute HB, being, however, suppressed upon additional functional induction. An increased viral load is associated with decreased basal levels of TNFa synthesis. (Med. Immunol., 2011, vol. 13, N2-3, pp 181-188)
Keywords: hepatitis B, immune profile, interferon-y, tumor necrosis factor-а, production levels.
Адрес для переписки:
Савченко Андрей Анатольевич,
НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, 3Г.
Факс: (391) 228-06-83.
E-mail: aasavchenko@yandex.ru
Введение
Вирусный гепатит В — широко распространенная инфекция человека, отличается многообразием клинических проявлений и исходов заболевания. Прогрессирование болезни зависит от продолжающейся репликации вируса в печени и состояния иммунной системы больно-
181
Савченко А.А. и др.
Медицинская Иммунология
го [5, 15]. Вирус не оказывает прямого цитопатического действия, лизис инфицированных ге-патоцитов определяется иммунным ответом хозяина [1, 8, 12]. Недостаточность лизиса инфицированных вирусом гепатоцитов объясняется различными механизмами, она может быть связана с усиленной супрессорной функцией лимфоцитов, дефектом цитотоксических лимфоцитов, увеличенным уровнем апоптоза специфических Т-лимфоцитов, наличием блокирующих антител на клеточной мембране, а так же недостатком синтеза цитокинов. В настоящее время, доказано, что активность иммунного ответа при остром вирусном гепатите В (ОВГВ) в значительной степени определяется оптимальным соотношением популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов, интенсивностью апоптоза Т-клеток и уровнем продукции ключевых цитокинов [4, 9, 10]. При этом обсуждается, что интенсивность иммунного ответа также может зависеть от уровня вирусной нагрузки.
Целью нашей работы было изучение иммунного ответа и способности мононуклеаров периферической крови к синтезу цитокинов у больных ОВГВ в зависимости от степени вирусной нагрузки.
Материалы и методы
Обследовано 76 пациентов инфекционных больниц г. Красноярска с диагнозом «острый вирусный гепатит В, среднетяжелое течение» (31 женщина и 45 мужчин). Диагноз ОВГВ устанавливался при помощи стандартных клиникобиохимических методов и верифицировался обнаружением с помощью иммуноферментных методов специфических маркеров — HBsAg, HBeAg, специфических иммуноглобулинов G и М к HBcAg, общих антител к HbeAg и вирусной ДНК. Из обследования исключались лица, инфицированные другими вирусами гепатитов и вирусом иммунодефицита человека. В качестве контроля обследовано 106 здоровых людей (49 женщин и 57 мужчин). Все исследования выполнены с информированного согласия испытуемых и в соответствии с этическими нормами Хельсинской Декларации (2001 г.).
ДНК ВГВ выявляли методом полимеразной цепной реакции с ипользованием флуоресцентномеченых гибридизационных зондов («ДНК-технология», Москва). Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов крови оценивали с помощью метода непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CD6, CD20, CD25, HLA-DR, CD95. Для дополнительной характеристики Т-клеточного звена иммунной системы вычисляли соотношение CD4+/CD8+ и индекс
активации Т-лимфоцитов (HLA-DR+/CD20+). Концентрацию иммуноглобулинов А, М и G в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии в агарозном геле по Ман-чини. Состояние гуморального иммунитета характеризовали также уровнем относительного синтеза IgA (IgA/CD20+), IgM (IgM/CD20+) и IgG (IgG/CD20+) [2]. Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови изучали методом селективной преципитации в полиэтиленгликоле.
Спонтанная и индуцированная продукция интерферона-у (IFNy) и фактора некроза опухоли-а (TNFa) оценивалась иммуноферментным методом с использованием тест-систем производства Вектор-Бест (г. Новосибирск) после in vitro инкубации цельной крови с индуктором синтеза цитокинов фитогемагглютини-ном (ФГА) и рекомбинантным НВsAg (вакцина HBVax II производства Merk Sharp Doun, США) в СО2-инкубаторе в течение 24 часов.
Описание выборки производили с помощью подсчета медианы (Ме) и интерквартального размаха в виде 25 и 75 процентилей (С25 и С75). Достоверность различий между показателями независимых выборок оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни. Различия между показателями спонтанного и индуцированного уровней синтеза цитокинов в каждой обследуемой группе людей определяли по U-критерию Вилкоксона. Для исследования силы взаимосвязей показателей вычислялся коэффициент ранговой корреляции по Спирмену. Статистический анализ осуществляли в пакете прикладных программ Statistica 6.0 (StatSoft Inc., 2001).
Результаты
При обследовании больных ОВГВ установлено, что содержание ДНК ВГВ в сыворотке крови характеризуется следующими статистическими характеристиками: Ме = 3,40 х 104 копий ДНК/мл, С25 = 1,90 х 103 копий ДНК/мл, С75 = 5,25 х 105 копий ДНК/мл, минимальное содержание = 0 копий ДНК/мл, максимальное содержание = 1,44 х 1010 копий ДНК/мл. Взаимосвязей содержания ДНК ВГВ с иммунологическими показателями и спонтанной и индуцированной продукцией IFNy и TNFa не обнаружено. Исходя из распределения количества ДНК ВГВ, мы разделили всех больных ОВГВ на три подгруппы: с низкой степенью вирусной нагрузки (ниже уровня соответствующего величине С25), со средней степенью вирусной нагрузки (лица с интерквартальным размахом ДНК ОВГВ: С25-С75) и с высокой степенью вирусной нагрузки (выше уровня соответствующего величине С75). Показатели количества ДНК ВГВ в сыворотке
182
2011, Т. 13, № 2-3
Иммунитет при гепатите В
ТАБЛИЦА 1. КОЛИЧЕСТВО МОЛЕКУЛ ДНК ВГВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ ОВГВ В ЗАВИСИМОСТИ
ОТ степени вирусной нагрузки (ме, с25-с75)
Группы больных ОВГВ ДНК ВГВ, копий ДНК/мл Р
1. Низкая степень вирусной на- Ме 0,00 х 100
грузки, N = 19 С25-С75 0,00 х 100 - 1,00 х 103
2. Средняя степень вирусной на- Ме 3,40 х 104 Р1 < 0,001
грузки, N = 38 С25-С75 7,00 х 103 - 2,30 х 105
3. Высокая степень вирусной на- Ме 4,50 х 107 P1, 2 < 0,001
грузки, N = 19 С25-С75 5,80 х 106 - 3,50 х 109
Примечание. Р, - статистически достоверные различия с группой Больных ОВГВ с низкой степенью вирусной нагрузки; Р2 - статистически достоверные различия с группой Больных ОВГВ со средней степенью вирусной нагрузки.
крови у больных ОВГВ в зависимости от степе- ных ОВГВ независимо от степени вирусной нани вирусной нагрузки представлены в таблице 1. грузки снижено процентное содержание цирку-При исследовании состояния клеточного зве- лирующих лимфоцитов в периферической крона иммунной системы установлено, что у боль- ви (табл. 2). Причем максимальное снижение со-
таблица 2. состояние клеточного иммунитета у больных овгв в зависимости от тяжести вирусной нагрузки (ме, С25-С75)
Показатели Контроль (n = 106) 1 Низкая вирусная нагрузка (n = 19) 2 Средняя вирусная нагрузка (n = 38) 3 Высокая вирусная нагрузка (n = 19) 4
Ме С25-С75 Ме С25-С75 Ме С25-С75 Ме С25-С75
Лейкоциты, 109/л 5,75 4,80-7,50 6,70 5,20-7,00 6,25 5,00-7,30 6,30 4,70-7,30
Лимфоциты, % 36,0 29,0-45,0 32,0 18,0-36,0 27,0 21,0-31,0 33,0 24,0-36,0
Р1 < 0,05 Р1 < 0,001 Р1,3 < 0,05
CD3+ лимфоциты, % 66,0 60,0-72,0 62,0 55,0-70,0 64,0 54,0-70,0 60,0 52,0-60,0
Р1 < 0,01
CD4+ лимфоциты, % 42,0 34,0-48,0 35,0 24,0-38,0 35,0 26,0-41,0 30,0 24,0-36,0
Р1 < 0,01 Р1 < 0,001 Р1 < 0,001
CD8+ лимфоциты, % 27,0 21,0-34,0 27,0 25,0-30,0 28,0 24,0-33,0 26,0 23,0-34,0
CD20+ лимфоциты, % 14,0 10,0-17,0 16,0 14,0-20,0 19,5 12,0-23,0 20,0 16,0-22,0
Р1 < 0,05 Р1 < 0,001 Р1 < 0,001 Р2 < 0,05
CD25+ лимфоциты, % 11,5 7,0-16,0 11,5 2,0-14,0 10,0 5,0-12,0 17,5 5,0-18,0
Р3 < 0,05
CD56+ лимфоциты, % 17,0 13,0-21,0 17,0 10,0-21,0 12,0 7,0-16,0 12,0 3,0-16,0
Р1,2 < 0,05 Р1,2 < 0,05
HLA-DR+ лимфоциты, % 17,0 13,0-21,0 20,0 13,0-24,0 20,0 16,0-22,0 19,0 12,0-22,0
Р1 < 0,05
CD95+ лимфоциты, % 14,0 10,0-20,0 10,5 7,0-12,0 8,0 3,0-13,0 20,0 18,0-20,0
Р1 < 0,01 Р1,2 < 0,05 Р3 < 0,01
CD4+/CD8+ 1,50 1,10-1,86 1,25 0,81-1,46 1,07 0,81-1,53 1,18 0,74-1,41
Р1 < 0,05 Р1 < 0,01 Р1 < 0,01
HLA-DR+/CD20+ 1,29 0,93-1,53 1,00 0,86-1,04 1,06 1,00-1,86 0,97 0,43-1,16
Р1,3 < 0,05
Примечание. Р, - статистически достоверные различия с показателями контрольной группы; Р2 - статистически достоверные различия с показателями Больных ОВГВ с низкой степенью вирусной нагрузки; Р3 - статистически достоверные различия с показателями Больных ОВГВ со средней степенью вирусной нагрузки.
183
Савченко А.А. и др.
Медицинская Иммунология
ТАБЛИЦА 3. СОСТОЯНИЕ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ ОВГВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ТЯЖЕСТИ ВИРУСНОЙ нагрузки (ме, С25-С75)
Показатели Контроль (n = 106) 1 Низкая вирусная нагрузка (n = 19) 2 Средняя вирусная нагрузка (n = 38) 3 Высокая вирусная нагрузка (n = 19) 4
Ме С25-С75 Ме С25-С75 Ме С25-С75 Ме С25-С75
IgA, г/л 2,13 1,32-3,20 3,10 2,50-3,50 3,45 2,80-4,30 3,20 2,40-4,20
Р1 < 0,001 Р1 < 0,001 Р1 < 0,001
IgM, г/л 1,25 0,60-1,80 2,00 1,40-2,10 2,00 1,50-2,20 2,20 1,20-2,60
Р1 < 0,001 Р1 < 0,001 Р1 < 0,001
IgG, г/л 11,20 8,60-15,00 14,40 12,00- 16,00 15,85 12,80- 18,10 16,90 10,80- 18,20
Р1 < 0,001 Р1 < 0,001 Р1 < 0,001
IgA/CD20+, нг/клетку 6,73 3,83-13,29 11,11 4,95-15,38 12,99 8,38-18,43 8,96 4,13-10,32
Р1 < 0,05 Р1 < 0,001 Р1 < 0,05
IgM/CD20+, нг/клетку 4,29 1,65-11,00 5,69 3,79-8,51 6,95 4,35-10,47 5,85 2,45-7,20
Р1 < 0,05
IgG/CD20+, нг/клетку 39,12 25,29- 66,67 48,98 34,38- 59,52 58,15 35,87- 83,72 44,94 19,37- 67,66
Р1 < 0,01
ЦИК, о.е. 30,00 15,00- 70,00 29,00 4,00- 124,00 35,00 22,00-104,00 37,00 14,00- 88,00
Примечание. См. таблицу 1.
держания лимфоцитов выявляется при средней степени вирусной нагрузки, минимальное снижение — при высокой степени вирусной нагрузки. При этом у больных ОВГВ с высокой степенью вирусной нагрузки выявляется относительное повышение содержания лимфоцитов относительно показателей больных со средней степенью вирусной нагрузки. Также независимо от степени вирусной нагрузки в периферической крови больных ОВГВ снижается относительное количество CD4+ лимфоцитов с понижением величины соотношения CD4+/CD8+ и повышено процентное содержание CD20+ клеток. Однако у больных ОВГВ с высокой степенью вирусной нагрузки выявляется максимальное содержание CD20+ лимфоцитов.
Только у больных со средней и высокой степенью вирусной нагрузки в периферической крови снижается относительное содержание CD56+ лимфоцитов как относительно контрольного диапазона, так и уровня, выявленного при низкой степени вирусной нагрузки. Характерной особенностью у больных со средней степенью вирусной нагрузки является повышение процентного содержания HLA-DR+ клеток и снижение относительного количества CD95+ лимфоцитов. В то же время только у больных с высокой степенью вирусной нагрузки повышается про-
центное содержание CD95+ лимфоцитов, причем относительно уровней, выявляемых у всех обследованных групп. Также, только у больных ОВГВ с высокой степенью вирусной нагрузки относительно контрольного диапазона и уровня, выявляемого при средней степени вирусной нагрузки, снижается величина коэффициента активации Т-лимфоцитов. Только относительно уровня, выявляемого при средней степени вирусной нагрузки, у больных с высокой степенью вирусной нагрузки повышается процентное содержание CD25+ клеток.
Менее выражена зависимость исследуемых величин показателей гуморального иммунитета от степени вирусной нагрузки. Так, независимо от вирусной нагрузки у больных ОВГВ повышаются уровни концентраций IgA, M и G в сыворотке крови (табл. 3). Только у больных с низкой и средней степенью вирусной нагрузки повышается уровень относительного синтеза IgA. Только у больных со средней степенью вирусной нагрузки повышаются уровни относительного синтеза IgM и G.
Уровни спонтанного и индуцированного синтеза IFNy значительно различаются в контрольной группе и у обследованных больных ОВГВ (рис. 1). Наиболее высокие уровни спонтанного синтеза отмечаются в группе больных с высокой степенью вирусной нагрузкой (достоверное
184
2011, Т. 13, № 2-3
Иммунитет при гепатите В
увеличение относительно уровней, выявляемых во всех обследованных группах). В то же время при низкой и средней степени вирусной нагрузки также выявляется повышение уровня спонтанного синтеза IFNy относительно контрольного диапазона (рис. 1А). При стимуляции ФГА наиболее интенсивный уровень отмечен в контрольной группе (в 114 раз). При низкой и средней степени вирусной нагрузки уровень ФГА-индуцированого синтеза IFNy повышается в 2,7 и 2,6 раза, соответственно (рис. 1Б). В то же время у больных с высокой степенью вирусной нагрузки воздействие ФГА на мононуклеарные клетки не приводит к изменению уровня синтеза данного цитокина. При стимуляции HBsAg наиболее интенсивный ответ по синтезу IFNy также выявляется у лиц контрольной группы (увеличение в 11,6 раз) (рис. 1В). У больных ОВГВ с низкой и средней степенью вирусной нагрузки уровень синтеза цитокина при воздействии HBsAg повышается в 1,4 и 1,3 раза, соответственно. При высокой степени вирусной нагрузки выявляется снижение уровня синтеза IFNy на 14,6% при воздействии HBsAg.
Наиболее высокий уровень спонтанной продукции TNFa отмечается у больных ОВГВ с низкой степенью вирусной нагрузкой (рис. 2А). С повышением степени вирусной нагрузки уровень спонтанного синтеза данного цитокина статистически достоверно снижается. Максимальный уровень повышения синтеза TNFa при воздействии ФГА выявляется у лиц контрольной группы (в 36,0 раз) (рис. 2Б). В группах больных ОВГВ максимальный уровень повышения синтеза TNFa в ответ на воздействие ФГА выявляется в группе с высокой степенью вирусной нагрузки (в 9,7 раза), тогда как минимальный (в 2,1 раза) — у больных со средней степенью вирусной нагрузки. Максимальный уровень повышения уровня синтеза TNFa при воздействии HBsAg также выявляется у лиц контрольной группы (в 16,0 раз) (рис. 2В). Среди групп больных ОВГВ максимальный уровень повышения синтеза TNFa при воздействии HBsAg выявляется у больных с низкой степенью вирусной нагрузки (в 4,2 раза), тогда как при средней и высокой степени вирусной нагрузки в ответ на HBsAg выявляется увеличение синтеза данного цитокина в 1,5 и 2,5 раза, соответственно.
С помощью корреляционного анализа установлено, что в зависимости от степени вирусной нагрузки выявляются взаимосвязи количества ДНК ВГВ с иммунологическими показателями и уровнем синтеза исследуемых цитокинов. Так, у больных с низкой степенью вирусной нагрузки количество копий ДНК положительно взаимосвязано с уровнями абсолютного содержания
А
с
о
J.3 X <1>
о
Q.
>
250
200
150
100
50
0
р1 < Р2 < 0,01 0,001 -| Рз < 0,0
Р \ о о" V QГ о о о" V
1 2 3 4
Б
с
о
X
X
<1>
о
Q.
>
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
Р1 < 0,05 Р1 < 0,001 Р1 < 0,01
} р2 < 0,05 т
1
1 2 3 4
в
с
о
X
X
<1>
о
Q.
>
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
Рз < 0,05
Р1 < 0,05
1 2 3 4
Рисунок 1. Уровень спонтанного (А) и ФГА- (Б) и HBsAg-индуцированного (В) синтеза IFNy в крови у больных овГв в зависимости от степени вирусной нагрузки
примечание. 1 - контроль; 2 - низкая степень вирусной нагрузки; 3 - средняя степень вирусной нагрузки; 4 - высокая степень вирусной нагрузки.
Р, - статистически достоверные различия с показателями контрольной группы; Р2 - статистически достоверные различия с показателями больных ОВГВ с низкой степенью вирусной нагрузки; Р3 - статистически достоверные различия с показателями больных ОВГВ со средней степенью вирусной нагрузки.
CD8+ лимфоцитов (г = 0,50; P < 0,05) и концентрацией IgM (г = 0,53; P < 0,05) в сыворотке крови. При средней степени вирусной нагрузки обнаружена отрицательная взаимосвязь содержания ДНК ВГВ с уровнем ФГА-индуцированного синтеза TNFa (г = -0,46; P < 0,01) и положительная — с величиной абсолютного количества CD25+ клеток (г = 0,45; P < 0,05). У больных с высокой степенью вирусной нагрузки количество копий ДНК ВГВ положительно коррелирует
185
Савченко А.А. и др.
Медицинская Иммунология
а
о
Q.
>
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Р1 < 0,001
о о о V CL
р < 0 05 Pi,2 < 0,05
1
2
3
4
Рисунок 2. Уровень спонтанного (А) и ФГА- (Б) и HBsAg-индуцированного (в) синтеза TNFa в крови у больных овГв в зависимости от степени вирусной нагрузки
примечание. См. рисунок 1.
б
в
с абсолютным содержанием CD16+ лимфоцитов (г = 0,53; P < 0,05) и отрицательно — с процентным уровнем CD25+ клеток (г = -0,83; P < 0,05).
Обсуждение
Анализ полученных результатов позволяет определить, что у больных ОВГВ независимо от степени вирусной нагрузки выявляется иммунная недостаточность, определяемая снижением содержания общих лимфоцитов и CD4+ клеток. Также независимо от вирусной нагрузки в периферической крови больных повышается количество В-лимфоцитов, что, в том числе, определяет увеличение концентрации IgA, M и G.
При исследовании состояния иммунного статуса у больных ОВГВ в зависимости от степени вирусной нагрузки обнаружено, что наиме-
нее выраженные изменения иммунного статуса выявляются при низкой концентрации ДНК ВГВ в сыворотке крови (по сравнению с другими группами больных ОВГВ). При этом только у больных данной группы выявляется положительная взаимосвязь количества копий вирусной ДНК в крови и содержанием цитотоксических Т-лимфоцитов и IgM. Наличие данной корреляционной связи характеризует развитие зависимости интенсивности иммунного ответа в диапазоне низкой вирусной нагрузки.
Характерными особенностями иммунного статуса у больных ОВГВ со средней степенью вирусной нагрузки является повышенное содержание HLA-DR+ клеток. Необходимо отметить, что данный рецептор экспрессируется на В-лимфоцитах и является маркером поздней активации Т-лимфоцитов [11, 13]. В связи с этим, для определения с какой клеточной популяцией связано увеличение HLA-DR+ лимфоцитов, мы вычисляли индекс активации Т-лимфоцитов. При этом у больных со средней степенью вирусной нагрузки величина индекса активации Т-лимфоцитов не отличается от контрольных величин. Следовательно, повышенное содержание HLA-DR-экспрессирующих клеток у больных данной группы связано с увеличенным содержанием В-лимфоцитов. Однако именно у больных со средней степенью вирусной нагрузки увеличением содержания в периферической крови В-лимфоцитов определяется повышенным уровнем их функциональной активности (по уровню относительного синтеза иммуноглобулинов).
Кроме того, характерной особенностью иммунного статуса у больных ОВГВ со средней степенью вирусной нагрузки является понижение содержания CD95+ клеток. CD95+ рецептор определяется как маркер готовности клетки реализовать свое развитие через апоптоз (маркер апоптической предуготовленности) [6, 14]. Причем, CD95 и HLA-DR-рецепторы определяются как поздние активационные маркеры лимфоцитов.
Только у больных ОВГВ со средней и высокой степенью вирусной нагрузки в периферической крови повышается содержания NK-клеток (по CD56+ рецептору). Известно, что NK-клетки являются одной из ключевой популяции клеток иммунной системы ответственной за противовирусный иммунитет [7]. Снижение содержания данной популяции клеток при средней и высокой степени вирусной нагрузки отражает понижение интенсивности противовирусного иммунитета.
Наиболее выраженные изменения иммунного статуса выявляются при высокой степени вирусной нагрузки. Во-первых, у больных данной груп-
186
2011, Т. 13, № 2-3
Иммунитет при гепатите В
пы выявляется максимальный уровень содержания В-лимфоцитов. Во-вторых, при высокой степени вирусной нагрузки выявляется максимальное количество клеток с CD25+ маркером. Известно, что CD25+ маркер является низкоаффинным рецептором для интерлейкина-2 (IL-2) [3, 7]. Повышение количества клеток с CD25+ маркером у больных ОВГВ с высокой степенью вирусной нагрузки сопровождается увеличением содержания лимфоцитов, экспрессирующих CD95+ рецептор. Между тем, именно у больных данной группы выявляется снижение величины индекса активации Т-лимфоцитов. Кроме того, отрицательная взаимосвязь между количеством вирусной ДНК и содержанием CD25+ клеток определяет снижение количества клеток, экспрессирующих рецептор к IL-2, при увеличении вирусной нагрузки.
Оценка уровней спонтанного и индуцированного синтеза IFNy и TNFa позволила установить, что у больных ОВГВ выявляется исходно повышенный уровень синтеза мононуклеарны-ми клетками цитокинов. Причем максимальный уровень спонтанного синтеза IFNy выявляется при высокой степени вирусной нагрузки, тогда как максимальный уровень спонтанного синтеза TNFa выявляется при низкой степени вирусной нагрузки. В то же время, уровень стимуляции при ФГА- и HBsAg-индуцированном синтезе цитокинов является максимальным в контрольной группе. Более того, у больных ОВГВ с высокой степенью вирусной нагрузки при HBsAg стимуляции выявляется снижение уровня синтеза IFNy. Следовательно, у больных ОВГВ выявляется исходная активация мононуклеарных клеток к синтезу, но при снижении уровня функционального резерва при дополнительной индукции активности клеток иммунной системы.
Таким образом, у больных ОВГВ выявляется иммунная недостаточность по клеточному типу при повышении активности гуморального звена иммунной системы. При исследовании иммунологических показателей в зависимости от степени вирусной нагрузки установлено, что наименее выраженные изменения выявляются при низкой степени вирусной нагрузки. По-видимому, низкий уровень вирусной ДНК оказывает слабое влияние на развитие иммунного ответа, что подтверждается результатами корреляционного анализа: только у больных с низкой степенью вирусной нагрузки выявляется положительная зависимость цитотоксических Т-лимфоцитов и IgM от количества вирусной ДНК в сыворотке крови. При средней степени вирусной нагрузки выявляется снижение противовирусного иммунитета за счет понижения содержания NK-клеток, но при повышении функциональной активно-
сти В-лимфоцитов. При высокой степени вирусной нагрузки в периферической крови больных ОВГВ выявляется максимальное содержание В-лимфоцитов и CD25+ клеток. При оценке уровней спонтанного и индуцированного синтеза IFNy и TNFa установлено, что у больных ОВГВ выявляется исходная повышенная активность мононуклеарных клеток к синтезу цитокинов, но сниженная активность мононуклеаров при дополнительной индукции. При этом выявляется снижение уровня спонтанного синтеза TNFa с увеличением степени вирусной нагрузки.
Список литературы
1. Гончикова С.Ч., Убеева И.П., Николаев С.М. Иммунологические аспекты патогенеза вирусных гепатитов // Бюллетень ВосточноСибирского научного центра СО РАМН. — 2010. - № 2. - С. 17-22.
2. Земсков А.М., Земсков В.М. Дополнительные методы оценки иммунного статуса //Клиническая лабораторная диагностика. — 1994. — № 3. — С. 34-35.
3. Зенин В.В., Аксенов Н.Д., Шатрова А.Н., Марахова И.И. Динамика экспрессии CD25 в лимфоцитах периферической крови человека, стимулированных фитогемагглютинином или интерлейкином-2 // Цитология. — 2009. — Т. 51, № 6. — С. 506-510.
4. Иванова М.Р., Жемухова Р.Х. Цитокино-вый профиль у больных острыми вирусными гепатитами В и С // Клиническая лабораторная диагностика. — 2009. — № 3. — С. 41-42.
5. Нагоев Б.С., Отараева Б.И., Рындина Е.И., Иванова М.Р. Клинико-патогенетические особенности острого гепатита В // Инфекционные болезни. — 2008. — Т 6, № 1. — С. 16-20.
6. Порядин Г.В., Салмаси Ж.М., Казимир-ский А.Н. Активационные маркеры лимфоцитов как показатели дизрегуляции иммунной системы при воспалении // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 2006. — № 1. — С. 2-7.
7. Ярилин А.А. Иммунология. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. — 752 с.
8. Brooks D.G., Teyton L., Oldstone M.B., McGavern D.B. Intrinsic functional dysregulation of CD4 T cells occurs rapidly following persistent viral infection // J. Virol. — 2005. — Vol. 79, N 16. — P. 10514-10527.
9. Kornek M., Popov Y., Libermann T.A., Afdhal N.H., Schuppan D. Human T cell microparticles circulate in blood of hepatitis patients and induce fibrolytic activation of hepatic stellate cells // Hepatology. — 2011. — Vol. 53, N 1. — P. 230242.
187
Савченко А.А. и др.
Медицинская Иммунология
10. Lee M.J., Jin YH., Kim K., Choi Y., Kim H.C., Park S. Expression of hepatitis B virus x protein in hepatocytes suppresses CD8 T cell activity // Immune Netw. - 2010. - Vol. 10, N 4. - P. 126-134.
11. Mouillot G., Carmagnat M., Grard L., Garnier J.L., Fieschi C., Vince N., Karlin L., Viallard J.F., Jaussaud R., Boileau J., Donadieu J., Gardembas M., Schleinitz N., Suarez F., Hachulla E., Delavigne K., Morisset M., Jacquot S., Just N., Galicier L., Charron D., Debrf P., Oksenhendler E., Rabian C. B-cell and T-cell phenotypes in CVID patients correlate with the clinical phenotype of the disease // J. Clin. Immunol. — 2010. — Vol. 30, N 5. — P. 746-755.
12. Ozaras R., Ar C., Ongoren S., Mete B., Tabak F., Mert A., Ozturk R. Acute hepatitis B despite a previous high titer of anti-HBs // Hepatol. Int. -2010. - Vol. 4, N 2. - P. 530-532.
13. Pagel J.M., Orgun N., Hamlin D.K., Wilbur D.S., Gooley TA., Gopal A.K., Park S.I., Green D.J., Lin Y., Press OW A comparative analysis
of conventional and pretargeted radioimmunotherapy of B-cell lymphomas by targeting CD20, CD22, and HLA-DR singly and in combinations // Blood. -2009. - Vol. 113, N 20. - P. 4903-4913.
14. Tanimura Y, Kon M., Shimizu K., Kimura F., Kono I., Ajisaka R. Effect of 6-day intense Kendo training on lymphocyte counts and its expression of CD95 // Eur. J. Appl. Physiol. - 2009. - Vol. 107, N 2. - P. 227-233.
15. Zhang Z., Jin B., Zhang J.Y., Xu B., Wang H., Shi M., Wherry E.J., Lau G.K., Wang F.S. Dynamic decrease in PD-1 expression correlates with HBV-specific memory CD8 T-cell development in acute self-limited hepatitis B patients // J. Hepatol. -2009. - Vol. 50, N 6. - P. 1163-1173.
поступила в редакцию 30.01.2011 отправлена на доработку 13.02.2011 принята к печати 05.03.2011
188
