CC BY
26
В.Н. Дармограй, Ю.В. Карасева, В.Н.Морозов и др.
функциональных систем П.К. Анохина [2, 9] биологически активным веществам (синтоксины и кататоксины) не отводится практически никакой роли. Формирование адаптивных программ при патологических состояниях в процессе биоэволюции идет путем взаимодействия его частей и усложнения этого взаимодействия в процессе филогенеза в соответствии с требованиями внутренней и внешней среды. Анализ СПА и КПА стимулирует поиск новых фармакологических соединений со свойствами синтоксинов или кататоксинов, модулирующих программу адаптации. Т. о., предложена принципиально новая гипотеза развития стрессовых реакций с участием антагонистических систем -гипоталамо-гипофизарно-репродуктивной и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой.
Литература
1. Андреенко Г.В. Методы исследования фибринолитиче-ской системы крови.- М.: МГУ, 1981.- 132 с.
2. Анохин П.К. Узловые вопросы теории функциональной системы.- М.: Наука, 1980.- 196 с.
3. Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемостаза.- М.: Нью-диамед-АО, 1999.- 224 с.
4. Григорьев С.Г. и др. Пакет прикладных программ Stat-graphics персонального компьютера.- Спб., 1992.- 132 с.
5. Патент № 2119331 от 27.09.98 Средство для лечения ожоговых ран «Витадерм» / Дармограй В.Н., Петров В.К., Ухов Ю.И.
6. Карасева Ю.В. Системные психонейроиммунологические механизмы в адаптационных возможностях организма женщин: Автореф. дис... докт. мед. наук.- Тула, 2003.- 42 с.
7. Морозов В.Н. Системные механизмы адаптации при криовоздействии и способы их коррекции: Автореф. дис. докт.мед.наук.- Тула, 1999.- 45 с.
8. Морозов В. Н. и др. Программы адаптации в эксперименте и клинике.- Тула: ТулГУ, 2003.- 284 с.
9. Судаков К.В. Кибернетические свойства функциональных систем // ВНМТ.- 1998.- Т. 5, № 1.- С. 12-19.
10. Тарусов Б.Н. Физико-химические механизмы гомеостаза // Тр. Х11 съезда физиол.- Л.: Тбилиси, 1975.- Т. 1.- С. 150-151.
11. Управление функциональными системами организма.-Ч.1./ Под ред. А.А.Хадарцева.- Тула: Изд-во ТулГУ, 1999.- 207 с.
12. Albe-FessardD.et al. Atlas stereotaxique du diencephale du rat blanc.- Paris, 1966.- 52 р.
13. SelyeH. Стресс без дистресса.- М.: Прогресс, 1982.
PHYTOECDISTEROIDS AND FERTILITY FACTORS AS ACTIVATORS OF SYNTOXIC PROGRAMMES OF COPING
группе (ОГ) в сравнении с контролем (КГ), имелась позитивная корреляция альтерации между c-fosmRNA и ppENKmRNA
20 BALB/С мышей весом 20-22 г инъецировали перитоне-ально 1,0 мл стерильного 4% крахмала, растворенного в нормальном физрастворе; после 48 ч их наблюдали в условиях фиксации в течение 15 мин., разделив на 2 группы: ОГ, получившую электроакупунктуру (ЭА - 1,5 В, 5 Гц) в билатеральные точки «Цзусаньли» в течение 15 мин, и КГ без ЭА. сации в течение 15 мин., разделив на 2 группы: ОГ, получившую электроакупунктуру (ЭА - 1,5 В, 5 Гц) в билатеральные точки «Цзусаньли» в течение 15 мин, и КГ без ЭА.
Порог болевой чувствительности определялся до и после ЭА или фиксации с помощью К+-ионофореза. Для сбора и выделения перитонеальных макрофагов каждой мыши вводился 1,0 мл физраствора перитонеально. Генная экспрессия c-fos и ppENK определялась путем situ гибридизации [1] и РНК дот блоттинга [2]. 10 мкл суспензии макрофагов в концентрации 1х105 клеток/мл блоттингировались на нитроцеллюлозную мембрану (NCM). Высохшие дот образцы, один дот на каждую особь, приготовлены для детекции РНК дот блоттинга. BCIP/NBT (Promega) использован, как субстрат для получения фиолетового цвета. Физраствор был заменителем субстрата и протеолизирован с рибонуклеазой для негативного контроля. Дот блот сигналы сканировали 528 нм волнами на Shimadu TLC сканере и анализировались статистически.
Таблица 1
Сканирование OD X±S сигналов дот блоттинга в макрофагах
c-fosmRNA ppENKmRNA
ОГ 9,43±0,38 9,11 ±1,38
КГ 6,16±0.62 6,34±0,96
р <0,005 <0,025
Уровень болевого порога перед ЭА был 0,02±0,04, после ЭА - 0,38±0,04 (р<0,01). Сигналы гибридизации окрасились в сине-фиолетовый цвет и локализованы в цитоплазме макрофагов. Сигналы гибридизации ррЕКК и с-Ю возросли в ОГ. Сканированную величину оптической плотности (ОЭ) сигналов с-Ю и ррЕКК РНК дот блоттинга см. в табл. 1. Сигналы дот блоттинга ррЕКК и с-Ю макрофагов были сильнее в ОГ, позитивно коррелировали с ростом уровня болевого порога в ОГ (табл. 2.) Была позитивная корреляция альтерации между с-АэвтЯКА и ррЕЖтЯКА г=0,53 (р<0,05).
Таблица 2
Корреляция между величиной ОО сигнала и степенью анальгезии
ppENK
г= 0,74 0,86
p <0,005 <0,0005
V.N. DARMOGRAY, YU.V. KARASYOVA, V.N. MOROZOV, V.I. MOROZOVA, E.M. NAUMOVA, A.A. KHADARTSEV
Summary
The authors suggest in principle q\a new hypothesis concerning development of stress reactions with involvement of antagonistic systems, and namely: hypothalamohypophysial-reproductive and hypothalamohypophysial-adrenal ones.
Key words: phytoecdisteroids and fertility factors
УДК 616-009.624; 616.8-009.624
ВЗАИМОСВЯЗЬ АКУПУНКТУРНОЙ АНАЛЬГЕЗИИ С ГЕННОЙ ЭКСПРЕССИЕЙ с-^тЯКА И ррЕККтЯКА
А. С .ЦОГОЕВ *
Исследовалась взаимосвязь между акупунктурной анальгезией, с-АэвтЯКА и ррЕККтЯКА в аспекте акупунктурного эффекта на их экспрессию в мышиных перитонеальных макрофагах. Сигналы гибридизации ррЕКК и с-Ю возросли в основной
Интактные клетки при situ РНК дот блоттинге и протеин дот блоттинге были использованы для определения c-fosmRNA и ppENKmRNA, все сигналы сканировались с помощью Shimadu TLC сканера для получения сравнительной OD, что облегчает статистический анализ [3-4]. Уровень болевого порога заметно возрос в ОГ, оставшись без изменения в КГ, при этом более выраженная анальгезия наступила у животных № 1, 2, 3, 6, 10. Имелась позитивная корреляция между c-fosm RNA и ppENKmRNA сигналами в макрофагах ОГ, которая так же позитивно коррелировала с анальгетическим эффектом. Экспрессия протоонкогена c-fos достигает пика через 2 ч, ppENK ген инициируется через 4 ч и достигает пика в ЦНС крыс через 48 часов после ЭА [5-6]. В нашем опыте на предметных стеклах и нитро-целлюлозной мембране (NCM) через 4 ч после ЭА, сигналы генной экспрессии c-fos и ppENK в мышиных макрофагах были схожи по интенсивности и выраженнее, чем в КГ. Очищенные натуральные макрофаги легко проявляют уровень ppENKmRNA [7]. Генная экспрессия ppENK может быть стимулирована све-жесинтезированной c-fos или фосфолирированной CREB (cAMP вызванный элемент), имея отличия в разных тканях и клетках [8]. Генная экспрессия ppENK и экспрессия c-fos происходят в макрофагах одновременно, в отличие от этих процессов в спинном мозге. В нашем же эксперименте экспрессия обоих генов совпадала по времени. Позитивная корреляция альтерации между c-fosm RNA и ppENKmRNA макрофагов служит основанием тесной связи с-fos с транскрипцией ppENK.
* Северо-Осетинская медицинская академия, Владикавказ
В.Н. Дармограй, Ю.В. Карасева, В.Н.Морозов и др.
Литература
1. Wu J.,Deng Y.//Zheng Henan Med Univ Press.- 1997.-Р. 56.
2. Zheng N. et al. // J. Henan. Med. Univ.- 1997.- № 3.- P.118.
3. Wu J. // Acup Res.- 1983.- Vol. 2.- Р. 81-83.
4. ShiX., et al. // J. Henan. Med. Univ.- № 3.- Р. 236-238.
5. Ding Y. et al. // J. Henan Med. Univ.- 1994.- № 1.- Р.27-29.
6. Guo H.F. et al. // Neurosci. Lett.- 1996.- № 3.- Р. 163-166.
7. Martin J. et al. // J Neuroscience Res.- 1987.- № 1.- Р. 82.
8. Weisinger G. et al. // J. Biol. Chem.- 1992.- № 7.- Р. 4508.
УДК 615.84
АЛЬТЕРАЦИЯ MEK-IR И Dyn-IR ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ЭЛЕКТРОАКУПУНКТУРЫ
А . С . ЦОГОЕВ *
Эффект электроакупунктуры (ЭА) на MEK-IR и Dyn-IR в спинном мозге мыши и перитонеальных макрофагах изучали путем NADPT/NBT гистохимического анализа, РНК дот блоттинга и situ гибридизации. Рост MEK-IR в макрофагах меньше, чем Dyn-IR. Альтерация МЕК и Dyn в спинном мозге и макрофагах при ЭА показывает влияние на нейроиммуномодуляцию.
20 BALB/С мышам (20-22 г) перитонеально ввели 1,0 мл стерильного 4% крахмала в нормальном физрастворе; после 48 ч их наблюдали в условиях фиксации в течение 15 мин., разделив на 2 группы: основную группу (ОГ) с ЭА (1,5 В, 5 Гц) в билатеральные точки Цзусаньли за 15 мин., и контроль (КГ) без ЭА. Порог болевой чувствительности изучали до и после ЭА или фиксации путем К+-ионофореза. Для сбора перитонеальных макрофагов мышам ввели 1,0 мл физраствора перитонеально.
Спинной мозг, включая шейный и люмбальный отделы, был выделен и заморожен при -20°С, смешан с 0,1 мл физраствора, как тканевым гомогенизатором, затем суспензия спинного мозга была центрифугирована со скоростью 5000 об/мин при 4°С в течение 20 мин. 10 мкл супернатанта спинного мозга или суспензии макрофагов с концентрацией 1х105 клетки/мл были блот-тингированы на нитроцеллюлозную мембрану (NCM). Два вида высохших дот проб, один дот для каждого животного, инкубировались с поликлональными анти-МЕК (INC) и анти-Dyn (INC) сыворотками (1:1000 - свежее разведение) в течение ночи при температуре 4°С следом за инкубацией со вторым антителом (HRP-меченным стафилококковым протеином А), 1:40 свежеприготовленным раствором при 37°С 60 мин; DAB и Н2О2 были использованы как субстрат для получения цвета. Физраствор применяли для антител как негативный контроль. Протеин дот блоттинг техника - по [1, 2]. Дот блот сигналы сканированы 528 нм волнами на Shimadu TLC и статистически обработаны.
У особей № 1-3, 5, 10 был более выраженный анальгетиче-ский эффект. Уровень болевого порога поднялся в ОГ 0,38±0,04, (р<0.01), в КГ - 0.02±0.03(р>0.05) (табл.). Величина оптической плотности (OD) протеин дот блоттинга MEK-IR спинного мозга в ОГ была 33,41±3,52, что ниже, чем в КГ - 68.83±7.98, (р<0,01), негативно коррелируя с анальгетическим эффектом (р<0,05). OD протеин дот блоттинга Dyn-IR спинного мозга в ОГ (37,75±3,54) также была ниже, чем в КГ (65,46±4,42, р<0,05), негативно коррелируя с анальгетическим эффектом (г=-0,60, р<0,05). Разница спинальной MEK-IR в ОГ и КГ была 3,52±0,81, спинальной Dyn-IR - 3,38±0,95 (р<0,0005). Величина OD MEK-IR макрофагов в ОГ равна 65,93±8,81, в КГ - 35,12±5,52 (р<0,025), позитивно коррелируя с анальгетическим эффектом, г=0,.66, р<0,025. OD Dyn-IR макрофагов в ОГ - 10,38±1Д3, в КГ - 9,33±2,21 (р<0,005), позитивно коррелируя с анальгетическим эффектом (г=0,62, р<0,025). Разница MEK-IR макрофагов в КГ и ЭГ была 0,31±0,10, Dyn-IR макрофагов - 1,28±0,46 (р<0,025). Протеин дот блоттинг поддерживает натуральные свойства протеина за счет отсутствия
влияния фиксации и воздействия парафина в процессе подготовки образцов. Протеин дот блоттинг сигналы могут быть легко определены тонкослойным хромотографическим сканером и статистически проанализированы. Известно, что irMEK в спинномозговой жидкости пациентов возрастал на 36,7% после 2 Гц чрезкожной стимуляции, a irDyn повышался на 49% после 100 Гц воздействия. Генная экспрессия препроэнкефалина (ppENK) может быть стимулирована током частотой 2 Гц и 100 Гц; и что экспрессия протоонкогена c-fos в различных отделах головного мозга крыс может быть вызвана или 2 Гц или 100 Гц воздействием. В настоящем исследовании выявлено уменьшение MEK-IR и Dyn-IR в спинном мозге мыши, вызванное стимуляцией частотой 5 Гц, и доказано, что 5 Гц ЭА оказывает большее влияние на мышей, чем на крыс. Уменьшение спинальной irMEK было более значимым, чем спинальной irDyn, что предполагает меньшее высвобождение ir-Dyn, чем ir-MEK из спинного мозга под воздействием 5 Гц у мышей. Выявлена негативная корреляция между уменьшением ir-MEK и ir-Dyn и анальгетическим эффектом. В предыдущих исследованиях рецепторы МЕК, LEK возрастали после ЭА [4-5]. В настоящей работе MEK-IR и Dyn-IR возрастали в ОГ в сравнении с КГ в перитонеальных макрофагах, видимо, рецепторы для МЕК и Dyn могут увеличиваться под воздействием ЭА. MEK-IR и Dyn-IR включают иммунореактивность рецепторов, связанных с эндогенными лигандами (МЕК и Dyn) и цитоплазматическими ir-MEK и ir-Dyn. Возрастание MEK-IR было более значимым, чем Dyn-IR в плазме лиц с болевым синдромом после 2-4 Гц ЭА. Возрастание MEK-IR в макрофагах было меньше, чем Dyn-IR из-за слабого высвобождения из макрофагов irDyn, чем irMEK. МЕК и Dyn могут регулировать функции иммунных клеток [3]. Альтерация МЕК и Dyn в спинном мозге и макрофагах, вызванная ЭА, подтверждает, что последняя может влиять на нейроиммуномодуляцию.
Литература
1. Wu Jinglan, Ding Yi. Practical Protocols of Nonradioactive Molecular Biology Technique. Zhengzhou Henan Publication Press.- 1997.- Р. 56-67.
2. Zheng Naigang et al. // J. Henan. Med. Univ.-1996.- №1.- Р. 13-15.
3. Fan S. // Sheng Li Ko Hsuch Chin Chan.- 1987.-№3.- Р. 270-280.
4. Zheng N. et al. // World J. Acup-Mox.- 1998.- Vol. 8(4).-Р. 35-38.
5. Lee J H, Beitz A J. // Pain.- 1993.- Vol. 52(1).- Р. 11-28.
УДК 575.224.234
ВЗАИМОСВЯЗЬ АКУПУНКТУРНОЙ АНАЛЬГЕЗИИ С ГЕННОЙ ЭКСПРЕССИЕЙ iNOSmRNA И iNOS АКТИВНОСТЬЮ
А. С . ЦОГОЕВ*
Известно, что макрофаги являются одним из видов имму-нокомпетентных клеток и играют важную роль не только в не- и специфическом иммунитете, но также могут высвобождать биологические медиаторы, включая нейротрансмиттеры и цито-кинины. Установлено регулирующее влияние электроакупунктуры (ЭА) на генную экспрессию iNOS макрофагов[1]. В настоящей работе изучали взаимосвязь между генной экспрессией iNOS и анальгетическим эффектом. В опыте использовались: NADPT-NBT гистохимический анализ, иммуногистохимический анализ, РНК дот блоттинг, протеин дот блоттинг и situ гибридизация.
20 BALB/С мышей весом 20-22 г инъецировали перитонеально 1,0 мл стерильного 4% крахмала, растворенного в нормальном физрастворе; после 48 ч их наблюдали в условиях фиксации в течение 15 мин., разделив на 2 группы: ОГ, получившую электроакупунктуру (ЭА - 1,5 В, 5 Гц) в билатеральные точки «Цзусаньли» в течение 15 мин, и КГ без ЭА.
Порог болевой чувствительности определяли до и после ЭА или фиксации с помощью К+-ионофореза. Для сбора перитонеальных макрофагов каждой мыши вводился 1,0 мл физраствора. Генная экспрессия iNOS оценивали методами situ гибридизации [2] и РНК дот блоттинга [3]. Путем NADPN-NBT гистохимического анализа и протеин дот блоттинга изучали iNOS активность
Таблица
Альтерация уровня болевого порога
№ ..1 ..2... ...6.. ...7.. ...8.. ...9.. ...10.. . Z"
КГ +G.45 +G.6 +G.45 +G.23 +G.35 +G.3 +G.2 +G.3 +G.3 +G.55 +G.38
ОГ +G.1G +G.2 +G.G5 +G.5G -G.25 +G.3 ...G.. ...G.. +G.1 +G.G5 +G.22
*
Северо-Осетинская медицинская академия, Владикавказ
*Северо-Осетинская медицинская академия, Владикавказ
