CC BY
6
СБОРНИК ТЕЗИСОВ
дился забор адипоцитов ЭЖТ, ПВЖТ и подкожной жировой ткани (ПЖТ) с последующим культивированием и получением супернатанта. Содержание лептина и растворимого рецептора к лептину (LSR) в супернатанте ЭЖТ, ПЖТ и ПВЖТ определяли иммуноферментным методом с использованием тест-систем фирмы BioVendor (США). Расчет индекса свободного лептина (FLI) определяли по формуле: лептин/ LSR*100). В полученном материале проводилась оценка экспрессия генов лептина (LEP) и его рецептора LSR. Экспрессию генов оценивали с помощью количественной полиме-разной цепной реакции с использованием анализа экспрессии генов TaqManTM (Applied Biosystems, США) в системе ПЦР ViiA 7 (Applied Biosystems, США). Данные проанализированы с использованием Statistica 9.0.
Результаты. ЭЖТ характеризовалась самой интенсивной экспрессией гена лептина и, как следствие самой высокой концентрацией лептина в супернатанте как среди пациентов с ИБС, так и с пороками сердца. Адипоциты ПВЖТ характеризовались наиболее низким содержанием лептина в супернатанте, а также экспрессия его гена была ниже, чем в адипоцитах ЭЖТ. Несмотря на то, что экспрессия гена лептина была достоверно ниже в адипоцитах ПВЖТ по сравнению с ЭЖТ, концентрации лептина в супернатанте двух этих культур достоверно не различались. Полученные данные были идентичны для пациентов с пороками сердца. Однако концентрация лептина была достоверно ниже в культуре ЭЖТ и ПВЖТ у пациентов с пороками сердца по сравнению с ИБС. Для адипоцитов ПВЖТ был характерен самый низкий FLI. Причем у пациентов с пороками сердца экспрессия мРНК растворимого рецептора к лептину была в 1,58 раза интенсивнее, чем у пациентов с поражением КА, хотя содержание самого рецептора в супернатанте достоверно не различалось. Наименьшая концентрация растворимого рецептора к лептину обнаружена в культуре ПЖТ, что сопровождалось наибольшим значением FLI по сравнению с адипоцитами ПВЖТ и ЭЖТ.
Заключение. Таким образом, пациенты с ИБС характеризуются наличием периферической лептинорезистентности локальных жировых депо.
Финансирование. Исследование выполнено в рамках фундаментальной темы НИИ КПССЗ № 0419-2022-0001.
2. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СИГНАЛЬНЫХ
ПУТЕЙ NOTCH И BMP В РЕГЕНЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССАХ СЕРДЦА
Докшин П. М.1, Панферов Е. В.2, Малашичева А. Б.1
1ФГБУ СЗФМИЦ им. В. А. Алмазова Минздрава России, Санкт-Петербург; 2Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия
Инфаркт миокарда является распространённым острым заболеванием, приводящем к ухудшению сердечной функции. Возможности регенерации постинфарктного миокарда сильно ограничены, а молекулярно-клеточные механизмы раннего ремоделирования не до конца изучены. В ответ на повреждение отмечалось повышение уровня экспрессии компонентов сигнальных путей Notch и Bmp (в частности, BMP2), как в мезенхимных клетках сердца, так и в зрелых кардиомиоцитах, находящихся в периинфарктной области. Данные передачи сигналов играют важное значение в развитии и поддержании сердечно-сосудистой системы, но влияют ли они на активацию друг на друга в процессах раннего ремо-делирования сердца остаётся неизвестным.
Цель. Изучить уровень экспрессии сигнальных путей Notch и Bmp в ответ на экзогенную активацию in vitro ме-зенхимных клеток сердца (МКС) и эндотелиальных клеток пупочной вены человека (ПВЭК) при моно- и сокультивиро-вании.
Материал и методы. Первичные культуры МКС и ПВЭК
были получены путём ферментативной диссоциации тканей из миокарда левого желудочка сердца и пупочной вены человека, соответственно. Клетки были выведены в культуру, фе-
нотипированы и трижды пассированы. Клеточные культуры были посажены в плотности 10*4 на 3,8 см2, и трансдуциро-ваны лентивирусными векторами, несущими целевые последовательности NOTCH1 (NICD) и BMP2; в качестве контроля влияния вирусной трансдукции использовался вектор без вставки — TRC. Через 48 часов после экзогенной активации, были собраны клеточные лизаты и выделена общая суммарная РНК. Для оценки уровней экспрессии целевых генов использовался метод ПЦР "в реальном времени" с обратной транскрипцией. Статистическая обработка данных проводилась с помощью программы GraphPad Prism 9.0.0.
Результаты. Экзогенная активация сигнального пути Notch приводит к увеличению экспрессии гена-мишени HEY1 и рецептора NOTCH1 в обеих культурах, но двойная трансдукция NICD/BMP2 оказывает противоположный эффект между МКС и ПВЭК. Данный феномен повторяется и при сокультивировании. Экзогенная активация сигнального пути Bmp приводит к увеличению экспрессии фактора BMP2 в обеих культурах, но при сокультивировании двойная трансдукция оказывает более выраженный эффект на уровень экспрессии BMP2.
Заключение. Активация BMP2 оказывает влияние на экспрессию компонентов сигнального пути Notch в МКС и ПВЭК, что может указывать на его вышестоящее положение в качестве регулятора генной сети, и, наоборот, только при сокультивировании экспрессия BMP2 повышается в присутствии активированного сигнального пути Notch.
Финансирование. Грант НШ-4664.2022.1.4.
3. ВЛИЯНИЕ АКТИВАЦИИ
ПРООСТЕОГЕННОГО ZBTB16 НА ОСТЕОГЕННУЮ ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ ИНТЕРСТИЦИАЛЬНЫХ КЛЕТОК АОРТАЛЬНОГО КЛАПАНА
Качанова О. С.1, Семенова Д. С.2, Лобов А. А.2, Малашичева А. Б.2
1НМИЦ им. В. А. Алмазова, Санкт-Петербург; 2НМИЦ им. В. А. Алмазова, Институт цитологии российской академии наук, Санкт-Петербургский Государственный Университет, Санкт-Петербург, Россия
Кальцинированный стеноз аортального клапана является третьей ведущей причиной сердечно-сосудистых заболеваний. Механизмы, лежащие в основе патологической каль-цификации, остаются неясными, однако, полагают, что они во-многом имеют сходство с формированием костной ткани во время эмбрионального развития, а также в постнаталь-ном периоде при регенерации. Существует множество подтверждений участия ZBTB16 в развитии скелета. При этом, ряд исследований, проведенных на разных типах клеточных культур, говорит о противоречивом и неоднозначном влиянии ZBTB16 на экспрессию RUNX2. Понимание сходства и различий в механизмах, опосредующих остеогенную диф-ференцировку клеток во время физиологического формирования кости и патологической оссификации тканей может дать предпосылки для возможности управления процессами остеогенной дифференцировки в организме человека. Таким образом, цель данного исследования состояла в изучении динамической вариабельности экспрессии ZBTB16, а также его роли в кальцификации клапана аорты.
Материал и методы. Из кальцинированных аортальных клапанов выделяли интерстициальные клетки, у которых индуцировали остеогенную дифференцировку путём добавления специфических индукторов в среду культвиирования. Для оценки воздействия фактора ZBTB16 на остеодиффе-ренцировку в клетки вносили ZBTB16 на лентивирусном носителе. Степень остеодифференцировки оценивалали окрашиванием ализарином красным. Изменение экспрессии маркеров остеодифференцировки оценивали при помощи полимеразной цепной реакцией в реальном времени. Также был проведнн анализ протеомного профиля модифицированных клеток.
54
Российский кардиологический журнал. 2022;27(S7), дополнительный выпуск (май)
