CC BY
6
агаровых пластинках наблюдали сливной рост колоний. Это дает основание считать, что снижение адсорбции происходило за счет изменения поверхностных структур микробной клетки в процессе ее развития.
Полученные результаты послужили поводом для изучения адсорбционных свойств бацилл в процессе их старения на изучаемом объекте. После нанесения взвеси суточной культуры образцы исследовали каждые 10—20 дней в течение 4 мес. На агаре вырастали единичные колонии, за исключением исследования на 40-й и 100-й дни (десятки колоний на агаре). Последнее можно отнести как за счет изменений в структуре полимера или влияния внешних факторов, так и за счет нарушения строения оболочки микробной клетки в результате процесса старения и спорообразования. В основном образовавшаяся связь между бациллами и полимером носила прочный и длительно не изменяющийся характер. Можно также заключить, что адсорбционные свойства бацилл меняются в процессе роста более активно, чем в процессе их старения на полимере.
Поскольку при адсорбции взаимодействуют две поверхности — микроорганизма и адсорбента, мы попытались оказать влияние на этот процесс путем изменения структуры взаимодействующих поверхностей. При направленном воздействии это позволяет получать желаемый результат.
Для разрушения комплексов, связывающих клетку с адсорбентом, перспективным является обработка микроорганизмов ферментами. Мы испытали влияние на бациллы фермента гиалуронидазы, специфическим субстратом которого служит гиалуроновая кислота, являющаяся мукополисахаридом. Поэтому было сделано предположение, что этот фермент будет оказывать влияние на соматический полисахаридный антиген сибиреязвенных бацилл и тем самым ослаблять связь клетки с адсорбентом.
Опыты проводили со стандартным препаратом лидазы, содержащим фермент гиалуро-нидазу. Лидазу испытывали в разведении от 1 : 4 до 1 : 16. Обработка микроорганизмов лидазой в указанных концентрациях значительно снижала их адсорбцию, что позволяло десорбировать с теста 50—75% нанесенных микроорганизмов.
Для изменения характера второй из взаимодействующих поверхностей — ПВХ-плиток — использовали их дубление 96% спиртом. Поливинилхлорид устойчив к действию химических веществ и вступает во взаимодействие только при определенных условиях: большом давлении, высокой температуре и др. Поэтому с поверхности полимера удаляли другие органические вещества, входящие в состав плиток и оказывающие существенное влияние на процесс адсорбции. Плитки выдерживали в спирте в течение суток. За это время поверхность приобретала выраженную лиофильность. После нанесения на такую поверхность взвеси бацилл удавалось методом агаровых заливок десорбировать от 20 до 42% исходного количества микроорганизмов. Параллельный контроль на необработанных плитках давал отрицательный результат или рост единичных колоний.
Таким образом, изучение процесса адсорбции бацилл на ПВХ-плитках показало, что взаимодействие микроорганизмов с полимерами многообразно н обусловлено как свойствами бактериальной оболочки, так и поверхности полимера. Проведенные наблюдения позволяют заключить, что ведущим в механизме адсорбции является взаимодействие межмолекулярных сил. Адсорбция бацилл на ПВХ-плитках довольно прочная, однако может наступать так называемая спонтанная десорбция, которая обусловлена разрывом связей в результате деструктивных процессов в полимере, а также изменений химического состава и строения поверхности бактериальной клетки. Полученные результаты позволяют также говорить о возможно прочной и в то же время непостоянной адсорбции других видов микроорганизмов на ПВХ-материалах, что надо иметь в виду при проведении микробиологических исследований во избежание методических ошибок.
ЛИТЕРАТУРА. Звягинцев Д. Г. Взаимодействие микроорганизмов с твердыми поверхностями. М., 1973,— Мальцев В. В.— В кн.: Гигиена применения полимерных материалов в строительстве. Киев, 1973, с. 214—221,—П е р ц о в-екая А. Ф., Звягинцев Д. Г.— «Научи, докл. высш. школы. Биол. науки», 1971, № 3, с. 100-105.
Поступила 13/УШ 1976 г.
УДК 6Н.777:628.1121:576.858.095.1
Канд. мед. наук А. Г. Кокина, Н. А. Лукашевич, Н. В. Новицкая
ВЫЖИВАЕМОСТЬ ЭНТЕРОВИРУСОВ И ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ХИМИЧЕСКОГО И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СОСТАВА ПОДЗЕМНОЙ ВОДЫ
Белорусский научно-исследовательский санитарно-гигиенический институт, Минск
В опыте использована вода трех скважин из межыоренных горизонтов четвертичных отложений, относящаяся к гндрокарбонатному классу, группе кальция, с разным количеством и происхождением органических веществ. В первой скважине вода практически не содержала органических веществ, во второй была обогащена гумусом из захоро-
ненных торфяников, а в третьей, расположенной в 140 м от полей фильтрации, вода имела признаки хозяйственно-бытового загрязнения.
В воде отсутствовали бактерии группы кишечной палочки (титр более 1000 мл), общее число колоний на МПА при 37° не превышало 6 мл. Количество водных микроорганизмов, учитываемых методом прямого счета с помощью фазово-контрастной микроскопии (А. Г. Кокина, 1956), в водах, использованных для опыта, существенно различалось. В 1 мл воды, практически не содержащей органического вещества, было 15 тыс. микробных тел, в воде с органическим веществом антропогенного характера — 500 тыс., а в воде, содержащей гумус, — 700 тыс.
В эксперименте использованы эктеровирусы — полиомиелит I тип Lsc, 2ab, ЕСН07, Коксаки ВЗ и фаг I-! Е. coli, энтеробактерии — Sh. Flexneri, Sh. Sonne, Salm, typhi и для сравнения — Е. coli.
Для определения выживаемости энтеровирусов в стерильные стеклянные колбы вносили по 1 л воды из скважин. Воду инфицировали соответствующими серотипами энтеровирусов в концентрации 10s ТЦД 50 мл. Первую серию колб выдерживали при температуре, близкой к таковой подземных вод — 8—10°, а вторую — при 18—20°. Исследование проб на наличие вируса проводили на культурах перевиваемой клеточной линии HeLa и диплоидных фибробластах эмбриона человека методом титрования по цитопати-ческому эффекту. Наличие и концентрацию фага Тх Е. coli определяли методом агаровых слоев по Грациа.
Первый отбор проводили через час после инфицирования (контрольное титрование). Затем образцы для титрования отбирали через 6, 10, 20, 25 сут и далее — до момента полного отмирания в воде энтеровирусов и фага Тх Е. coli.
При изучении жизнеспособности энтеробактерий свежедоставленную воду скважин разливали по 1 л в стерильные бутылки, заражали патогенными энтеробактериями в концентрации 10' микробных тел в 1 л и выдерживали при такой же температуре, как и энтеровирусы, — 18—20°и 8—10°. Высевы в объеме 50 мл производили на 2-й и 3-й дни после заражения, затем — еженедельно. Для выделения использовали магниевую среду обогащения с последующим высевом на плотные дифференциально-диагностические среды. Для выделения кишечных палочек в начале опыта по 1 мл исходной воды засевали на чашки со средой Эндо, в дальнейшем применяли в качестве накопительной среду Эйкмана. В процессе опыта определяли культуральные, серологические, биохимические свойства культур и их вирулентность.
Результаты исследований представлены в таблице. Во всех вариантах опыта более интенсивное отмирание энтеровирусов мы отмечали в первые 6—10 дней (в пределах 0,5—1,5 lg ТЦД 50 в 1 мл), замедленное — в последующие сроки наблюдений (в пределах 0,3—1,0 1g ТЦД 50 в 1 мл).
Срок жизнеспособности вирусов в воде второй и третьей скважин был практически одинаков и выше, чем первой. То же можно сказать и о фаге Тх Е. coli. Это, по-видимому, можно объяснить тем, что вода скважин различалась по химическому составу, содержанию и характеру органического вещества, а также количеству водных микроорганизмов, учитываемых прямым микроскопированием, — соответственно 15, 700 и 500 тыс. микробных тел в 1 мл. Установлено также, что при низких температурах опыта жизнеспособность энтеровирусов и фага кишечной палочки выше.
В результате исследований выявлена индивидуальная устойчивость штаммов, выражающаяся в разных сроках выживания их в воде. Сравнение показало более длительные сроки выживания в воде вирусов ЕСН07 по сравнению с вирусом полиомиелита и Коксаки ВЗ, самым устойчивым оказался фаг Tj Е. coli. Шигеллы Flexner и Sonne
Выживаемость (в днях) вирусов и бактернй кишечной группы в воде скважин
Скважина
Мякрооргаяазыы первая вторая третья
температура воды, градусы
10 20 10 20 10 20
Вирусы:
полиомиелит
I тип Lsc,
2ab 48 13 60 26 60 22
Коксаки ВЗ 82 45 105 62 103 58
ЕСН07 90 50 113 66 112 64
фаг Т] Е. coli 118 72 320 220 307 145
Бактерии:
Sh. Sonne 6 6 6 6 7 6
Sh. Flexner 6 6 13 6 6 6
Salm, typhi 34 15 29 22 55 22
E. coli 41 57 55 55 76 55
Примечание. Приведены средние данные из 3 серий опытов в 3 повторностях.
быстро погибали независимо от характера воды и ее температуры (см. таблицу). Сальмонеллы брюшного тифа и кишечная палочка оказались более жизнеспособными в воде третьей скважины, в которой установлены высокий уровень общего и минерального азота, близкая к нейтральной реакция среды (рН 6,85), наличие СПАВ и др. Наименьшее число дней выживали эти бактерии в щелочной воде первой скважины, характеризующейся минимальной минерализацией и самым низким содержанием органических веществ. Выживаемость бактерий зависела также от температуры воды в опыте, но эта зависимость была менее выражена, чем у вирусов. Необходимо отметить, что все изучаемые культуры в процессе длительного вегетирования в подземных водах сохраняли свои серологические и биохимические свойства, а также вирулентность.
Индикация энтеровирусов в воде носила ретроспективный характер из-за длительности лабораторных исследований. В связи с этим очень важна сравнительная оценка сроков выживания в одной и той же воде энтеровирусов и бактерий кишечной группы. Среди бактерий отличалась наибольшей жизнеспособностью кишечная палочка. Вирусы ЕСН07 и Коксаки ВЗ выживали большее время, чем кишечная палочка. При температуре 20° разница жизнеспособности вирусов и кишечной палочки была небольшая: 9—11 дней в водах с большим содержанием микроорганизмов (по прямому счету) и органических веществ, а в воде с небольшим количеством бактерий вирусы погибали на 7 дней раньше. При 10° последние выживали на 2 мес дольше, чем кишечная палочка. Наибольшее число дней сохранялся в воде фаг кишечной палочки, что еще раз позволяет высказать суждение о необходимости использования кишечных бактериофагов в качестве санитарно-показательных микроорганизмов.
В предыдущих работах нами установлено, что количество микроорганизмов в подземной воде зависит от содержания в ней минеральных и органических веществ (А. Г. Ко-кина, 1970).
Таким образом, систематизировать сведения о выживаемости микроорганизмов в воде можно лишь в том случае, если при постановке экспериментов в лабораторных или натурных условиях будут учитываться химический состав воды и наличие сопутствующих микроорганизмов.
ЛИТЕРАТУРА. Кокина А. Г.— «Микробиология», 1956, № 5, с. 615.— Она же,— «Гндробиол. ж.», 1970, № I, с. 104—108.
Поступил» а/Х 1976 г.
УДК 576.851.49.01(260-17)
JI. В. Пономарева
К ВОПРОСУ О ВЫЖИВАЕМОСТИ ЭНТЕРОПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ В ПРИБРЕЖНЫХ МОРСКИХ ВОДАХ
Полярный научно-исследовательский и проектный институт морского рыбного хозяйства
и океанографии, Мурманск
Настоящая работа посвящена изучению продолжительности выживания отдельных видов энтеропатогенных бактерий, изменению их свойств в незамерзающих водах морского залива и северного моря. В залив сбрасывается большое количество сточных вод рыбообрабатывающих предприятий, судов, городской канализации, что загрязняет водоем, несмотря на интенсивное разбавление чистыми морскими водами во время приливов. Море при входе в залив имеет следующие бактериологические показатели: титр кишечной палочки более 333, количество микробных тел до 50 в 1 мл.
Опыты по выживаемости энтеропатогенных бактерий ставили на модельных водоемах емкостью 200 мл. В качестве тест-микробов были взяты Sh. Sonnei, Sh. Flexner, S. Newport, всего поставлено 20 серий опытов. Модельные водоемы обсеменяли изучаемыми тест-культурами в концентрации 100 микробных клеток в 1 мл. Все серии опытов проводили параллельно при 4 и 16°. Температура 4° — среднегодовая для данных вод в холодное время года, в летнее время температура воды поверхностного горизонта 16—17°.
Для установления степени бактерицндности морской воды опыты ставили с естественными и автоклавированными водами. Количественное содержание тест-микроба на протяжении всего опыта определяли путем фильтрования через мембранный фильтр № 3 и прямым посевом на чашкн по Марману. Через сутки инкубирования отбирали типичные для энтеропатогенных бактерий колонии и дальнейшую идентификацию проводили общепринятыми приемами.
В воде залива отмечены закономерность отмирания сапрофитной микрофлоры и значительное увеличение титра кишечной палочки в конце каждого опыта. Энтеропатогенные культуры, используемые в опытах, обладали характерными культуральными, биохимическими и серологическими свойствами.
Изучению изменений биологических свойств при длительном вегетировании в водах моря и залива было подвергнуто 528 дизентерийных культур (3168 определений)
