CC BY
14
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
наблюдался довольно низкий уровень экспрессии гена PTPN1 по сравнению со всеми исследованными выборками. При анализе уровня экспрессии гена NF1 в лейкоцитах периферической крови выявлены статистически значимые различия в уровне экспрессии между контрольной группой и больными ХМЛ, резистентными к терапии ИТК, а также между контрольной группой и больными с полным молекулярным ответом. В клеточной линии К562 наблюдалось статистически значимое снижение уровня экспрессии гена NF1 по сравнению со всеми исследованными выборками, кроме группы контроля. Ген NF1 действует как негативный регулятор активности Ras белков, и тем самым, проявляет себя в роли онкосупрессора Повышение уровня экспрессии гена NF1 у больных онкологическими заболеваниями ранее было обнаружено только в исследовании Cacev и соавт. (2005) при развитии рака толстого кишечника (Cacev Т. et al., 2005). Увеличение уровня экспрессии данного
гена у больных ХМЛ свидетельствует о важности изучения именно тканеспецифичной экспрессии гена №1 и необходимости дальнейшего изучения профиля экспрессии данного гена.
Выводы. Таким образом, мутации в киназном домене БCR-ABL являются одной из основных причин резистентности к терапии иматинибом у некоторых пациентов с ХМЛ. Тем не менее, очевидно, что в развитии резистентности к лечению препаратами ИТК и прогрессировании ХМЛ в сторону акселерации и властного криза могут играть важную роль множество других клеточных, генетических и эпигенетических факторов, которые в совокупности определяют индивидуальное развитие болезни у больных ХМЛ. Полученные нами данные о роли онкосупрессоров раскрывают некоторые патогенетические аспекты ХМЛ и вносят вклад в общее представление о молеку-лярно-генетических основах развития данного заболевания.
Л.В. Сандакова, Л.Р .Ахметова, Э.Г. Багаутдинова, Р.И. Хусаинова, И.Р. Минниахметов
ВЫЯВЛЕНИЕ ВАРИАНТНОЙ ТРАНСЛОКАЦИИ С ОБРАЗОВАНИЕМ ХИМЕРНОГО ОНКОГЕНА BCR-ABL МЕТОДОМ FISH У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН
Государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Республиканский медико-генетический центр», г. Уфа
Введение. FISH-метод (метод флуоресцентной in situ гибридизации) широко используется в дифференциальной диагностике злокачественных заболеваний. Хромосомные аномалии, выявляемые при FISH, в сочетании с клинической картиной и данными иммуногистохимии являются основой классификации, определения тактики лечения и прогноза лимфо- и миелопроли-феративных заболеваний. В 2020 году в Медико-генетическом центре Республики Башкортостан (ГБУЗ РМГЦ) впервые в регионе был внедрен метод флуоресцентной гибридизации для исследования костного мозга у пациентов с гемобластозами.
Хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ) - клональное ми-елопролиферативное заболевание, особенностью которого является наличие приобретенной генетической аномалии -«филадельфийской хромосомы» (Ph). В большинстве случаев «филадельфийская хромосома» образуется в результате классической реципрокной транслокации t(9;22)(q34;q11.2) и в некоторых случаях в результате криптической инсерции ABL в район гена BCR, либо вариантной транслокации. Простые вариантные транслокации возникают в результате вовлечения в перестройку хромосомы 22 и любой другой, кроме хромосомы 9. В образовании сложных вариантных транслокаций участвуют не менее трех хромосом, две из которых хромосомы 9 и 22. При этом формируется химерный онкоген BCR-ABL, чаще всего кодирующий белок р210, обладающий тирозинкиназной активностью. Вследствие появления BCR-ABL-тирозинкиназы происходит нарушение нормального функционирования клетки, что приводит к злокачественной трансформации и вытеснению нормальных стволовых клеток. В работе представлены обобщенные результаты первого года диагностики ХМЛ в Республике Башкортостан с применением FISH-технологии.
Цель. Определить частоту встречаемости вариантной транслокации с образованием химерного онкогена BCR-ABL у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом в Республике Башкортостан.
Материалы и методы. Материалом для исследования послужили образцы костного мозга 83 пациентов с диагнозом ХМЛ на различных фазах заболевания. В работе использовались локус-специфичные ДНК- зонды фирмы «Kreatech». Зонд ON BCR/ABL t(9;22) Fusion оптимизирован для детекции реципрокной транслокации t(9;22)(q34;ql1.2) по двойному слиянию сигналов, в двух цветах, на метафазных и интерфазных клетках мазков крови или костного мозга. Этот набор выявляет и криптическую инсерцию ABL в район гена BCR. Зонд ON BCR/ABL t(9;22), DC, S-Fusion, ES применяется для первичного скрининга пациентов
с ХМЛ. За счет дополнительного зонда, проксимального по отношению к точке разрыва на хромосоме 9q34, набор обеспечивает дополнительный сигнал на аберрантной хромосоме der(9q34) в случае транслокации ^9;22). «Филадельфийская хромосома», der(22q) идентифицируется по слитному сигналу. Р^Н-анализ проводили согласно протоколу производителя на цитогенети-ческих препаратах, содержащих интерфазные ядра. Препараты исследовали с помощью флуоресцентного микроскопа фирмы «Zess» Ахю Imager.A2. В каждом случае было проанализировано от 200 до 400 интерфазных ядер. Интерпретация полученных результатов осуществлялась в соответствии с международной цитогеномной номенклатурой хромосом человека (^СЫ, 2016).
Результаты. Диагностика хронического миелоидного лейкоза проводилась с помощью Р^Н-анализа костного мозга в сочетании с молекулярно-генетическим исследованием периферической крови (определением экспрессии химерного транскрипта БСЯ-АБЬ р210 методом качественной и количественной ПЦР в реальном времени) и стандартным цитогенетическим исследованием (СЦИ) костного мозга. У 42 (50,6%) пациентов выявлена стандартная Р^хромосома, образованная в результате классической реципрокной транслокации ^9;22)^34^11.2). У 7 (8,4%) пациентов выявлено атипичное распределение флуоресцентных сигналов, что соответствует наличию различных вариантных транслокаций ^9;22). У 34 (41%) пациентов химерный онкоген БСЯ-АБЬ не выявлен.
Выводы. Таким образом, в Республике Башкортостан у большинства (50,6%) пациентов с хроническим миелоидным лейкозом при помощи Р^Н-анализа выявляется классическая реципрокная транслокация ^9;22)^34^11.2). Частота встречаемости вариантной транслокации, приводящей к образованию химерного онкогена БСЯ-АБЬ составляет 8,4%. У 41% пациентов в результате лечения достигнут полный цитогенетический ответ (ПЦО).
