CC BY
209
286
Вопросы онкогематологии
Е. С. Кормщикова, Е. В. Хлыбова, А. В. Дробкова, Н. В. Минаева
Выявление серологических маркеров грибковых инфекций у пациентов гематологической клиники
ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови ФМБА России»
Грибковые инфекции относятся к категории тяжелых ослож-н ений у больных гемобластозами, получающих программную полихимиотерапию. Возбудителями таких инфекций являются, как правило, грибы родов Aspergillus и Candida [1]. По данным ряда авторов, частота инвазивного аспергиллеза у данной категории больных составляет от 5 до 20%, кандидоза - от 10 до 30%. Их характеризует быстрое течение, поражение различных органов и систем, а также высокая летальность, которая варьирует от 30 до 70% [1, 2, 3].
«Золотым стандартом» диагностики микозов считаются микробиологическое культивирование и гистологический анализ биоптата пораженной ткани, занимающие продолжительное время - до 2 недель. Недостаточная чувствительность гемокультуры (50%), а также длительность анализа могут приводить к несвоевременной постановке диагноза и позднему началу специфической терапии.
В клинической практике для экспресс-диагностики инвазивных кандидоза и аспергиллеза используется иммуноферментный анализ (ИФА) на наличие специфичеких маркеров -маннанового (МАГ) и галактоманнанового (ГМАГ) антигенов соответственно. В качестве дополнительного элемента диагностики инвазивного кандидоза рассматривают одновременное выявление антигена и антител (АТ) классов IgG, IgA, IgM к антигенам Candida, такой подход более информативен и способен повысить диагностическую значимость полученных результатов. Специфические IgA появляются в сыворотке через 10-14 дней после начала заболевания и снижаются ко 2-4 месяцу в результате успешного лечения, при реинфекции их уровень вновь
Выявление серологических маркеров грибковых инфекций у пациентов ... 287
возрастает. Отсутствие снижения содержания этих антител в процессе лечения указывает на хроническую или персистиру-ющую форму инфекции. В течение непродолжительного промежутка времени в крови инфицированных могут одновременно выявляться антитела классов IgM и IgA. В это же время или с небольшой задержкой выявляются специфические IgG. Для постановки окончательного диагноза при использовании результатов серологических методов анализа необходимо проводить определение специфических IgA и IgG одновременно. При неясном результате обнаружения ^А подтверждение осуществляется определением IgM.
Проведено выявление ГМАГ грибов рода Aspergillus, МАГ Candida, АТ классов IgG, IgA, IgM к антигенам Candida соответственно в 167, 211 и 163 образцах сыворотки крови пациентов гематологической клиники ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России. Забор крови пациента осуществляли в вакутейнеры. Определение антигенов и антител проводили методом ИФА с использованием тест-систем «Platelia Aspergillus Ag Plus» (BioRad, Франция), «Platelia Candida Ag Plus» (BioRad, Франция), «Кандида - IgG (IgA, IgM) - ИФА - Бест» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия). Постановку реакций выявления антигенов осуществляли в стерильных условиях в рабочей зоне бокса биологической безопасности второго класса SC2 (Esco Micro Pte. Ltd., Сингапур). Учет результатов ИФА проводили на фотометре для микропланшетов iMark (Био-Рад Лабораториез Инк., США) с использованием программного обеспечения Земфира 4.0 версии 1.4.8 (Био-Рад Лабораториез Инк., США). Оценку данных анализа осуществляли в соответствии с инструкциями к наборам. Положительный результат на наличие МАГ регистрировали для образцов с концентрацией антигена не менее 125 пг/мл; отрицательный - не более 62,5 пг/мл; результат в пределах от 62,5 до 125 пг/мл расценивался как «промежуточный». Интерпретация данных исследования на ГМАГ включала расчет коэффициента отношения оптических плотностей образца и контроля уровня среза. Значение коэффициента > 0,5 рассматривали как положительный результат. Содержание IgG, IgA и IgM оценивали в соответствии с расчетными значениями диагностической и критической оптических плотностей.
ГМАГ был выявлен в 8,4% исследованных образцов. Результаты выявления МАГ были расценены как положительные при анализе 5 образцов (2,4%), при этом только в одном из исследованных МАГ-положительных образцов сыворотки не выявлены антитела к Candida. Низкая частота выявления антигенов грибов родов Aspergillus и Candida может быть связана как с от-
288
Вопросы онкогематологии
сутствием микоза, так и с низкой концентрацией и быстрой элиминацией циркулирующих маннанов и галактоманнанов в процессе проводимой профилактики и/или лечения, в то время как антитела присутствуют в кровотоке достаточно длительное время. Так, в 38 МАГ-отрицательных образцах сыворотки крови 26 пациентов были обнаружены АТ к антигенам Candida классов IgG (33 образца), IgG и ^А (2 образца) и ^М (1 образец) или всех трех классов (2 образца). Выявление антител в 44,7% случаев происходило на фоне клинических проявлений инвазивной грибковой инфекции.
Таким образом, определение серологических маркеров грибковых инфекций является необходимым компонентом мониторинга состояния пациентов гематологической клиники. Представляется целесообразным проведение повторных еженедельных исследований у пациентов с высоким риском развития грибковой инвазии и, принимая во внимание, что в состоянии агранулоцитоза продукция антител снижена, при анализе данных целесообразно учитывать изменение абсолютного показателя аналитического сигнала ИФА - оптической плотности продукта реакции, даже если его значение интерпретируется как промежуточный результат.
Список литературы
1. Рунке, М. Грибковые инфекции у иммунокомпрометиро-ванных пациентов (Эпидемиология, диагностика, терапия, профилактика) / Маркус Рунке // Проблемы медицинской микологии. - 2000. - № 1. - С. 6-14.
2. Илюкевич, Г. В. Современные возможности диагностики
грибковых инфекций у пациентов отделений интенсивной терапии и реанимации / Г. В. Илюкевич, Ю. Н. Доценко // Электронный ресурс: http://belmapo.by/downloads/anesteziology/2009/
sovr_vozm_diagn_grib.pdf.
3. Васильева, Н. В. Диагностика и лечение инвазивных микозов: современные рекомендации / Н. В. Васильева, Н. Н. Клим-ко, В. А. Цинзерлинг // Вестник Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования. - 2010. - С. 5-18.
