CC BY
178. Van den Hoogen B.G., de Jong J.C., Groen J. et al. A newly discovered human Metapneumovirus isolated from young children with respiratory tract disease. Nat. Med. 2001, 7: 719-724.
9. Williams J.V., Harris P.A., Tollefson S.J. et al. Human Metapneumovirus and tower respiratory tract disease in otherwise healthy infants and children. New Engl. J. Med. 2004, 350: 443-50.
Поступила 17.03.14
Контактная информация: Островская Ольга Васильевна, д.м.н., 680038, Хабаровск, ул. Волочаевская, 182, р.т. (4212)98-05-91
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015
Л.С.Карань1, М.В.Федорова1, К.А.Гриднева1, А.Н.Чайка2, Е.И.Ромасова2
ВЫЯВЛЕНИЕ РНК ВИРУСА ЗАПАДНОГО НИЛА И СПЕЦИФИЧНЫХ АНТИТЕЛ В КРОВИ ДОНОРОВ В ВОЛГОГРАДСКОЙ ОБЛАСТИ
Центральный НИИ эпидемиологии, Москва; 2Центр гигиены и эпидемиологии в Волгоградской области, Волгоград
Цель. Изучить инфицированность вирусом Западного Нила (ВЗН) доноров, проживающих на территории очагов лихорадки Западного Нила (ЛЗН) с многолетней активностью, и оценить возможность нетрансмиссивной передачи возбудителя при использовании крови доноров. Материалы и методы. Сыворотки крови (432), собранные в августе и сентябре 2012 г. в Волгограде и г. Волжском, исследовали методами ПЦР и ИФА. Результаты. Антитела к ВЗН обнаружены у 16,2% (70/432); 8,8% (38/432) доноров имели IgG; 0,93% (4/432) - IgM и 6,5% (28/432) — IgG и IgM одновременно. В последней группе в одном образце выявлена РНК ВЗН. Таким образом, пять доноров (1,1%, 5/432) находились на начальных сроках после инфицирования. Заключение. Полученные данные свидетельствует о необходимости введения контроля крови доноров методами ПЦР и ИФА в очагах ЛЗН с многолетней активностью.
Журн. микробиол., 2015, № 2, С. 65—69
Ключевые слова: доноры, скрининг крови, безопасность донорской крови, ВЗН, трансфузия-трансмиссия ВЗН
L.S.Karan1, M.V.Fedorova1, K.A.Gridneva1, A.N.Chaika2, E.I.Romasova2
DETECTION OF WEST NILE VIRUS RNA AND SPECIFIC ANTIBODIES IN BLOOD DONORS OF VOLGOGRAD REGION
1Central Research Institute of Epidemiology, Moscow; 2Centre of Hygiene and Epidemiology in Volgograd Region, Volgograd, Russia
Aim. Study infection level by West Nile virus (WNV) of donors living on the territory of West Nile fever (WNF) foci with long-term activity, and evaluate the possibility of non-transmissible transfer of the causative agent during use of donor blood. Materials and methods. Blood sera (432) collected in August and September 2012 in Volgograd and Volzhsky cities were studied by PCR and EIA. Results. Antibodies to WNVwere detected in 16.2% (70/432); 8.8% (38/432) donors had IgG; 0.93% (4/432) — IgM and 6.5% (28/432) — IgG and IgM antibodies simultaneously. WNV RNA was detected in one of the samples in the last group. Thus, 5 donors (1.1%, 5/432) were at the early stages after infection. Conclusion. The data obtained give evidence on the necessity to execute control of donor blood by PCR and EIA in WNF foci with long-term activity.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2015, No. 2, P. 65—69
Key words: donors, blood screening, safety of donor blood, West Nile virus, WNV transfusiontransmission
5. ЖМЭИ 2 № 12-2015
65
В природных очагах циркуляция вируса Западного Нила (ВЗН) происходит преимущественно трансмиссивным путем. Основными резервуарными хозяевами вируса являются птицы, а переносчиками — комары. Человек считается конечным звеном в цепи передачи, так как вирусемия в крови людей не достигает уровня, необходимого для заражения комаров [9].
В 2002 г. в США и Канаде впервые зарегистрирована передача вируса ЛЗН от доноров, у которых отсутствовали клинические симптомы: в Канаде — четыре случая после переливания крови, в США — 23 случая после переливания крови или ее компонентов и четыре — в результате трансплантации органов; девять реципиентов умерли [13]. С 2003 г. в обеих странах введен обязательный скрининг крови доноров методами ПЦР, которые позволяют обнаружить РНК вируса на ранних стадиях заболевания [13].
В Европе в период с 2009 по 2012 гг. было зарегистрировано 11 случаев передачи ВЗН с биоматериалом от доноров в Италии [7] и один случай в Греции [5]. В 2012 г. ECDC были разработаны методические указания по обеспечению безопасности донорской крови [14].
В РФ эпидемическая активность природных очагов ЛЗН на юге европейской части (Астраханская, Волгоградская, Ростовские области) в последнее десятилетие практически не прекращается. С 1999 по 2009 гг. здесь зарегистрировано 979 случаев заболеваний ЛЗН [3]. В следующие три года нозоареал инфекции значительно расширился [1, 2], а число больных составило 1140 человек. Подавляющее большинство заболеваний отмечено в Волгоградской области — 78,8; 37 и 46,3% от общего числа случаев, зарегистрированных в 2010, 2011 и 2012 гг., соответственно [2, 3]. Исследования сывороток крови показали наличие IgG к ВЗН у 13,5% (27/200) доноров в Волгоградской области (2010 г.) и у 5,2% (22/423) — в Ростовской обл. (2008 — 2010 гг.) [3]. Эти данные свидетельствуют об интенсивной циркуляции вируса на указанных территориях.
Целью нашей работы было изучить инфицированность ВЗН доноров, проживающих на территории очагов ЛЗН с многолетней активностью, и оценить возможность передачи возбудителя при использовании крови доноров. Для этого методами ПЦР и ИФА исследовали сыворотки крови доноров, собранные в 2012 г. в Волгоградской области, где в период с 7 июля по конец октября было зарегистрировано 210 случаев ЛЗН [2].
Материалом послужили 432 образца сыворотки крови, собранные в августе и сентябре 2012 г. в Волгограде и г. Волжском, где преимущественно регистрировали случаи заболевания ЛЗН.
РНК ВЗН выделяли из 1 мл сыворотки крови, используя набор реагентов «Амплисенс-МАГНО-сорб». Постановку ПЦР и детекцию продуктов амплификации проводили с использованием набора реагентов «Амплисенс WNV-Fl» согласно инструкции производителя (производство ЦНИИ эпидемиологии). Аналитическая чувствительность метода — 500 копий РНК ВЗН/мл.
Для определения IgM и IgG использовали коммерческий набор реагентов «Биоскрин ВЗН (IgM)» и «Биоскрин ВЗН (IgG)» производства ЗАО «БиоСервис» (г. Боровск, Московская область). Положительными считали образцы, для которых полностью выполняли условия, указанные в инструкции к наборам.
Согласно результатам серологического анализа 16,2% (70/432) доноров имели антитела к ВЗН, причем у 8,8% (38/432) выявлены только IgG, у 0,93% (4/432) — только IgM и у 6,5% (28/432) — антитела обоих классов.
38 доноров, вошедших в первую группу, можно рассматривать как реконвалесцен-тов, переболевших ЛЗН в предыдущий эпидемический сезон. Исследования, проведенные в Волгограде после вспышки 2010 г., показали, что через год после перенесенного заболевания антитела только этого класса присутствуют в крови у 27,8% реконвалесцентов.
Вторая группа объединяет четырех доноров, находящихся в начальном периоде заболевания: титры ^М варьировали от 1:100 до 1:800. Известно, что антитела этого класса появляются у доноров в среднем через 3,9 суток после обнаружения РНК ВЗН, причем их появление коррелирует с началом снижения вирусемии. Естественное снижение концентрации вируса в крови происходит при сероконверсии ^М, вследствие чего вирусемию не удается обнаружить у большинства пациентов. Так, у больных, госпитализированных после появления клинических симптомов, антитела класса ^М выявляются в первую неделю заболевания в 100% случаев, тогда как РНК вируса выявляют только у 40% (30 — 50%) больных. В данном исследовании РНК ВЗН не была обнаружена ни у одного донора из этой группы.
28 доноров третьей группы имели антитела обоих классов. В трех случаях (0,7%, 3/432) титры ^М превышали титры IgG, что свидетельствует об острой инфекции [12]. Соотношение ^М/^ было следующее: 1:800/1:400, 1:1600/1:400, 1:3200/1:400. В одном случае титры обоих иммуноглобулинов были равны (1:400), во всех остальных случаях титры IgG (от 1:200 до 1:3200) были выше, чем ^М (от 1:100 до 1:400) — ситуация, характерная как для выздоравливающих, так и для реконвалесцентов, перенесших заболевание в предыдущий эпидемический сезон. В связи с этим, точное определение статуса указанной части доноров данной группы требует проведения дополнительных исследований, например, изучения авидности IgG.
В этой группе РНК ВЗН была выявлена в образце с титрами ^М, равными 1:3200 и ДО — 1:400 (0,2%, 1/432) от 03.08.2012 г.
Таким образом, в период забора крови в острой стадии инфекционного процесса находились, по крайней мере, семь доноров (1,6%, 7/432), из которых четверо имели ^М, трое — антитела обоих классов, включая одного донора с РНК ВЗН.
Анализ данных литературы показывает различную частоту обнаружения РНК ВЗН у сероотрицательных и сероположительных доноров. Например, во время вспышки ЛЗН в 2010 г. в Греции РНК ВЗН выявлена у одного из 619 обследованных сероотрицательных доноров [14], в Италии — у одного из 5726 [11]. В США среди 1468 образцов плазмы крови доноров, собранных в 6 штатах, наиболее пострадавших во время вспышки ЛЗН в 2002 г., РНК вируса обнаружили в одном сероотрицательном образце (0,07%, 1/1468) и в двух образцах (0,14%, 2/1468), содержавших одновременно ^М и IgG. В штате Калифорния (2007 г.) РНК вируса выявлена у 75 из 74 250 доноров (0,1%). Серологический анализ 34 из них показал, что в 4 образцах антитела отсутствуют, в 9 — имеются ^М и в 21 — антитела обоих классов [8]. При исследовании 155 280 образцов крови доноров из Нью-Йорка во время вспышки 2010 г. РНК ВЗН обнаружена в 20 (0,0129%) образцах, среди которых два были положительными по ^М и пять — по ^М и IgG одновременно [6]. Таким образом, частота обнаружения РНК ВЗН в целом очень низка. Поэтому отсутствие в данном исследовании сероо-трицательных образцов, содержавших РНК вируса, можно рассматривать как следствие небольшой выборки.
Считается, что риск заражения при переливании крови или пересадке органов наиболее высок в период вирусемии, до начала иммунного ответа [10]. Специальные исследования показали, что методами ПЦР РНК вируса в среднем удается детектировать в образце крови в течение 14 дней после инфицирования, причем максимум вирусемии наблюдается на 5 — 6 сутки. В отдельных случаях РНК ВЗН выявляли у доноров через 40 дней [10]. Такие же поздние сроки отмечены и при анализе клинических случаев. Сероконверсию ^М у доноров регистрируют в среднем на 8, а IgG — на 10 — 11 сутки. Таким образом, вирус может продолжительное время циркулировать в крови после появления антител, однако вирусная нагрузка в этот период значительно снижается [10]. Подтверждением служит тот факт, что практически во всех описанных в настоящее время случаях передачи ВЗН с компонентами крови (при переливании крови) была использована кровь сероотрицательных доноров с вирусе-мией [7]. Иная ситуация складывается при пересадке органов: зафиксированы случаи
передачи ВЗН от доноров, у которых инфекция перед забором органов для трансплантации не была выявлена методом ПЦР, а серологические методы не применяли, а также от доноров с недетектируемой методом ПЦР вирусемией, но с выявленными при ретроспективном серологическом анализе IgM [7].
Учитывая эти данные, можно считать, что среди исследованных нами образцов, по крайней мере, пять (один образец с РНК ВЗН и четыре с антителами класса IgM) представляют опасность при дальнейшем использовании. Это свидетельствует о возможности нетрансмиссивной передачи ВЗН на территории России и необходимости введения соответствующего контроля.
В настоящее время для скрининга крови доноров рекомендуют использовать метод ПЦР, который позволяет выявлять ВЗН на ранних стадиях заболевания [14], в том числе до начала появления клинических симптомов. Последние регистрируют лишь у 26% доноров [15]. Скрининг крови доноров рекомендуют проводить либо в формате минипулов, объединяя образцы плазмы крови от 6 — 16 пациентов, либо исследуя образцы индивидуально. Выбор стратегии определяется интенсивностью циркуляции вируса как на обследуемой, так и на соседних территориях [15]. Выявление одного положительного минипула служит основанием для перехода к исследованиям индивидуальных образцов. В случае отсутствия положительных результатов при обследовании индивидуальных образцов крови в течение 7 дней рекомендуют возвращаться к исследованию минипулов. Следует отметить, что при использовании формата ми-нипулов доноров с низким уровнем вирусемии не всегда удается выявить, что приводит к случаям передачи ВЗН [6].
Полученные данные свидетельствуют о том, что скрининг крови доноров на эндемичных по ЛЗН территориях только методом ПЦР следует считать недостаточным: из пяти образцов, представляющих опасность, в четырех РНК ВЗН не была обнаружена. Поэтому для повышения эффективности скрининга можно рекомендовать анализ только индивидуальных образцов крови без объединения их в минипулы параллельно с исследованием образцов методом ИФА на наличие IgM. Несмотря на то, что при этом в категорию риска попадут не только доноры, находящиеся на ранних стадии заболевания, но и реконвалесценты, такой подход позволит исключить возможность передачи вируса с кровью доноров, у которых РНК ВЗН не удалось выявить методом ПЦР.
ЛИТЕРАТУРА
1. Красовская Т.Ю., Шарова И.Н., Найденова Е.В. Формирование очага лихорадки Западного Нила на территории Саратовской области. Журн. микробиол. 2013, 5: 3642.
2. Путинцева Е.В., Антонов В.А., Викторов Д.В. и др. Особенности эпидемической ситуации по лихорадке Западного Нила в 2012 г. на территории Российской Федерации. Проблемы особо опасных инфекций. 2013, 1: 25-29.
3. Сборник материалов по вспышке лихорадки Западного Нила в Российской Федерации в 2010 году. Волгоград, 2011.
4. Capobianchi M.R., Sambri V., Castilletti C. et al. Retrospective screening of solid organ donors in Italy, 2009, reveals unpredicted circulation of West Nile virus. Euro Surveillance. 2010, 15 (34) pii: 19648.
5. ECDC, Annual epidemiological report 2013. http://www.ecdc.europa.eu/en/publications/ Publications/annual-epidemiological-report-2013.pdf.
6. Francis R.O., Strauss D., Williams J.D. et al. West Nile virus infection in blood donors in the New York City area during the 2010 seasonal epidemic. Transfusion. 2012, 52 (12): 26642670.
7. Inojosa W.O., Scotton P.G., Fuser R. et al. West Nile virus transmission through organ transplantation in north-eastern Italy: a case report and implications for pre-procurement screening. Infection. 2012, 40 (5): 557-562.
8. Kleinman S.H., Williams J.D., Robertson G. et al. West Nile virus testing experience in 2007:
evaluation ofdifferent criteria for triggering individual-donation nucleic acid testing. Transfusion. 2009, 49 (6): 1160-1170.
9. Murray K.O., Mertens E., Despres P. West Nile virus and its emergence in the United States of America. Vet. Res. 2010, 41 (6): 67-81
10. Petersen L.R., Busch M.P. Transfusion-transmitted arboviruses. Vox Sanguinis. 2010, 98 (4): 495-503.
11. Pezzotti P., Piovesan C., Barzon L. et al. Prevalence of IgM and IgG antibodies to West Nile virus among blood donors in an affected area of north-eastern Italy, summer 2009. Euro Surveillance. 2011, S16 (10): pii: 19814.
12. Prince H.E., Tobler L.H., Yeh C. et al. Persistence of West Nile virus-specific antibodies in viremic blood donors. Clin. Vac. Immunol. 2007, 14 (9): 1228-1230.
13. Vamvakas E.C., Kleinman S., Hume H. et al. The development of West Nile virus safety policies by Canadian blood services: guiding principles and a comparison between Canada and the United States. Transfusion Med. Rev. 2006, 20 (2): 97-109.
14. West Nile virus and blood safety introduction to a preparedness plan in Europe. Based on the EU Satellite Meeting of the Working Group on Blood Safety and WNV, Thessaloniki, 25-26 January 2011 and on the teleconference, 18 January 2012, Final Working Document 2012 v.2.1.
15. Zou S., Foster G.A., Dodd R.Y. et al. West Nile fever characteristics among viremic persons identified through blood donor screening. J. Infect. Dis. 2010, 202 (9): 1354-1361.
Поступила 20.05.14
Контактная информация: Карань Л.С.
111123, Москва, Новогиреевская, 3а, р.т. (495)305-54-24
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015
А.В.Касатов1,3, Э.С.Горовиц1, М.В.Кузнецова1,2, О.А.Тимашева2, С.Г.Суханов1,4
ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ШТАММОВ PSEUDOMONAS AERUGINOSA, ИЗОЛИРОВАННЫХ ОТ БОЛЬНЫХ ОСТЕОМИЕЛИТОМ ГРУДИНЫ И РЕБЕР
1Пермская государственная медицинская академия, 2Институт экологии и генетики микроорганизмов, Пермь; 3Пермская краевая клиническая больница; 4Федеральный центр сердечно-сосудистой хирургии
Цель. Изучение роли P. aeruginosa в развитии остеомиелита грудины и ребер у кардио-хирургических больных и анализ основных биологических свойств изолированных штаммов бактерий. Материалы и методы. В течение 2007 — 2013 гг. в результате бактериологического обследования 83 пациентов стационара выделено 132 бактериальные культуры. Материалом для исследования служило отделяемое ран. Забор, посев и идентификацию выделенных культур проводили с использованием соответствующих тест-систем; анти-биотикочувствительность изучали диско-диффузионным методом. Результаты. Доля P. aeruginosa составила 10,6% (n=14), что сопоставимо с данными по раневым инфекциям общехирургических стационаров. При оценке вирулентных свойств выделенных штаммов установлена прямая сильная коррелятивная связь (R=0,846, p=0,000132) между гемолитической и фосфолипазной активностью. Степень пленкообразующей способности в значительной мере варьировала от 0,122 до 1,412 ед. ОП; высоко пленкообразующими вариантами были 64,3% изученных культур. Статистически значимой связи между био-пленкообразованием и другими изученными признаками не выявлено. Четыре штамма продуцировали металло-беталактамазы VIM2 типа и имели идентичные RAPD-профили. Заключение. Учитывая, что ранее подобные культуры не обнаруживали и все они изолированы в короткий промежуток времени, мы сделали вывод, что, по-видимому, их кратковременная циркуляция связана с заносом, что и стало причиной инфицирования пациентов. Показано, что P. aeruginosa может быть этиопатогеном как ранних, так и поздних осложнений после кардиохирургических вмешательств.
Журн. микробиол., 2015, № 2, С. 69—74
