CC BY
43
УДК 618.2.36:578.825.11:612.015.39
Н.Н.Дорофиенко, Н.А.Ишутина
ВЫЯВЛЕНИЕ ИОНИЗИРОВАННОГО КАЛЬЦИЯ В ВОРСИНЧАТОМ ХОРИОНЕ У БЕРЕМЕННЫХ
С ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ
ГУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН
РЕЗЮМЕ
На структурно-гистохимическом уровне изучено накопление и распределение ионизированного кальция в хориальной ткани плаценты при обострении герпес-вирусной инфекции на разных сроках гестации. Показано увеличение внутриклеточной концентрации этого иона в синцитио-и цитотрофобластических слоях, накопление в кариоплазме клеток Ланхганса и диффузное распространение в строме ворсинчатого хориона. Следствием этого, является нарушение кальциевого обмена в симпласте хориона, приводящее к глубоким изменениям метаболических процессов, которые являются причиной тяжелых поражений фетоплацентарного барьера при герпетической инфекции.
SUMMARY N.N.Dorofienko, N.A.Ishutina
IONIZED CALCIUM DETECTION IN VILLOUS
CHORION IN PREGNANT PATIENTS WITH HERPES-VIRUS INFECTION
Structural and histo chemical studies have been carried out to investigate accumulation and distribution of ionized calcium at placentar chorion tissue in patients with acute herpes-virus infection during different gestation periods. The study showed increase in this ion concentration in scinticio - and cyto-trophoblastic layers, its accumulation in carioplasm of Langerhans islets and its diffuse distribution in villous chorion stroma. This results in calcium metabolism disturbance in chorion symplast, leading to significant alterations in metabolic processes, which account for severe lesions of phetoplacentar barrier in herpes infection.
Герпесная инфекция является, несомненно, одной из наиболее распространенных болезней человека. В последние годы доказана её роль в возникновении патологии плода и новорожденных. При беременности в связи с подавлением клеточного иммунитета возможно возникновение диссеминации вируса с поражением последа и инфицированием плода [2, 4, 7].
Известно, что плацента является основным барьером на пути внутриутробного инфицирования плода, а её поражение приводит к фетальным осложнениям [13]. Строение плаценты позволяет вирусам размножаться в ней в больших количествах. Изменения в последе зависят как от патогенности возбудителя и
способа его размножения, состояния макроорганизма, длительности инфекционного процесса и путей инфицирования, так и от времени возникновения рецидивов и их количества [3].
При длительном или повторном воздействии повреждающих факторов (например, при хронической, часто рецидивирующей инфекции) чрезмерная активация деятельности плаценты и напряжение всех компенсаторных механизмов сменяется угнетением, дезорганизацией основных функций с развитием необратимых процессов в плацентарной ткани [10].
Герпетическое поражение плаценты сопровождается воспалительными изменениями в ворсинчатом хорионе, в плаценте наблюдаются плазматические клетки в строме ворсин, выраженная лимфоцитарно-плазмоцитарная инфильтрация базальной пластинки, хориона (клетки Гоффбауэра-Кащенко), отмечаются явления васкулита. Неспецифическими проявлениями является образование тромбов, отложение фибрина, кальция и железа в строме ворсин [7].
Особое внимание на наш взгляд заслуживает изучение роли ионов кальция в регуляции внутриклеточного метаболизма в плаценте беременных, как в норме, так и при патологии. Это обстоятельство не является случайным, поскольку роль внутриклеточного кальция исключительно важна для нормальной жизнедеятельности практически всех клеточных элементов [1]. Так как кратковременное повышение внутриклеточной концентрации кальция является одним из важнейших пусковых механизмов, приводящих к делению клеток, секреции гормонов и медиаторов, к запуску других активных процессов жизнедеятельности клеток.
Увеличение потока кальция в клетках различных органов часто является необходимым этапом функциональной активности клеточных элементов. В связи с тем, что ионы кальция являются универсальными внутриклеточными регуляторами, то длительное повышение входа кальция в клетки может нарушать его регуляторную функцию и стать ведущим звеном многих патологических процессов [8, 12].
Анализ современной литературы свидетельствует о том, что вопрос аккумуляции ионов кальция в плаценте беременных, а именно симпласте хориона, при обострении герпес-вирусной инфекции практически не изучен. Вместе с тем, механизм транспорта ионов кальция внутрь клетки, а также значение кальция в протекании тех или иных биохимических реакций в ворсинчатом хорионе в норме и, особенно при влиянии герпетической инфекции остаются до конца не выясненными.
Целью данного исследования явилось гистохимическое изучение внутриклеточной локализации и содержания ионизированного кальция в плаценте беременных с герпес-вирусной инфекцией.
Материалы и методы
Проведено гистохимичекое исследование 20 плацент, взятых на сроке 5-10 недель (абортивный материал) и 38-40 недель от беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции до и во время беременности. В группу контроля вошли 14 плацент от практически здоровых беременных на тех же сроках гестации.
Ионы кальция выявляли по методу Карассо и Фа-ворда в модификации Комника [5]. Материал фиксировали в 2,5% глютаральдегиде на 0,05 М кокадилат-ном буфере при рН 7,4 в течение часа. Далее отмывали соответствующим буфером. Последующую фиксацию проводили в 2% растворе четырех окиси осмия в течение 60 минут. После дегидратации в серии спиртов и ацетона образцы заливали в смесь смол аралдит и эпон-812. Полутонкие срезы толщиной 1 мкм готовили на ультромикротоме «ЬКВ - 8800» (Швеция) и окрашивали, метиленовым синим. Конечный осадок гистохимической реакции интенсивно черного цвета (диффузный или гранулярный) контрастно маркирует места интрацеллюлярной локализации ионизированного кальция. Оценка данной реакции полуколичественная. Уровень анализа - светооптическая микроскопия.
Результаты исследования и их обсуждение
Анализ гистохимических препаратов на светооптическом уровне свидетельствует о том, что происходит накопление ионизированного кальция в ворсинчатом хорионе на фоне влияния агента герпесвирусной инфекции.
Осадок черного цвета (гранулы конечного продукта реакции оксолата кальция) отчетливо выявлялись в цитоплазме и ядрах клеток эпителия и строме ворсинчатого хориона. Высокое содержание ионов
кальция наблюдалось на ранних сроках беременности (5-10 недель) в синцитио- и цитотрофобластиче-ских слоях эпителия ворсин. Гранулы располагались в большей мере диффузно, а также отдельными участками-скоплениями. Отмечалось накопление продукта гистохимической реакции большом количестве в клетках Ланхганса (рис. 1, 2).
На некоторых участках хориальных ворсин, где наблюдалось отсутствие эпителия, отмечалось скопление продукта гистохимической реакции на базальной мембране и под ней (рис. 3).
Отдельные участки эпителия, находившиеся в межворсинчатом пространстве, были сплошь заполнены гранулами ионов кальция. В разволокненной строме ворсин ионы кальция выявлялись хаотично, редко отдельными участками, расположенными около кровеносных сосудов, также в цитоплазме клеточных элементов наподобие фибробластов и мезенхи-альных клеток (рис. 4, 5).
В материале, взятом при родах, в отличие от ранних сроков беременности, отмечалось высокое содержание двухвалентного иона в цитоплазме синци-тиотрофобласта и в единичных клетках Ланхганса (рис. 6, 7). В склерозированной строме ворсин наблюдалось значительное содержание ионизированного кальция. Осадок реакции располагался диффузно или скоплениями гранул под базальной мембраной и вокруг утолщенных кровеносных сосудов.
Полученные результаты гистохимического исследования свидетельствуют о накоплении ионов кальция во всех тканевых элементах ворсинчатого хориона плаценты при действии вируса герпеса. Особенно демонстративен в этом отношении симпластический слой ворсин, являющийся основным фетоплацентарным барьером на пути внутриутробного инфицирования плода.
Накопление ионов кальция в симпласте хориона при герпесе, можно объяснить нарушением физикохимического состояния липидного компонента клеточной мембраны и изменением в ней структуры и конформации белков, включая белки-рецепторы,
Рис. 1. Ворсинчатый хорион. 10 недель беременности. Обострение герпес-вирусной инфекции. В симпласте хориона и клетках Ланхганса накопление ионов кальция. Реакция на кальций по методу Карос-со и Фаворда в модификации Комника. Увеличение 20 х 40.
Л Л4
Рис. 2. Ворсинчатый хорион. Контроль. В сипла-сте хориона и клетках Ланхганса единичные гранулы ионов кальция. Реакция на кальций по методу Карос-со и Фаворда в модификации Комника. Увеличение 20 х 40.
Рис. 3. Ворсинчатый хорион. 10 недель беременности. Обострение герпес-вирусной инфекции до беременности. Накопление ионов кальция под базальной мембраной. Реакция на кальций по методу Кароссо и Фаворда в модификации Комника. Увеличение 10 х 40.
Рис. 5. Ворсинчатый хорион. 10 недель беременности. Контроль. В цитоплазме симпласта единичные гранулы ионов кальция. Реакция на нальций по методу Кароссо и Фаворда в модификации Комнина. Увеличение 20 х 40.
Рис. 4. Ворсинчатый хорион. 10 недель беременности. Обострение герпес-вирусной инфекции. Накопление кальция вокруг кровеносных сосудов. Реакция на кальций по методу Кароссо и Фаворда в модификации Комника. Увеличение 10 х 40.
торая выводит из сферы реакции цАМФ, превращая
Рис. 7. Зрелая плацента. Контроль. Низкоактивная гистохимическая реакция. Реакция на кальций по методу Кароссо и Фаворда в модификации Комника. Увеличение 10 х 40.
Под влиянием высокой концентрации [Са2 ]ц в симпласте хориона может происходить неконтролируемый запуск каскада Са2+ - зависимых реакций. В первую очередь - это активация протеоли-тических ферментов, липаз, эндонуклеаз. Активация фосфолипазы А2 сопровождается отщеплением арахидоновой кислоты и включением ферментов каскада арахидоновой кислоты. Активация цикло-и липооксигеназного путей в ворсинчатом хорионе плаценты, сопровождается накоплением лейкот-риенов, тромбоксанов, простогландинов, которые могут способствовать спазму сосудов и усугублять воспалительный процесс [6, 11].
Таким образом, при активации персистирующей герпес-вирусной инфекции в ворсинчатом хорионе плаценты наблюдалось накопление ионов кальция, что может приводить к глубоким изменениям в метаболизме белков, жиров, углеводов, водноэлектролитном обмене, которые могут являться причиной тяжелых поражений плацентарной ткани и развитию фетоплацентарной недостаточности.
ЛИТЕРАТУРА
1. Рецепторы и внутриклеточный кальций [Текст]/П.В.Авдонин.-М.: Наука, 1994.-288 с.
2. Особенности течения беременности и родов у
больных с герпес-вирусными инфекциями
[Текст]/Е.И.Барановская [и др.]//Акуш. и гин.-2004.-№5.-С.49-50.
3. Морфология последа при генитальной герпетической инфекции [Текст]/Н.И.Бубнова, З.С.Зайдиева,
В.Л. Тютюнник//Акуш. и гин.-2000.-№6.-С.24 - 29.
4. Диагностика и лечение хронической фетоплацентарной недостаточности [Текст]/В.И.Бычков, Е.Е.
Образцова, С.В.Шамарин//Акуш. и гин.-1999.-№6.-С.3-6.
5. Электронная гистохимия [Текст]/Г.Гайер.-М.: Мир, 1974.-C.340-341.
6. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса [Текст]/Е.Е.Дубинина// Вопр. мед. химии.-2001.-Т.47, №6.-С.561-581.
7. Перинатальные аспекты герпетической инфекции
[Текст]/З.С.Зайдиева, В.Л.Тютюнник,
Н.В.Орджоникидзе//Акуш. и гин.-1999.-№1.-С.4-17.
8. Гистохимическая локализация ионизированного кальция в афферентном нервном аппарате слизистой оболочки бронхов больных бронхиальной астмой [Текст]/В.И.Кириченко, М.Т.Луценко//Новые научные технологии в Дальневосточном регионе: материалы III Дальневосточной региональной конференции с всероссийским участием, 27 - 29 сент., 1999. -Благовещенск, 1999.-С.79-80.
9. Роль афферентного нервного аппарата воздухоносных путей в патогенезе бронхиальной астмы [Текст]/В.И.Кириченко//Бюл. физиол. и патол. дыха-ния.-2000.-Вып.7.-С20-31.
10. Фетоплацентарная система при герпесной инфекции [Текст]/Луценко М.Т. [и др].-Благовещенск, 2003.-200 с.
11. Хроническая плацентарная недостаточность при бактериальной и/или вирусной инфекции [Текст] /Н.В.Орджоникидзе, В.Л.Тютюнник//Акуш. и гин.-1999.-№4.-С.46-50.
12. Dihydropyridine modulators of voltage - sensitive Ca2+ chatnnels specificaly regulate prolactin production bu GH4Ci pituitary tumor alls [Text]/J.J.Enycart, S.S.Sheu, P.M.Hinkle//J. Diol. Cytm.-1987.-Vol.262.- P.3154-3159.
13. An ultrastructual and ultrhis tochemicalstudy of the human placenta in mamurnal preeclampsia [Text]/C. J.P.Jones, H.Fox//Placenta.-1980.-Vol.1.-P.61-67.
Поступила 17.11.2005
УДК 616.981.46:616.327.2]:615.371/.372-053.3/.4(571.620)
Е.А.Стукун, В.К.Козлов, Г.Н.Холодок, Н.А.Просина, С.В.Крекнина, С.С.Левченко
АКТУАЛЬНОСТЬ НОСИТЕЛЬСТВА ГЕМОФИЛЬНОЙ ПАЛОЧКИ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ ГЕМОФИЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ
Хабаровский филиал ГУДНЦ ФПД СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства
РЕЗЮМЕ SUMMARY
В статье обсуждается назофарингеальное носи-тельство Haemophilus influenzae различных типов среди детей закрытых детских коллективов. Выявлеш 49% носителей капсульных типов Haemophilus influenzae. Выявлены различия у детей до 1 года и старше двух лет в динамике бактерионосительства. Оценен уровень заболеваемости органов респираторного тракта до и после вакцинации гемофильной инфекции вакциной Акт-Хиб. Рекомендовано использование вакцины Акт-Хиб в закрытых детских коллективах.
E.A.Stukun, V.K.Kozlov, G.N.Holodok, N.A.Prosina,
C.V.Kreknina, S.S.Levchenko
HEMOPHILIC BACILLUS CARRIAGE AND VACINE PROPHILAXIS EFFICIENCY IN CHILDREN
The paper describes different types of nasopharyngeal Haemophilus influenzae in children. Study showed 49% of hosts with capsule type of Haemophilus influenzae. We found differences in bacillus carriage between children younger than 1 year and children older than 2 years. We
