CC BY
44
'4 (23) октябрь 2007 г.
Тема номера: ПУЛЬМОНОЛОГИЯ. АЛЛЕРГОЛОГИЯ
47
ИЭМ» проведено обследование комбинированными методами фекалий пациентов с подозрением на аскаридоз. Больные были направлены врачами-аллергологами, а также врачами-педиатра-ми с подозрением на глистную инвазию, среди них дети составили 43,3%, взрослые — 56,6%, всего обследовано 127 больных.
Взрослые больные предъявляли жалобы на уртикарные или пятнисто-папулезные высыпания (16,6%), часто в сочетании с отеками по типу Квинке, направлялись в поликлинику с диагнозом «Хроническая рецидивирующая крапивница», «Рецидивирующий дерматит». Часть больных (12,2%) была направлена с диагнозом «Атопическоий дерматит», 20% предъявляли жалобы на заложенность носа, периодический сухой кашель, приступы удушья и были направлены в поликлинику с диагнозом «Бронхиальная астма, аллергический ринит». Дети предъявляли жалобы на периодический сухой кашель (44,8%), кашель с мокротой (19,7%), приступы затрудненного дыхания (35,4%) и направлялись в поликлинику с диагнозом «Рецидивирующий обструктивный бронхит, бронхиальная астма», 33,4% с диагнозом «Атопический дерматит». Из анамнеза кроме основных, отмечены жалобы на пониженный аппетит, тошноту, рвоту, диспептические явления, боли в эпигастральной или околопупочной областях. У значительной части больных отмечались головные боли (44,8%), повышенная утомляемость (72,4%). Более чем у половины больных по анамнезу отмечался контакт с землей (в летнее и осеннее время проживали на даче). В 100% случаев у больных имелись признаки интоксикации. Со стороны внутренних органов — в 64,5% была выявлена гепато-мегалия, в 62,9% болезненность в области живота.
Больным проводилось комплексное обследование включающее: общий анализ крови, кожное тестирование (по показаниям), определение уровня общего (ИФА), и специфических (по показаниям) 1дЕ методом иммуноблотинга, определение антител класса 1дМ и в к антигенам лямблий, проводилось исследование кала на цисты лямблий (в нативном препарате и с использованием консерванта Сафаралиева). Всем больным было проведено комплексное исследование фекалий гельминтоовоскопическим комбинированным методом в нашей модификации, который
имеет большую диагностическую эффективность по сравнению с общепринятыми методами [1].
При использовании трехингредиентного комбинированного копроскопического метода, нам удалось существенно увеличить выявляемость яиц гельминтов и цист простейших, паразитирующих в кишечнике, а так же сократить количество повторных исследований необходимых для точного диагноза. При проведении обследования больные были разделены на 2 группы: 1-я — преимущественно респираторный синдром (47,2%); 2-я — преимущественно кожный синдром (52,8%). При кожном синдроме у 15 (22,3%), при легочном синдроме у 13 (21,6%) больных обнаружены яйца аскарид.
Таким образом, примененный нами подход позволил с минимальными затратами увеличить диагностическую эффективность копроскопической диагностики такого важного паразитарного заболевания как аскаридоз у пациентов с атопической патологией.
литература
1. Долбин Д. А., Лутфуллин М. Х., Латыпов Д. Г. Сравнительная эффективность различных гельминтоовоскопических методов диагностики при неоаскаридозе телят. // РАН. Основные достижения и перспективы развития паразитологии. — 2004. — С. 163-164.
2. Латыпов Д. Г., Лутфуллин М. Х. и др. Модифицированный гельмин-тоовоскопический метод для диагностики трематодозов крупного рогатого скота. // Тр. ВИГИСа. — 2003. — Т. 39. — С. 136-145.
3. Онищенко Г. Г. Эпидемиологическая обстановка в Российской Федерации и основные направления деятельности по ее стабилизации. // Мат. к докл. на VIII Всероссийском съезде эпидемиол., микробиол. и паразитол.: Москва, 26-28 марта 2002 г. — М., 2002.
4. Покровский В. И., Онищенко Г. Г. и др. Эволюция инфекционных болезней в России в ХХ веке. — М., «Медицина», 2003. — С. 599-616.
5. Сафиуллин Р. Т. Сравнительная эффективность копроскопических методов диагностики гельминтозов свиней и их усовершенствование на основе стандартизации. // Тр. ВИГИСа. — 2001. — Т. 37. — С. 149-159.
6. Сергиев В. П., Лобзин Ю. В. и др. Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы). — С.-Петербург, «Фолиант», 2006. — С. 2-444.
Выявление антигенов плесневых грибов рода А$регд111и$ с помощью амперометрических иммуноферментных сенсоров
Е. В. ХАЛДЕЕВА, Н. И. ГЛУШКО, С. А. ЛИСОВСКАЯ, ФГУН Казанский НИИЭМ Роспотребнадзора, Казань
Плесневые грибы рода Aspergillus нередко выявляются при культуральных исследованиях проб, отобранных из наружных слуховых проходов, носовых пазух, а также при исследовании мокроты. При этом Aspergillus fumigatus является основным возбудителем инвазивного аспергиллеза, наиболее часто поражающего бронхолегочную систему, а Aspergillus niger способен вызывать различные заболевания ЛОР-органов, а также нередко выделяется в ассоциациях с другими возбудителями микозов. В то же время, доказать этиологическую роль грибов в каждом конкретном случае достаточно сложно, поскольку плесневые грибы нередко рассматривают как контаминацию, вследствие распространенности их спор в окружающей среде.
Основу успешной терапии аспергиллеза составляют ранняя диагностика и своевременное назначение эффективных анти-микотиков. Однако диагностика этого заболевания затруднена, вследствие низкой эффективности микологических и гистологических исследований, и как следствие — необходимости проведения дополнительных, весьма сложных и дорогостоящих исследований (компьютерная томография и рентгенография лег-
ких, бронхоскопия, биопсия очагов поражения). Подтверждением инвазивного процесса является присутствие в крови антигена соответствующего гриба. Однако существующие тесты выявляют совокупность антигенов Aspergillus spp., и позволяют достоверно определять антиген лишь у больных с тяжелыми формами аспер-гиллеза.
В связи с этим разработка чувствительного и селективного способа определения антигенов Aspergillus fumigatus и Aspergillus niger является достаточно актуальной задачей. Одним из способов решения этой проблемы является использование имму-ноферментных сенсоров, позволяющих проводить быстрое, чувствительное и селективное определение биологически активных веществ, в том числе антигенов патогенных грибов [1-3].
Цель работы: разработка амперометрических иммуноферментных сенсоров (ИФС) для определения антигена (Аг) плесневых грибов Aspergillus niger и Aspergillus fumigatus. Разработанные ИФС состояли из биочувствительной части, включающей совместно иммобилизованные антитела (Ат) против Aspergillus niger или Aspergillus fumigatus и ферментную метку (холинэстеразу),
48 _JU- Тема номера: ПУЛЬМОНОЛОГИЯ. АЛЛЕРГОЛОГИЯ
и трансдьюсера (стационарного ртутно-пленочного электрода). В основе предлагаемого варианта иммуноферментного анализа лежит сочетание реакции образования иммунного комплекса Ат-Аг на поверхности биочувствительной части сенсора с последующей вольтамперометрической индикацией сигнала. Аналитическим сигналом служит высота катодного пика при потенциале — 0,55 В, который отвечает электрохимическому процессу восстановления продукта реакции тиола (R2SH), образующемуся в результате катализируемого холинэстеразой гидролиза специфических серосодержащих субстратов, с материалом электрода ртутью [4]. Образование иммунного комплекса оказывает активирующее действие на каталитическую активность иммобилизованной холинэстеразы, что проявляется в увеличении аналитического сигнала. Величина этого эффекта линейно зависит от логарифма концентрации Аг в исследуемом растворе. Диапазоны определяемых концентраций составляют 5х10-10-3х10-6 мг/мл для Аг Aspergillus niger и 1х10-8-1х10-4 мг/мл для Аг Aspergillus fumigatus.
Разработанные ИФС использовали для определения антигенов Aspergillus fumigatus и Aspergillus niger в сыворотках крови.
Исследование сыворотки крови пациента с подтвержденным независимыми методами (компьютерная томография, культуральное исследование индуцированной мокроты) диагнозом «аспергиллез легких» показало наличие Аг Aspergillus fumigatus в концентрации 0,018±0,002 мг/мл.
Проведено определение Аг Aspergillus niger в сыворотке крови пациента с диагнозом «отомикоз» и «грибковый риносинусит»,
'4 (23) октябрь 2007 г.
у которого, по данным культурального исследования, был выделен в значительном количестве Aspergillus niger. Концентрация Аг составила (7,3±0,3)х10-6 мг/мл. В то же время, при исследовании сывороток крови пациентов с аналогичным диагнозом, у которых выявлялись другие виды грибов (в т.ч. рода Candida, Penicillium), активирующего эффекта не наблюдалось, что указывает на достаточно высокую селективность разработанного метода.
Таким образом, использование разработанных ИФС может быть целесообразно при выяснении этиологической роли плесневого гриба Aspergillus niger, особенно при микст-инфекциях, а также в качестве дополнительного инструмента комплексного лабораторного обследования больных при подозрениях на инвазивный аспергиллез.
литература
1. Morgan C. L., Newman D. J., Price C. P. Immunosensors: Technology and opportunities in laboratory medicine. // Clin. Chem. — 1996. — V. 42, n. 2. — P. 193-209.
2. Кутырева М. П., Халдеева Е. В., Медянцева Э. П., Глушко Н. И., Будников Г. К. Определение антигена Candida albicans с помощью амперометрического иммуноферментного сенсора. // Вопросы медицинской химии. — 1998. — Т. 44, № 2. — С. 172-178.
3. Skladal P. Advances in electrochemical immunosensors. // Electroanalysis. — 1997. — V. 9, n. 10. — P. 737-745.
4. Плембек Дж. Электрохимические методы анализа: Основы теории и применение. — М.: Мир, 1985. — С. 387.
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Применение Виферона в комплексной терапии новорожденных с вирусно-бактериальными инфекциями
В. В. МАЛИНОВСКАЯ, В. А. ДОСКИН, О. В. ЗАЙЦЕВА, Л. В. КОЛОБУХИНА, З. С. МАКАРОВА, И. В. НЕСТЕРОВА, В. П. ТИМИНА, Н. В. ДЕЛЕНЯН, В. В. ПАРФЕНОВ, Т. А. ЧЕБОТАРЕВА,
Р. З. ГАТИЧ, С. В. КОВАЛЕВА
ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи РАМН, Москва,
Российская медицинская академия последипломного образования, Москва,
Российский государственный медицинский университет, Москва, ГУ НИИ вирусологии
им. Д. И. Ивановского РАМН, Москва, УНЦ Медицинского центра УД Президента РФ, Москва.
Роль иммунной системы в противоинфекционной защите организма доказана. Появляется все больше данных о прямой и обратной связи иммунной системы с системой интерферона. Состояние и активность этих систем во многом определяет исход заболевания, характер его течения.
В лечении инфекционно-воспалительных заболеваний традиционно применяются антибиотики и химиотерапевтические препараты. Тем не менее, часто такая терапия не оправдывает возлагаемых на нее надежд. Это объясняется, прежде всего, резистентностью многих микроорганизмов к лекарственным средствам, имеющимся в арсенале практической медицины. Например, по статистике устойчивость некоторых штаммов Staphylococcus aureus к эритромицину в странах Западной Европы и Японии достигает 90%. А ведь именно эти микроорганизмы являются возбудителями многих внутрибольничных инфекций, таких, как пневмонии, сепсис, послеоперационные осложнения.
Каким образом можно повысить эффективность этиотропной терапии и одновременно добиться снижения побочных эффектов, проявляющихся в ходе ее применения? Как можно повысить функциональную активность собственной иммунной системы и ускорить восстановление ее нарушенных звеньев? Как обойти возможность аллергизации организма и развития иммунодефицита?
В настоящее время в арсенале практической медицины достойное место занимают препараты интерферонов. И это неудивительно. Интерфероны, как естественные факторы неспецифической защиты организма и медиаторы иммунитета, обладают самым широким спектром действия.
ВИФЕРОН" положительно зарекомендовал себя при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных: ОРВИ, сепсис, пневмония, менингит, специфическая внутри-утробная инфекция (хламидиоз, герпес, цитомегалия, в том числе СМУ-гепатит, уреаплазмоз) (Дементьева Г. М., Кеши-
