CC BY
65
№ 5 - 2011 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки
УДК 615.211:543.544
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В АНАЛИЗЕ МОНОМЕКАИНА
Л.А. Чекрышкина, Е.А. Брылина, Н.В. Слепова
ГБОУВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России (г. Пермь)
Цель исследования — разработка методик контроля качества мономекаина-2-метиланилида-Ы^-диэтиламиноэтановой кислоты нитрата с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Разработана методика ВЭЖХ-анализа применительно к мономекаину — биологически активному веществу (I), обладающему антиаритмическим действием. Подобранные условия позволяют идентифицировать (I) и возможную технологическую примесь — 2-метиланилин по временам удерживания. Методика включена в проект ФСП на мономекаин, используется для установления чистоты синтезируемых для целей эксперимента его лабораторных серий.
Ключевые слова: ВЭЖХ, мономекаин, контроль качества.
Чекрышкина Людмила Александровна - профессор, доктор фармацевтических наук, заведующая кафедрой фармацевтической химии ФДПО и ФЗО, ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России, e-mail: [email protected]
Брылина Евгения Анатольевна - преподаватель ГОУ СПО «Свердловский областной фармацевтический колледж», телефон 8 (343) 2-45-72-85
Слепова Надежда Валентиновна - кандидат фармацевтических наук, старший преподаватель кафедры фармацевтической химии ФДПО и ФЗО, ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России, e-mail: [email protected]
Мономекаин (I) — 2-метиланилид-№,№диэтиламиноэтановой кислоты нитрат — биологически активное соединение из группы ариламидов аминокарбоновых кислот, синтезированное в Пермской государственной фармацевтической академии, проявляющее антиаритмическое действие [1]. На рис. представлена структурная формула.
Аритмии сердца продолжают занимать значительное место в ряду сердечнососудистых заболеваний, поэтому создание антиаритмических препаратов является одной из актуальных проблем медицины и фармации.
Цель исследования — разработка методик контроля качества мономекаина с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Мономекаин — белый кристаллический порошок, без запаха, растворим в воде, спирте этиловом, ацетонитриле, диметилформамиде (ДМФА), нерастворим в ацетоне, гексане, бензоле. Строение (I) подтверждено методами ИК-, ЯМР 1Н- и ПМР-спектроскопии.
Важным этапом исследования синтезированного биологически активного вещества (БАВ) является контроль его чистоты, для чего должны быть использованы эффективные и достоверные методы, к каким относится ВЭЖХ [2].
Анализу подвергали образцы субстанции мономекаина и одной из возможных технологических примесей — 2-метиланилина, а также их модельную смесь.
Анализ проводили на жидкостном хроматографе Agilent Technologies Series 1200, оснащенном диодной матрицей «UV-VIS» и масс-селективным детектором Quadrupole Agilent 6120. Условия хроматографического разделения: предколонка с сорбентом SB-8, колонка Zorbax Eclipse XDB-C18, с обращенной фазой С-18 (150 х 2,1 мм), элюент — ацетонитрил-0,1 % раствор муравьиной кислоты в воде, градиентный режим, 0-3 мин 5 % ацетонитрила, 3-8 мин 5-50 % ацетонитрила, 8-10 мин 50 % ацетонитрила, 10-15 мин 505 % ацетонитрила, скорость подачи элюента 0,3 л/мин, температура термостата 40 °С, объем вводимой пробы 0,1 мкл, время анализа 15 мин, кондиционирование колонки 1 мин, детектирование в диапазоне длин волн от 190 до 400 нм с выделением аналитической длины волны 240 нм. Работа масс-детектора в режиме комбинированной ионизации (APCI+ES): химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и ионизации электростатическим распылением (ES) с регистрацией положительно заряженных ионов от 100 до 400 а.е.м. (режим SCAN), в режиме комбинированной ионизации с регистрацией положительно заряженного молекулярного иона 221 а.е.м. (режим SIM) напряжение на фрагментаторе 70 V, температура осушающего газа 350 °С, температура испарителя 200 °С, поток осушающего газа азота 5 л/мин, давление на небулайзере 50 psig, напряжение на капилляре 1000 V, ток коронного разряда 1 мкА, напряжение на заряжающем электроде 2000 V. На хроматограммах идентифицировали пики со временами удерживания — 9,168 мин (n = 3) и 3,430 (n = 3), соответствующие мономекаину и 2-метиланилину; масс-спектру с группой ионов 221 а.е.м. (мономекаин) и 108 а.е.м. (2-метиланилин).
Анализ модельной смеси показал результаты, согласующиеся с результатами, полученными при хроматографировании отдельных проб исследуемых веществ: время удерживания мономекаина — 9,235 мин, 2-метиланилина — 3,410 мин.
Таким образом, проведенные исследования мономекаина как потенциального лекарственного средства методом ВЭЖХ показали возможность использования метода для установления подлинности и испытания на содержание технологической примеси. Методика включена в проект ФСП на мономекаин, используется для установления чистоты синтезируемых для целей эксперимента его лабораторных серий.
Список литературы
1. Гашкова О. В. Синтез и биологическая активность ариламидов аминокарбоновых кислот / О. В. Гашкова, В. И. Панцуркин, И. П. Рудакова, Б. Я Сыропятов, М. И. Вахрин // Проблемы синтеза биологически активных веществ и создание на их основе лекарственных субстанций : сб. материалов Украинской науч. -практич. конференции. — Харьков, 2009. — С. 46.
2. Государственная фармакопея Российской Федерации. — Издательство «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», 2010. — Т. 2. — Режим доступа : (http://farmakopeya12.ru/index.htm)
HIGHLY EFFECTIVE LIQUID CHROMATOGRAPHY IN MONOMECAINE ANALYSIS
L.А. Chekryshkina, Е.А. Brylina, N.V. Slepova
SEIHPE «Perm State Pharmaceutical Academy» Minhealthsocdevelopment (Perm c.)
Research objective is working out of techniques of quality control monomecaine-2-metilanilid-N, N-dietilaminoethanoic acid of nitrate using the method of highly effective liquid chromatography (HELC). The HELC-analisys technique with reference to monomecaine, the biologically active substance (I) that possesses antiarrhytmic action, is developed. Selected conditions allow to identify (I) a possible technological impurity — the 2-metilanilin on time keeping. The technique is included in the MM project on monomecaine and used for establishment of cleanliness of its laboratory series that are synthesized for experiment.
Keywords: HELC, monomecaine, quality control.
About authors:
Chekryshkina Lyudmila Aleksandrovna — professor, doctor of pharmaceutical sciences, pharmaceutical chemistry chair FAPE and FCS, SEI HPE «Perm State Pharmaceutical Academy» Minhealthsocdevelopment, e-mail: [email protected]
Brylina Evgeniya Anatolevna — teacher at SEI SPE «Sverdlovsk regional pharmaceutical college», phone 8(343) 2-45-72-85
Slepova Nadezhda Valentinovna — candidate of pharmaceutical sciences, senior teacher of pharmaceutical chair chemistry FAPE and FCS, SEI HPE «Perm State Pharmaceutical Academy» Minhealthsocdevelopment, e-mail: [email protected]
List of the Literature:
1. Gashkova O. V. Synthesis and biological activity of arylamides of aminocarboxylic acids / O. V. Gashkova, V. I. Pantsurkin, I. P. Rudakov, B. I Syropyatov, M. I. Vakhrin // Problems of synthesis of biologically active substances and creation the medicinal substances on that basis : col. Materials Ukrainian scien.-pract. Conferences. — Kharkov, 2009. — P. 46.
2. The state pharmacopoeia of the Russian Federation. — Publishing house " Science center of agents examination of medical application", 2010. — V. 2. —access mode: (http://farmakopeya 1 2. ru/index.htm)
