CC BY
9УДК 619.616.98.579.841.935.07
ВЫДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРУЦЕЛЛЕЗА В МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ МЕТОДОМ ПЦР
М. М. Микаилов - канд. вет. наук, ведущий научный сотрудник Э. А. Яникова - канд. вет. наук, старший научный сотрудник Дж. М. Рамазанова - научный сотрудник
Прикаспийский зональный НИВИ- филиал ФГБНУ «ФАНЦРД», 367000, РД, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 88
О. Ю. Черных - д-р вет. наук, профессор, главный научный сотрудник
ФГБОУ ВО Кубанский государственный аграрный университет имени И. Т.
Трубилина, 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13
Ш. А. Гунашев - канд. вет. наук, старший научный сотрудник, доцент
ФГБОУ ВПО «Дагестанский государственный аграрный университет им.
М.М. Джамбулатова», 367032, РД, г. Махачкала, ул. М.Гаджиева, 180
Аннотация. В статье представлены результаты, характеризующие эпизоотическую ситуацию по бруцеллезу сельскохозяйственных животных. Десятки неблагополучных пунктов, сотни голов мелкого и тысячи голов крупного рогатого скота больных бруцеллезом свидетельствуют о широком распространении инфекции. Высокая заболеваемость людей свидетельствует о тяжелой эпидемиологической обстановке. Возможным источником заболевания людей являются молочные продукты, не прошедшие пастеризацию. Для выявления ДНК возбудителя бруцеллеза в сырах из молока крупного и мелкого рогатого скота использовали метод полимеразной цепной реакции. В образцах сыра, изготовленного из молока от больных животных, были обнаружены фрагменты ДНК бруцелл.
Ключевые слова: полимеразная цепная реакция, бруцеллез, молочная продукция, заболеваемость людей.
ISOLATION OF THE CAUSATIVE AGENT OF BRUCELLOSIS IN DAIRY
PRODUCTS BY PCR M. М. Mikailov - Candidate of Veterinary Sciences, leading researcher E. A. Yanikova - Candidate of Veterinary Sciences, senior researcher; J. M. Ramazanova - researcher, graduate student
FBSI Federal agrarian scientific center of Dagestan Republic, 367000, DR, Makhachkala, Dakhadaeva str., 88
O. Yur. Chernykh - Doctor of Veterinary Sciences, Professor, Chief researcher
Kuban State Agrarian University named after I. T. Trubilin, 350044, Krasnodar, Kalinina str., 13
Sh. A. Gunashev - Candidate of Veterinary Sciences, senior researcher, Associate
Professor;
FBSI Federal agrarian scientific center of Dagestan Republic, 367032, DR, Makhachkala, M. Gadjiyev str., 180
Abstract. The article presents the results characterizing the epizootic situation of brucellosis of farm animals. Dozens of poor settlements, hundreds of small animals and thousands of cattle indicate a wide spread of infection. High morbidity of people indicates a severe epidemiological situation. A possible source of human disease is dairy products that have not been pasteurized. The polymerase chain reaction method was used to identify the DNA of the causative agent of brucellosis in cheeses from the milk of cattle and small cattle. Fragments of brucella DNA were found in samples of cheese made from milk from sick animals.
Keywords: polymerase chain reaction, brucellosis, dairy products, human morbidity.
Введение. Республика Дагестан занимает первое место в Российской Федерации по количеству мелкого рогатого скота. По данным статистического управления в республике насчитывается 4,5 млн. голов овец и коз. Количество крупного рогатого скота достигает 1,5 млн. голов. Дагестан является лидером по производству баранины и сыров, приготовленных из молока овец и коз. Высокоразвито производство молочных продуктов от крупного рогатого скота: имеются десятки молокозаводов, сотни пунктов сбора молока, сыроварни.
Многие высокогорные районы Дагестана славятся производством определенных сортов сыра и различной молочной продукции. Когда речь идет о производстве и переработки молочной продукции с соблюдением всех санитарных норм и ветеринарных требований, угроза заражения людей бруцеллезом практически сводится к нулю. Учитывая географический рельеф Дагестана, когда овцы находятся высоко в горах на летних пастбищах, где и проходит основная заготовка овечьего сыра, не следует исключать возможность попадания в благополучные хозяйства больных бруцеллезом животных. Поэтому следует, строго следить за качеством произведенного товара и проводить исследования каждой партии сыра на отсутствие возбудителя бруцеллеза, дабы исключить заражение людей. Аналогичная ситуация может складываться и с молочной продукцией от крупного рогатого скота [7].
Производством и заготовкой сыра, сливок, творога для дальнейшей их реализации занимаются многие частные подворья. Выпасая животных на общих скотопрогонных трассах с использованием общих водоемов, следует помнить о возможности заражения даже вакцинированного поголовья. Двукратное исследование в год крупного рогатого скота на бруцеллез не может гарантировать благополучие хозяйств по бруцеллезу из-за большого числа передвижения скота как внутри республики, так и за ее пределами [6].
Эпизоотическая ситуация по бруцеллезу сельскохозяйственных животных за последние годы характеризуются как неблагополучная, об этом свидетельствуют ежегодно выделяемые неблагополучные пункты, число больных животных среди крупного рогатого скота превышает тысячу. Все это влечет за собой огромные экономические потери. Ущерб наносимый бруцеллезной инфекцией экономике Республики огромен, он складывается из ряда факторов: это потеря племенной ценности, как животных, так и хозяйств, потеря молочной, мясной продукции, молодняка, а так же материальные затраты, направленные на проведение ветеринарно-санитарных мероприятий по оздоровлению хозяйств. Всё вышеперечисленное не имеет такой ценности, как здоровье человека. Являясь зооантропонозом бруцелла, попав в организм
человека, наносит ущерб здоровью неизмеримый в денежном эквиваленте. В зависимости от патогенности и вирулентности возбудителя, организму человека наносится колоссальный урон, вплоть до инвалидности и потери трудоспособности. Поэтому борьба с бруцеллезом должна проводиться совместно работниками ветеринарной службы и медицинским персоналом [1,2,5].
Основным источником распространения бруцеллеза являются больные животные, они выделяют возбудитель во внешнюю среду, контаминируя пастбища, базы, водоемы, предметы ухода и т.д. Человек может заразиться, как при уходе, контакте с больным животным, так и при употреблении в пищу мясомолочной продукции от них. Научно доказано, что бруцелла не устойчива к высоким температурам. Так при температуре 70-80 градусов инактивируются в течение нескольких минут, а при кипячении моментально [3]. Следовательно, мясная продукция после термической обработки не представляет угрозы здоровью человека, но иная ситуация складывается с молочной продукцией, производимой в домашних условиях, в частности, в производстве сыров. В этом случае возникают риски заражения людей при использовании такой продукции [8].
В последние годы в диагностике многих заболеваний инфекционной патологии стали применять полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Данный метод позволяет идентифицировать ДНК возбудителя в пат и биоматериале [4,9].
Целью наших исследований было изучение возможности использования полимеразной цепной реакции в диагностике бруцеллеза при исследовании молочной продукции.
Материалы и методы. Источником информации послужили отчетные данные Комитета ветеринарии РД, отчеты статистического управления.
В качестве материала были отобраны сыворотки крови от животных из хозяйств с различной эпизоотической обстановкой по бруцеллезу, молоко и молочные продукты.
Исследования сывороток крови проводились согласно наставлению для постановки ПЦР тест-системой для выявления возбудителей бруцеллеза методом ПЦР, ООО «Вет-Фактор» (г. Троицк) и Инструкции по применению тест-системы «Бруцелла А/М», предназначеной для индикации и дифференциации видов возбудителей бруцеллеза методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», г. Казань).
Статистическую обработку данных провели константным методом.
Результаты проведенных исследований. Специалистами ветеринарной службы проводится большой объем работ, направленных на ликвидацию бруцеллезной инфекции. Для своевременного выявления и удаления из стад больных животных проводится комплексная серологическая диагностика с максимальным охватом восприимчивых животных (таблица 1).
Таблица 1 - Результаты серологических исследований крупного и мелкого
рогатого скота за 2022 г.
Исследовано (тыс.) Выявлено н/п Выявлено больных
крс мрс крс мрс крс мрс
921,4 513,4 30 7 1511 175
В 2022 выявлено и сдано на убой 1511 крупного и 175 голов мелкого рогатого скота в 37 неблагополучных пунктах, всего исследованиям было подвергнуто 921,4 тыс. голов крупного и 513,4 тыс. голов мелкого рогатого скота. В ходе проведения оздоровительных мероприятий в течение года удалось освободить от бруцеллеза 18 неблагополучных пунктов (таблица 2).
Таблица 2 - Сведения о мерах профилактики и ликвидации бруцеллеза
Вакцинировано (тыс.) Оздоровлено н/п
крс мрс крс мрс
587,4 3986,2 13 5
Для создания стойкого иммунитета овец и коз прививают вакциной из штамма REV-1, Br. melitensis, крупный рогатый скот - вакциной из штамма Br. abortus 82. Сложившаяся эпизоотическая обстановка отразилась на заболеваемости людей.
За предыдущий год диагноз на бруцеллез установлен в 228 случаях. Причиной такой высокой заболеваемости людей может быть ряд факторов: это и контакт с больными животными, и их убой, родовспоможение, а также употребление в пищу продуктов, приготовленных из молока от этих животных. С целью выделения ДНК возбудителя бруцеллеза в сырах мы отобрали несколько больных коров и лактирующих овец, из молока которых приготовили образцы сыра для дальнейшего исследования в ПЦР.
Таблица 3 - Результаты исследования в ПЦР образцов сыра от больных и
здоровых животных
№ Определяемая Метод Результаты
Образцы характеристика (показатель), единицы измерения исследования (испытаний)
1 ДНК возбудителей бруцеллеза ПЦР обнаружено
(микроорганизмов рода
Brucella: B.melitensis,
B.abortus, B.suis, B.ovis,
B.canis)
2 ДНК возбудителей бруцеллеза (микроорганизмов рода Brucella: B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.ovis, B.canis) ПЦР обнаружено
3 ДНК возбудителей бруцеллеза (микроорганизмов рода Brucella: B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.ovis, B.canis) ПЦР не обнаружено
4 ДНК возбудителей бруцеллеза ПЦР не обнаружено
(микроорганизмов рода
Brucella: B.melitensis,
B.abortus, B.suis, B.ovis,
B.canis)
Для контроля брались образцы сыров от здоровых животных из благополучных хозяйств. По данным приведенным выше видно, что в образце 1 (сыр из молока коров больных бруцеллезом) и образце 2 (сыр из молока овец больных бруцеллезом) с помощью ПЦР удалось выделить ДНК возбудителя бруцеллеза, контрольные образцы 3 и 4, приготовленные из молока от здоровых животных, дали отрицательный результат.
Заключение. Широкое распространение бруцеллезной инфекции среди крупного рогатого скота, овец и коз явилось основной причиной заболеваемости людей в регионе. Перегоны мелкого и крупного рогатого скота на летние пастбища, так же перевозка животных из одного региона в другой, без соблюдения ветеринарных правил и многое другое создают благоприятные условия для распространения бруцеллезной инфекции среди восприимчивых животных. Для профилактики возникновения бруцеллеза, а также сдерживания распространения, ветеринарными специалистами проводится массовая иммунизация, охватывающая максимальное число животных. С целью контроля эпизоотической ситуации проводятся плановые диагностические исследования животных, позволяющие своевременно выявить и удалить из отар и стад больных животных. Проводимые противобруцеллезные мероприятия позволили оздоровить 37 неблагополучных пунктов.
Результаты исследований сыров в ПЦР доказали пригодность данного метода для диагностики бруцеллеза в молочных продуктах. Внедрение этого метода в широкую практику позволит исключить попадание инфицированной бруцеллами продукции на прилавки торговых точек, тем самым предотвратит заражение людей бруцеллезом.
Литература
1. Будулов Н.Р. Анализ современной эпизоотической обстановки по хроническим инфекционным заболеваниям в Республике Дагестан / Н.Р. Будулов, А.Ю. Алиев, М.М. Микаилов, Э.А. Яникова, А.А. Халиков // Ветеринария Кубани. - 2021. - № 2. - С. 9 - 12.
2. Винокуров Н.В. Эпизоотологическая и эпидемиологическая роль бруцеллеза разных видов животных в РФ / Н.В. Винокуров, М.И. Искандаров, К.А. Лайшев, Е.С. Слепцов, И.И. Григорьев, З.Г. Татаринова // Ветеринария и кормление. - 2020. - № 6. - С. 13-15.
3. Гордиенко Л. Н. Система мониторинга за эпизоотической обстановкой по бруцеллезу северных оленей и способы повышения его эффективности в современных условиях / Л. Н. Гордиенко, Е. В. Куликова, А. Н. Новиков // Ветеринария и кормление. - 2017. - № 3. - С. 31-32.
4. Гулюкин М.И. Эффективность мероприятий против бруцеллеза сельскохозяйственных животных / М.И. Гулюкин, А.Д. Забережный, М.И. Искандаров [и др.] // Ветеринария. - 2019. - № 11. - С. 20-24.
5. Лямкин Г.И. Эпизоотолого-эпидемиологическая обстановка по бруцеллезу в Южном федеральном округе Российской Федерации в 2006-2009 гг. / Г.И. Лямкин, Н.И. Тихенко, Е.А. Манин, С.В. Вилинская, С.И. Головнева, Д.В. Русанова // Проблемы особо опасных инфекций. - 2010. - №105. - С. 3134.
6. Микаилов М.М. Об эпизоотической ситуации по бруцеллезу в Республике Дагестан и мерах по её стабилизации / М.М. Микаилов, О.Ю. Юсупов, А.А. Халиков [и др.] // Ветеринария и кормление. - 2020. - № 4. - С. 40-41.
7. Нурлыгаянова Г.А. Заболеваемость животных бруцеллезом и его эпидемическая проекция в Российской Федерации / Нурлыгаянова Г.А., Белоусов В.И., Варенцова А.А., Шарыпов А.С., Грудев А.И., Скворцова А.Н. // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2021. - Т. 245. - № 1. - С. 138-143.
8. Скляров О.Д. Бруцеллез как актуальный зооноз, характеристики особенностей болезни и порядка проведения противобруцеллезных мероприятий / О. Д. Скляров, О. В. Бабичева, А. Н. Иванова, В. Н. Боровой // Биология и биотехнология на службе охраны здоровья животных и человека : Материалы Национальной научно-практической конференции молодых
ученых, аспирантов и студентов, Москва, 21 октября 2022 года. - Москва: Сельскохозяйственные технологии, 2022. - С. 94-103.
9. Федоров А.И. Эффективность диагностических методов исследования бруцеллеза животных / А.И. Федоров, М.И. Искандаров, С.С. Искандаров, Е.С. Слепцов, А.И. Павлова, Л.П. Корякина, Н.В. Винокуров // Ветеринария и кормление. - 2020. - №1. - С. 21-23.
References
1. Budulov N.R. Analysis of the modern epizootic situation on chronic infectious diseases in Dagestan Republic / N.R. Budulov, A.Y. Aliyev, M.M. Mikailov, E.A. Yanikova, A.A. Khalikov // Veterinary medicine of Kuban. - 2021. -No. 2. - P. 9-12.
2. Vinokurov N.V. Epizootological and epidemiological role of brucellosis of different animal species in the Russian Federation / N.V. Vinokurov, M.I. Iskandarov, K.A. Laishev, E.S. Sleptsov, I.I. Grigoriev, Z.G. Tatarinova // Veterinary medicine and feeding. - 2020. - No. 6. - P. 13-15.
3. Gordiyenko L. N. A system for monitoring the epizootic situation of reindeer brucellosis and ways to increase its effectiveness in modern conditions. N. Gordienko, It's Me. V. Kulikova, A. N. Novikov / / Veterinary and steering. - 2017. -No 3. - P. 31-32.
4. Gulyukin M.I. Effectiveness of measures against brucellosis of farm animals / M.I. Gulyukin, A.D. Zaberezhny, M.I. Iskandarov [et al.] // Veterinary medicine. - 2019. - No. 11. - P. 20-24.
5. Lyamkin G.I. Epizootological and epidemiological situation of brucellosis in the Southern Federal District of the Russian Federation in 2006-2009 / G.I. Lyamkin, N.I. Tikhenko, E.A. Manin, S.V. Vilinskaya, S.I. Golovneva, D.V. Rusanova // Problems of particularly dangerous infections. - 2010. - No. 105. - P. 31-34.
6. Mikailov M.M. About the epizootic situation of brucellosis in Dagestan Republic and measures to stabilize it / M.M. Mikailov, O.Yu. Yusupov, A.A. Khalikov [et al.] // Veterinary medicine and feeding. - 2020. - No. 4. - P. 40-41.
7. Nurlygayanova G.A. The incidence of brucellosis of animals and its epidemic projection in the Russian Federation / Nurlygayanova G.A., Belousov V.I., Varentsova A.A., Sharypov A.S., Grudev A.I., Skvortsova A.N. // Scientific notes of the Kazan State Academy of Veterinary Medicine named by N.E. Bauman. - 2021. -T. 245. - Vol. 1. - P. 138-143.
8. Sklyarov O.D. Brucellosis as an actual zoonosis, characteristics of the features of the disease and the procedure for carrying out anti-brucellosis measures / O. D. Sklyarov, O. V. Babicheva, A. N. Ivanova, V. N. Borovoy // Biology and biotechnology in the service of animal and human health protection : Materials of the National Scientific and Practical Conference of Young scientists, graduate students and Students, Moscow, October 21, 2022. - Moscow: Agricultural Technologies, 2022. - P. 94-103.
9. Fedorov A.I. The diagnostics methodologies and studies of brucellleza animalcule / A.I. Fedorov, M.I. Iskandarov, S.S. Iskandarov, E.S. Sleptsov, A.I. Pavlova, L.P. Koryakina, N.V. Vinokurov / / Veterinary and steering. - 2020. - No 1. - P. 21-23.
