CC BY
28
УДК 619:637.075
Ключевые слова: сальмонеллы, E. coli, мясные продукты, время исследования
Key words: Salmonella, E. coli, meat products, time of research
Чугунова Е. О.
ВЫДЕЛЕНИЕ САЛЬМОНЕЛЛ ИЗ ПРОДУКТОВ, ОБСЕМЕНЕННЫХ E. COLI И SALMONELLA SPP.
THE ISOLATION OF SALMONELLA FROM PRODUCTS THAT CONTAMINATIONED
BY E. COLI AND SALMONELLA SPP.
ФГБОУ ВО «Пермская государственная сельскохозяйственная академия имени академика Д. Н. Прянишникова»
Адрес: 614990, Россия, г. Пермь, ул. Петропавловская, 23
Perm State Agricultural Academy named after academician D. N. Pryanishnikov, Federal State Educational Institution of Higher Education Address: 614990, Russia, Perm, Petropavlovskaya str., 23
Чугунова Елена Олеговна, к. в. н, доцент каф. внутренних незаразных болезней, хирургии и акушерства. E-mail: [email protected]. Тел. (912) 884-38-39
Chugunova Elena O., PhD in Veterinary Sciences, Associate Professor of the Dept. Non-communicable diseases, Surgery and Obstetrics. E-mail: [email protected]. Tel. +7 (912) 884-38-39
Аннотация. В статье представлены результаты исследований мяса и мясных продуктов, обсемененных бактериями группы кишечной палочки и дополнительно искусственно контаминированных клетками E. coli и Salmonella spp. Работа выполнена в Пермском ветеринарном диагностическом центре в период с 2014 по 2016 гг. В процессе лабораторных испытаний формировали опытные и контрольные образцы мясных продуктов массой по 25 г, которые инокулировали клетками сальмонелл и эшерихий в равных количествах: от 101 до 108 МТ. Контрольные пробы анализировали по ГОСТ 31659-2012 «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella», а опытные исследовали разработанным и запатентованным способом (патент РФ № 2570386). Результаты исследований показали, что чувствительность разработанного способа индикации сальмонелл выше, чем классического анализа. При внесении в образец по 10 микробных тел сальмонелл и эшерихий в опыте был получен положительный результат за 71,4±5,06 часа, на исследование контрольных образцов потребовалось больше времени, и в итоге лабораторных испытаний не обнаружили искомых микроорганизмов. Аналогичный результат получили при посевной дозе по 100 клеток Salmonella spp. и E. coli. При искусственной контаминации образцов в дозе от 1000 до 100 млрд. клеток как в опыте, так и в контроле были получены положительные результаты исследования. Однако на испытания контрольных образцов мясных продуктов оказалось затрачено в 1,5-2 раза больше времени, чем на анализ опытных проб. Summary. The article shows the results of research of meat and meat products that were contaminated by Coli form bacteria. Also it's artificially contaminated by E. coli and Salmonella spp. The work was performed in the Perm veterinary diagnostic center at the period from 2014 to 2016 years. During laboratory tests the experimental and control samples of meat products weighing 25 g, inoculated Salmonella and Escherichia cells in equal amounts from 101 to 108 cells were formed. Control samples were analyzed by GOST 31659-2012 "Food Products. Methods of the detection of Salmonella spp.". Experienced samples were analyzed by the patented method (№ 2570386) that was investigated and developed. The result of the research proved high sensitivity of the patented method indication of Salmonella unlike the classical analysis. Experience samples inoculated by 10 cells of Salmonella and Escherichia, and positive result was obtained during 71.4±5.06 hours. The analysis of control samples took more longer time and we have not found the desired microorganisms. Similar results were obtained when inoculated 100 cells of Salmonella spp. and E. coli. Artificial contamination of the samples by 1000 to 100 billion cells of Salmonella spp. and E. coli was positive both in experiment and in the control. However, at the testing of control samples of meat products were spent 1.5-2 times more than for analysis of the experimental samples.
Введение
Мясо и мясопродукты различных видов сельскохозяйственных животных и птицы используют в пищу как источник биологически полноценных белков, жиров, необходимых для организма человека витаминов, макро- и микроэлементов. При этом нужно помнить, что человек зависит от состояния
здоровья животных, а также от качества и безопасности животноводческой продукции [1, 7]. По данным Туляковой Т. В. (2013), в 2011 году было зафиксировано увеличение удельного веса проб, не соответствующих гигиеническим нормам по санитарно-хими-ческим показателям. В холодильниках предприятий общепита и торговли, где нередко
нарушают правила хранения мяса и яиц, такое интенсивное инфицирование продуктов -реальный факт. Вторичное обсеменение происходит чаще в разделочных цехах общепита и ресторанов, магазинах и в других торговых предприятиях. Известно, что сальмонеллы долго сохраняют свою жизнеспособность в колбасных изделиях (от 60-ти до 130-ти дней), в замороженном мясе (от 6-ти до 13-ти мес.), в яйцах (до 13-ти мес.), в яичном порошке (до 9-ти мес.). После длительного хранения в незамороженном виде мясо может стать опасным для человека, поскольку при благоприятных температурных условиях размножение микробов происходит каждые 20-30 минут, при этом бактериальная масса возрастает в геометрической прогрессии [2]. Кроме того, любой пищевой продукт животного или растительного происхождения при определенных условиях может быть фактором передачи инфекции при зоонозных саль-монеллезах [8, 9, 10]. Учитывая факт, что мясные продукты могут быть контаминиро-ваны ассоциацией микроорганизмов, в том числе сальмонеллами и эшерихиями [3], неоспорима актуальность и значимость проведенных нами исследований. Цель исследований - выделить единичные сальмонеллы из ассоциации с бактериями группы кишечной палочки.
Материалы и методы
Материалом для ветеринарно-санитар-ных исследований служили мясные продукты и субпродукты, мясные полуфабрикаты, которые ранее на питательных средах дали рост бактериям группы кишечной палочки (БГКП). Для искусственной контаминации данных проб продуктов использовали штаммы S. Typhimurium, S. Enteritidis, S. Gallinarum-Pullorum, S. Dublin, S. Choleraesuis, S. Infantis, S. Hamburg, S. Virchow и E. Coli, полученные из ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России (всего 48 штаммов).
Метод исследования - бактериологический. Исходную бактериальную суспензию, содержащую 108 микробных тел (МТ), готовили в физиологическом растворе с помо-
щью оптического прибора Densi-La-Meter (Erba Lachema, Чехия). Биохимическую идентификацию выполняли на микробиологическом анализаторе Multiskan FC (Thermo Fisher Scientific Inc., Финляндия) с помощью набора ЭНТЕРОтест 24h (Arkray, Япония). При этом определяли ß-ксилоксидазную активность, способность ферментации салицина, сорбита, мелибиозы, целлобиозы, лактозы, трегалозы, маннита, дульцита, адонитола, арабитола, сахарозы, инозитола, раффинозы, расщепления мочевины, глюку-ронидазы, способность декарбоксилировать аргинин, орнитин, лизин, образовать сероводород, ß-галактозидазу, утилизировать цитрат, малонат и эскулин. Согласно ГОСТ 31659-2012 «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella» определяли подвижность и способность сальмонелл образовывать ацетоин и индол. Серогруп-повую принадлежность сальмонелл оценивали по результатам реакции агглютинации на предметном стекле, используя набор сывороток сальмонеллезных О-комплексных и монорецепторных О- и Н-агглютини-рующих (ФГУП «Курская биофабрика -«БИОК»).
В процессе выполнения исследований формировали опытные и контрольные образцы мясных продуктов массой по 25 г, которые инокулировали не только клетками сальмонелл, но и E. coli в равных количествах: от 101 до 108 МТ. Таким образом, общее количество БГКП в испытуемых образцах превысило численность внесенных сальмонелл. Затем контрольные пробы подвергали лабораторным испытаниям по ГОСТ 316592012, а опытные исследовали разработанным и запатентованным способом (патент РФ № 2570386). Для этого проводили обогащение бактерий опытных образцов в сконструированной нами ранее среде [6]. Далее производили пересев на плотные питательные среды (ППС), в качестве которых использовали висмут-сульфитный агар (ВСА) и ксило-зо-лизин-дезоксихолатный агар (XLD-агар). После инкубации при 37° С микробиологической петлей вновь пересевали микроорганизмы с типичных для сальмонелл колоний на скошенный мясо-пептонный агар (МПА)
для дальнейшей биохимической идентификации и серологической типизации. Кроме того, проводили опытные и контрольные исследования с неинфицированной сальмонеллами мясной продукцией, чтобы исключить вероятность ложноположительных результатов испытаний.
Результаты исследований и обсуждение
Проводя интерпретацию результатов, учитывали, что сальмонеллы могут формировать колонии на ВСА и XLD-агаре более 24-х часов, поэтому инкубацию посевного материала на ППС осуществляли в течение 48-ми часов. При культивировании отмечена морфологическая идентичность между колониями опытных и контрольных образцов: все пробы дали характерный рост. Колонии бактерий рода Salmonella на XLD-агаре имели черный центр и слегка прозрачную зону красноватого цвета. На ВСА используемые в работе штаммы сальмонелл образовывали
черные с характерным металлическим блеском или зеленые колонии. Единственным существенным отличием между куль-туральными свойствами контрольных и опытных образцов явилось время колони-еобразования. В частности, нами отмечено более быстрое формирование колоний в опытных образцах по сравнению с контрольными (табл. 1). Сальмонеллы контрольных и опытных образцов обладали типичными биохимическими и серологическими свойствами.
Общее время исследований, включая этапы обогащения, формирования колоний, биохимической идентификации и серологической типизации, в опыте составило 63,0 часа, а в контроле - 90,0 часов (табл. 2).
Из таблицы 2 видно, что чувствительность разработанного способа индикации сальмонелл выше, чем классического анализа. При внесении в образец по 10 МТ сальмонелл и эшерихий в опыте были обнаружены Salmonella spp. за 71,4±5,06 часа, на иссле-
Таблица 1.
Рост колоний сальмонелл на плотных питательных средах
Серотип сальмонелл Просмотр чашек Петри
через 24±3 часа через 48±3 часа
опыт контроль опыт контроль
XLD-агар
S. Typhimurium +++ ++ +++ +++
S. Dublin ++ + +++ ++
S. Choleraesuis + - + +
S. Enteritidis + - ++ ++
S. Gallinarum-Pullorum ++ - ++ ++
S. Infantis ++ + +++ ++
S. Hamburg ++ + +++ ++
S. Virchow +++ + +++ ++
ВСА
S. Typhimurium +++ ++ +++ +++
S. Dublin + - ++ +
S. Choleraesuis - - + -
S. Enteritidis + - ++ +
S. Gallinarum-Pullorum +++ ++ +++ ++
S. Infantis +++ + +++ ++
S. Hamburg +++ ++ +++ ++
S. Virchow + + ++ ++
Примечание: +++ обильный рост; ++ несколько колоний; + единичные колонии; - отсутствие роста.
дование контрольных образцов потребовалось на 18,6 часов больше времени, и в итоге лабораторных испытаний не зафиксирован рост искомых микроорганизмов. Аналогичный результат получили при посевной дозе по 100 МТ Salmonella spp. и E. coli. В частности, обнаружение бактерий рода Salmonella в опытных образцах продукции продолжалось в течение 70,2±3,80 часов, и был достигнут положительный результат, а в контрольных 90,0±0,0 часов при отрицательном итоге исследований.
Заключение
С применением модифицированного метода изучения антагонистической активности бактерий Плитовым И. С. (2012) установлено, что биологически активные вещества, продуцируемые изолятами E. coli, угнетают рост бактерий рода Salmonella. Действительно, при попытке выделить сальмонеллы из ассоциации с эшерихиями (при посевной дозе по 10 и по 100 МТ в соотношении 1:1) классическим бактериологическим анализом были получены отрицательные результаты. Однако обогащение испытуемых образцов в сконструированной среде привело к угнетению БГКП и способствовало детекции сальмонелл.
При искусственной контаминации образцов в дозе от 1000 до 100 млрд. МТ Salmonella spp. и E. coli как в опыте, так и в контроле были получены положительные результаты исследования. Однако на испытания контрольных образцов мясных продуктов оказалось затрачено в 1,5-2 раза больше времени, чем на анализ опытных проб.
Таким образом, продолжительность лабораторных испытаний контрольных образцов составила от трех до шести дней, а опытных - всего до трех дней. Также необходимо отметить, что внесение в исследуемые мясные продукты только эшерихий в количестве по 10 МТ/образец не привело к получению лож-ноположительных результатов испытаний как при работе с разработанной средой, так и при использовании стандартного бактериологического анализа.
Список литературы
1. Белик, С. Н. Гигиеническая характеристика пищевой ценности и безопасности мяса и шпика свиней, выращенных с использованием белково-витаминно-минеральной добавки фирмы "Провими": дисс. ... канд. мед. наук [Текст] / С. Н. Белик. - Ростов-на-Дону, 2005. - 214 с.
2. Мезенцев, С. В. Распространение сальмонелл в продукции животноводства [Текст] / С. В. Мезенцев // Практик. - 2010. - № 2. - С. 6-11.
Таблица 2.
Результат исследования мясных продуктов, искусственно контаминированных
Salmonella spp. в ассоциации с E. coli
Количество внесенных сальмонелл и E. coli, МТ/см3 Опыт Контроль
время, час результат время, час результат
101 71,4±5,061 положительный 90,0±0,0 отрицательный
102 70,2±3,801 положительный 90,0±0,0 отрицательный
103 70,2±3,801 положительный 135,6±5,80 положительный
104 69,0±0,01 положительный 133,2±3,79 положительный
105 69,0±0,01 положительный 124,8±6,20 положительный
106 69,0±0,01 положительный 121,2±3,79 положительный
107 69,0±0,01 положительный 120,0±0,0 положительный
108 69,0±0,01 положительный 120,0±0,0 положительный
Контроль на отсутствие ложнополо-жительного результата (0 МТ сальм. 10 МТ E. coli) 63,0±0,01 отрицательный 90,0±0,0 отрицательный
1 При Р<0,001.
3. Нитяга, И. М. Повышение эффективности выявления L. monocytogenes и энтерогеморрагиче-ских E. coli в мясе и мясных продуктах : дисс. ... канд. биол. наук [Текст] / И. М. Нитяга. - Москва, 2004. - 127 с.
4. Плитов, И. С. Этиологическая структура саль-монеллеза и эшерихиоза птиц : автореферат дисс. . канд. вет. наук [Текст] / И. С. Плитов. - Москва, 2012. - 25 с.
5. Тулякова, Т. В. Безопасность продовольственного сырья - важнейшая составляющая безопасности пищевых продуктов [Текст] / Т. В. Тулякова, Н. А. Фурсова, Е. И. Шибанов // Пищевая промышленность. - 2013. - № 5. - С. 33.
6. Чугунова, Е. О. Сравнительный анализ сред для неселективного обогащения сальмонелл [Текст] /
Е. О. Чугунова, Н. А. Татарникова, О. Г. Мауль // Вестник ветеринарии. - 2015. - № 75. - С. 51-54.
7. Яремчук, П. В. Некоторые вопросы сдачи-приемки живого скота [Текст] / П. В. Яремчук // Мясные технологии. - 2010. - № 2 (86). - С. 34 - 38.
8. Burnett, S. L. Survival of Salmonella in peanut butter and peanut butter spread [Текст] / S. L. Burnett [et al.] // J. Appl. Microbiol. - 2000. - Vol. 89 (3). -P. 472-477.
9. Doyle, M. P. Food Microbiology. Fundamentals and Frontiers [Текст] / M. P. Doyle, L. R. Beuchat // Washington: ASM Press, 1997. - 1038 p.
10. Olsen, S. J. Multidrug-resistant Salmonella Typhimurium infection from milk contaminated after pasteurization [Текст] / S. J. Olsen [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2004. - Vol. 10. - P. 932-935.
Патологоанатомическая диагностика болезней собак и кошек
Авторы: Кудряшов А. А., Балабанова В. И.
Формат: 170 х 250 мм, твёрдый переплет, 328 с. с илл.
Описание: В книге представлены рекомендации по проведению и протоколированию вскрытия мелких домашних животных и в частности собак и кошек, а также материалы по патологоанатомической и дифференциальной диагностике большинства инфекционных и наиболее важных инвазионных и незаразных болезней.Из незаразных болезней разобраны те, которые наиболее часто приводят к смерти и в диагностике которых определяющее значение имеют результаты вскрытия.
Впервые представлены данные по патологоанатомиче-
А. А. Кудряшов, В. И. Балабанова
ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНЕЙ СОБАК И КОШЕК
скому описанию отравлений собак ИЗОНИАЗИДОМ, ЦИАНИДАМИ И КРЫСИНЫМИ ЯДАМИ, а также представлена информация по патогенезу данных отравлений.
Текст иллюстрирован авторскими снимками органов с патологоанатомическими изменениями при ряде болезней.
В книгу включены снимки препаратов и рисунков музея кафедры патологической анатомии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.
Книга предназначена для ветеринарных специалистов и студентов ветеринарных факультетов вузов.
Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности «Ветеринария».
Заказ книги: т. 8 (812) 232-88-61, Е-mail: [email protected] ; [email protected]; через сайт http://invetbio.spb.ru/Kudryashov-2016.htm Код заказа П10
