CC BY
56
среде 0,5%-ный ГЛА на основе раствора Хэнкса с 10-тью% сыворотки крови бычков. При культивировании вируса ИРТ было выявлено снижение инфекционной активности на 1 lg тцд50/мл в опыте по сравнению с контролем.
WAY OF OPTIMIZATION OF STRUCTURE AND PROPERTIES OF THE
KULTURALNY ENVIRONMENT FOR A REPRODUCTION OF VIRUSES
Khaziev L.R., Glagoleva I.S., Plotnikova E.M., Gurianov N.I., Khamzina E.Y.,
Kirillova J.M.
Summary
The opportunity of virus reproduction on LEK cell culture grown on 0,5%-lactalbumin hydrolysate media based on Hanks’ solution and 10%-bovine sera was determined. At acute rhinotracheitis virus cultivation the virus infectivity was determined to reduce for 1 lg TCD 50/m comparing to controls.
УДК 619:616.98:578.824.11 (470.26)
ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
ЭПИЗООТИЧЕСКИХ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ КАЛИНИНГРАДСКОЙ
ОБЛАСТИ
Хисматуллина Н.А. - д.б.н., зав. лабораторией; Петрова Т.П. - аспирант; *Кадочников В.Е.; **Сабирова В.В. - к.б.н., н.с.; **Гафарова А.З. - к.в.н., с.н.с.
ФГБОУ «ФЦТРББ-ВИНИВИ», E-mail: vnivi@ mail.ru * Служба ветеринарии и государственной ветеринарной инспекции Калининградской
области **ФГБУ «ФЦТРББ-ВИНИВИ»
Ключевые слова: бешенство, эпизоотические изоляты, вакцинные штаммы вируса бешенства, иммунобиологические свойства.
Key words: rabies, epizootic isolations, rabies vaccine strains,
immunobiological properties.
Бешенство остается постоянной угрозой для человечества во многих странах мира. Калининградская область Российской Федерации также неблагополучна по заболеваемости бешенством. Так, только за 10 мес. 2011 г. в Калининградской области зарегистрировано 20 случаев лабораторно подтвержденного бешенства в 9 районах и 2-х городах среди диких животных - 13, кошек - 4 и собак -2. Удельная заболеваемость диких животных составила 65,0%, кошек - 20,2% и собак - 15,0%.
Главным источником и распространителем бешенства в Калининградской области является лисица, на долю которой среди заболевших диких животных приходится 84,6%. Бешенство отмечено в Зеленоградском (4), Гусевском (4), Полесском (3), Озерском (2) и по одному случаю - в Краснознаменском, Правдинском, Славском, Черняховском, Нестеровском районах области и в городах - Калининграде и Балтийске.
При планировании профилактических мероприятий необходимо учитывать биологические свойства штаммов возбудителя бешенства, циркулирующих в регионе [2,3,6,7].
Цель исследований - выделение и изучение антигенных и патогенных свойств изолятов вируса бешенства, циркулирующих на территории Калининградской области.
Материалы и методы. В опытах использовали вакцинные штаммы «Овечий» ГНКИ, «Щелково-51» и стандартный - СУБ вируса бешенства. Исследовали 30 проб патологического материала от различных видов животных, поступивших с подозрением на бешенство из неблагополучных районов Калининградской области, а также 300 проб от лисиц и енотовидных собак, полученных в период отстрела на территории проведения вакцинации. Выделение возбудителя бешенства проводили биопробой на белых мышах согласно ГОСТу 26075 - 84 [1] и в культуре клеток невриномы Гассерова узла крысы (НГУК-1) - согласно
Методическим рекомендациям по лабораторной диагностике бешенства, утвержденным ДВ МСХ и П РФ 14.05.97 г. [8], обнаружение и идентификацию антигена рабического вируса - методами иммуноферментного анализа (ИФА) и иммунофлуоресценции (ИФ), а также реакцией нейтрализации (РН) с применением диагностических препаратов, разработанных в ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», г. Казань [4,5]. В качестве специфических антител применяли антирабический гамма-глобулин, полученный из сыворотки крови овец, иммунизированных вакцинным штаммом «Овечий» ГНКИ вируса бешенства с индексом нейтрализации, равным 2 и более.
Результаты и обсуждение. Из 330 проб патматериала положительный диагноз поставлен в 9 случаях (Таблица).
Из данных таблицы следует полное совпадение результатов ИФА и ИФ с биопробой на белых мышах и в культуре клеток НГУК-1. При этом титры специфического антигена уличного вируса бешенства в зависимости от содержания его в патматериале в ИФА варьировали в пределах от 1:20 до 1:160 при Ксп=2,1 и более. Изучаемые изоляты вируса бешенства выделялись в культуре клеток НГУК-1 с последующим обнаружением рабического антигена в реакции ИФ и ИФА через 72-96 ч после заражения без проявления цитопатического действия. При сравнительном исследовании 9 проб от животных, доставленных из различных неблагополучных по заболеваемости бешенством районов
Калининградской области, установлено полное совпадение результатов биопробы на белых мышах и в культуре клеток НГУК-1. Антиген вируса бешенства выявлялся в цитоплазме клеток НГУК-1 в виде ярких гранул различной формы и величины - от едва заметных до имеющих 15-20 мкм в диаметре. Иногда отмечалось небольшое количество мелких желтозеленых частиц (размером до 0,5 мкм) округлой и овальной формы. В контроле, где клетки НГУК-1 инкубировали с мозговой взвесью от интактных животных при окрашивании их флуоресцирующим антирабическим глобулином, специфических гранул не обнаруживали.
Результаты исследования патологического материала от различных видов животных лабораторными методами обнаружения вируса бешенства
Источник выделения вируса Коли- чество проб Количество положительных проб в исследованиях
ИФ ИФА биопроба, продолжительность инкубационного периода, сут. Заражение культуры клеток НГУК-1
Крупный рогатый скот 2 - - - -
Лисицы 188 6 6 6 11...23 6
Енотовидные собаки 22 - - - -
Барсук 1 - - - -
Белка 1 - - - -
Собаки 12 3 3 1> 2 3 1> 3
Кошки 4 - - - -
Контроль 10%-ная суспензия мозга интактных животных 330
Контроль 10%-ная суспензия мозга, зараженных вирусом бешенства, штамм «Овечий» ГНКИ 330 330 330 330 330
Примечание: «-» - отрицательный результат.
На следующем этапе экспериментов была установлена патогенность изучаемых изолятов для лабораторных животных - белых мышей, морских свинок и кроликов. Специфичность клинических проявлений бешенства подтверждена методами ИФА и ИФ.
Исследуемые изоляты вируса бешенства вызывали заболевания белых мышей с летальным исходом как при интрацеребральном, так и при подкожном способах заражения. Продолжительность видимых проявлений болезни (взъерошенность шерсти, горбатость спины, тремор при поднятии на воздух пинцетом за кончик хвоста, нарушение координации движений задних конечностей, паралич), обычно составляла менее суток и в редких случаях - 2-3 суток.
В последующих экспериментах было установлено, что изоляты вируса бешенства, выделенные из неблагополучных по данному заболеванию районов Калининградской области имеют ярко выраженные преципитирующие и комплементфиксирующие свойства с активностью в реакции диффузионной преципитации и длительного связывания комплемента 1:2 - 1:8. Изучаемые изоляты вируса бешенства
нейтрализовались сыворотками, полученными на вакцинные штаммы «Щелково-51» и «Овечий» ГНКИ вируса бешенства, что свидетельствует об антигеном соответствии эпизоотических изолятов вируса бешенства, циркулирующих на территории Калининградской области, вакцинным штаммам и это имеет важное значение для профилактики и диагностики данного заболевания.
Выводы. 1. Эпизоотические изоляты вируса бешенства не оказывали цитопатического действия и выделялись в культуре клеток НГУК-1 с последующим анализом по методу ИФ, а также обладали ярко выраженными преципитирующими и комплементсвязывающими свойствами. 2. Установлено антигенное соответствие уличного
рабического вируса вакцинным штаммам «Щелково-51» и «Овечий» ГНКИ вируса бешенства.
ЛИТЕРАТУРА: 1. ГОСТ 26075-84 (СТ СЭВ 3452-8). Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики бешенства. Государственный стандарт Союза ССР.-М.,-1984.- 9 с. 2. Груздев, К.Н. Бешенство животных / К.Н. Груздев, В.В. Недосеков - М.: «АКВАРИУМ ЛТД», 2001.- 304 с. З.Селимов, М.А.Современные достижения в области рабиологии: обзорная информация / М.А.Селимов //- М.: ВНИИМИ,1987.-Вып.4.-С.35-40. 4. 9388-025-00492374-2007. Технические условия к «Набору препаратов для лабораторной диагностики бешенства методом иммуноферментного анализа (ИФА)», утв. Россельхознадзором 3.03.2008г. / Н.А.Хисматуллина, Р.Х., Юсупов, А.Н. Чернов. 5. 9388-027-004923742007 Технические условия к «Флуоресцирующему антирабическому глобулину», утв. Россельхознадзором 3.03.2008 г. / Н.А.Хисматуллина, Р.Х., Юсупов, А.Н. Чернов. 6. Хисматуллина, Н.А. Идентификация и изучение биологических свойств эпизоотических изолятов вируса бешенства / Н.А. Хисматуллина, М.М.Каримов, Т.А. Савицкая, А.Н.Чернов, Р.Х.Юсупов, А.З. Равилов //Учёные записки КГАВМ.-2004.-Т.178.- С.156-162. 7.Хисматуллина, Н.А. Изучение биологических и
молекулярно-генетических свойств эпизоотических изолятов вируса бешенства, циркулирующих на территории Татарстана / Н.А. Хисматуллина, Т.Х. Фаизов, Н.И. Ермакова, А.Н. Чернов, К.В. Усольцев, Н.М.Александрова //Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность.- Казань.-2010.- С. 497- 499. 8.Хисматуллина, Н.А. Методические указания по лабораторной диагностики бешенства, утв. ДВ МСХ и П РФ 14.05.97г./ Н.А.Хисматуллина, Р.Х. Юсупов, С.Р.Янбарисова, А.Н Чернов, Ш.А. Тятигачев, М. А. Селимов, А.Г. Татаров, В.Я. Кармышева, Л.И. Кондакова.
ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЭПИЗООТИЧЕСКИХ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ
КАЛИНИНГРАДСКОЙ ОБЛАСТИ
Хисматуллина Н.А., Петрова Т.П., Кадочников В.Е.,
Сабирова В.В., Гафарова А.З.
Резюме
Эпизоотические изоляты вируса бешенства не оказывали цитопатического действия и выделялись в культуре клеток НГУК-1 с последующим анализом по методу ИФ, а также обладали ярко выраженными преципитирующими и комплементсвязывающими свойствами. Установлено антигенное соответствие уличного рабического вируса вакцинным штаммам вируса бешенства.
ISOLATION AND STUDY OF BIOLOGICAL PROPERTIES OF EPIZOOTIC RABIES VIRUS ISOLATES CIRCULATING IN KALININGRAD REGION
Khismatullina N.A., Petrova T.P., ^dochnikov V.E.,
Sabirova V.V., Gafarova A.Z.
Summary
Epizootic isolates did not have citopatic effect and were isolated in of rat Ganglion Gasser nodes neurinoma cell culture with the subsequent ELISA analysis, and also had strongly expressed precipitation and complement fixation properties. The antigenic relationship between street rabies virus and rabies vaccine strains was established.
