CC BY
254
УДК 547.548
ВЫДЕЛЕНИЕ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ И ЕЕ МОНОАММОНИЙНОЙ СОЛИ ИЗ КОРНЕЙ И КОРНЕВИЩ СОЛОДКИ КОРЖИНСКОГО (GLYCYRRHIZA KORSHINSKYI GRIG)
О. В. Столярова 1, Г. Ф. Фаррахова 2, Л. А. Балтина (мл.) 1г3, Т. М. Габбасов 1,
Р. М. Баширова 2, Р. М. Кондратенко 3, Л. А. Балтина 1,э*
1 Институт органической химии Уфимского научного центра РАН Россия, Республика Башкортостан, 450054 г. Уфа, проспект Октября, 71.
Тел./факс: +7 (347)235 60 66.
E-mail: [email protected] 2 Башкирский государственн ый университет Россия, Республика Башкортостан, 450074 г. Уфа, ул. Фрунзе, 32.
Тел./факс: +7 (34 7) 273 6 7 78.
3 Башкирский государственный медицинский университет Россия, Республика Башкортостан, 450000 г. Уфа, ул. Ленина, 3.
Тел.: +7 (34 7) 273 61 71.
Разработан способ выделения глицирризиновой кислоты (ГК) и ее моноаммонийной соли (глицирама) из корней и корневищ солодки Коржинского (Glycyrrhiza Korshinskyi Grig), собранной в Республике Башкортостан. Способ включает стадии экстракции корней 0.5—1.0% раствором NH4OH, осаждение суммы кислот концентрированной H2SO4 с последующей реэкстракцией 1% раствором H2SO4 в ацетоне, высаживание триаамонийной соли ГК 25% раствором NH4OH и перевод ее в моноаммонийную соль (глицирам) путем кристаллизации из ледяной СН^ООН. Способ позволяет получать образцы глицирама с чистотой 85—88% по данным ВЭЖХ. Обработка очищенного глицирама 1 % раствором HSO4 дает ГК с чистотой 85—88%. Содержание ГК в исследованных образцах корней солодки составляет 2.5—4.0 %.
Ключевые слова: солодка Коржинского, глицирризиновая кислота, глицирам.
Солодка (с.) Коржинского (Glycyrrhiza Korshinskyi Grig) - ценное лекарственное растение семейства бобовых (Leguminosae), относящееся к секции настоящих солодок Glycyrrhiza Boiss. С. Коржинского относится к редким видам солодок [1]. Основная часть ареала с. Коржинского находится в Казахстане, на территории Российской Федерации с. Коржинского образует промысловые заросли, преимущественно, в междуречье рек Урал-Волга, встречается в Саратовской, Самарской, Оренбургской и Челябинской областях: в Республике Башкортостан произрастает в ковыльных степях, на солонцеватых и солончаковых лугах, в поймах рек Зауралья [2-6]. В последние годы наметилась тенденция к расширению ее ареала.
Л. В. Аверьяновым солодка Коржинского обнаружена в Ленинградской области, более чем на 1400 км к северо-западу от мест естественного обитания вида, что свидетельствует о возможности ее культивирования в более северных областях [7].
Солодка Коржинского включена в Государственную Фармакопею IX [8] в качестве дополнительного источника глицирризиновой кислоты (ГК) (1), которая является основным биоактивным компонентом корней растения и обладает широким спектром фармакологической активности (противовирусной, противовоспалительной, противоязвенной, иммуно-тропной, антиаллергической, антидотной и др.) [9, 10]. ГК представляет интерес для медицины в качестве основы для создания новых анти-ВИЧ агентов,
средств для лечения хронических вирусных гепатитов В и С и других социально опасных вирусных инфекций [9-15]. Моноаммонийная соль ГК (3) применяется в медицине в качестве противовоспалительного и противоаллергического средства (субстанция препарата глицирам) и используется в ряде стран в качестве подсластителя [16, 17].
Цель данной работы состояла в разработке способа выделения ГК (1) и ее моноаммонийной соли (3) из корней солодки Коржинского, собранной на территории Хайбуллинского района Республики Башкортостан.
COOR
R'°^O O
r1o2c ~ \
"°£^° OH
1- 3
R=R1=H (1); R = R1 = NH4+ (2); R = H, R1 = H, NH4+ (3)
Выделение ГК и ее соли (3) из размельченных корней проводили по следующей схеме:
* автор, ответственный за переписку.
!88Ы 1998-4812__________Вестник Башкирского университета. 2008. Т. 13. №2
257
Измельченные корни и корневища солодки экстрагировали 0.5—1.0% водным раствором КИ4ОЫ при 20-22 °С, осаждали сумму кислот концентрированной Ы28О4, осадок отфильтровывали, промывали водой, сушили и полученный сухой экстракт (сумма кислот) с содержанием ГК 41.5-49.2% реэкстрагировали 1% раствором Ы28О4 в ацетоне и чистым ацетоном. Ацетоновые вытяжки объединяли и высаживали триаммонийную соль ГК (3№Ы4+ - соль) (2) 25% раствором ЫЫ4ОЫ (pH 7-8). Осадок соли (2) отфильтровывали, сушили и кристаллизовали из ледяной уксусной кислоты (ЛУК) при 90-95 °С, получая техническую моно-аммонийную соль ГК (1КЫ4+ - соль) (3) с содержанием ГК 68.9-76.9, которую перекристаллизовыва-ли из водного МеОН или БЮЫ. Выходы глицирама в зависимости от условий экстракции приведены в табл. 1.
Как видно из данных табл. 1, максимальный выход экстракта (суммы кислот) из 100 г сухих корней составляет 8.2-8.6 г, выход технической 1КЫ4+ - соли (2) - 2.6-2.8 г. После однократной перекристаллизации из 80% МеОН или 80-85% БЮЫ получали образцы глицирама с содержанием основного вещества 85.1-88.2 (±0.8)% по данным
высокоэффективной жидкостной хроматографии (колонка ^-Бопёарак С18, подвижная фаза: МеОН-Н2О-СН3СООН, 60:35:5 (у%); детектор -УФ (X 254 нм).
Общий выход очищенного глицирама в пересчете на сухое сырье составил 31.2-41.3%. Экстракция 0.5% раствором МЫ4ОН и перекристаллизация из 80-85% БЮЫ позволяют получать более чистые образцы глицирама с содержанием ГК 87% и более, соответствующие требованиям ВФС 42-419-75 на субстанцию глицирама. Данные элементного анализа полученных образцов глицирама соответствовали расчетным данным.
При обработке очищенной моноаммонийной соли ГК (3) 1% водным раствором Ы28О4 (10 мин при 100 °С) получали ГК 85-88% чистоты по данным ВЭЖХ хроматографии. Таким образом, содержание ГК в исследованных образцах корней солодки Коржинского составляет 2.5-4.0%. Корни и корневища солодки Коржинского могут быть использованы в качестве растительного сырья для получения ГК и ее моноаммонийной соли по предлагаемой схеме. Учитывая то, что солодка Коржин-ского является самым северным источником ГК, целесообразно вводить данное растение в культуру.
Таблица 1
Условия опытов и выходы глицирама из корней солодки Коржинского (в пересчете на 100 г корней и корневищ)
№ Условия Выход сухого Выход Выход Выход Чистота УФ-спектрг,
п/п, шифр экстракции (содержание ГК, %) экстракта, г (% ГК) 3КЫ4+ - соли (II), г технической 1КЫ4+ - соли (III), г очищенной 1МЫ+ - соли, г по ВЭЖХ, % Лмакс, нм Ов е) Т.пл., °Сд
1% ЫЫ4ОЫ, 8.59 6.21 2.85 1.53а 85.1 256
(3.7) (42.6) (4.20)
1% ЫЫ4ОЫ, (4.0) 8.22 (49.1) 5.35 2.64 1.30б 85.2 256 (4.16)
0,5% ЫЫ4ОЫ, 8.25 5.60 2.67 1.25в 85.5 255
(4.0) (49.2) (4.08)
0,5% ЫЫ4ОЫ, (2.5) 6.09 (41.5) 4.38 2.33 1.02б 88.2 255 (4.05)
0,5% ЫЫ4ОЫ, 6.35 4.61 2.45 1.16в 87.6 253
(2.7) (42.2) (4.02)
224-227
222-225
222-225
226-228
228-230
1
2
3
4
5
а) Перекристаллизация из 80% МеОН; б) перекристаллизация из 85% БЮЫ; в) перекристаллизация из 80% БЮЫ; г) в 25% БЮЫ;
д) Лит. т. пл. [18]: 220-222 °С.
ЛИТЕРАТУРА
1. Красная книга РСФСР. Растения. М.: Госагропромиздат, 1988. -591 с.
2. Красная книга Башкирской АССР. Редкие растения и животные. Проблемы их охраны. Уфа: Башкирское книжное изд-во, 1984. -200 с.
3. Горчаковский П. Л., Шурова Е. А. Редкие и исчезающие растения Урала и Предуралья. М.: Наука, 1982. -208 с.
4. Михайлова А. В., Зарубин С. И. Солодка Коржинского (Glycyrrhiza Korshinskyi Grig.) - редкое растение Тюменской области. // Флора и растительность Сибири и Дальнего Востока: чтения памяти Л. М. Черепнина: Ч.1. Красноярск, 1996. С. 132.
5. Муртазина Ф. К., Баширова Р. М., Янтурин С. И. и др. Род солодка - Glycyrrhiza на Южном Урале. Уфа: РИО БашГУ, 2002. -104 с.
6. Абрамова Л. М., Баширова Р. М., Муртазина Ф. К. и др. // Растительные ресурсы. 2001. Т. 37. Вып. 2. С. 24-29.
7. Аверьянов Л. В. // Ботанический журнал. 1999. Т. 84. С. 138-139.
8. Государственная фармакопея СССР IX. Мин-во здравоохранения СССР. M.: Медицина, 1990. -390 с.
9. Толстиков Г. А., Балтина Л. А., Гранкина В. П., Кондратенко Р. М., Толстикова Т. Г. Солодка: биоразнообразие, химия, применение в медицине. Новосибирск: Академическое издательство «Гео», 2007. -311 с.
10. Толстиков Г. А., Балтина Л. А., Шульц Э. Э., Покровский А. Г. // Биоорганическая химия. 1997. Т. 32. С. 5-14.
11. Shibata S. // Journal Pharmaceutical Society of Japan. 2000. V.120. P. 849-862.
12. Sato H., Goto W., Yamamura J., Kurokawa M., Kageyama S., Takahara T., Watanabe A., Shiraki K. // Antiviral Research. 1996. V. 30. P. 171-177.
13. Arase Y., Ikeda K., Murashima N. et al. // Cancer. 1997. V. 79. P. 1494-1500.
14. Kumada Н. // Oncology. 2002. V. 62. P. 94-100.
15. Hoever G., Baltina L., Michaelis M. et al. // Journal Medical Chemistry. 2005. V. 48. P. 1256-1259.
16. Соколов С. Я., Замотаев И. П. Справочник по лекарственным растениям. М.: «Медицина», 1988. -272 c.
17. Kitagawa I. // Pure and Applied Chemistry. 2002. V. 74. P. 1189-1198.
18. Запесочная Г. Г., Звонкова Е. Н., Куркин В. А. и др. // Химия природных соединений. 1994. № 6. С. 772-780.
Поступила в редакцию 15.04.2008 г.
