CC BY
45
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ
УДК 543.544.5.068.7:615.214:547.743.1
Е.А. Булгакова
Аспирант кафедры токсикологической химии
Ю.Н. Карпенко
К.ф.н., доцент Пермская государственная фармацевтическая
академия
г. Пермь, Российская Федерация
ВЫБОР ОПТИМАЛЬНЫХ УСЛОВИЙ ИЗВЛЕЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ПИРРОЛИН-2-ОНА ИЗ МОЧИ
Аннотация
Работа посвящена выбору условий изолирования биологически активных соединений из группы 3-пирролин-2-она ВКВ-1и КОН-1 из мочи для целей изучения их фармакокинетики на этапе доклинических исследований. В рамках модельного эксперимента определены оптимальные условия жидкость-жидкостной экстракции, позволяющие извлекать более 90% исследуемых веществ.
Ключевые слова Ноотропы, жидкость-жидкостная экстракция, ВЭЖХ.
В последние годы ноотропные препараты привлекают к себе повышенное внимание. Это объясняется уникальностью их фармакологического спектра действия, большим разнообразием возможностей и перспектив их применения в различных областях медицины. [4, с. 20-27; 5, с. 49-50] По данным ВОЗ более 30% населения во всем мире принимает нейро- и психотропные средства. Поэтому актуальным является разработка и внедрение в практику новых отечественных эффективных и безопасных ноотропных препаратов. [3, с. 97-101]
В Пермской государственной фармацевтической академии синтезированы биологически активные соединения ВКВ-1 и КОН-1 (производные 3-гидрокси-3-пирролин-2-она), которые в настоящее время находятся на этапе доклинических испытаний в качестве потенциальных ноотропных средств (рис.1, 2) [6, с. 12-15; 7, с. 810].
Рисунок 1 - Структурная формула ВКВ-1 Рисунок 2 - Структурная формула КОН-1
Целью настоящей работы явилась разработка оптимальных условий извлечения соединений ВКВ-1и КОН-1 из мочи для дальнейшего изучения их экскреции из организма лабораторных животных в ходе доклинических фармакокинетических исследований.
Контроль эффективности извлечения веществ осуществляли методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе «Shimadzu LC Prominence» с диодноматричным детектированием.
В ходе проведенного эксперимента по выбору оптимальных органических растворителей для экстракции КОН-1 из его водных растворов [1, с. 38-40] установлено, что исследуемое вещество
максимально извлекается из кислых водных растворов смесью хлороформ-бутанол (97-100%) и хлороформом (93-96%).
ВКВ-1 наиболее эффективно экстрагируется из водных растворов при рН 2-3 смесью хлороформ-бутанол (97-99%), этилацетатом (94-97%) и хлороформом (88-90%). [2, с. 31-32]
Поэтому указанные экстрагенты были использованы при изучении экстракции исследуемых соединений из модельных смесей мочи.
Для разработки методики экстракции были приготовлены модельные смеси биожидкости (мочи) с концентрацией аналита (ВКВ-1 и КОН-1) 5 мкг/мл.
Методика: в пробирку типа Эппендорф помещали 1 мл модельной смеси, подкисляли кислотой хлористоводородной разведенной 10% до рН 3 по универсальному индикатору (50 мкл). Далее проводили двукратную экстракцию органическим растворителем порциями по 0,5 мл, используя пробирочный вортекс. Время каждой экстракции - 1 минута. Образовавшуюся эмульсию разрушали путем центрифугирования при 5000 об/мин в течение 5 мин. Органический слой переносили в выпарительную чашку, сухой остаток после удаления экстрагента в токе теплого воздуха растворяли в 1 мл метанола (КОН-1) или фосфатного буфера с рН 10 (ВКВ-1). Извлечения фильтровали через мембранные шприцевые нейлоновые фильтры с размером пор 0,45 мкм и исследовали методом ВЭЖХ. Идентификацию исследуемых соединений на хроматограмме проводили путем сравнения времен удерживания и УФ-спектров с аналогичными параметрами стандартных растворов. Количественное определение проводили по площади пика, используя метод внешнего стандарта. Полученные результаты представлены в таблицах 1, 2.
Таблица 1
Результаты экстракции ВКВ-1 из модельных смесей мочи
Экстрагент Степень экстракции, % Метрологические характеристики (П=6; f=5)
хлороформ 92,80; 93,80; 92,10; 93,91; 91,66; 94,98 Xср. = 93,21; S = 1,2469; ДХср. = 1,31; 8ср= ±1,40%
смесь хлороформ -н-бутанол (9:1) 100,31; 96,62; 101,5; 101,31; 101,01; 97,97 Xср. = 99,79; S = 2,0177; ДХср. = 2,12; 8ср = ± 2,12%
этилацетат 88,60; 90,02; 95,31; 94,63; 95,00; 92,39 Xср. = 92,66; S = 2,8251; ДХср. = 2,96; 8ср.=±3,20%
Таблица 2 Результаты экстракции КОН-1 из модельных смесей мочи
Экстрагент Степень экстракции, % Метрологические характеристики (П=6; f=5)
хлороформ 101,5; 99,99; 97,68; 101,12; 94,87; 97,09 Xср. = 98,71; S = 2,5947; ДХср. = 2,72; 8ср = ±2,76%
смесь хлороформ -н-бутанол (9:1) 87,58; 101,35; 95,38; 89,94; 93,18; 92,16 Xср. = 93,27; S = 4,7842; ДХср. = 5,02; 8ср = ± 5,38%
смесь хлороформ -н-бутанол (1:1) 90,76; 91,63; 93,12; 91,55; 92,27; 91,40 Xср. = 91,79; S = 0,8119; ДХср. = 0,85; 8ср = ± 0,93%
В ходе проведенных исследований установлено, что наиболее эффективным экстрагентом для ВКВ-1является смесь хлороформ - н-бутанол в соотношении 9:1, которая обеспечивает более 99% извлечения ВКВ-1 из модельных смесей мочи, для КОН-1 - хлороформ, который извлекает более 98% вещества. Список использованной литературы:
1. Булгакова Е.А. Экстракция биологически активного соединения КОН-1 из водных растворов [Текст] / Е.А. Булгакова, Ю.Н. Карпенко, Е.Ю. Тумилович // Мат. 5-ой Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» - Курск, 2013, С. 38-40.
2. Булгакова Е.А. Изучение влияния рН среды и природы органического растворителя на экстракцию ВКВ-1 из водных растворов [Текст] / Е.А. Булгакова, Ю.Н. Карпенко, Е.Ю. Тумилович // Современные тенденции
и перспективы развития фармацевтического образования и науки в России и за рубежом: материалы научно-практической конференции с международным участием. - Пермь, 2013. - С. 31-32.
3. Бурчинский С.Г. Новые подходы к ноотропной фармакотерапии и фармакопрофилактике [Текст] // Украшський вКсник психоневрологЕ. - 2008. - Том 16, вып. 2. - С. 97-101.
4. Евтушенко И.С. Ноотропы и нейропротекторы в современной клинической нейрофармакологии [Текст] // Международный неврологический журнал. - 2013. - № 3(37). - 20-27.
5. Мамчур В.И. Фиксированные комбинации церебропротекторов: мнение фармаколога [Текст] / В.И. Мамчур, С.Н. Дронов, В.И. Жилюк // Здоров'я Украши. - 2007. - № 6/1. - С. 49-50.
6. Разработка методов оценки качества субстанции нового биологически активного соединении КОН-1 [Текст] / О Н. Кляшева [и др.] // Фармация - 2012. - №5. - с. 8-10.
7. Разработка методов контроля качества нового биологически активного производного 3-пирролин-2-она [Текст] / К.В. Ван [и др.] // Фармация. - 2011. - Т. 60. - № 6. - с. 12-15.
© Е.А. Булгакова, Ю.Н. Карпенко, 2015
