CC BY
21
о 'Fi ® Оригинальные исследования
/Original Researches/
International journal of endocrinology
УДК 616.33/.36:616.72-007.24]-085-092
ЧИМПОЙ К.А.1, ПАШКОВСЬКА Н.В.2, ПАВЛЮКОВИЧ Н.Д.3, КОРОТАШ 1.Ф.4, РИБАК О.Я.4, М1СЕЧКО А.1.4 1Кафедра внутршньо! медицини, ВДНЗ Укра!ни «Буковинський державний медичний унверситет», м. Чернiвцi, Укра!на
2Кафедра 1^мчно! 'шунолоп!, алерголоп! та ендокринолог! ВДНЗ Укра!ни «Буковинський державний медичний унверситет», м. Чернiвцi, Укра!на
3Кафедра внутршньо! медицини, клiнiчно! фармакологи та професйниххвороб, ВДНЗ Украни
«Буковинський державний медичний унверситет», м. ЧернвцЬ Укра!на
4ВДНЗ Укра!ни «Буковинський державний медичний ун'терситет», м. ЧернвцЬ Укра!на
ВПЛИВ ДИСТРИБУЦП ПОЛiМОРФiЗМУ ГЕНА ДЕЙОДИНАЗИ 1-го ТИПУ НА ПОКАЗНИКИ ТИРЕО1ДНОГО ГОМЕОСТАЗУ ХВОРИХ НА ХРОЫЧЫ ГЕПАТИТИ ТА ЦИРОЗ ПЕЧШКИ
НЕВiРУСНОÍ ЕТЮЛОГП
Резюме. Вивчено особливост тиреодного гомеостазуухворих на хро^чн дифузн захворювання печiн-ки залежно вд А/С полiморфiзму гена DIO1. Встановлено залежнсть показниюв тирео!дного гомеостазу у хворих на хронiчнi дифузнi захворювання печiнки вд дистрибуци А/С полiморфiзму гена DIO1, а також вДсутн'1сть зв'язку титру антитл до тканини щитопо^бно!залози з даним полiморфiзмом. Ключовi слова: хронiчнi дифузнi захворювання печiнки, полiморфiзм, тиреоДний гомеостаз, антитла до тканини щитопо^бно! залози.
Вступ
Генетичний полiморфiзм е основою фенотипово! рiзницi особистостей ^ зокрема, може зумовлювати спадкову схильнють до рiзних захворювань [5, 9]. При вивченш цього питання особлива увага придтяеться генам, що кодують фактори, залучеш до виникнення рiзноl патологи [4, 6].
Особливе значення останшм часом придтяеться полiморфiзмам гешв селеновмюних протешв, з якими пов'язують схильнють до розвитку патолопчних сташв внаслток порушення активност тих чи шших фер-ментних систем [6, 9].
Важливу роль у забезпеченш нормального функцю-нування щитоподiбноl залози вщграють селеновмiснi ензими, у першу чергу дейодинази [7, 8]. Загальновь домо, що позатирео!дне монодейодування тироксину е основним джерелом трийодтиронiну в органiзмi й каталiзуеться тироксин-5'-дейодиназою. Цей процес забезпечуе майже 80 % утворення бюлопчно бiльш активного (у 8 разiв порiвняно з тироксином) трийодти-ронiну, що утворюеться за добу [1, 2].
Мета дослщження — дослтити особливостi показ-ниыв тирео!дного гомеостазу у хворих на хрошчш ди-фузнi захворювання печшки (ХДЗП) залежно вiд А/С полiморфiзму гена DЮ1.
Матерiали та методи
Обстежено 50 хворих на ХДЗП (хрошчш гепати-ти та цирози печшки) вшом вщ 34 до 72 роив. Дiагноз ХДЗП встановлювали на пiдставi анамнезу, загально-прийнятого комплексу клшчно-лабораторних та ш-струментальних методiв дослiдження, УЗД органiв че-ревно! порожнини. Хворi на хрошчний гепатит та цироз вiрусноl етюлоги, хворобу Втьсона — Коновалова, при-роджену недостатнiсть а1-антитрипсину (a1-iнгiбiтору протешаз), iдiопатичний (генетичний) гемохроматоз, автоiмунний гепатит у дослщження не включалися.
Алелi полiморфних дiлянок A/C у геш DIO1 ви-вчали шляхом видтення геномно! ДНК з лейкоцитiв периферично! кровi з подальшою амплiфiкацieю поль
Адреса для листування з авторами: Чимпой Кристина АнIдрiiвна E-mail: chimpoik@mail.ru Пашковська Наташя Вiкторiвна E-mail: natpash@mail.ru Павлюкович Наталя Дмитршна E-mail: natasha.pavlyukovich@gmail.com.
© Чимпой К.А., Пашковська Н.В., Павлюкович Н.Д.,
Короташ 1.Ф., Рибак О.Я., Мiсечко А.1., 2016 © «Мгжнародний ендокринолопчний журнал», 2016 © Заславський О.Ю., 2016
Таблиця 1. Послдовнсть ол'/гонуклеотид'/в у праймерах, використаних для пол'меразно)'ланцюгово/
реакцп при щентифкацП' пол'шорф'зму A/C гена DIO1
Назва гена Локалiзацiя гена на xpoMocoMi Праймер Послiдовнiсть олiгонуклеотидiв у праймерах
DIO1 1 p33-p32 Прямий 5'-GAACTTGATGTGAAGGCTGGA-3'
Зворотний 5'-TAACCTCAGCTGGGAGTTGTTT-3'
морфно! дтянки за допомогою полiмеразноí ланцю-гово! реакци (ПЛР) на програмованому амплiфiкаторi Amply-4L (Biocom, Рошя) з iндивiдуальною темпера-турною програмою для праймерiв гена.
Послiдовнiсть олiгонуклеотидiв у праймерах та !х розрахунковi позици на хромосомах наведенi в табл. 1.
Екстракцш ДНК проводили за допомогою реак-тивiв «ДНК-сорб-В» варiант 100 (ФГУН ЦНИИЭ, Рошя) згiдно з iнструкцieю. Очищену ДНК збериали при температурi —20 ± 2 °С.
Проби для ПЛР готували за допомогою набору «АмплиСенс-200-1» (ФГУН ЦНИИЭ, Росiя).
Для дискримiнацií алелей гена DIO1 використову-вали ендонуклеазу рестрикци Bcl I фiрми «СибЭнзим» (Рошя).
Залежно вiд дистрибуци А/С полiморфiзму гена DIO1 пацieнтiв розподiлено на три групи: носи АА-генотипу — 17 пащентав, АС-генотипу — 24 обстежеш та СС-генотипу — 9 хворих.
Особливост тирео!дного гомеостазу вивчали за визначенням вмiсту в сироватщ кровi вiльного тироксину (вТ4), вiльного трийодтиронiну (вТ3) та тире-отропного гормону (ТТГ) iз використанням реактивiв «ИммуноФА-ТТГ», «ИФА-СвТ3» та «ИФА-СвТ4-1» (ЗАО «НВО Иммунотех», Рошя), а також обчисленням коефщента периферично! конверси вiльних тирео!д-них гормошв (вТ3/вТ4).
Для оцiнки функционального стану системи «гшо-фiз — щитоподiбна залоза» визначали коефiцieнти: вiльний Т3/втьний Т4, вiльний Т4/вiльний Т3, ТТГ/ втьний Т3, ТТГ/вiльний Т4, тирео!дний iндекс (Т1) [3]:
вльний Т. + вльний Т„
TI = -3-4--
ТТГ
(1)
Також визначали сумарний тирео!дний iндекс (СТ1), який вщображае периферичну активнiсть тире-о!дних гормошв [3]:
выьний Т. + выьний Т. СТ1 =-3 •100 +-^ • 100. (2)
2,38
90
Антитта до тиреоглобулiну (АТ-ТГ) та тиреощно! пероксидази (АТ-ТПО) визначали iмуноферментним методом за допомогою наборiв реагентав «ИФА-АТ-ТГ-1» та «ИммуноФА-Ат-ТПО» (ЗАО «НВО Иммунотех», Рошя) на аналiзаторi iмуноферментних реакцiй «Унiплан».
Отримаш результати обробленi за допомогою про-грами Biostat iз використанням парного критерш Стьюдента.
Результати
Характеристика показниюв тирео!дного гомеостазу у хворих на ХДЗП залежно вiд полiморфiзму А/С гена DIO1 наведена в табл. 2.
Як видно з наведених даних, рiвень ТТГ у сироватщ кровi хворих на ХДЗП не зазнавав вiрогiдних змш за-лежно вщ дистрибуци полiморфiзму гена DIO1.
Вiрогiдно вищий рiвень вТ3 встановлено в носив СС-генотипу на 46,6 % (p < 0,001) та 31,6 % (p < 0,01), шж у пащентав iз АА- та АС-генотипом вщповщно.
Вмiст у сироватщ кровi вТ4 у хворих iз гомозигот-ним носiйством А-алелi гена DIO1 на 31,3 % (p < 0,05) вiрогiдно перевищував вiдповiдний показник у пащен-пв iз СС-генотипом.
Показник вТ3/вТ4 також статистично значуще змь нювався залежно вiд полiморфiзму гена DIO1. У гру-пi хворих iз СС-генотипом вш у 1,5 раза перевищував його значення (p < 0,05) у пащенпв iз АА-генотипом та у 1,3 (p < 0,05) раза — носив АС-генотипу. Залежно вщ полiморфiзму гена DIO1 також змшювався показник вТ4/вТ3. Його значення у хворих iз АА-генотипом перевищувало вiдповiдний показник у гомозигот за С-алеллю у 1,6 раза (p < 0,05) та АС-гетерозигот — у 1,2 раза (p > 0,05).
Аналопчш закономiрностi встановленi й щодо по-казника ТТГ/вТ3.
Визначалося вiрогiдно вище у 2,0 i 1,3 раза вщповщ-но значення показниюв Т1 та СТ1 в груш хворих iз СС-генотипом щодо групи носив АА-генотипу.
Дослщженням титру АТ-ТГ встановлено вiрогiд-не зростання показника у хворих ушх груп порiвняно з контрольним значенням: у хворих iз СС-геноти-пом — на 19,0 % (р < 0,001), АС-генотипом та АА-ге-нотипом — вщповщно на 22,1 та 18,4 % (р < 0,001) без наявност вiрогiдноí мiжгруповоí рiзницi (табл. 2).
Обговорення
За носшства АА-генотипу спостериалося вiрогiдне зростання рiвня АТ-ТПО у 2,9 раза (р < 0,001) порiв-няно з показником контрольно! групи, у АС-гетерози-гот — у 2,8 раза (р < 0,001) та у СС-гомозигот — у 2,5 раза (р < 0,001).
Отже, можна зробити висновок, що дистрибущя полiморфiзму гена DIO1 у хворих на ХДЗП впливае на тирео!дний гомеостаз оргашзму.
Проведет дослщження вказують на зв'язок дистрибуци полiморфiзму гена DIO1 з рiвнем вiльних тирео!д-них гормошв, а також коефщентами !х сшввщношен-ня у хворих на ХДЗП. Гомозиготне носшство С-алелi асоцшеться зi зростанням показника вТ3/вТ4 та рiвня вТ3, а також зниженням вТ4, у той час як носшство АА-
генотипу пов'язано зi зменшенням значення вТ3/вТ4, рiвня вТ3 та зростанням вмюту вТ4.
Висновки
1. Носiйство АА-генотипу гена DЮ1 у хворих на ХДЗП асоцшеться зi зменшенням рiвня вiльного трийодтиронiну в сироватцi кров^ показника вщ-ношення вiльного трийодтироншу до вiльного тироксину та зростанням вмюту вшьного тироксину.
2. А/С полiморфiзм гена DЮ1 не впливае на ти-
три антитт до тканини щитоподiбноl залози у хворих на ХДЗП.
Перспективи подальших дослщжень. Отриманi ре-зультати вказують на необхiднiсть створення диферен-цшованого пiдходу щодо дiагностики та л^вання по-рушень тирео1дного гомеостазу за хрошчних дифузних захворювань печiнки залежно вiд експресй' А/С поль морфiзму гена DIO1.
Конфл1кт iHTepeciB. Автори заявляють про вщсут-нiсть конфлшту iнтересiв.
Таблиця 2. Показники тиреодного гомеостазу у хворих на хрон1чн1 дифузн захворювання печ1нки залежно вД пол '1морф '1зму А/С гена DIO1 (M ± m)
Показник Контрольна група, n = 20 Генотипи гена DIO1, n = 50
АА, n = 17 АС,n = 24 СС, n = 9
Тиреотропний гормон, мМО/л 1,780 ± 0,162 2,730 ± 0,177 p1 < 0,001 2,570 ± 0,292 p1 < 0,05 p2 > 0,05 2,310 ± 0,102 p2 < 0,001 fD2 > 0,05 p3 > 0,05
Втьний Т4, пмоль/л 15,880 ± 0,894 20,210 ± 1,389 p1 < 0,05 19,260 ± 1,247 p1 < 0,05 p1 > 0,05 15,390 ± 1,546 p2 > 0,05 p2 < 0,05 p,2 > 0,05
Втьний Т3, пмоль/л 5,470 ± 0,326 4,460 ± 0,364 p1 < 0,05 4,970 ± 0,280 p2 > 0,05 p2 > 0,05 6,5-40 ± 0,144 p2 < 0,05 p2< 0,001 p3 < 0,01
Втьний Т3/втьний Т4 0,370±0,029 0,250 ± 0,021 p1 < 0,01 0,290 ± 0,022 p2 < 0,05 p2 > 0,05 0,3^0 ± 0,027 p2 > 0,05 p2 < 0,05 p2 < 0,05
Втьний Т4/втьний Т3 3,190 ± 0,337 5,140 ± 0,467 p1 < 0,05 4,220 ± 0,365 p2 < 0,05 p21> 0,001 3,210 ± 0,101 p2 > 0,05 p2 < 0,05 p^ > 0,05
Тиреотропний гормон/втьний Т3 0,35 ± 0,04 0,720 ± 0,098 p1 < 0,001 0,590 ± 0,083 p2 < 0,05 p2 > 0,05 0,4230 ± 0,049 p2 > 0,05 p2 < 0,05 p,j > 0,05
Тиреотропний гормон/втьний Т4 0,120 ± 0,011 0,150 ± 0,02 p1 > 0,05 0,140 ± 0,018 p2 > 0,05 p2 > 0,05 0,120 ± 0,021 p2 > 0,05 p2 > 0,05 p2 > 0,05
Тирео'щний Ыдекс 13,780±1,301 9,820 ± 0,954 p1 < 0,05 13,210 ± 2,810 p2 > 0,05 p2 > 0,05 19,440 ± 2,233 p2 < 0,001 p2 < 0,001 p3 > 0,05
Сумарний тирео'щний iндекс 247,60 ± 13,61 209,80 ± 12,19 p1 < 0,05 230,10 ± 11,59 p2 > 0,05 p2 > 0,05 26i?,7±17,64 p2>0,05 p2<0,05 p3>0,05
Антитта до тиреоглобулiну, МО/мл 26,290 ± 2,446 57,080 ± 6,184 p1 < 0,001 53,010 ± 5,509 p2 < 0,001 p2 > 0,05 50,16)0 ± 6,186 p2 < 0,001 F32 > 0,05 p,2 > 0,05
Антитiла до тирео'щно!' пероксидази, МО/мл 11,940 ± 1,067 35,170 ± 2,831 р1 < 0,001 33,950 ± 4,586 р2 < 0,001 р2 > 0,05 29,640 ± 3,764 р2 < 0,001 р2 > 0,05 P2 > 0,05
Примтки: n — кльксть спостережень; p1 — в1рогщн1сть змН щодо контролю; p2 — в1рогщн1сть змН щодо групихворих i3 АА-генотипом; p3 — в1рогщн1сть змн щодо групихворих '¡з АС-генотипом.
Список лператури
1. Макар Р.Д. Функщональна автономiя щитоподiбноí залози (патогенез, дiагностика, лкування) / Р.Д. Макар // Мiжнародний ендокринологiчний журнал. — 2007. — Т. 2, № 8. — C. 27-34.
2. Олтник В.А. Хротчний лiмфоцитарний mupeoídum (mupeoídum Хашимото): сучасний стан проблеми (огляд л^ тератури i власт данi) / В.А. Олйник // Ендокринологiя. — 2006. — Т. 11, № 1. — C. 71-79.
3. Патология щитовидной железы у больных ревматоидным артритом / Б. Т. Турмухамбетова, А. С. Аметов, Л.К. Козлова [и др.]// Клиническая и экспериментальная ти-реоидология. — 2009. — № 3. — С. 63-68.
4. Полiморфiзм гена гемахроматозу у хворих на хротчний гепатит С/Л. Мороз, В. Дудник, О. Турський [та rn.]// Су-часна гастроентерологiя. — 2009. — № 2. — С. 26-28.
5. Bastaki M. Genotype-activity relationship for Mn-superoxide dismutase, glutathione peroxidase 1 and catalase in humans / M. Bastaki, K. Huen, P. Manzanillo [et al.] // Pharmacogenet Genomics. — 2006 — Vol. 16. — P. 279-286.
6. Chrissobolis S. Gluathione peroxidase-1 plays a major role in protecting against angiotensin II-induced vascular dysfunction / S. Chrissobolis, S.P. Didion, D.A. Kinzenbaw [et al.] // Hypertension. — 2008. — Vol. 51. — P. 872-877.
7. Panicker V. A Common Variation in Deiodinase 1 Gene DIO1 Is Associated with the Relative Levels of Free Thyroxine and Triiodothyronine / V. Panicker, C. Cluett, B. Shields [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 2008. — Vol. 93, № 8. — P. 30753081.
8. Panicker V. Heritability of serum TSH, free T4 and free T3 concentrations: a study of a large UK twin cohort / V. Panicker, S.G. Wilson, T.D. Spector [et al.] // Clin. Endocrinol. (Oxf). — 2008. — Vol. 68. — P. 652-659.
9. Wagner Andreas H. Upregulation of Glutathione Peroxidase Offsets Stretch-InducedProatherogenic Gene Expression in Human Endothelial Cells Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology / H. Wagner Andreas, O. Kautz,, K. Fricke [et al.] // ATVBAHA. — 2009 — Vol. 21. — P. 316-325.
OmpuMano 03.03.16 ■
Чимпой К.А.1, Пашковская Н.В.2, Павлюкович Н.Д.3, Короташ 1.Ф.4, Рыбак О.Я.4, Мисечко А.И.4
1Кафедра внутренней медицины, ВГУЗ Украины «Буковинский государственный медицинский университет», г. Черновцы, Украина
2Кафедра клинической иммунологии, аллергологии и эндокринологии, ВГУЗ Украины «Буковинский государственный медицинский университет», г. Черновцы, Украина
3Кафедра внутренней медицины, клинической фармакологии и профессиональных болезней, ВГУЗ Украины «Буковинский государственный медицинскиий университет», г. Черновцы, Украина 4ВГУЗ Украины «Буковинский государственный медицинский университет», г. Черновцы, Украина ВЛИЯНИЕ ДИСТРИБУЦИИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА ДЕЙОДИНАЗЫ 1-го ТИПА НА ПОКАЗАТЕЛИ ТИРЕОИДНОГО ГОМЕОСТАЗА У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ГЕПАТИТАМИ И ЦИРРОЗОМ ПЕЧЕНИ НЕВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ
Резюме. Изучены особенности тиреоидного гомеостаза титра антител к ткани щитовидной железы с данным полимору больных хроническими диффузными заболеваниями печени физмом в зависимости от А/С полиморфизма гена DIO1. Установлена
зависимость показателей тиреоидного гомеостаза у больных Ключевые сл°ва: ^отиге^ диффузные заболевания пе-
хроническими диффузными заболеваниями печени от дистри- чени, п°лим°рфизм, тиреоидньш гоме°стаз, мтатеда к ткани
буции А/С полиморфизма гена DЮ1, а также отсутствие связи щитовидной железы.
ChympoiK.A.1, PashkovskaN.V.2, Pavliukovych N.D.3, Korotash I.F.4, RybakO.Ya.4, Misechko A.I.4
Department of Internal Medicine, Higher State Educational Institution of Ukraine «Bukovinian State Medical University»,
Chernivtsi, Ukraine
2Department of Clinical Immunology, Allergology and Endocrinology, Higher State Educational Institution of Ukraine «Bukovinian State Medical University», Chernivtsi, Ukraine
3Department of Internal Medicine, Clinical Pharmacology and Occupational Diseases, Higher State Educational Institution of Ukraine «Bukovinian State Medical University, Chernivtsi, Ukraine
4Higher State Educational Institution of Ukraine «Bukovinian State Medical University», Chernivtsi, Ukraine INFLUENCE OF DISTRIBUTION OF TYPE I DEIODINASE GENE POLYMORPHISM ON INDICES OF THYROID HOMEOSTASIS IN PATIENTS WITH CHRONIC HEPATITIS AND NONVIRAL LIVER CIRRHOSIS
Summary. The features of thyroid homeostasis in patients with chronic diffuse liver diseases, depending on the A/C polymorphism in DIO1 gene, have been studied. The dependence of indicators of thyroid homeostasis in patients with chronic diffuse liver diseases on the distribution of A/C polymorphism
in DIO1 gene, as well as the absence of correlation of titer of antibodies to thyroid tissue and this polymorphism have been established.
Key words: chronic diffuse liver diseases, polymorphism, thyroid homeostasis, antibodies to thyroid tissue.
