CC BY
48
8. Флетчер, Р. Клиническая эпидемиология: Основы доказательной медицины / Р. Флетчер, С. Флетчер, Э. Вагнер. - М. : Медиа Сфера, 1998. - 352 с.
9. Кулагин, В.К. Патологическая физиология травмы и шока / В.К. Кулагин. - Л. : Медицина, 1978. - 340 с.
10. Буреш, Я. Методика и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Я. Буреш, О. Бурешова, Д. Хьюстон ; пер. с англ. - М. : Высшая школа, 1991. - 399 с.
11. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. - М. : Ме-диаСфера, 2002. - 312 с.
Семченко Валерий Васильевич, доктор мед. наук профессор, Институт ветеринарной медицины Омского ГАУ; Соколов Евгений Юрьевич, заведующий отделением клиники «Ультрамед», г. Санкт-Петербург, sokolovnew22@yandex.ru; Турок Надежда Ефимовна, кандидат биол.наук, turokne@mail.ru, Омский ГАУ; Степанов Сергей Степанович, доктор мед. наук, Омский государственный медицинский университет.
8. Fletcher, R. Klinicheskaya epidemiologiya: Osnovyi dokazatelnoy meditsinyi / R. Fletcher, S. Fletcher, E. Vagner. - M.: Media Sfera, 1998. - 352 s.
9. Kulagin, V.K. Patologicheskaya fiziologiya travmyi i shoka / V.K. Kulagin. - L.: Meditsina, 1978.- 340 s.
10. Buresh, Ya. Metodika i osnovnyie eksperi-mentyi po izucheniyu mozga i povedeniya / Ya. Buresh, O. Bureshova, D. Hyuston; per. s angl. - M.: Vyisshaya shkola, 1991. - 399 s.
11. Rebrova, O.Yu. Statisticheskiy analiz med-itsinskih dannyih. Primenenie paketa prikladnyih programm STATISTICA / O.Yu. Rebrova. - M.: MediaSfera, 2002. - 312 s.
Semchenko Valery Vasilyevich, Doctor of Medical Sciences, Professor, Institute of Veterinarian Medicine of OmskSAU, Sokolov Evgeny Yuryevich, Head of Department of "Ultramed" Clinics, St. Petersburg, sokolov-new22@yandex.ru, Turok Nadezhda Efimovna, Candidate of Biological Sciences, turokne@mail.ru, Omsk State Medical University; Stepanov Sergey Stepanovich, Doctor of Medical Sciences, Omsk State Medical University.
Статья поступила в редакцию 15марта 2016 г.
УДК 591.11:598.261.7:577.33 ГРНТИ 68.41.47
Е.Г. Турицына, Г.В. Макарская, С.В. Тарских, П.Ю. Царев
ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ КЛЕТОК КРОВИ ПЕРЕПЕЛОВ
Исследования проведены на кафедре анатомии, патологической анатомии и хирургии Красноярского государственного аграрного университета и на базе Международного научного центра исследований экстремальных состояний организма при Президиуме Красноярского научного центра СО РАН в 2015-2016 гг. Впервые изучены возрастные особенности течения свободнорадикальных процессов в клетках цельной крови японских перепелов микрометодом спонтанной и активированной in vitro латексом люцигенин- и люминолусиленной хемилюминесценции. Определены максимальная интенсивность хемилюминесцентной реакции, время достижения максимума хемилюминесценции, суммарные объемы генерации активных форм кислорода, общее содержание лейкоцитов, фагоцитарная активность лейкоцитов, индекс активации, удельная продукция антигениндуцированных радикалов лейкоцитами и фагоцитами крови. Результаты статистически обработаны методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента. Различия возрастных показателей считали достоверными при Р < 0,05. Установлено преобладание генерации люцигенинзависимых кислородных радикалов клетками цельной крови как в спонтанном, так и в антигенактивированном состоянии. Минимальная суммарная продукция всех форм свободных радикалов отмечена у перепелов суточного и 240-суточного возраста. Максимальные значения светосуммы антигениндуцированных люцигенинзависимых радикалов зарегистрированы у птицы двухнедельного возраста, люминолзависимых АФК - у двухмесячных перепелов. Антигенная стимуляция фагоцитов крови частицами латекса сокращает время достижения максимума хемилюминес-ценции в 5-7 раз. Полученные данные дополняют сведения о механизмах неспецифической резистентности организма перепелов и имеют теоретическое и прикладное значение в биологии и ветеринарии.
Ключевые слова: клетки крови, хемилюминесценция, активные формы кислорода, фагоцитоз, перепела.
© Турицына Е.Г., Макарская Г.В., Тарских С.В., Царев П.Ю., 2016
E.G. Turitsyna, G.V. Makarskaya, S.V. Tarskikh, P.Yu. Tsarev
THE AGERELATED PECULIARITIES OF THE CHEMILUMINESCENCE OF THE QUAIL BLOOD CELLS
The research is conducted at the sub department of anatomy, pathological anatomy and surgery of the Krasnoyarsk state agrarian University and at the International scientific research center of extremal body states under the Presidium of Krasnoyarsk scientific center of SB RAS in 2015-2016. The age-related peculiarities of the course of free radical processes in the whole blood cells of Japanese quails are studied for the first time by the microtechnique of spontaneous and activated in vitro with latex lucigenin- and luminol-enhanced chemilu-minescence. The maximum intensity of the chemiluminescent reaction, the time of the maximum chemilumines-cence achieving, the total amount of the oxygen active form generation, the total content of leukocytes, the phagocytic activity of leukocytes, the activation index, the specific products of antigen-induced radicals by blood leukocytes and phagocytes are determined. The results are statistically processed by the method of variation statistics using t Student's test. The differences of the age-related indicators were considered reliable at p < 0.05. The predominance of the lucigenin-dependent oxygen radicals by whole blood cells, both in spontaneous and in antigen-activated condition is revealed. The minimum total production of all forms of free radicals was observed in quails of one day-age and 240-day age. The maximum value of the light sum of the antigen-induced lucigenin-dependent radicals are registered in birds of two-week age, luminol-dependent AOF (active oxygen forms) in two-month age quails. Antigenic stimulation of blood phagocytes by latex particles reduces the time to reach the maximum chemiluminescence by 5-7 times. The obtained data complement the information about the mechanisms of nonspecific resistance of quails' organism and have theoretical and practical importance in biology and veterinary medicine.
Keywords: blood cells, chemiluminescence, reactive oxygen species, phagocytosis, quails.
Введение
Кровь является жидкой тканью организма, обладающей сложными и разносторонними функциями. Она реагирует на экстремальные внешние и внутренние воздействия не только изменениями соотношения клеточных элементов, но и колебаниями интенсивности их метаболизма. Известно, что гранулоциты и моноциты крови обладают способностью генерировать активные радикалы кислорода, объемы которых резко увеличиваются при контакте с чужеродными веществами [1]. Индукторами функциональной активности фагоцитов крови могут быть крупнодисперсные частицы [2], микроорганизмы [3], циркулирующие иммунные комплексы [4]. В последние годы появляются публикации, освещающие некоторые аспекты продукции активных форм кислорода клетками цельной крови или фракционированными лейкоцитами разных видов диких и домашних птиц [5, 6]. Однако достоверные данные о кинетике течения свободнорадикальных процессов в фагоцитах крови перепелов, отличающихся высокой устойчивостью к инфекционным болезням, отсутствуют, что делает актуальным представленные научные исследования.
Целью работы являлось изучение возрастных особенностей генерации свободных радикалов кислорода клетками цельной крови перепелов хемилюминесцентным методом. В задачи исследования входило определение спонтанной (в состоянии покоя) и индуцированной (при фагоцитозе) люцигенин- и люминолусиленной хемилюминесценции (ХЛ) клеток крови перепелов 1-240-суточного возраста.
Объекты и методы
Исследования проведены на кафедре анатомии, патологической анатомии и хирургии ФГБОУ ВО «Красноярский ГАУ» и на базе Международного научного центра исследований экстремальных состояний организма при Президиуме Красноярского научного центра СО РАН с сентября 2015 г. по январь 2016 г. Объектом исследований являлись японские перепела разного пола 1-, 14-, 30-, 60-, 90-суточного возраста из парка флоры и фауны «Роев ручей» (г. Красноярск) и перепела 240-суточного возраста, поступившие из фермерского хозяйства. Материалом для исследований служила венозная гепаринизированная кровь в разведении 1 : 1 неокрашенным раствором Хенкса. Всего исследовано 28 образцов крови. Хемилюминесцентный анализ проведен по методу В.М. Земскова с соавторами [7] в модификации Г.В. Макарской с соавторами [8]. Кинетика спонтанной и индуцированной (активированной) хемилюминесценции
регистрировалась на 36-канальном хемилюминометре CL-3604 (Красноярск), совмещенном с ПЭВМ. Время записи хемилюминесцентной кривой - 90 мин, температура в регистрационной камере +42 °С. Для усиления хемилюминесценции в качестве ХЛ-зондов использованы люци-генин и люминол, обладающие выраженной селективностью в отношении первичных (суперок-сиданион) и вторичных (гидроксил, гипохлорид, перекись водорода) радикалов кислорода. Антигенная активация фагоцитов крови осуществлена in vitro частицами латекса, опсонизиро-ванными белками сыворотки крови взрослых кур. Определены показатели кинетики ХЛ-реакции: амплитуда максимальной активности (Imax, имп./с); время достижения максимума (Tmax, мин); светосумма (S, имп. за 90 мин); индекс активации (ИА = $акт/$сп0нт, усл. ед.). На основании полученных данных рассчитана удельная антигениндуцированная продукция свободных радикалов лейкоцитами и фагоцитами крови (S/лейкоцит и S/фагоцит, имп./кл.).
После завершения регистрации ХЛ-реакции микроскопированием в камере Горяева установлено общее содержание лейкоцитов и их фагоцитарная активность. Для дифференциации клеток образцы крови окрашены 0,25 %-ным раствором генцианвиолетта, приготовленном на 3%-ном водном растворе уксусной кислоты. Статистическая обработка цифрового материала проведена методом вариационной статистики с помощью прикладных программ Microsoft OfficeExcel 2010. Возрастные различия параметров ХЛ считали достоверными при Р < 0,05. Микроскопия и микрофотографирование проведены на микроскопе МС 100 (Micros, Austria) цифровой камерой CAM V200 (Vision, Austria).
Результаты исследований
Кинетика генерации всех видов активных форм кислорода (АФК) клетками крови перепелов демонстрировала значительные колебания в разные возрастные периоды. Минимальные показатели суммарной продукции люцигенинзависимых радикалов как при спонтанной, так и при антигениндуцированной латексом ХЛ-реакции зарегистрированы у перепелов суточного (2,90 х 105 и 12,98 х 105 имп. за 90 мин) и 240-суточного (2,90 х 105 и 8,17 х 105 имп. за 90 мин) возраста. Аналогичная зависимость отмечена при генерации люминолзависимых АФК. Минимальный объем вторичных радикалов при спонтанной и индуцированной хемилюминесценции у суточных перепелов составил 1,11 х 105 и 1,88 х 105 имп. за 90 мин соответственно, а у птицы 240-суточного возраста - 0,39 х 105 и 1,14 х 105 имп. за 90 мин. У старых перепелов светосумма всех видов индуцированной и спонтанной продукции АФК либо не отличалась от исходных показателей, либо на 20-60 % отставала от них (рис. 1), вероятно, это свидетельствует или о низких функциональных возможностях фагоцитов крови у только что вылупленных и старых перепелов, или о высокой активности антиоксидантной защиты организма.
800 700 600 500 400 300 200 100 0
люцигенин
14
□ активир.
□ спонтан.
30 60 90
возраст, сутки
240
250 225 200 175 150 125 100 75 50 25 0
□ активир.
□ спонтан.
■
14 30 60 90
возраст, сутки
240
Рис. 1. Относительные показатели суммарных объемов люцигенин- и люминолзависимой хемилюминесценции при спонтанной и активированной продукции АФК клетками крови перепелов
(% к исходным данным суточной птицы)
Высокий уровень генерации свободных кислородных радикалов установлен у перепелов 14-, 30-, 60-, 90-суточного возраста. Межвозрастные отличия в этот период жизни птицы характеризовались недостаточной степенью достоверности вследствие высокой вариабельности полученных показателей. Максимальные значения суммарной продукции антигениндуцированных
люцигенинзависимых радикалов зарегистрированы у птицы двухнедельного возраста, люминолзависимых АФК - у двухмесячных перепелов (Р < 0,05). Светосумма люцигенинзависимых радикалов при спонтанной ХЛ у перепелов 14-90-суточного возраста в 5,5-7 раз превысила исходные показатели суточной птицы (рис. 1). Продукция спонтанных люминолзависимых радикалов отличалась крайне низкими показателями, особенно на 30-е и 240-е сут жизни.
Во все периоды исследования суммарная генерация первичных люцигенинзависимых АФК клетками цельной крови перепелов значительно превышала продукцию вторичных лю-минолзависимых радикалов как в состоянии покоя, так и при антигенном раздражении клеток частицами латекса. При активированной ХЛ-реакции объемы люцигенинзависимых АФК превысили показатели люминолзависимых свободных радикалов в 5,6-13,3 раза (Р < 0,01), при спонтанной ХЛ-реакции - в 2,6-18,2 раза (Р < 0,01). Причем минимальные отличия в соотношении люминол- и люцигенинзависимых АФК отмечены у суточной и 240-суточной птицы. Аналогичные особенности спектра свободных кислородных радикалов установлены Г.В. Ма-карской и соавторами при исследовании хемилюминесценции клеток цельной крови у кур [8].
При использовании люцигенина и люминола в качестве ХЛ-зондов выявлено заметное отличие амплитуды активности продукции первичных и вторичных АФК. Показатели интенсивности активированной и спонтанной люцигенинзависимой реакции в несколько раз превышали параметры люминолусиленной ХЛ во все периоды исследования. Особенно ярко это проявлялось у 90-суточных перепелов (в 15-18 раз), менее выражены отличия - у птицы суточного и 240-суточного возраста. Амплитуда максимальной активности люцигенинзависимой ХЛ достигала пиковых показателей у перепелов 90-суточного возраста, превышая исходные величины при спонтанной реакции в 5,9 раза, при индуцированной - в 8,7 (Р < 0,05).
Для люминолзависимой ХЛ была характерна низкая амплитуда максимальной активности как при спонтанной, так и при антигенактивированной реакции во все возрастные периоды. Интенсивность спонтанной люминолзависимой реакции колебалась в пределах 30-43 имп./с, а при активированной ХЛ - от 85 имп./с у суточных перепелов до 214 имп./с - у птицы двухмесячного возраста.
Самый быстрый выход хемилюминесцентной кривой на максимум (12-13 мин) наблюдался у двух- и трехмесячной птицы при индуцированной люцигенин- и люминолусиленной ХЛ. Однако спонтанная генерация всех видов АФК отличалась крайне медленным течением, о чем свидетельствовало выраженное смещение пика хемилюминесцентной кривой вправо, особенно у перепелов 14-, 30- и 60-суточного возраста. Так, у двухмесячной птицы максимальная интенсивность продукции спонтанных люминолзависимых радикалов зарегистрирована на 64 мин, люцигенинзависимых - на 82 мин, это в 5-6 раз выше показателей индуцированной частицами латекса ХЛ-реакции у птицы аналогичного возраста (Р < 0,01). С момента достижения максимума хемилюминесценции и до окончания регистрации кинетики хемилюминесцентной кривой интенсивность выхода спонтанных АФК превышала показатели индуцированной реакции, наиболее ярко это проявилось у 30- и 60-суточных перепелов. Очевидно, что при антигенной активации in vitro частицами латекса в клетках, наряду с проокси-дантными реакциями, запускаются и ферментные механизмы антиоксидантной защиты, «гасящие» образование свободных радикалов.
По окончании регистрации хемилюминесцентной реакции определяли фагоцитарную активность лейкоцитов крови как соотношение количества клеток с частицами латекса в цитоплазме к общему содержанию лейкоцитов, выраженное в процентах. Общее содержание лейкоцитов колебалось от 9,99 ± 1,27 х 109 кл./л до 12,82 ± 1,43 х 109 кл./л. Минимальное содержание лейкоцитов (4,76 ± 0,43 х 109 кл./л) зарегистрировано у старых перепелов. При исследовании возрастных особенностей фагоцитарной активности лейкоцитов крови показаны минимальные величины данного параметра у суточных перепелов (15,6 ± 3,6 %), указывая на крайне низкие функциональные способности клеток к ответной реакции на раздражение частицами латекса (рис. 2). Спустя две недели показатель вырос более чем в 2 раза, а у птицы двух- и трехмесячного возраста достиг максимальных величин, в 4,26-4,36 раза превысив исходные данные. Относительно высокий уровень фагоцитарной активности лейкоцитов (51,67 ± 7,26 %) сохранялся до конца наблюдений.
400
300
200
100
436
351 w+w
жш
KSSSS1 Hill у+++"++ Шж
й-:-:-:-: -Т+Т+Т+Т+Т+; V+Wt* WKv (■Т+Т+Т+Т+Т+
Ш: ::::::
209 iiitt ШШ Шж
Qßßßßf £+Î+Î+Î+Î+ ■+++V+VH шш v+v+v WKv шш
Т+Т+Т+Т+Т+Т- ï^A+H+i ■Т+Т+Т+Т+Т+; V+Wt* (■Т+Т+Т+Т+Т+
К+4-4.4.4. г.-.-.-г: rtrtrtfWf ш ш
ш шт.
14 30 60
возраст, сутки
426
• о*
• «
* \ / •#
90
240
л.
«S с % ? /
о% f, • I
* * * t
M
. f I
А
« «
аз
Б
Рис. 2. Фагоцитарная активность (ФА) лейкоцитов крови перепелов: А - возрастные изменения ФА относительно показателей суточной птицы, %; Б - фагоцитоз частиц латекса лейкоцитом крови.
Возраст - 60 сут. Окраска 0,25 %о-ным генцианвиолеттом, ув. х 400
Полученные в ходе ХЛ-реакции цифровые данные позволили рассчитать удельную антигениндуцированную продукцию свободных радикалов кислорода на один лейкоцит и активированный частицами латекса фагоцит крови (таблица). Для возрастных особенностей показателя характерен достоверный рост удельной антигенактивированной люцигенинзависимой генерации АФК лейкоцитами у 14-90-суточной птицы по сравнению с показателями суточных и старых перепелов. Удельная продукция первичных АФК активированными фагоцитами у двухнедельных перепелов превысила исходные данные в 2 раза, однако вследствие высокой вариабельности значений данные показатели не отличались высокой достоверностью. В последующем показатель сокращался, особенно значимое падение отмечено на 60-е и 240-е сутки.
Удельная продукция люминолзависимых свободных радикалов лейкоцитами крови на 14-е сутки жизни выросла почти в 2 раза, а активированными фагоцитами - лишь на 17,7 % (таблица). В дальнейшем показатель сокращался на 50-60 % относительно исходных данных и достиг минимальных величин у птицы 90-суточного возраста.
Немаловажное значение в
Возрастные показатели удельной генерации АФК оценке свободнорадикальных
лейкоцитами и фагоцитами крови перепелов процессов, протекающих в ор-
при хемилюминесценции, активированной частицами ганизме имеет гоказагель ин-
латекса, имп./кл. декса активации. Определяют
его отношением суммарной продукции индуцированных и спонтанных АФК; он указывает на потенциальные возможности лейкоцитов к генерации «респираторного взрыва» при антигенной стимуляции. Нами установлено, что у суточных перепелов индекс активации при образовании первичных люцигенинзави-симых радикалов в два раза выше, чем при использовании люминола в качестве ХЛ-зонда, т.е. 3,8 и 1,9 усл. ед. соответственно. Однако в дальнейшем показатели продукции первичных люцигенинзависимых АФК сократились на 19-52 % относительно исходных данных, а при люминолзависимой ХЛ - увеличились на 68-84 %, достигая пиковых значений у птицы 240-суточного возраста при наименьшей суммарной продукции спонтанных и активированных АФК.
Заключение
Установлено преобладание генерации люцигенинзависимых кислородных радикалов клетками цельной крови перепелов как в спонтанном, так и в антигенактивированном состоянии. Минимальная суммарная продукция всех форм свободных радикалов отмечена у перепелов
Возраст, сут Люминол Люцигенин
S/лейкоцит S/фагоцит S/лейкоцит S/фагоциг
1 0,33 ± 0,25 1,92 ± 0,24 1,77 ± 0,50 13,56 ± 3,20
14 0,73 ± 0,15 2,26 ± 0,36 7,63 ± 2,17* 27,52 ± 8,71
30 0,58 ± 0,19 1,00 ± 0,25** 5,15 ± 1,10** 9,66 ± 2,24
60 0,60 ± 0,16 0,89 ± 0,25** 4,50 ± 1,05** 6,93 ± 1,90
90 0,53 ± 0,16 0,78 ± 0,22** 6,32 ± 1,14** 9,54 ± 2,04
240 0,61 ± 0,22 1,18 ± 0,44 3,46 ± 1,06 7,24 ± 3,01
Примечание: *Р < 0,05; **Р < 0,01 по сравнению с показателями суточной птицы.
суточного и 240-суточного возраста. Максимальные значения светосуммы антигениндуциро-ванных люцигенинзависимых радикалов зарегистрированы у птицы двухнедельного возраста, люминолзависимых АФК - у двухмесячных перепелов. Антигенная стимуляция фагоцитов крови частицами латекса сокращает время достижения максимума хемилюминесценции в 5-7 раз. Полученные данные дополняют сведения о механизмах неспецифической резистентности организма перепелов и имеют теоретическое и прикладное значение в биологии и ветеринарии.
Список литературы
1. Меньщикова, Е.Б. Окислительный стресс. Патологические состояния и заболевания / Е.Б. Меньщикова, Н.К. Зенков, В.З. Ланкин. - Новосибирск : АРТА, 2008. - 284 с.
2. Садовников, Н.В. Использование метода биохемилюминесценции и ферментативной антиокислительной системы крови для оценки функционального состояния цыплят в норме и при гипотрофии / Н.В. Садовников // БИО. - 2002. - № 4. - С. 16.
3. Oxidative burst mediated by toll like receptors (TLR) and CD14 on avian heterophils stimulated with bacterial toll agonists / M.B. Farnell [et al.] // Dev. Comp. Immunol. - 2003. - Vol. 27. - № 5. - РР. 423-429.
4. Дюсенова, Г.М. Усовершенствование хемилю-минесцентного метода для прижизненной диагностики туберкулеза / Г.М. Дюсенова, В.Г. Ощепков, А.Д. Слеп-ченко // Актуальные вопросы ветеринарной медицины : материалы II Сиб. вет. конгресса. - Новосибирск : Новосибирский государственный аграрный университет, 2010. - С. 363-365.
5. Functional responses of neonatal chicken and turkey heterophils following stimulation by inflammatory agonists / M.H. Kogut, C. Holtzapple, V.K. Lowry [et al.] // Am. J. Vet. Res. - 1998. - Vol. 59. - № 11. - РР. 14041408.
6. Papp Z. Validation and novel applications of the whole-blood chemiluminescence assay of innate immune function in wild vertebrates and domestic chickens / Z. Papp, J.E.G. Smits // Journal of Wildlife Diseases.-2007. - Vol. 43. - № 4. - PP. 623-634.
7. Земсков, В.М. Изучение функционального состояния фагоцитов человека (кислородный метаболизм и подвижность клеток): метод. рекомендации /
B.М. Земсков, А.А. Барсуков. - М. : Институт иммунологии МЗ СССР, 1988. - 20 с.
8. Макарская, Г.В. Люминол- и люцигенинзави-симая хемилюминесценция клеток крови кур в постна-тальном онтогенезе / Г.В. Макарская, С.В. Тарских, Е.Г. Турицына // Докл. РАСХН. - 2011. - № 3. -
C. 46-48.
References
1. Menshchikova Ye.B. Okislitelnyy stress. Patolo-gicheskie sostoyaniya i zabolevaniya / Ye.B. Menshchikova, N.K. Zenkov, V.Z. Lankin. - Novosibirsk: ARTA, 2008. -284 s.
2. Sadovnikov N.V. Ispolzovanie metoda bio-khemilyuminestsentsii i fermentativnoy antiokislitelnoy sistemy krovi dlya otsenki funktsionalnogo sostoyaniya tsyplyat v norme i pri gipotrofii / N.V. Sadovnikov // BIO. -2002. - № 4. - S. 16.
3. Oxidative burst mediated by toll like receptors (TLR) and CD14 on avian heterophils stimulated with bacterial toll agonists / M.B. Farnell [et al.] // Dev. Comp. Immunol. - 2003. - Vol. 27. - № 5. - RR. 423-429.
4. Dyusenova G.M. Usovershenstvovanie khemilyuminestsentnogo metoda dlya prizhiznennoy diag-nostiki tuberkuleza / G.M. Dyusenova, V.G. Oshchepkov, A.D. Slepchenko // Aktualnye voprosy veterinarnoy med-itsiny: mat. II Sib. vet. kongress. - Novosibirsk: Novosibir-skiy gosudarstvennyy agrarnyy universitet, 2010. -S. 363-365.
5. Functional responses of neonatal chicken and turkey heterophils following stimulation by inflammatory agonists / M.H. Kogut [et al.] // Am. J. Vet. Res. - 1998. -Vol. 59. - № 11. - RR. 1404-1408.
6. Papp Z. Validation and novel applications of the whole-blood chemiluminescence assay of innate immune function in wild vertebrates and domestic chickens / Z. Papp, J.E.G. Smits // Journal of Wildlife Diseases. -2007. - Vol. 43. - № 4. - PP. 623-634.
7. Zemskov V.M. Izuchenie funktsionalnogo sostoyaniya fagotsitov cheloveka (kislorodnyy metabolizm i podvizhnost kletok): metod. rekomendatsii / V.M. Zemskov, A.A. Barsukov. - M.: Institut immunologii MZ SSSR, 1988. - 20 s.
8. Makarskaya G.V. Lyuminol- i lyutsigeninzavi-simaya khemilyuminestsentsiya kletok krovi kur v postna-talnom ontogeneze / G.V. Makarskaya, S.V. Tarskikh, Ye.G. Turitsyna // Dokl. RASKhN. - 2011. - № 3. -S. 46-48.
Турицына Евгения Геннадьевна, доктор вет. Turitsyna Eugenia Gennadevna, doctor of vet. sci-
наук, доцент, turitcyna@mail.ru, Красноярский ГАУ; ences, associate professor, Krasnoyarsk SAU; Makarskaya
Макарская Галина Владимировна, кандидат биол. Galina Vladimirovna, candidate of boil. sciences, senior
наук, ст. науч. сотр., Институт вычислительного мо- staff scientist, Institute of computational modelling of Sibe-
делирования СО РАН, mgv@icm.krasn.ru; Тарских rian branch of Russian academy of sciences; Tarskikh Svet-
Светлана Вениаминовна, ведущий hh^^ lana Veniaminovna, leading engineer, tsv@akadem.ru,
tsv@akadem.ru, Международный научный центр иссле- International scientific center of research of the extreme
дования экстремальных состояний организма при Пре- states of organism at Presidium of the Krasnoyarsk scientific
зидиуме Красноярского научного центра СО РАН; Ца- center of SB RAS; Tsarev Pavel Yurevich, graduate stu-
рев Павел Юрьевич, аспирант, jet500000@bk.ru, Крас- dent, jet500000@bk.ru, Krasnoyarsk SAU. ноярский ГАУ.
Статья поступила в редакцию 29 февраля 2016 г.
