CC BY
32
УДК 616. 596-007.2-071.616.153-074
ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ АКТИВНОСТИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ, НЕЙТРОФИЛЬНОЙ ЭЛАСТАЗЫ И ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ СЫВОРОТКИ КРОВИ ПРИ СИНДРОМЕ ЛОМКОСТИ НОГТЕЙ
© 2012 г. Е.В. Уразовская, З.И. Микашинович
Ростовский государственный медицинский университет, Rostov State Medical University,
пер. Нахичеванский, 29, г. Ростов н/Д, 344022, Nakhichevanskiy Lane, 29, Rostov-on-Don, 344022,
okt@rostgmu.ru okt@rostgmu.ru
У 99 женщин с ломкостью ногтей, онихошизисом, онихолизисом и гиперкератозом определяли абсолютное содержание нейтрофиль-ных гранулоцитов, активность миелопероксидазы, нейтрофильной эластазы и щелочной фосфатазы сыворотки крови. У пациенток старше 50 лет по сравнению с женщинами моложе 40 лет наблюдали снижение содержания лейкоцитов, активности щелочной фосфатазы, усиление активности миелопероксидазы и нейтрофильной эластазы крови, что обосновывает использование в диагностике онихо-дистрофий у женщин старше 50 лет показателей функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, в том числе миелоперокси-дазы и эластазы крови.
Ключевые слова: ломкость ногтей, онихошизис, онихолизис, гиперкератоз, нейтрофильные гранулоциты, миелоперок-сидаза, нейтрофильная эластаза, щелочная фосфатаза.
We studied the neutrophilic granulocytes absolute content, myeloperoxidase, neutrophil elastase and blood alkaline phosphatase activity in 99 women of the different ages with nails brittle, onychoschizis, onycholysis and hyperkeratosis. The biochemical analysis show that nail plates brittle accompanied by increased activity of the myeloperoxidase and neutrophil elastase in the trand to reduce the blood leukocytes content in women older than 50 years and more a marked reduction of the blood alkaline phosphatase activity as compared to women younger than 40 years. The research results justify the need to use neutrophilic granulocytes functional activity findings including blood myeloperoxidase and elastase in diagnostics of the onychodystrophy with different genesis in women older than 50 years.
Keywords: brittleness of nails, onychoschizis, onycholysis, hyperkeratosis, neutrophilic granulocytes, myeloperoxidase, neutro-phil elastase, alkaline phosphatase.
Синдром ломкости ногтей имеет связь с уровнем гормонов в организме, о чем свидетельствует больший процент его встречаемости у женщин по сравнению с мужчинами, усиление при старении организма и использовании препаратов индукторов гормонов щитовидной железы [1, 2]. Распространенность синдрома ломкости ногтей связана с трудностями патогенетического обоснования ранней стадии деструкции кератогиалиновой ткани, разнообразием морфологических видов ониходистрофии, осложнениями в связи с колонизацией тканей ногтей микробной и грибковой флорой [3], а также возрастными особенностями. Перспективы разработки методов диагностики стадий деструкции тканей, на наш взгляд, могут быть связаны с анализом ферментативной активности клеток крови у женщин различных возрастных групп. В связи с тем, что ферменты лейкоцитов могут препятствовать продукции цитотоксинов, разрушающих коллаген и кератин, а также участвуют в реакциях апоптоза клеток, изучение активности нейтрофильной эласта-зы, миелопероксидазы и щелочной фосфатазы может иметь патогенетическое значение при обосновании стадии деструкции, выборе способа лечения ониходи-строфии и профилактике ранней стадии ониходист-рофии и ломкости ногтей.
Целью настоящего исследования явилось - изучение абсолютного содержания нейтрофильных грану-лоцитов, их миелопероксидазной, эластазной активности, а также активности щелочной фосфатазы сыворотки крови женщин различных возрастных групп при синдроме ломкости ногтей.
Материалы и методы
Нами обследованы 30 женщин среднего возраста 32±2,4 лет (группа 1) и 26 женщин среднего возраста 57,4±5,4 лет (группа 2) без патологических изменений кожи и ногтей. Группу 3 составили 30 пациенток с синдромом ломкости ногтевых пластин. Возраст пациенток группы 3 составлял 28,7±2,8 лет. У всех пациенток группы 3 наблюдали онихошизис, у 15 из них -дистальный краевой онихолизис. Группу 4 составили 33 пациентки среднего возраста 58,9±4,7 лет с ломкостью ногтей, онихошизисом кистей рук, онихолизи-сом и гиперкератозом ногтей стоп. Дистрофические изменения кератогиалиновой ткани ногтей, нарушение связи гипонихион и ногтевого ложа у пациенток приводили к потере влаги и ломкости ногтей. Определение абсолютного числа нейтрофильных грануло-цитов (АЧНГ) и активности щелочной фосфатазы (АЩФ) крови проводили унифицированными методами [4]. Активность миелопероксидазы нейтрофильных гранулоцитов крови определяли по методу, описанному в [5], эластазы в нейтрофилах крови - по скорости гидролиза М-тетра-бутокси-карбонил-аланин-р-нитро-фенилового эфира [6]. О достоверности различий средних арифметических показателей сравниваемых групп судили по величине ^критерия Стьюдента после проверки распределения на нормальность. Статистически достоверными считали различия, соответствующие оценке ошибки вероятности р < 0,05. Исследования выполнены в соответствии с Декларацией о биоэтике и правах человека.
Результаты и их обсуждение
Результаты исследований представлены в таблице. Как следует из полученных результатов, в возрастных группах (1 и 2) определили неоднозначное количество клеток и активность ферментов. Так, у женщин группы 2 по сравнению с группой 1 средние арифметиче-
ские показателей АЧНГ и активности нейтрофильной эластазы крови соответственно в 1,5 и 2,5 раза выше. Соответственно, активность миелопероксидазы и щелочной фосфатазы ниже в 2,6 и 1,6 раза. Таким образом, выявлена взаимосвязь между возрастом пациентов, количеством клеток и активностью ферментов.
Показатели ферментативной активности нейтрофильных гранулоцитов и щелочной фосфатазы сыворотки крови пациенток с ломкостью ногтей в различных возрастных группах, М ± т
Группа Здоровые Больные
1 2 3 4
АЧНГ, 109 / л 2,54±0,26 3,75±0,45 Pi,2 < 0,05 2,36±0,29 P1, 3 > 0,05 2,24±0,19 P2 4 < 0,05 P3 4 >0,05
Нейтрофильная эластаза, моль/млмин 0,4±0,1 0,9±0,25 P1,2 < 0,05 1,5±0,3 P1,3 < 0,05 1,5±0,31 P2,4 < 0,05 P3,4 >0,05
Миелопероксидаза, активность/г белка 0,54±0,11 0,21±0,05 P1,2 < 0,05 0,41±0,09 P1, 3 > 0,05 0,44±0,10 P2 4 < 0,05 P3 4 >0,05
АЩФ, мкмоль/млч 1,64±0,21 0,98±0,25 P1,2 < 0,05 0,48±0,17 P1,3 < 0,05 0,10±0,01 P2,4 < 0,05 P3,4 <0,05
Примечание. р < 0,05 - отличие достоверно; р > 0,05 - недостоверно.
Как возрастную особенность можно расценивать более низкие средние арифметические показатели АЩФ и активности миелопероксидазы крови в группе 2 по сравнению с группой 1. С другой стороны, имеются данные [7], что с возрастом при уменьшении количества клеток увеличивается активность ферментов крови, а также при повышении ферментативной активности крови регистрируется снижение содержания клеток крови. Повышение АЩФ нейтрофилов наблюдают при эссенциальной полицитемии, снижение - при симптоматическом эритроцитозе [4]. Выявленное нами уменьшение активности миелоперокси-дазы и АЩФ соответствует представлениям о снижении интенсивности метаболического обеспечения защитных реакций при старении.
Результаты настоящего исследования показали, что при синдроме ломкости ногтей у пациенток группы 3 средние арифметические АЧНГ и показателей активности миелопероксидазы крови не отличались от показателей группы сравнения 1, тогда как активность ферментов существенно разнилась. Так, АЩФ крови была ниже более чем в 3 раза, а нейтрофильной эластазы - выше более чем в 3 раза.
У пациенток разных возрастных групп (группы 4 по сравнению с группой 3) средние арифметические АЧНГ крови, показатели активности эластазы и мие-лопероксидазы не имели достоверных отличий.
В то же время пятикратное снижение АЩФ пациенток группы 4 по сравнению с группой 3 указывало на усиление деструктивного процесса кератогиалино-вой ткани ногтей. Как показали наши предыдущие исследования, снижение АЩФ является отражением состояния адаптивных возможностей организма при формировании тканевой гипоксии и ониходистрофии [8]. В таблице показано, что средние арифметические показатели АЩФ крови пациенток группы 3 в 4 раза
ниже, чем в группе 1, а в группе 4 - в 10 раз ниже, чем в группе 2. Более резкое снижение АЩФ в крови пациенток группы 4, возможно, является результатом усиления деструкции тканей и старения организма в ответ на то, что повышается функциональная активность нейтрофилов.
По результатам исследования В.В. Меньшикова [4], полуколичественная оценка функциональной активности клеток, основанная на выявлении различной интенсивности окраски клеток при цитохимическом методе определения активности миелопероксидазы, определяет 98 % активных гранулоцитов у здоровых людей. Миелопероксидазе лейкоцитов принадлежит защитная антиоксидантная роль при изменении соотношения активности ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ), супероксиддисмутазы и каталазы эритроцитов [9]. Изменение функциональной активности клеток эритроцитов крови в условиях гипоксии у женщин репродуктивного возраста может свидетельствовать об усилении продукции перекиси водорода, супероксидного радикала и преобладающей защитной роли мие-лопероксидазы, а также об избыточной продукции токсинов, гипогалоидов, окисляющих сульфгидрильные и тиоэфирные группы белковых молекул [10]. Как показали наши предыдущие исследования, угнетение ферментов АОЗ создает условия для формирования тканевой гипоксии и прогрессирования деструкции керато-гиалиновой ткани ногтей, метаболизм которой энергозависим в связи с высокой способностью к росту [11]. Возможно, функциональная активность нейтрофиль-ных гранулоцитов и содержание клеток крови зависят от активности и соотношения различных ферментов крови, в том числе, как нами показано, щелочной фос-фатазы сыворотки крови, резкое снижение которой можно наблюдать при различных стадиях деструкции кератогиалиновой ткани ногтей при синдроме ломко-
сти ногтей. Уменьшение средних арифметических АЧНГ и увеличение в 2 раза активности миелопероксидазы в крови группы 4 по сравнению с группой 2 при усилении ломкости ногтей у пациенток старше 50 лет (таблица) может иметь патогенетическое значение и указывать на повышение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов при снижении содержания их в крови.
В работе [12] нами отмечено, что деструкция кера-тогиалиновой ткани, проявляющаяся в виде синдрома ломкости ногтей, сопровождается усилением глико-литических процессов в эритроцитах крови в условиях формирующейся тканевой гипоксии. Повышение интенсивности анаэробного обмена в клетках крови может явиться метаболическим механизмом, препятствующим увеличению абсолютного числа эритроцитов крови в связи с необходимостью доставки кислорода тканям, и направлено на сохранение в том числе адекватных реологических свойств системы крови. Так, средняя арифметическая активности нейтро-фильной эластазы крови пациенток группы 3 в 3,7 раза выше, чем в группе сравнения 1, в группе 4 - в 0,7 раза, чем в группе 2 (таблица). Уменьшение АЧНГ и повышение активности эластазы крови пациенток при ломкости ногтей может быть результатом усиления металлопротеиназной активности белковой фракции крови, направленного на устранение продуктов токсического действия гипогалоидов на длинноцепо-чечные молекулы коллагена и кератина кожи.
Большая часть потребляемого нейтрофильными гранулоцитами молекулярного кислорода расходуется на образование активных форм кислорода. Окислению системой миелопероксидаза - перекись водорода - ион хлора подвергаются железосодержащие центры и ге-мовые группы ферментов, что приводит к высвобождению железа в каталитически активной форме (+2). Увеличение активности миелопероксидазы крови может быть обусловлено ростом функциональной активности лейкоцитов [10]. В сыворотке крови практически здоровых людей содержание продуктов деградации соединительной ткани, а именно гидроксипро-лина и гликозамингликанов, находится в зависимости от возраста и пола [13]. Усиление активности миело-пероксидазы и нейтрофильной эластазы крови пациенток группы 4 по сравнению с группой 2 (таблица) может свидетельствовать о повышении функциональной активности нейтрофилов крови при старении организма и деструкции кератогиалиновой ткани ногтей.
Усиление активности миелопероксидазы и инфильтрации нейтрофильными гранулоцитами кожи пациентов при нарушении ее целостности возможно зарегистрировать через 2 ч [14]. Любое неблагоприятное воздействие на организм, сопровождающееся активацией реакций перекисного окисления липидов (ПОЛ), накоплением в крови, органах и тканях токсинов, имеет определенную интенсивность. Интенсивность окислительно-восстановительных реакций ней-трофильных гранулоцитов при адаптации к хроническим заболеваниям кожи, таким как ониходистрофия, очевидно, компенсирована повышением активности миелопероксидазы и нейтрофильной эластазы крови. Накопление продуктов ПОЛ при ослаблении АОЗ и
иммунного статуса пациентов с хроническими заболеваниями кожи (микоз стоп, псориаз, розацеа и др.) приводит к угнетению пентозофосфатного цикла и нарушению метаболизма протеогликанов, в результате чего нарушается структура кератогиалиновой ткани ногтей [15]. Нарушение связи гипонихион с сосудами ногтевого ложа у пациентов с хроническими кожными заболеваниями, а также при ониходистро-фии у людей старше 50 лет, возможно, является результатом действия токсинов, усиливающих протео-литическую активность металлоферментов при дисбалансе АОЗ. Нарушение проницаемости кожи ногтей при гипоксии является не только следствием кратковременного и мощного действия токсинов, но и постепенного их накопления в результате возрастных метаболических изменений. Адекватной компенсаторно-приспособительной реакцией организма в ответ на гипоксию можно считать изменения количественного состава клеток крови и их функциональной активности, которая обеспечивается специфическими метаболическими процессами и имеет возрастные особенности.
Полученные данные обосновывают необходимость использования в диагностике синдрома ломкости у женщин старше 50 лет показателей функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, в том числе миелопероксидазы и эластазы крови с учетом выраженности гипоксии и деструктивного процесса кератогиалиновой ткани ногтей.
Литература
1. Hillerdal G. Yellow neil syndrome: treatment with octreo-
tide // J. Clin. Respir. 2007. Vol. 1, № 2. P. 120-121.
2. Khanderia U., Jaffe C.A., Theisen V. J. Amiodarone-induced
thyroid dysfunction // J. Cosmet. Dermatol. 2004. Vol. 3, № 3. P. 138-144.
3. Мишина Ю.В. Патогенетическое обоснование ком-
плексной терапии заболеваний ногтей у детей и подростков: автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2008. 25 с.
4. Лабораторные методы исследования в клинике: спра-
вочник / под ред. В.В. Меньшикова. М., 1987. 240 с.
5. Шафран М.Г., Лызлова С.Н. Очистка и некоторые свой-
ства миелопероксидазы лейкоцитов белых мышей // Вопросы мед. химии. 1975. № 6. С. 629-633.
6. Выявление лейкоцитарной эластазы человека из ком-
плекса С плазменным а1-протеиназным ингибитором по ее энзиматической активности / В.Л. Доценко [и др.] // Вопросы мед. химии. 1994. Т. 40, № 3. С. 20-25.
7. Микашинович З.И. Общие и частные закономерности
изменений метаболизма в эндокринных органах и крови при разной тяжести травматического шока и острой кровопотери: автореф. дис. ... д-ра биол. наук. Ростов н/Д, 1989. 34 с.
8. Микашинович З.И., Уразовская Е.В., Квасов А.Р. Изуче-
ние зависимости между содержанием оксипролина в сыворотке крови у больных и возможностью развития ониходистрофии // Вестн. РУДН. 2008. № 7. С. 446450.
9. Микашинович З.И., Гридасова Р.А., Олемпиева Е.В. Из-
менение активности ферментов антиоксидантной защиты у пациентов с разными формами ишемической болезни сердца // Клин. лаб. диагностика. 2011. № 5. С. 11-14.
10. Олемпиева Е.В. Клинико-диагностическое значение
биохимических маркеров в диагностике сердечно-
сосудистых заболеваний у беременных женщин: авто-реф. дис. ... д-ра мед. наук. Ростов н/Д, 2009. 41 с.
11. Активность супероксиддисмутазы, каталазы в эритро-
цитах и щелочной фосфатазы сыворотки крови при ониходистрофии у женщин в стадии отторжения ногтя / Е.В. Уразовская [и др.] // Клин. лаб. диагностика. 2010. № 8. С. 23-25.
12. Адаптационно-компенсаторные реакции в патогенезе
развития деструкции кератогиалиновой ткани ногтей / Е.В. Уразовская [и др.] // Валеология. 2011. № 1. С. 64-69.
Поступила в редакцию
13. Ким Л.Б., Путятина А.Н., Никонова И.К. Содержание
гликозамингликанов и гидроксипролина в сыворотке практически здоровых людей в зависимости от возраста, пола и группы крови // Клин. лаб. диагностика. 2011. № 6. С. 23-26.
14. Активность антиоксидантных ферментов кожи при хи-
рургических ранах / Е.В. Михальчик [и др.] // Бюл. экс-перим. биологии и медицины. 2006. № 12. С. 622-625.
15. Weakness in intercellular association of keratinocytes in se-
verely brittle nails / K. Kitamori [et al.] // Arch. Histol. Cytol. 2006. Vol. 69, № 5. P. 323-328.
31 января 2012 г
