CC BY
277
Медицинская иммунология 2011, Т. 13, № 2-3, стр. 261-266 © 2011, СПб РО РААКИ
Краткие сообщения
ВОЗРАСТНАЯ ДИНАМИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ГЕМОГРАММЫ И ИММУННОГО СТАТУСА У ДЕТЕЙ РАЗЛИЧНОГО ВОЗРАСТА
Розенберг В.Я.1, Бутыльский А.Н.1, Кузник Б.И.2
1ГУЗ «Краевой центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями», г. Чита 2 ГОУВПО Читинская государственная медицинская академия, кафедра нормальной физиологии, г. Чита
Резюме. Определялись показатели гемограммы и иммунитета (в том числе «минорные» субпопуляции лимфоцитов) у 196 здоровых детей в г. Чите и 5 районах области с предварительным отбором и многоэтапной оценкой состояния здоровья.
Из тестов, характеризующих красную кровь, вначале «стабилизируется» цветовой показатель (к 3 годам), затем общее содержание гемоглобина (к 7 годам), и только потом характеристики, свойственные эритроцитам.
Основные лейкоцитарные популяции достигают стабилизации к возрасту 11 лет, кроме числа нейтрофилов (к 15 годам). Все Т-клеточные субпопуляции, в том числе «минорные» (NKT, HLA-DR) продолжают «созревать» до 18 лет, за исключением Т-хелперов, остающихся по количеству неизменными после возраста 7 лет. IgG стабилизируются к 7 годам, а IgA и IgM — к 18 годам.
Ключевые слова: иммунитет, гемограмма, возрастная динамика, минорные субпопуляции, проточная цитометрия.
Rozenberg V.Y., ButilskiyA.N., KuznikB.I.
AGE-RELATED DYNAMICS OF HEMOGRAM AND IMMUNE PROFILE IN CHILDREN AT DIFFERENT AGES
Abstract. General parameters of blood cells and immunity (including minor lymphocyte subpopulations) were determined in 196 healthy children from Chita City and 5 districts of the Chita Region, preceded by preselection of the subjects, using multi-step health evaluation schedules.
When analyzing data on red blood cells, erythrocyte color index was found to become stable by the age of 3 years, followed by stabilization of blood hemoglobin content by the age of 7 years. RBC indices become stable at later ages..
Basic leukocyte populations reach stability by 11 years, except for the numbers of neutrophilic granulocytes (by 15 years). All the T-cell subpopulations including the minor ones (NKT, HLA-DR) continue to mature until 18 years, except for T-helpers, that become constant in their numbers after 7 years. Serum IgG levels stabilize by the age of 7 years; IgA and IgM amounts — by 18 years. (Med. Immunol., 2011, vol. 13, N 2-3,
pp 261-266)
Keywords: immunity, hemogram, age dynamics, minor subpopulations, flow cytometry.
Не подлежит сомнению, что одной из актуальнейших проблем современной медицины является иммунодиагностика и иммунопрофилактика различных заболеваний. Решение этой зада-
Адрес для переписки:
Розенберг Владимир Яковлевич 672010, г. Чита, ул. Амурская, 39. Тел.: (3022) 32-06-15.
Факс: (3022) 31-03-66.
E-mail: rovlad@inbox.ru
чи не возможно без уточнения нормы для показателей, характеризующих состояние клеточного и гуморального иммунитета в возрастном аспекте. Большинство работ, выполненных в этом направлении, охватывает незначительное число тестов [3, 6, 7, 8, 10]. Вместе с тем в настоящее время во многих лабораториях для изучения показателей иммунитета используется метод проточной цитометрии, позволяющий отслеживать ранее недоступные специалистам «минорные» субпопуляции лейкоцитов и лимфоцитов, играю-
261
Розенберг В.Я., Бутыльский А.Н., Кузник Б.И.
Медицинская Иммунология
щих существенную роль в иммунных реакциях [1, 4, 5, 12, 13]. Определение общего анализа крови в последние годы осуществляется с помощью современных гемоанализаторов, благодаря чему автоматически регистрируются основные показатели гемограммы. Однако в литературе последних лет отсутствуют сведения о том, как изменяются тесты, характеризующие состояние красной и белой крови, в возрастном аспекте. Ликвидации указанных пробелов и посвящено наше исследование.
Материалы и методы
Кровь для анализов бралась утром натощак (с использованием вакутайнеров) у 196 здоровых детей (89 мальчиков и 107 девочек) в г. Чите и 5 районах области с предварительным отбором и многоэтапной оценкой состояния здоровья по специальной методике (утверждена к использованию приказом Комитета здравоохранения Читинской области от 29.12.2005 № 447, приложение № 4) [2, 11] . Дети относились к 1 группе здоровья, имели грудное или смешанное вскармливание, получали прививки согласно графику, не имея на них реакции, планово наблюдались специалистами и были отобраны с участием участковых педиатров и аллергологов-иммунологов. При осмотре у детей отсутствовали признаки любой патологии. Среди обследованных 43 ребенка — в возрасте от 6 месяцев до 1 года, 29 детей — 1-2 года, 39 — 3-6, 23 — 7-10, 20 — 11-14 лет и 42 ребенка -15-17 лет.
У всех обследованных определялись основные показатели ОАК с использованием автоматического гемоанализатора ABX Micros 60, иммунограммы — на проточном цитометре EpicsXL-MCL фирмы Beckman Coulter (реактивы Immunotech, Франция, поставка компании «Биохиммак») с определением в двухпараметрическом анализе поверхностных маркеров лейкоцитов CD45+, CD14+, CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD56+, CD19+, CD25+, CD28+CD95+, HLA-DR+, в том числе на моноцитах. Оценивались субпопуляции Т-лимфоцитов CD3+, Т-хелперов CD3+CD4+, Т-киллеров CD3+CD8+, NK-клеток CD16+CD56+, В-клеток CD19+, активных Т-клеток и моноцитов с маркером HLA-DR+, а также минорные подгруппы — NKT CD3+CD16+CD56+, истинные цитотоксические лимфоциты (CTL) CD28+CD8+ (с определением всей популяции CD28+), клетки с регуляторной функцией CD25+CD4+ (с определением всей популяции клеток с рецептором к IL-2 — CD25+), а также экспрессирующие Fas-рецептор CD95+ (в том числе Т-хелперы), определялись показатели CD4+/CD8+, CD3+/CD19+.
Также исследовалась фагоцитарная активность нейтрофилов в тесте с поглощением латексных шариков (фагоцитарное число и фагоцитарный индекс) с оценкой до и после стимуляции проди-гиозаном в мазках после предварительной инкубации, концентрация иммуноглобулинов классов G, А, М методом турбодиметрии (реактивы Sentinel, Италия). Стандартная статистическая обработка проводилась с использованием программного пакета MS Excel.
Результаты и обсуждение
В первой серии исследований у детей разного возраста были изучены показатели общего анализа крови (табл. 1), а также проанализировано, к какому возрастному периоду наступает их стабилизация.
Значительный интерес представляет наличие четкой возрастной динамики ряда показателей общего анализа крови вплоть до достижения «точки равновесия» (стабилизации), после которой исследуемый признак практически не изменяется. Исключение из этого правила относится лишь к числу эритроцитов. Количество эритроцитов имеет два максимума — до 3-летнего возраста и с 11 до 17 лет, а минимальные значения выявляются с 3 до 10 лет. При этом изученные показатели не выходят за пределы общепринятых норм. Также обнаружено, что вначале «стабилизируется» цветовой показатель (к 3 годам), затем общее содержание гемоглобина (к 7 годам), и только потом характеристики, свойственные эритроцитам, что, несомненно, имеет свой биологический смысл. Среди лейкоцитов вначале «приходят в форму» моноциты, как наиболее «старые» участники врожденного иммунитета, а затем — нейтрофилы и лимфоциты. Заслуживает внимания тот факт, что лимфоциты «стабилизируются» в той же возрастной группе, что и тромбоциты. Это лишний раз свидетельствует о тесной связи между системами иммунитета и гемостаза [8, 9].
В дальнейшем нами было исследовано, какие сдвиги в возрастном аспекте претерпевают показатели, характеризующие состояние клеточного и гуморального иммунитета (табл. 2), и в каком возрасте наступает их стабилизация.
Из-за высокого лейкоцитоза абсолютные значения показателей иммунограммы детей до 1 года малоинформативны, поэтому необходимо обратить внимание на относительные величины.
Наши результаты подтверждают данные литературы о незрелости многих показателей иммунной системы в возрасте до 1 года [2, 3, 4, 5, 9, 14], что находит отражение в наиболее низком уровне
262
2011, Т. 13, № 2-3
Возрастная динамика иммунного статуса
ТАБЛИЦА 1. ДИНАМИКА ОБЩЕГО АНАЛИЗА КРОВИ У ДЕТЕЙ РАЗЛИЧНОГО ВОЗРАСТА (M±m)
Показатель Группа 1 6-12 мес n = 43 Группа 2 1-2 года n = 29 Группа 3 3-6 лет n = 39 Группа 4 7-10 лет n = 23 Группа 5 11-14 лет n = 20 Группа 6 15-17 лет n = 42
Лейкоциты, /мкл 11788±46023456 8962±43213456 7400±3171256 6696±44512 6240±288123 6733±281123
Лимфоциты, % 59,8±1,1 23456 50,0±1,713456 44,3±1,712456 38,3±1,6 1236 35±2,7123 32,7±1,51234
Лимфоциты, /мкл 7121±34723456 4538±29613456 3283±19512456 2590±240123 2149±174123 2185±134123
Нейтрофилы, % 29,3±1,123456 40,4±1,913456 47,5±2,012456 54,3±1,8 1236 57,2±2,8 123 59,2±1,81234
Нейтрофилы, /мкл 3378±1476 3538±1896 3505±2196 3613±236 3597±269 3973±190123
Моноциты, % 9,7±0,73456 8,6±0,934 6,8±0,612 6,4±0,712 7,0±0,81 6,9±0,71
Моноциты, /мкл 1149±943456 1083±2303456 494±4512 433±6012 439±6112 544±7812
Тромбоциты, /мкл 410±1856 382±2056 359±1256 333±1456 290±181234 271±81234
Эритроциты х 1012/л 4,78±0,063456 4,73±0,06356 4,58±0,051256 4,62±0,06156 4,91±0,061234 4,94±0,051234
Гемоглобин (Hb), г/л 121,2±1,93456 119,2±1,63456 127,4±1,512456 144,6±13,0123 141,8±2,5123 146,4±2,1123
Гематокрит (Ht), доля 0,349±0,0053456 0,358±0,005456 0,367±0,0041456 0,379±0,0051256 0,408±0,0061234 0,418±0,0051234
Средний объем эритроцита (MCV), fl (фемтолитр = 10-15 литра) 73,2± 0,823456 75,9±0,813456 80,5±0,51256 81,9±0,6126 83,2±0,9123 84,9±0,61234
Цветовой показатель 0,76± 0,0 1 3456 0,75±0,013456 0,83±0,011245 0,85±0,01126 0,86±0,01123 0,88±0,011234
Примечание. 123456 - различие достоверно между показателем в указанных группах и данной группе (р < 0,05).
Т-клеток, активных Т-клеток (CD3+HLA-DR+), Т-киллеров, соотношения CD3+/CD19+, содержания всех классов иммуноглобулинов. Минорные субпопуляции, обладающие в основном регулирующими и компенсаторными свойствами (CD3+CD16+CD56+ - NKT, CD28+CD8+ - CTL), и лимфоциты с маркером готовности к апоптозу CD95+, также отличаются минимальным процентным содержанием, не играя существенной роли в поддержании иммунного гомеостаза в этом возрасте.
В возрастной группе 1-6 лет из-за явления физиологического перекреста (после 5 лет) наблюдается снижение уровня лимфоцитов. Рост Т-клеточной популяции, сопровождающийся снижением индекса CD4+/CD8+ к 3 годам, а также числа В-клеток, указывает на уменьшение избыточной стимуляции гуморального звена, со стабилизацией продукции иммуноглобулинов на более высоком уровне. Низкое количество NK-клеток компенсируется ростом киллер-ной популяции CD3+CD8+, а также минорных групп CD3+CD16+CD56+, CD28+CD8+.
Таким образом, в возрасте до 6 лет наблюдается активизация специфического звена противовирусной защиты (Т-киллеры) в помощь врожденному (NK-клетки), в том числе с участием минорных субпопуляций лимфоцитов. После 3 лет происходит стабилизация индекса CD4+/CD8+ как за счет резкого снижения уровня Т-хелперной популяции, так и роста процента Т-киллеров.
В возрастной группе старше 7 лет продолжается постепенное падение числа лейкоцитов и лимфоцитов до уровня взрослых, причем лимфоцитарный пул стабилизируется в группе 11-14 лет. За счет этого снижаются количественные (но не процентные) характеристики ряда субпопуляций (Т-клетки, Т-хелперы, Т-киллеры, лимфоциты с антиапоптотическим маркером CD28+), что говорит об их стабильном функционировании с предыдущего возрастного этапа. Появляются признаки увеличения популяции CD25+, что может отражать формирование адекватной реакции лимфоцитов на IL-2 и рост влияния CD25+CD4+. Также возрастает и выходит на стабильный уро-
263
Розенберг В.Я., Бутыльский А.Н., Кузник Б.И.
Медицинская Иммунология
ТАБЛИЦА 2. ПОКАЗАТЕЛИ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ РАЗНОГО ВОЗРАСТА (M±m)
Показатель Группа 1 6-12 мес n = 43 Группа 2 1-2 года n = 29 Группа 3 3-6 лет n = 39 Группа 4 7-10 лет n = 23 Группа 5 11-14 лет n = 20 Группа 6 15-17 лет n = 42
CD3+, % 71,2±1,223456 75,8±1,51 75,8±1,11 76,7±1,21 76,7±1,41 74,2±1,01
CD3+, /мкл 5043±24923456 3397±22613456 2486±14712456 1976±180123 1649±138123 1627±105123
CD3+4+, % 45,0±1,2 45,2±1,335 41,8±1,112 42,6±1,9 41,3±1,812 43,8±1,0
CD3+CD4+, /мкл 3153±15723456 2055±14813456 1394±10112456 1075±91123 877±76123 960±63123
CD3+CD8+, % 22,0±1,03456 24,8±1,1345 28,1±1,1126 28,4±1,2126 30,0±1,0126 25,6±0,71345
CD3+CD8+, /мкл 1595±11 723456 1127±8213456 913±551256 760±96126 649±60123 566±401234
Соотношение CD4+/CD8+ 2,23±0,1123456 1,92±0,111345 1,57±0,08126 1,60±0,1312 1,43±0,10126 1,77±0,08135
Соотношение CD3+/CD19+ 3,86±0,3423456 5,42±0,581456 5,56±0,381456 7,29±0,65123 9,46±1,021236 6,64±0,401235
CD3-CD19+, % 21,8±1,1 23456 17,3±1,41456 15,6±0,91456 11,8±0,81235 9,5±0,812346 12,9±0,81235
CD3-CD19+, /мкл 1553±11 523456 796±903456 519±4512456 310±361235 202±241234 282±26123
CD16+CD56+, % 6,7±0,6456 5,8±0,73456 7,9±0,72456 10,9±1,4123 12,7±1,3123 11,2±1,0123
CD16+CD56+, /мкл 507±6223456 270±381 256±291 282±421 280±421 238±231
CD3+CD16+56+, % 1,3± 0,13456 1,6±0,23456 2,5±0,3126 3,2±0,412 3,1±0,312 3,4±0,4123
CD3+CD16+CD56+, /мкл 93±112 65±71 82±11 94±25 70±10 78±11
CD3+HLA-DR+, % 1,0±0,123456 1,8±0,3156 1,9±0,2156 2,2±0,3156 3,1±0,41234 3,1±0,31234
CD3+HLA-DR+, /мкл 70±9 76±13 58±6 60±9 68±9 65±7
CD28+CD8+,% 3,5±0,33456 4,6±0,645 5,3±0,414 6,4±0,4123 6,0±0,512 5,5±0,41
CD28+CD8+,/мкл 260±293456 200±2756 164±1116 160±1416 134±1712 119±131234
CD28+CD8-,% 30,9±1,36 32,4±1,1 31,9±1,0 33,7±1,5 31,1±1,2 34,1±1,11
CD28+CD8-, /мкл 2173±13723456 1443±9913456 1025±6012456 849±68123 671±63123 738±51123
CD95+CD4+,% 0,15±0,0223456 0,27±0,051356 0,44±0,07126 0,32±0,0516 0,55±0,13126 0,78± 0,1212345
CD95+CD4+, /мкл CD 1+ СТ) 12±2 13±2 8±26 12±3 17±314
CD95+CD4- % 0,07± 0,0 1 2356 0,15±0,041 0,20±0,051 0,12±0,02 0,19±0,051 0,15±0,031
CD95+CD4-, /мкл 5±1 6±2 6±1 3±1 4±1 3±1
CD25+CD4+, % 4,8±0,3456 4,4±0,33456 5,4±0,3 2456 6,7±0,5123 7,1±0,7123 7,5±0,5123
CD25+CD4+, /мкл 337±2323456 197±201 173±131 162±131 151±161 167±161
264
2011, Т. 13, № 2-3 Возрастная динамика иммунного статуса
Таблица 2 (окончание)
Показатель Группа 1 6-12 мес n = 43 Группа 2 1-2 года n = 29 Группа 3 3-6 лет n = 39 Группа 4 7-10 лет n = 23 Группа 5 11-14 лет n = 20 Группа 6 15-17 лет n = 42
CD25+CD4-, % 2,4±0,23456 2,4± 0,33456 3,6±0,4124 4,5±0,5123 4,9±0,612 3,6±0,412
CD25+CD4-, /мкл 179± 2 1 23456 105±161 115±1316 110±1116 112±1716 79±101345
Моноциты с HLA-DR 71,0±2,0356 72,3±2,5356 77,8±1,41256 76,2±2,256 82,3±1,41234 81,1±1,41234
Фагоцитарный индекс, базальный 3,0±0,1 3,3±0,2 3,2±0,2 3,2±0,2 2,9±0,3 2,9±0,1
Фагоцитарный индекс, стимулир. 3,4±0,1 3,7±0,2 3,4±0,2 3,6±0,2 3,7±0,3 3,4±0,1
Фагоцитарное число, базальное 36,4±1,9 35,3±2,4 35,2±1,6 37,5±2,6 35,9±2,0 35,9±1,6
Фагоцитарное число, стимулир. 44,0±2,1 40,7±2,5 41,3±1,6 43,4±2,5 43,4±1,6 41,5±1,7
IgA, г/л 0,40±0,073456 0,41±0,063456 1,02±0,1012456 1,50±0,131236 1,65±0,14123 1,87±0,101234
IgM, г/л 0,82±0,063456 0,92±0,07346 1,13±0,0812 1,24±0,1112 1,10±0,111 1,20±0,0712
IgG, г/л 6,68±0,4123456 8,37±0,5813456 9,94±0,5612456 12,13±0,60123 11,60±0,68123 12,68±0,46123
Примечание. 12345 - различие достоверно между показателем в указанных группах и данной группе (р < 0,05).
вень процент NK-клеток CD16+CD56+, сигнализируя о созревании этого важного звена неспецифической защиты. Продолжается уменьшение субпопуляции CD19+ на фоне роста IgG, свидетельствующее о растущих функциональных возможностях В-клеток. То же можно сказать о мо-ноцитарной активности по возросшей популяции HLA-DR+ моноцитов, стабилизирующейся к 11 годам.
Интересно, что показатели фагоцитоза во всех возрастных группах практически одинаковы, что может говорить об их формировании уже к концу первого полугодия жизни.
В целом можно считать, что с 7 до 17 лет происходит дальнейшее созревание иммунной системы и во врожденном, и в адаптивном звене защиты.
Выводы
1. Стабилизация показателей красной крови в возрастном аспекте осуществляется неравномерно: вначале «стабилизируется» цветовой показатель (к 3 годам), затем общее содержание гемоглобина (к 7 годам), и только потом характеристики, свойственные отдельным эритроцитам. При этом наблюдается два пика максимального
содержания эритроцитов — в возрасте до 3 лет и в 11-17 лет.
2. Основные лейкоцитарные популяции достигают стабилизации к возрасту 11 лет, кроме числа нейтрофилов, содержание которых стабилизируется к 15 годам.
3. Все Т-клеточные субпопуляции, в том числе «минорные» (NKT, HLA-DR), продолжают «созревать» до 18 лет, за исключением Т-хелперов, содержание которых не изменяется после возраста 7 лет.
4. Концентрация IgG стабилизируется к семи, а IgA и IgM — к 18 годам.
Список литературы
1. Бобкова М.Р. Иммунитет и ВИЧ-инфекция. — М.: Олимпия-Пресс, 2006. — С. 112121.
2. Бутыльский А.Н. Особенности иммунитета и гемостаза у здоровых и ВИЧ-инфицированных жителей Читинской области // Дис. ... канд. мед. наук. — Чита, 2007.
3. Вельтищев Ю.Е., Ветров В.П. Объективные показатели нормального развития и состояния здоровья ребенка (нормативы детского возраста) // М.: Московский НИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РФ. — 2000; 96. — С. 26-42.
265
Розенберг В.Я., Бутыльский А.Н., Кузник Б.И.
Медицинская Иммунология
4. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология. — М.: ООО «Медицинское информационное агенство», 2003. — С. 56-69.
5. Земсков А.М., Земсков В.М., Караулов А.В. Клиническая иммунология. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - С. 288-292.
6. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. Л. Йегера, в 3-х томах. — М.: Медицина, 1990. — Т. 1. — С. 94, 126.
7. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. Г. Лолора-младшего и др. — М.: Практика, 2000. — С. 607-624, 687.
8. Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цыбиков Н.Н. Иммунитет, гемостаз и неспецифическая резистентность организма. — М.: Медицина, 1989. — С. 67-69.
9. Кузник Б.И., Максимова О.Г. Общая гематология, гематология детского возраста. — Ростов-на-Дону: Феникс, 2007. — 575 с.
10. Розенберг В.Я. HLA-антигены, иммунитет и гемостаз у здоровых людей. Дис. ... канд. мед. наук. — Чита, 1998.
11. Розенберг В.Я., Бутыльский А.Н. Возрастные особенности иммунного статуса здоровых жителей Забайкалья // Иммунология. — 2007. — Т. 28, № 3. — С. 177-180.
12. Сепиашвили Р.И. Основы физиологии иммунной системы. — М.: Медицина-Здоровье, 2003. — С. 40-47, 173-181.
13. Шабашова Н.В. Лекции по клинической иммунологии. — СПб.: Фолиант, 2002. — С. 38-48.
14. Ярилин А.А. Основы иммунологии. — М.: Медицина, 1999. — 607 с.
поступила в редакцию 27.11.2010 отправлена на доработку 20.12.2010 принята к печати 10.01.2011
266
