CC BY
231
Обзоры
ОБЗОРЫ
Возможные пути реализации регенерационной стратегии при лечении сахарного диабета I типа методами клеточной трансплантации
АР. Закирьянов, НА. Онищенко Лаборатория биотехнологии стволовых клеток
ФГУ НИИ Трансплантологии и искусственных органов Росздрава, Москва
Possible pathways of гедепег ative strategy in correction of type I diabetes mellitus by methods of cell transplantation
A.R. Zaklryanov, NA. Onishchenko
The stem cell biotechnology laboratory Research Institute of transplantology and artificial organs, Moscow
В обзоре представлены современные концепции физиологической и репаративной регенерации р-клеток и островков Лангер-ганса поджелудочной железы при сахарном диабете I типа. Рассмотрены современные подходы к восполнению пула утраченных р-клеток за счет аллогенной трансплантации островковых клеток, а также In vitro дифференцировки взрослых прогениторных клеток поджелудочной железы и эмбриональных стволовых клеток; проанализированы возможные пути индукции In vivo тканеспецифичной регенерации и устранения дизрегуляции иммунной системы при сахарном диабете I типа с помощью терапии стволовыми клетками костного мозга и пуповинной крови.
Ключевые слова: сахарный диабет I типа, регенерационная клеточная терапия, р клетки, островки Лангерганса, репликация, неогенез, стволовые клетки.
This review describes up to date concepts of pancreatic p-cell and islets ofLangerhans physiological and reparative regeneration during type
p
population with transplantation of allogenic Islet cells, in vitro differentiated adult pancreatic progenitors or embryonic stem cells are considered. Possible pathways of In vivo tissue regeneration Induction or Immune correction In type I diabetes mellitus with bone marrow and cord blood stem cell therapy are analyzed.
Key words: type I diabetes mellitus, regeneration cell therapy, ^cells, islets of Langerhans, replication, neogenesis, stem cells.
По современным представлениям, сахарный диабет (СД) I типа - это хроническое аутоиммунное воспаление островков Лангерганса (ОЛ) [1 8], следствием которого является нарушение процессов регенерации, деструкция и гибель р клеток ОЛ [9, Ю] с развитием абсолютной инсулиновой недостаточности и гипергликемии.
Неэффективность процессов восстановительной реге нерации в ОЛ в значительной степени обусловлена и под держивается глубокими нарушениями функций иммунной системы, которая, будучи филогенетически наиболее древ ней интегративной системой организма, более других от ветственна за регуляцию морфогенеза и структурного гомеостаза [1117].
Регенерационная способность р-клеток
островков Лангерганса поджелудочной железы
На долю ОЛ приходится около 2% массы поджелудочной железы (ПЖ) и, в отличие от экзокринной части, ОЛ обла дают выраженной регенерационной способностью. Суще ствует ряд прямых и непрямых доказательств постоянного р
индуцируется уровнем гликемии и регулируется процесса ми пролиферации, регенерации и апоптоза [9, 18 20].
Показано, что уже на ранних стадиях СД I типа под действи ем факторов аутоиммунной агрессии, а также с помощью ме ханизмов апоптоза и некроза [1] наступает гибель большей части р клеток ОЛ. Возросшую потребность тканей в инсу лине организм на начальных этапах пытается компенсиро вать путем запуска процессов репаративной регенерации и
р
менной (до 7 10 месяцев) клинической ремиссией заболе вания, известной как фаза «медового месяца» (honeymoon phase) [21, 22]. Частичная клиническая ремиссия заболе вания со снижением суточной потребности в экзогенном инсулине описана у 43 80% пациентов с СД I типа [23 25], причем ее механизм связывают с частичным восстановле
р
тественном течении заболевания носит, однако, временный характер, так как под воздействием факторов прогрессиру р
рировать со скоростью, равной скорости их гибели, и возни кает стадия развернутого клинического течения СД I типа.
Адрес для корреспонденции:
Закирьянов Артур Русланович. Москва, ул. Академика Волгина кор. 37 ком. 12 17. Моб. тел.: 8 926 533 66 84; раб. тел.: 8 499 190 45 31; е mail: logart@mail.ru
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, № 2, 2007
Обзоры
Между тем, даже на этой стадии драматического сни жения пула р клеток в организме параллельно с процес сами гибели инсулин продуцирующих клеток, некоторые исследователи отмечают косвенные признаки их регене рации и неогенеза. Так, \Л/. 6ер1в (1965) наблюдал митоти р
из 23 аутопсийных исследований ПЖ больных, погибших от СД I типа (27). При резекции сегмента ПЖ, выполненной у 89 летнего больного с СД I типа в связи с развитием эпи телиальной неоплазии, в свободной от опухоли ткани ПЖ р
тителами к инсулину и Ю 67 - маркеру пролиферативной активности клеток (28). В практике также описываются еди ничные случаи полной клинической ремиссии у больных на фоне предсуществующего длительного течения СД I типа в анамнезе, что косвенно указывает на возможность полно ценной регенерации ОЛ ПЖ (23, 29, 30]. р
периментальных моделях у животных: после частичной ре зекции ПЖ (31 ], при перевязке протоков ПЖ (32], введении стрептозотоцина (ЭТТ!) и аллоксана (33, 34], в условиях ги пергликемии при хронической инфузии глюкозы (35], а также на трансгенных мышах с гиперпродукцией у интерферона [36] и И6 [37].
р
ток и островковых клеток (ОК) в ПЖ, как у новорожденных, так и у взрослых крыс и мышей с СД I типа возникает вслед ствие следующих механизмов [38]: р
ференцировки внугриостровковых прогениторных/стволовых клеток, а также дедифференцировки соматостатин содер жащих 8 клеток);
- пролиферации эпителиальных клеток протоков и их пос
р
а также посредством созревания прогениторных/стволовых клеток, локализующихся внутри или вокруг протоков ПЖ;
- дедифференцировки ацинарных клеток и последующей
р
неза ОК за счет трансдифференцировки ацинарных клеток;
р
ОЛ (рис.).
В ряде работ была подвергнута сомнению возможность участия прогениторных клеток ПЖ в процессах новооб
разования р клеток и показано, что репликация инсулин продуцирующих клеток является основным механизмом,
р
сы в постнатальном периоде [40 42].
Однако, более поздние исследования, проведенные S. Bonner Weir и A. Sharma (2006), доказали, что реплика ция является не единственным механизмом постнатальной р
ных крыс в период с 20 го по 31 й день после рождения авторы наблюдали более чем трехкратное увеличение об рр образованны не в результате их собственной репликации. Также было показано, что после введения Brdll (5 bromo 2 deoxyuridine), маркера клеточной пролиферации, крысам с 90% резекцией ПЖ в первую очередь позитивная флю оресценция появлялась в области эпителиальных клеток протоков ПЖ [44].
р
риоде путем их репликации и неогенеза, очевидно, функцио нируют у всех животных, однако они могут иметь различный вклад у разных видов. У человека компенсаторное увеличе р
сокой инсулиновой резистентности в ответ на ожирение, а также при беременности [19, 45]. Полагают, что в механиз р
играет более важную роль, чем репликация [46, 47], так как на гистологических срезах ткани ПЖ людей, страдавших ожирением, очень редко наблюдаются увеличенные в раз мерах ОЛ, при этом описываются множественные внутри дольковые выводные протоки, в составе выстилки которых были обнаружены инсулин содержащие клетки [43].
На сегодняшний день существует ряд косвенных дока зательств того, что в ПЖ взрослого человека может проис
р
р
только у больных СД I типа, но и у здоровых людей [45, 47]. В связи с этим, логично утверждать, что параллельно с про цессами разрушения эндокринных клеток в норме в ПЖ человека должны протекать процессы регенерации, направ р
уровне. Основные терапевтические подходы, основанные на р
быть направлены на стимуляцию регенерации и восстановление
Рис.
Возможные механизмы регенерации р-клегок поджелудочной железы.
По [39] с изменениями
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 2, 2007
Обзоры
пула p клеток, а также на ингибирование р клеточного апоп тоза и/или коррекцию иммунных нарушений [1, 4].
В многочисленных экспериментальных работах на живот ных было показано, что некоторые белки и гастроинтестиналь ные гормоны могут выступать в качестве терапевтических
р
vivo. Среди них выделяют: INGAP (протеин гена неогенеза островков) (48), глюкагоноподобный полипептид 1 (GLP 1) и exendin 4 (Ex 4, агонист рецептора GLP 1) (49), сочета ние бетацеллюлина (ВТС, член семейства EGF) и активина А р
мальный фактор роста) (51]. Применение INGAP, пептидного фрагмента Reg белка ПЖ, приводит к кратному увеличению ОК у мышей с СД I типа (48]. GLP 1/Ех4 обладают спо собностью повышать секрецию инсулина, стимулировать
р
их апоптоз (49]. В опыте ВТС стимулирует пролиферацию р
р
Возможность и эффективность применения гормонов и белков для стимуляции увеличения массы р-клеток при СД I типа у человека пока мало изучена. Не так давно были опи саны результаты клинического применения INGAP при СД I типа (53]. Несмотря на то, что на фоне проводимой терапии у больных наблюдалось незначительное повышение уровня С пептида, в целом исследователи не отмечали выражен ного клинического эффекта.
Показано, что некоторые факторы роста способны сти мулировать in vitro процессы новообразования инсулин про дуцирующих клеток путем запуска процессов репликации р
гениторных/стволовых клеток ПЖ. Среди них выделяют: HGF (фактор роста гепатоцитов) (54], EGF (эпидермальный фак тор роста) (52], IGF 1 или 2 (инсулиноподобный фактор роста 1, 2) (55], TGF а (трансформирующий фактор рос та альфа) (56]. Несмотря на то, что результаты экспери ментальных работ демонстрируют высокую эффективность этого направления, остается много вопросов, которые ог раничивают применение рекомбинантных факторов роста с
р
последующей клеточной трансплантации. В частности, от сутствуют четкие указания, какой фактор роста, в каких ко личествах и на каких этапах культивирования клеток ПЖ необходимо использовать. Кроме того, современные мето ды получения рекомбинатных факторов роста являются крайне дорогостоящей процедурой.
р
шенную чувствительность к апоптозу (57, 58]. Следова тельно, несмотря на возможность активации процессов реп р
фоне повышенного апоптоза будет происходить постоянная
рр ной массы. С этой точки зрения регенерационная терапия СД I типа должна быть комплексной и сочетаться с методами, направленными на ингибирование апоптоза и иммунных дизрегуляций (59]. Недавние экспериментальные исследо вания показали (60], что сочетанное применение лизофилли на - для подавления аутоиммунитета и Ех4 - для усиления р
NOD мышей, что проявлялось снижением гипергликемии до нормальных цифр, повышением секреции инсулина, улуч р
апоптоза. Согласно полученным результатам, эугликемия наблюдалась у животных в течение 5 мес. В другом иссле довании (61] мышам линии NOD с аутоиммунным СД под кожно вводили адъювант Фрейнда, после чего проводили внутривенную инфузию донорских сингенных спленоцитов.
Для контроля уровня гликемии проводили трансплантацию аллогенных ОК под капсулу почки. На 40 й день после уда ления почки с графтом ОК в экспериментальной группе жи вотных с одновременным введением живых спленоцитов уровень глюкозы оставался на уровне нормогликемии, в отли чиє от контрольной группы животных с введением облученных спленоцитов, у которых отмечалось нарастание гликемии. При мечательно, что при удалении почки с графтом ОК на 120 й день у животных как в контрольной, так и в эксперименталь ной группе авторы отмечали длительную реверсию СД на фоне продолжительной нормогликемии, а в ПЖ наблюдалась реге нерация р клеток и ОЛ. Иммуногистохимически было показа но, что живые донорские спленоциты мигрируют в область ОЛ, эпителий протоков и экзокринную часть ПЖ, где, по мнению
р
Вместе с тем, в аналогичных работах трех независимых групп исследователей (62 64] было доказано, что регене р
ровки мезенхимальных спленоцитов, как считалось ранее. Несмотря на то, что исследователям не удалось найти источ р
животных, ими было высказано мнение, что введение адъю ванта приводит к подавлению аутоиммунитета, направлен р
в почке. При этом на фоне снижения иммунной дизрегуляции
р
пролиферации инсулин продуцирующих клеток и/или диф ференцировки прогениторных/стволовых клеток ПЖ (65].
Таким образом, имеющиеся наблюдения свидетельству ют о том, что развитие и прогрессирование СД I типа часто происходит на фоне сохраняющихся в ПЖ потенциальных ре р
вовлеченными в процесс репаративной регенерации этих клеток.
Основные подходы к осуществлению регенерационной терапии СД I типа и его осложнений
Успехи в лечении СД I типа и его осложнений, достигну тые при трансплантации аллогенных и ксеногенных ОК ПЖ, вновь подчеркнули актуальность проблем дефицита до норского материала и поиска новых источников получения до
р
ток для трансплантации.
В связи с этим, в последние годы стали активно разра батываться и изучаться новые методы регенерационной клеточной терапии, предусматривающие выделение и ex vivo предифференцировку эмбриональных и прогениторных/ стволовых клеток ПЖ. Эти клетки обладают более высоким пролиферативным потенциалом, чем зрелые дифференциро ванные ОК ПЖ и поэтому могут оказаться более пригодным материалом для получения достаточных количеств функцио р
пуповинной крови также являются материалом, пригодным для более выраженной активизации в сохранившихся клет ках ПЖ собственного резерва регенерации и пролиферации, а также коррекции аутоиммунных нарушений, лежащих в основе патогенеза СД I типа.
Трансплантация островковых клеток поджелудочной железы
Терапия СД I типа путем пересадки ОК, выделенных из ПЖ взрослых доноров, разрабатывается уже более 30 лет. По данным Международного регистра трансплантаций ОК ПЖ, за период с 1974 по 2000 г. в мире было выполнено 445 аллогенных трансплантаций ОК (66]. По сравнению с органной аллотрансплантацией ПЖ, полученные результаты
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 2, 2007
Обзоры
были весьма неутешительными, так как из 267 переса док аллогенных ОК, выполненных с 1990 по 1998 г., пе риод инсулиновой независимости больше 1 года наблюдался лишь у 8% больных с СД I типа [67].
В 2000 году группой A. Shapiro et al. [68] был разрабо тан протокол (the Edmonton protocol) трансплантации OK, выделенных из ПЖ двух и более трупных доноров, с приме нением щадящей схемы иммуносупрессии и без использова ния глюкокортикостероидов. Согласно данному протоколу, больным СД I типа была выполнена интрапортальная пере садка изолированных ОК в количестве 110ОО IEQ/кг. Под держивающая терапия включала малые дозы такролимуса с сиролимусом. Индукционная терапия проводилась весь 10 недельный трансплантационный период с помощью блокатора рецептора IL 2 (даклизумаб). Все 7 пациентов (100%) оставались инсулин независимыми в период на блюдения (в среднем около 14 мес.) и при этом имели нор мальный уровень гликированного гемоглобина. По данным других зарубежных клинических центров, зарегистрирован ных в Международном регистре трансплантаций ОК ПЖ, процент успешно проведенных операций с достижением инсулин независимости до 1 года составил 50 80% [69]. За последние 5 лет более чем 471 больному с СД I типа была выполнена аллотрансплантация ОК по Эдмонтонскому про токолу в 43 клиниках по всему миру [70].
Последующее наблюдение за пациентами показало постепенное снижение функции трансплантанта ОК ПЖ. У половины из успешно пролеченных больных с СД I типа пе риод инсулин независимости наблюдался до 2 лет и только у 7,5% до 5 лет [71].
Несмотря на положительные моменты в плане поддер жания инсулин независимости у больных СД I типа в течение 1 года и более, следует отметить и отрицательные стороны аллогенной трансплантации изолированных ОК ПЖ: по жизненная необходимость приема иммунодепрессантов, обладающих токсическим действием не только на почки реципиента, но и на трансплантат ОК; отсутствие необходи мого числа пригодных донорских органов, что не позволяет выполнить значительное количество таких пересадок. Отсут ствие реальной возможности проведения повторных трансплантаций, в том числе из за их высокой стоимости и возникновения нового хирургического риска, не дает шанса оценить результаты длительного влияния ретрансплантаций изолированных ОК на вторичные осложнения СД I типа [72]. В недавно выполненном клиническом исследовании [73] приведены четкие доказательства возникновения очагового стеатоза печени после интрапортальной трансплантации аллогенных ОК ПЖ.
Показано [74], что графты аллогенных ОК, применяемые у больных СД I типа согласно Эдмонтонскому протоколу, во всех случаях содержали незначительное количество донор ских экзокринных клеток и эпителиальных клеток протоков ПЖ. Начиная с 1999 г. авторами этого исследования про водилась оценка клеточного состава трансплантатов алло генных человеческих ОК, введенных 83 больным СД I типа. Наблюдалась положительная корреляция между количе ством пересаженных эпителиальных клеток протоков ПЖ и длительным метаболическим улучшением, которое отслежи вали у пациентов путем проведения глюкозо толерантного теста в течение 2 лет после аллотрансплантации ОК. Было высказано мнение, что эпителиальные дуктальные клетки (прогениторы), находящиеся в аллогенном графте ОК, иг
р
в длительности выживания трансплантанта ОК.
Трудности терапии СД I типа, связанные с отсутствием необходимого числа доноров, пытаются разрешить с помо щью ксеногенной трансплантации ОК ПЖ [75]. Большой и
многолетний клинический опыт применения гормонально активных культур ксеногенных ОК ПЖ имеется в ФГУ НИИТ и ИО Росздрава [72, 76]. В качестве донорского материала для клинических трансплантаций используются ОК, выделен ные из ПЖ новорожденных кроликов. Согласно полученным результатам, возможность регулярного (каждые 6 12 ме сяцев) и многолетнего введения пациентам, страдающим СД I типа, культур ОК ПЖ новорожденных кроликов позволяет на многие годы отодвинуть наступление терминальных стадий диабетических ангиопатий, а также снизить гипергликемию и стабилизировать течение лабильных форм СД. По мнению авторов [77], под влиянием пересадки ксеногенных неона тальных ОК может происходить мобилизация пролифератив ного пула эпителиальных (прогениторных) клеток протоков собственной ПЖ больных СД I типа и последующая их диф р
натальные ОК могут продуцировать не только инсулин, но и тканеспецифические пептиды и факторы роста, которые
р
ток в ПЖ реципиента, тем самым регулируя метаболические процессы в организме [78].
Однако будучи эффективным способом коррекции ги пергликемии и вторичных диабетических осложнений, трансплантация ксеногенных ОК ПЖ сталкивается с необ ходимостью решения ряда дополнительных проблем, таких как несовместимость пары донор реципиент, которая сокра щает сроки терапевтического эффекта, и риск для больного подвергнуться зоонозной инфекции при использование ксе ногенного материала [79].
Предварительное получение in vitro инсулин продуцирующих клеток -производных эмбриональных стволовых клеток
Известно, что эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) человека плюрипотентны и обладают высоким пролифера тивным потенциалом. Получают ЭСК из внутренней клеточной массы (эмбриобласта) донорских эмбрионов на стадии ран ней бластоцисты [80].
Ряд экспериментальных работ сообщает об успешных опытах по направленной дифференцировке человеческих и животных ЭСК in vitro в функционально активные инсулин продуцирующие клетки [81 83]. Авторы используют раз личные подходы для получения необходимой популяции ЭСК, способной дифференцироваться в инсулин продуцирующие клетки: подбор условий культивирования [83 86]; сверхэк спрессию основных транскрипционных факторов, таких как Рах 4 и Pdx 1 [87 89]; отбор клеток путем трансфекции гена резистентности к антибиотикам, запускаемого под кон тролем промотора инсулина или Nkx 6.1 [81, 90].
Было показано, что более эффективным способом по лучения инсулин продуцирующих клеток является селекция ЭСК, экспрессирующих нестин - промежуточный филамен тный маркерный белок нервных стволовых клеток [83, 84, 88, 89]. Данный метод отбора ЭСК был получен в результате модификации протокола, первоначально предназначенно го для нейрональной дифференцировки [91], который ос
р
эмбрионального развития могут происходить от общей попу ляции нестин экспрессирующих клеток предшественников. В некоторых исследованиях было показано [84, 87], что введение мышам с СД I типа островковоподобных клас теров клеток, полученных путем дифференцировки ЭСК, экспрессирующих нестин, приводило к снижению у них гипергликемии.
Позже было показано, что большинство инсулин пози тивных клеток, полученных согласно данному протоколу, не
Обзоры
синтезировали инсулин de novo и в большинстве случаев экзогенный инсулин концентрировался клетками из куль туральной питательной среды, который затем выделялся апоптотическими клетками [92, 93]. Более того, было по казано, что полученные инсулин экспрессирующие клетки имели нейрональные характеристики. Несмотря на то, что дифференцированные клетки были инсулин позитивны ми, в них слабо определялась инсулиновая мРНК, а С пептид, побочный продукт синтеза инсулина, и секреторные гра нулы не определялись. В связи с этим стало очевидно, что иммуногистохимическое исследование только инсулина (без демонстрации С пептида) не является надежным методом определения панкреатической дифференцировки in vitro и лишь применение методов оценки de novo синтеза инсули на с использованием маркировки С пептида демонстриру р
Принимая во внимание, что в проведенных исследова ниях была показана селекция нестин позитивных прогени торных клеток, а также тот факт, что нервные стволовые клетки человека в норме способны продуцировать малые количества инсулина [94], возможно, что инсулин в остро вковоподобных кластерах клеток появлялся в результате аберрантной нейрональной дифференцировки. Тем не менее, эти клетки имеют очень малое внутриклеточное содержа ние инсулина по сравнению с нормальными инсулин про дуцирующими клетками ПЖ и характеризуются неполной р
нованные на селекции нестин позитивных ЭСК, являются невоспроизводимыми (в связи с тем, что полученные клет ки уже коммитированны к дальнейшей дифференцировке в нервном направлении) и не подходят для дальнейшего р
Более естественный подход к получению in vitro панкре этических клеток предшественников и, в конечном итоге,
р
основан на начальной коммитированности ЭСК к дефини тивной эндодерме, имитирующей дифференцировку инсу лин продуцирующих клеток ¡n vivo. Данный подход является сложным, так как спонтанная дифференцировка ЭСК in vitro направлена по нейроэктодермальному пути чаще, чем по мезодермальному или эндодермальному пути. С этой точки зрения, потенциально важным является недавнее сообще ние о том, что в эмбриональных тельцах возможна активация эндодермального пути дифференцировки при культивиро вании их в бессывороточных средах с добавлением активина А [95]. Было показано, что культивирование эмбриональных телец, выделенных из ЭСК, в присутствии стадийно специфи ческой концентрации монотиоглицерола в бессывороточных условиях, приводит к развитию популяции клеток, экспрес сирующей инсулин I, инсулин II, Pdx 1 и Sox 17 [эндодермаль ный маркер) [96]. Иммуногистохимическое исследование по казало низкое внутриклеточное содержание инсулина, а его de novo продукция была подтверждена визуально путем С пептид маркировки. Добавление в культуру факторов дифференцировки: активина А, никотинамида и Ех 4, при вело к увеличению количества инсулин позитивных клеток до 2,73% от общей популяции, по сравнению с контрольной культурой, где количество инсулин позитивных клеток уве личилось за тот же период менее чем на 1 %.
В настоящее время ЭСК не применяются в регенера ционной терапии СД I типа в связи с проблемами, возни кающими при их трансплантации: с тератогенностью ЭСК, необходимостью использования иммуносупрессии, но главное с нерешенностью этических и правовых проблем получения и использования ЭСК в клинике.
Получение in vitro инсулин продуцирующих клеток - производных прогениторных/стволовых клеток ПЖ
На сегодняшний день существует множество прямых и непрямых доказательств существования прогениторных/ стволовых клеток в области протоков и ОК ПЖ взрослого человека.
Известно, что во время эмбриогенеза ОЛ развиваются из прогениторных/стволовых клеток, ассоциированных с дуктальным эпителием ПЖ. Следуя этой гипотезе, исследо вательская группа V. Ramiya et al. (2000) впервые обнару жила в культуре эпителиальных клеток протоков ПЖ NOD/Uf мышей полипотентные прогениторные/стволовые клетки, которые в процессе длительного культивирования образо вывали островковоподобные кластеры, характеризующиеся экспрессией глюкагона, инсулина и содержащие — р, 8 клетки [97]. Последующая трансплантация полученных функцио нальных ОК диабетическим NOD мышам приводила к дли тельному снижению у них гипергликемии и регрессу СД I типа. Несмотря на это, уровень экспрессии инсулина в опытных ОК был очень низким.
В ряде работ [98, 99] неогенез ОК также был показан в культуре ткани протоков, выделенных из ПЖ человека. Данный метод основан на культивировании остаточной фракции смешанных клеток ПЖ, полученной после выде ления ОК. На первом этапе клетки наращивали в культуре, что приводило к формированию клеточного монослоя, со держащего большей частью цитокератин (СК) 19 пози тивные эпителиальные клетки протоков, а также некоторое количество мезенхимоподобных и эндокринных клеток ПЖ. В дальнейшем полученную клеточную культуру подвер гали дифференцировке путем нанесения на ее поверхность тонкого слоя внеклеточного матрикса (Matrlgel) и добавле ния бессывороточной среды с никотинамидом. Такое сочета ние условий приводило к формированию островково подоб ных трехмерных кластеров, от которых «отпочковывались» ОК. Культивированные человеческие островковые «почки» [the cultivated human islet buds CHIBs) содержали преиму щественно инсулин и глюкагон позитивные эндокринные клетки, а также СК 19 позитивные эпителиальные клетки. Несмотря на то, что уровень экспрессии гена инсулина в CHIBs составлял около 5% (по сравнению с нормальными ОК ПЖ), они были способны секретировать инсулин в зави симости от уровня глюкозы в культуре. Помимо этого CHIBs обладали ограниченным репликативным потенциалом.
В экспериментальных исследованиях in vivo показано, что комбинированное применение EGF и гастрина стимулирует пролиферацию эпителиальных клеток протоков и их диффе ренцировку в ОК [100]. Показано, что добавление данной комбинации гормона и фактора роста в культуру ОК челове ка, частично содержащую клетки экзокринных протоков, при
р
клеточной популяции и ее пролиферации в данном экспе рименте подтвердил, что увеличение числа инсулин про дуцирующих клеток в культуре возникало в результате дифференцировки клеток протоков чаще, чем путем реп р
эндокринной дифференцировки также может быть акти вирован in vitro в клетках протоков ПЖ человека путем эктопической экспрессии нейрогенина 3 (Ngn 3) - одного из главных транскрипционных факторов развития эндокрин ной части ПЖ [101 ].
В настоящее время исследования, касающиеся культи вирования клеток экзокринных протоков ПЖ человека с це
р
в связи с тем, что имеется множество вопросов, требующих предварительного решения. Так например, неизвестно,
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 2, 2007
Обзоры
существуют ли в ткани экзокринных протоков ПЖ взросло го человека истинные прогениторные/стволовые клетки, способные дифференцироваться в эндокринные клетки и способны ли эпителиальные клетки протоков утрачивать свой
р
ческие маркеры, по которым возможно идентифицировать прогениторные/стволовые клетки ПЖ, пока не установле ны. По мнению R. Gao et al. (2003), в качестве возможных прогениторных/стволовых клеток ПЖ могут выступать СК 19 позитивные эпителиальные клетки экзокринных протоков, а использование бессывороточной среды, нико тинамида и внеклеточного матрикса должно быть обяза тельным компонентом при культивировании клеток для их дальнейшей дифференцировки (99). В другом исследова нии A. Suzuki et al. (2004), используя методы проточной ци тометрии и клонального анализа, показали, что возможные кандидаты на роль прогениторных/стволовых клеток ПЖ не несут маркеров гемопоэтических клеток, таких как CD45, TER119, с kit и Flk 1 (102). Но они имеют специфический маркер с met - рецептор для фактора роста гепатоцитов (HGF). Тем не менее, идентификация и изоляция прогени торных/стволовых клеток ПЖ остается пока не изученной.
Согласно некоторым данным, прогениторные/стволовые клетки ПЖ могут находиться в ОК ПЖ. Согласно ряду экс периментальных работ, в качестве возможных кандидатов могут рассматриваться нестин позитивные [103], а также малые клетки [104].
Исследовательская группа Н. Zulewski et al. (2001) вы делили нестин позитивные клетки из крысиных и челове ческих ОК ПЖ, которые могли пролиферировать in vitro и дифференцироваться во множественные клеточные линии, экспрессирующие маркеры клеток экзокринной и эндокрин ной части ПЖ, а также клеток печени [103]. Согласно мнению авторов, нестин позитивные мультипотентные прогениторные клетки могут участвовать в процессах неогенеза эндокрин ных клеток ПЖ. Также показано, что нестин позитивные клетки предшественники, выделенные из ПЖ взрослой мыши, способны давать начало линиям клеток ПЖ и нервной ткани [105]. В противоположность данным исследованиям, детально проведенный анализ ранних стадий развития че ловеческой ПЖ показал, что эндокринные клетки предше ственники не экспрессируют нестин [106]. В ряде экспери ментов [107,108], проведенных на трансгенных мышах с применением генетической конструкции, отслеживающей клеточное происхождение, было показано, что нестин по зитивные прогениторные клетки не участвуют в развитии эндокринных клеток в ОЛ. Известно, что в ПЖ нестин экспрессируется в клетках протоков и ацинусов, в ОК, звез дчатых клетках, а также в эндотелии сосудов. С этой точки зрения нестин не является подходящим маркером для про гениторных/стволовых клеток ПЖ. Между тем, вопрос о том, можно ли считать нестин маркером прогениторных/ство ловых клеток ПЖ, остается по сей день предметом многих дискуссий.
М. Petropavlovskaya et al. (2002) описали в культуре ОК ПЖ человека и лошадей новый клеточный тип, названный ими «малыми» клетками [104]. Эти клетки обладали спо собностью формировать малые кластеры и при иммуно гистохимическом исследовании позитивно окрашивались антителами на эндокринные гормоны ПЖ и Pdx 1, но были негативными при окраске на СК 19 и нестин. Несмотря на то, что в работе не было указаний на пролиферативный и дифференцировочный потенциал «малых» клеток, скорее всего, их способность к росту и пролиферации недостаточ на для необходимой клеточной экспансии in vitro.
В ряде экспериментальных работ в качестве одного из воз
р
пластичность экзокринных и эндокринных клеток ткани ПЖ. Ацинарные клетки не рассматриваются в качестве стволо вых/прогениторных клеток ПЖ. Однако, как показано на модели перевязки протоков ПЖ у крыс, ацинарные клетки обладают способностью к дифференцировке в эпителиаль ные клетки, формирующие дуктально подобные структуры,
р
[109]. Исследовательская группа I. Rooman et al. (2000), также наблюдала прямую ацинарно дуктальную трансдиф ференцировку in vitro, в результате чего в процессе культиви рования ацинарные клетки теряли свой фенотип и начинали экспрессировать СК 7, СК 20, Flk 1, а также Pdx 1 - мар керы эпителиальных клеток протоков ПЖ [110]. Эти дан ные позволяют предположить, что эпителиальные клетки, полученные в процессе трансдифференцировки ацинарных клеток, могут рассматриваться в качестве возможных про гениторных/стволовых клеток ПЖ. Исследования К. Song et al. (2004) подтвердили эти результаты [111]. Более того, при культивировании ацинарных клеток ПЖ крыс ими были обнаружены инсулин продуцирующие клетки, коэкспресси рующие СК.
М. Gershengorn et al. (2004) выдвинули концепцию эпи телиально мезенхимальной трансформации в качестве
р
ток в ПЖ человека [112]. Как показано этими авторами, человеческие ОК в процессе их культивирования могут де дифференцироваться путем эпителиально мезенхимальной трансформации в фибробластоподобные клетки с мезенхи мальным фенотипом, которые в процессе экспансии спо собны к последующей редифференцировке в островково подобные структуры, представленные эпителиальными клетками, экспрессирующими инсулин.
В настоящее время основным препятствием клинического применения взрослых прогениторных/стволовых клеток ПЖ является малочисленность их популяции в ткани, трудность выделения, а также отсутствие эффективных методов вы ращивания в культуре в связи с их низким пролиферативным потенциалом.
Трансплантация клеток костного мозга
и пуповинной крови
В последние годы появилось большое количество экс периментальных работ, в которых было изучено влияние трансплантации мезенхимальных стволовых/ прогенитор ных клеток костного мозга (КМ) на процессы регенерации р
довались механизмы регенераторного действия клеток КМ (ККМ): обсуждалась возможность трансдифференцировки
р
ОЛ, а также способность ККМ запускать процессы регене р
васкулогенеза в ПЖ, наряду с продукцией этими клетками регуляторных пептидов (ростовых факторов, цитокинов) -регуляторов морфогенеза органов и тканей.
Так, A. lanus et al. (2003) на модели аутоиммунного СД у мышей самок трансплантировали мезенхимальные ство ловые/прогениторные ККМ от мышей самцов (доноров), экспрессирующих GFP (green fluorescent protein), причем GFP белок экспрессировался в ККМ доноров самцов толь ко при условии активации в них транскрипции гена инсули на [113]. Используя метод FACS (fluorescence activated cells sorter) и цитогенетический метод FISH (fluorescence in situ hybridization), через 4 6 недель после трансплантации до норского КМ авторы обнаружили в ОК мышей самок (реци пиентов) GFP^ клетки с Y позитивной хромосомой, которые составляли 1,7 3% от общего числа эндокринных клеток ПЖ. Кроме того, выявленные в пределах ОК мышей реципиентов
Обзоры
GFP* клетки экспрессировали инсулин, GLUT 2 и ряд дру гих генетических маркеров, характерных для в клеток ПЖ. В культуральных условиях in vitro изолированные GFP* клетки донорского происхождения секретировали инсулин в ответ на физиологическую стимуляцию глюкозой. Авторы по лагали, что в этих опытах ими была доказана способность мезенхимальных стволовых/ прогениторных ККМ к транс р
Однако в ряде других исследований [114 116] данные A. lanus et al. (2003) не были подтверждены. Авторами этих работ было высказано предположение, что стволовые/ прогениторные ККМ участвуют в процессах регенерации р
инсулин продуцирующие клетки, а преимущественно пу
р
го органа.
В ряде исследований in vitro было показано, что мезен химальные стромальные клетки (МОК) [117], выделенные согласно их пластик адгезивным свойствам из КМ или жи ровой ткани, обладают способностью к трансдифференци ровке в инсулин продуцирующие клетки при культивирова нии в соответствующих средах [118 120]. Так, L Chen et al. (2004), нашли, что полученная культура МСК КМ обладала глюкозо зависимой секрецией инсулина in vitro, а при ее трансплантации крысам с STZ СД I типа происходило сни жение гипергликемии у животных [118]. При этом авторы наблюдали экспрессию нестина на одной из промежуточ ных стадий дифференцировки ККМ. В другой эксперимен тальной работе человеческие МСК КМ трансфецировали генами Foxa2, НЬ9 и Pdx1, ранними транскрипционными факторами в клеток, с помощью ретровирусного вектора и кокультивировали с ОК. Такая процедура также способство вала дифференцировке МСК в инсулин продуцирующие клетки [120]. Несмотря на описанные наблюдения, вопрос
о том, является ли трансдифференцировка МСК в функци ональные инсулин продуцирующие клетки нормальным и физиологическим явлением в условиях живого организма, остается дискуссионным, так как к настоящему времени пластичность МСК продемонстрирована лишь в условиях эксперимента. Доказательства возможности слияния кле ток разных фенотипов in vivo свидетельствуют против кон цепции пластичности мезенхимальных стволовых/прогени торных ККМ и ставят под сомнение терапевтическую стратегию применения ККМ, основанную на этой концеп ции [121].
Известно, что в основе СД I типа лежит глубокая дизре гуляция гуморального и клеточного иммунитета на фоне прогрессирующего аутоиммунного процесса. В условиях на блюдаемого иммунного дисбаланса возникает нарушение информационного межклеточного взаимодействия и угне тение воспринимающей, индукционной и пролиферативной активности прогениторных/стволовых клеток ПЖ, что про является торможением миграционной активности и нару шением запуска процессов восстановительной регенера р
С этой точки зрения, использование ККМ для коррекции СД I типа и его осложнений является перспективным и обо снованным методом. Улучшение эндокринной функции и р
введения стволовых/прогениторных ККМ ряд авторов свя зывают с секрецией ими противовоспалительных и имму номодулирующих цитокинов с антиапоптотическим и анги огенетическим действием, обладающих адаптивными и регуляторными эффектами на различные функциональные системы, в том числе и на иммунную систему - важнейшую интегративную систему организма. Известно, что стволовые/ прогениторные ККМ, будучи клетками иммунной системы,
секретируют in vitro обширный спектр регуляторных пепти дов - цитокинов, хемокинов и факторов роста, с помощью которых регулируется репаративный и физиологический морфогенез органов и тканей [122].
Y. Izumlda et al. (2005) показали, что при транспланта ции ККМ происходит активация с met/HGF сигнального
р
[123]. Начиная с 7х суток после изотрансплантации све жевыделенных мононуклеарных ККМ крысам с STZ СД I типа, было отмечено более чем 8 кратное увеличение со держания HGF в сыворотке крови животных по сравнению с группой контроля на протяжение всего эксперимента. На фоне трансплантации ККМ у диабетических крыс наблюда лось увеличение концентрации инсулина в плазме крови, снижение гипергликемии, а также увеличение числа инсулин продуцирующих клеток в ПЖ. Используя метод мечения ККМ витальным красителем РКН 26 и последующее иммуноги стохимическое исследование криосрезов ПЖ с применением DAPI метода окраски ядер ККМ и антител к HGF, с met, ин сулину, BrdU, Pdx 1, СК 20, было показано, что все новооб р
ных протоков ПЖ. Основываясь на полученных результатах, авторы предположили, что ККМ могут играть роль в синтезе эндогенного HGF в организме и способны путем прямого взаимодействия с гепатоцитами и/или паракринного вза имодействия с помощью неизвестных пока факторов по вышать секрецию HGF, который способен стимулировать дифференцировку с met* эпителиальных клеток протоков ПЖ в инсулин продуцирующие клетки. Известно, что взаи модействие между рецептором с met и HGF, которое проис ходит в организме опосредованно путем обмена сигналами между мезенхимальными [124] и эпителиальными клетка ми, играет важную роль на эмбриональном этапе развития ПЖ [125,126].
В работе М. Banerjee et al. (2005) была показана прямая зависимость между эффектом от проводимой клеточной терапии и кратностью введения ККМ [127]. Изотрансплан тацию клеток свежевыделенного нефракционированного КМ проводили облученным мышам линии Swiss albino с мо делью STZ СД I типа путем однократного или многократного (минимум - трехкратно) внутривенного введения в хвостовую вену с регулярным интервалом в 6 дней. Было установлено, что на фоне многократного введения ККМ в течение одного месяца происходило постепенное и достоверное снижение показателей высокого уровня глюкозы в крови до нормогли кемии, которая сохранялась в течение всего эксперимента (длительностью до 1 месяца), в отличие от группы животных с однократным введением ККМ, где отмечалось незначи тельное снижение гипергликемии. Нормализация показа телей гликемии у диабетических мышей с многократным введением ККМ была подтверждена положительными ре зультатами при проведении глюкозо толерантного теста. На гистологических срезах ПЖ этих мышей было обнаружено увеличение количества новообразованных ОК с малым ди аметром (менее 50 мкм по сравнению с нормальными ОК), которые локализовались в области протоков и ацинусов ПЖ.
Аналогичные результаты были получены группой R. Lee et al. (2006) [128]. Культивированные в течение 7 9 дней до 70% монослоя человеческие мультипотентные МСК КМ вводились двукратно с интервалом 7 дней в полость левого желудочка иммунодефицитным NOD/seid мышам с моде лью STZ СД I типа. Начиная с 14 го дня от момента первого введения МСК, в группе диабетических животных с транс плантацией ККМ происходило достоверное снижение гипер гликемии и полиурии, а также повышение уровня мышиного инсулина, при этом человеческий инсулин в образцах кро ви не определялся. Результаты, полученные под контролем
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 2, 2007
Обзоры
молекулярно генетического метода - RT PCR, позволили заключить, что около 3% введенных МСК обнаруживаются в ткани ПЖ и 11% в ткани почек диабетических мышей. На срезах ткани ПЖ мышей с трансплантацией МСК, в отличие от группы диабетического контроля, авторы наблю дали достоверное увеличение количества новообразован ных ОК с высокой иммунореактивностью инсулина, которые визуально «отпочковывались» от эпителия протоков ПЖ. На фоне введения МСК в ткани почек мышей с СД I типа было отмечено улучшение морфологии гломерулярного аппара та, уменьшение мезангиального утолщения и инфильтрации ткани макрофагами. При иммуногистохимическом исследо вании криосрезов ткани почек было показано, что часть МСК экспрессировали CD31 (platelet endothelial cell adhesion molecule 1 (PECAM 1)) и имели морфологию эндотелиаль ных клеток.
Имеются все основания признать, что ККМ участвуют не только в регенерации паренхимы органов, но также в реге нерации и новообразовании сосудов. С этими эффекта ми связывают прежде всего активацию гемангиобластов, которые, как полагают, представляют самостоятельную популяцию ККМ, а также активацию мезенхимальных про гениторных клеток, которые содержатся как во фракции МСК КМ (128], так и во фракции гемопоэтических ККМ (129], и могут дифференцироваться в эндотелиоциты.
У больных СД I типа в условиях повышенного апоптоза клеток, на фоне окислительного стресса и других многочис ленных метаболических нарушений, количество циркулиру ющих в крови предшественников эндотелиальных клеток (ПЭК) резко снижено, что проявляется снижением процессов неоваскуляризации в организме. Дисфункция ПЭК приво дит к снижению сосудистого регенеративного потенциала, замедляет регенерацию ОЛ и способствует развитию сосу дистых осложнений при СД I типа (130].
Показано, что клетки мононуклеарной фракции КМ мо гут мигрировать в ткань ПЖ в ответ на ее повреждение и стимулировать неоангиогенез, тем самым запуская про цессы регенерации пула ß клеток (129,131]. Было уста новлено (129], что при внутривенном введении с kit (CD117) фракции мононуклеарных ККМ от GFP трансген ных мышей, иммунодефицитным NOD/seid мышам с моде лью STZ СД I типа, происходило снижение гипергликемии и повышение уровня инсулина в крови. На гистологических срезах ткани ПЖ мышей реципиентов авторы наблюдали
ß
ОК, где также были найдены GFP* ККМ мышей доноров, причем 2,5% этих клеток позитивно окрашивались анти телами к инсулину, однако не экспрессировали Pdx 1 -ß
ференцировки в инсулин продуцирующие клетки. Одновре менно было показано, что донорские ККМ при введении в организм мышей реципиентов способны дифференциро ваться в эндотелиальные клетки (ЭК) ПЖ. Процесс диф ференцировки в ЭК подтверждался позитивным иммуно гистохимическим окрашиванием донорских GFP* ККМ на эндотелиальный белок РЕСАМ 1 (CD31). Несмотря на то, что в данной работе не были установлены возможные ис
ß
ческих мышей реципиентов, авторами было высказано предположение, что ККМ способны мигрировать в область поврежденных ОК ПЖ, где они и дифференцируются в ЭК. В свою очередь новообразованные ЭК костномозгового происхождения начинают стимулировать пролиферацию локальных стволовых/прогениторных клеток ПЖ посред ством выделения ими трофических факторов или благодаря какому то другому механизму, индуцирующему дифферен ß
р
в период эмбрионального развития ПЖ (132].
Аналогичные результаты также были получены группой V. Mathews et al. (2004), которые на модели STZ СД I типа у мышей проводили трансплантацию мононуклеарной фрак ции сингенного КМ, полученного от GFP трансгенных до норов (131]. Непосредственно перед трансплантацией ККМ мышам реципиентам с СД I типа вживляли подкожно мик рокапсулы с инсулином для снижения изначально высокого уровня гликемии и последующего поддержания ее на суб нормальном уровне. После трансплантации донорские GFP* ККМ, экспрессирующие CD45* и vWF* (von Willebrand factor), обнаруживали повсеместно в OK ПЖ мышей реци пиентов. В то время как общее количество донорских GFP* ККМ постепенно снижалось в ткани ПЖ, количество эндоте лиальных клеток собственного и донорского происхождения увеличивалось в зависимости от степени повреждения ОК. Наблюдались признаки неоангиогенеза в ткани ПЖ. В от личие от результатов, полученных D. Hess et al. (2003), ав торы в данном исследовании не смогли показать положи тельное влияние введения ККМ на течение гликемии у мышей реципиентов с СД I типа, т.к. при удалении микро капсул с инсулином, показатели глюкозы в крови возвра щались на изначально высокий уровень (129]. Возможно, что отсутствие репаративной регенерации в клеток в дан ной работе могло быть связанно с изначальной коррекцией высокого уровня гликемии у мышей с СД I типа путем вве дения в организм экзогенного инсулина (микрокапсул), что в итоге могло привести к подавлению сигналов, направлен ных на активацию процессов пролиферации и неогенеза инсулин продуцирующих клеток ПЖ.
Основываясь на данных экспериментальных исследо ваний, несколько групп в разных странах приступили к кли ническим испытаниям метода клеточной терапии СД I типа у человека с использованием ККМ. Показано, что систем ное [133], а также местное (артериальным катетером в чревный ствол) [134] введение аутогенных ККМ приводит к улучшению функции ПЖ, коррекции метаболических на рушений, снижению суточных доз экзогенного инсулина,
р
тел к инсулину, аутоантител к глутаматдекарбоксилазе (GAD), повышению резистентности к сахарной нагрузке, а также увеличению синтеза С пептида, что косвенно ука
р
ПЖ у больных СД I типа.
Активное изучение и возможность применения стволо вых/прогениторных клеток пуповинной крови (ПК) челове ка в клеточной терапии СД I типа обусловлены тем, что этот источник рассматривается как альтернатива КМ.
Показано [135], что на фоне ксенотрансплантации кле ток ПК человека значительно снижалась вероятность и ин тенсивность развития аутоиммунного инсулина в ОК ПЖ NOD мышей с моделью аутоиммунного СД. Оказалось, что поддержание нормогликемии, выживаемость животных и
р
ток ПЖ находятся в прямой зависимости от дозы вводимых клеток. Так, при введении мышам с СД I типа 200 млн моно нуклеарных клеток ПК человека положительные эффекты были выражены более значимо, чем при трансплантации 100 млн клеток.
Полагая, что стволовые/прогениторные клетки ПК способны к миграции в область поврежденных ОК ПЖ и что коррекция аутоиммунных процессов активирует за
р
пилотные клинические испытания метода трансплантации аутогенных клеток ПК у 9 пациентов с СД I типа. У этих больных был достигнут положительный результат [136].
■ И I II II
■тп
Обзоры
Заключение
Анализ современных концепций развития СД I типа по казывает, что стойкая инсулиновая недостаточность при СД
I типа является результатом неэффективной репаративной регенерации поврежденных ОЛ. Недостаточность репара тивных процессов в ОЛ в значительной мере обусловлена и поддерживается глубокими нарушениями функций иммун ной системы (аутоиммунный процесс), которая более других интегративных систем организма ответственна за регуля цию морфогенеза и поддержание структурного гомеостаза.
Клеточная терапия - ОК ПЖ или ККМ и ПК позволяет в наиболее полном объеме обеспечить доставку в организм
дефицитных пептидов и факторов межклеточного взаи модействия, которые способствуют активизации репаратив ных процессов в ОЛ и восстановлению их функции. При трансплантации ОК в большей степени восполняется де фицит тканеспецифических регуляторных пептидов реге нерации ОЛ. При трансплантации ККМ и ПК регенерация ОЛ и сосудов достигается через устранение дизрегуляции иммунной системы и восстановление адаптационных функ ций всех интегративных систем организма, которые повы шают резервы регенерации ОЛ (р клеток, сосудистого русла] и нормализуют собственную инсулин продуцирующую функцию ПЖ.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Дедов И.И., Никонова T.B., Смирнова ОБ. и др. Роль цитокинов в регуляции иммунного ответа и механизмы гибели в клеток при различных вариантах течения сахарного диабета I типа. Вопросы эндокринологии 2005; 51(3): 3 7.
2. Балаболкин М.И. Диабетология. М.: Медицина; 2000.
3. Ефимов А.С. Диабетические ангиопатии. М.: Медицина; 1989.
4. Rabinovitch A, Suarez Pinzon W.L. Role of cytokines in the pathogenesis of autoimmune diabetes mellitus. Rev. Endocr. Metab. Disord. 2003; 4(3): 291 99.
5. Делягин В.М., Волков И.Э., Румянцев А.Г., Скуркович С.В. Иммунные и неиммунные нарушения при сахарном диабете типа 1 у детей. Вопросы гематологии / онкологии и иммунопатологии в педиатрии 2004; 3(2): 76 80.
6. Prud'homme G.J., Piccirillo С.А. The inhibitory effects of transforming growth factor beta 1 [TGF betal) in autoimmune diseases. J. Autoimmun. 2000; 14(1): 23 42.
7. Peterson J.D., Pike B., Dallas Pedretti A. et al. Induction of diabetes with islet specific T cell clones is age dependent. Immunology 1995; 85(3): 455 60.
8. Winter W.E., Harris N., Schatz D. Immunological markers in the diagnosis and prediction of autoimmune type 1 a diabetes. Clin. Diabetes 2002; 20:183 91.
9. Колесник Ю.М., Орловский M.A. Панкреатические островки: некоторые аспекты морфологии, физиологии и процессов деструкции при сахарном диабете 1 типа. Проблемы эндокринологии 2004; 50(2): 3 10.
10. Yoon J.W., Jun H.S. Autoimmune destruction of pancreatic beta cells. Am. J. Ther. 2005; 12(6): 580 91.
11. Бабаева А.Г. Роль иммунной системы в дизрегуляции морфогенетических процессов. В кн.: Крыжановский Г.Н., редактор. Дизрегуляционная патология. М.: Медицина; 2002: 366 85.
12. Бабаева А.Г. Иммунологические реакции в процессах нормального и восстановительного роста. В кн.: Регенерация и клеточное деление. М.: Медицина; 1968: 11 6.
13. Бабаева А.Г. О роли гуморальных и клеточных факторов иммунитета в регуляции процессов восстановления внутренних органов позвоночных. В кн.: Лиознер Л.Д., Доброхотов В.Н., редакторы. Восстановительные и пролиферативные процессы у животных. М.: Наука; 1968: 66 82.
14. Бабаева А.Г. Регенерация и система иммуногенеза. М.: Медицина; 1985.
15. Бабаева А.Г. Прошлое, настоящее и будущее проблемы лимфоидной регуляции пролиферации нелимфоидных клеток. БЗБМ 1995; 9: 230 34.
16. Бабаева А.Г., Зотиков Е.А. Иммунология процессов адаптивного роста, пролиферации и их нарушений. М.: Наука; 1987.
17. Бабаева А.Г. Единство и противоположность цитогенетической активности лимфоцитов и их антителообразующей функции при восстановительных процессах в органах. БЗБМ 1999; 11: 484 90.
18. Bonner Weir S. Beta cell turnover: its assessment and implications. Diabetes 2001; 50 Suppl 1: S20 S24.
19. Bouwens L, Rooman I. Regulation of pancreatic beta cell mass. Physiol. Rev. 2005; 85(4): 1255 70.
20. Herold K.C., Ablamunits V., Sherry N.A. et al. Autoimmunity and beta cell regeneration in mouse and human type 1 diabetes: The peace is not enough. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2007; in press.
21. Scholin A., Torn C., Nystrom L. et al. Normal weight promotes remission and low number of islet antibodies prolong the duration of remission in type 1 diabetes. Diabet. Med. 2004; 21 (5): 447 55.
22. Chase H.P., MacKenzie T.A., Burdick J. et al. Redefining the clinical remission period in children with type 1 diabetes. Pediatr. Diabetes 2004; 5(1): 16 9.
23. Karges B., Durinovic Bello I., Heinze E. et al. Immunological mechanisms associated with long term remission of human type 1 diabetes. Diabetes Metab. Res. Rev. 2006; 22(3): 184 9.
24. Ortqvist E., Falorni A., Scheynius A. et al. Age governs gender dependent islet cell autoreactivity and predicts the clinical course in childhood IDDM. Acta Paediatr. 1997; 86 [11): 1166 71.
25. Muhammad B.J., Swift P.G., Raymond N.T. et al. Partial remission phase of diabetes in children younger than age 10 years. Arch. Dis. Child. 1999; 80(4): 367 9.
26. Scholin A., Berne C., Schvarcz E. et al. Factors predicting clinical remission in adult patients with type 1 diabetes. J. Intern. Med. 1999; 245(2): 155 62.
27. Gepts W. Pathological anatomy of the pancreas in juvenile diabetes mellitus. Diabetes 1965; 14(10): 619 33.
28. Meier J.J., Lin J.C., Butler A.E. et al. Direct evidence of attempted beta cell regeneration in an 89 year old patient with recent onset type 1 diabetes. Diabetologia. 2006; 49(8): 1838 44.
29. Karges B., Durinovic Bello I., Heinze E. et al. Complete long term recovery of beta cell function in autoimmune type 1 diabetes after insulin treatment. Diabetes Care. 2004; 27(5): 1207 08.
30. Bonfanti R., Bognetti E., Meschi F. et al. Residual beta cell function and spontaneous clinical remission in type 1 diabetes mellitus: the role of puberty. Acta Diabetol. 1998; 35(2): 91 5.
31. Peshavaria M., Larmie B.L., Lausier J. et al. Regulation of pancreatic beta cell regeneration in the normoglycemic 60% partial pancreatectomy mouse. Diabetes 2006; 55(12): 3289 98.
32. Peters K., Panienka R., Li J. et al. Expression of stem cell markers and transcription factors during the remodeling of the rat pancreas after duct ligation. Virchows Arch. 2005; 446(1): 56 63.
33. Tiemann K., Panienka R., Kloppel G. Expression of transcription factors and precursor cell markers during regeneration of beta cells in pancreata of rats treated with streptozotocin. Virchows Arch. 2007; 450(3): 261 66.
34. De Haro Hernandez R., Cabrera Munoz L., Mendez J.D. Regeneration of beta cells and neogenesis from small ducts or acinar cells promote recovery of endocrine pancreatic function in alloxan treated rats. Arch. Med. Res. 2004; 35(2):114 20.
35. Lipsett M., Finegood D.T. Beta cell neogenesis during prolonged hyperglycemia in rats. Diabetes. 2002; 51 (6): 1834 1841.
36. Gu D., Sarvetnick N. Epithelial cell proliferation and islet neogenesis in IFN r transgenic mice. Development 1993; 118(1): 33 46.
37. Campbell I.L., Hobbs M.V., Dockter J. et al. Islet inflammation and hyperplasia induced by the pancreatic islet specific overexpression of interleukin 6 in transgenic mice. Am. J. Pathol. 1994; 145(1): 157 66.
38. Yamada S., Kojima I. Regenerative medicine of the pancreatic b cells. J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 2005; 12(3): 218 26.
39. Banerjee M.,Kanitkar M.,Bhonde P.R. Approaches towards endogenous pancreatic regeneration. Rev. Diabet. Stud. 2005; 2(3): 165 76.
40. Duvillie B., Currie C., Chrones T. et al. Increased islet cell proliferation, decreased apoptosis and greater vascularization leading to b cell hyperplasia in mutant mice lacking insulin. Endocrinology 2002; 143(4): 1530 7.
41. Georgia S., Bhushan A. Beta cell replication is the primary mechanism for maintaining postnatal beta cell mass. J. Clin. Invest. 2004; 114(7): 963 8.
42. Dor Y., Brown J., Martinez O.l. et al. Adult pancreatic beta cells are formed by self duplication rather than stem cell differentiation. Nature 2004; 429(6987):41 6.
43. Bonner Weir S., Sharma A. Are there pancreatic progenitor cells from which new islets form after birth? Nat. Clin. Prac. Endocrinol. Metab. 2006; 2(5): 240 1.
44. Bonner Weir S., Toschi E., Inada A. et al. The pancreatic ductal epithelium serves as a potential pool of progenitor cells. Pediatr. Diabetes 2004; 5 Suppl 2: 16 22.
45. Butler A.E., Janson J., Bonner Weir S. et al. Beta cell deficit and increased beta cell apoptosis in humans with type 2 diabetes. Diabetes 2003; 52(1): 102 10.
46. Tyrberg B., Ustinov J., Otonkoski T. et al. Stimulated endocrine cell proliferation and differentiation in transplanted human pancreatic islets: effects of the ob qene and compensatory qrowth of the implantation orqan. Diabetes 2001; 50(2): 301 7.
47. Meier J.J., Bhushan A., Butler A.E. et al. Sustained beta cell apoptosis in patients with long standing type 1 diabetes: indirect evidence for islet regeneration? Diabetologia 2005; 48: 2221 8.
48. Rosenberg L., Lipsett M., Yoon J.W. et al. A pentadecapeptide fragment of islet neogenesis associated protein increases beta cell mass and reverses diabetes in C57BL/6J mice. Ann. Surg. 2004; 240(5): 875 84.
49. Brubaker P.L., Drucker D.J. Minireview: Glucagon like peptides regulate cell proliferation and apoptosis in the pancreas, gut, and central nervous system. Endocrinology 2004; 145(6): 2653 59.
50. Li L., Yi Z., Seno M. et al. Activin A and betacellulin: effect on regeneration of pancreatic beta cells in neonatal streptozotocin treated rats. Diabetes 2004; 53(3): 608 15.
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 2, 2007
Обзоры
51. Rcraman I., Bouwens L. Combined gastrin and epidermal growth factor treatment induces islet regeneration and restores normoglycaemia in C57BI6/ J mice treated with alloxan. Diabetologia 2004; 47(2): 259 65.
52. Suarez Pinzon W.L., Lakey J.R., Brand S.J. et al. Combination therapy with epidermal growth factor and gastrin induces neogenesis of human islet {beta} cells from pancreatic duct cells and an increase in functional {beta} cell mass. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2005; 90(6): 3401 9.
53. Ratner R.E., Feeley D., Buse J.B. et al. Double blind, placebo controlled trial of islet neogenesis gene associated protein (INGAP) in type 1 diabetes. Diabetes 2005; 54 Suppl 1:11 LB [late breaking abstract).
54. Beattie G.M., Montgomery A.M., Lopez A.D. et al. A novel approach to increase human islet cell mass while preserving beta cell function. Diabetes 2002; 51[12):3435 39.
55. Lingohr M.K., Dickson L.M., McCuaig J.F. et al. Activation of 1RS 2 mediated signal transduction by IGF 1, but not TGF alpha or EGF, augments pancreatic beta cell proliferation. Diabetes 2002; 51(4): 966 76.
56. Huotari M.A., Palgi J., Otonkoski T. Growth factor mediated proliferation and differentiation of insulin producing INS 1 and RINm5F cells: identification of betacellulin as a novel beta cell mitogen. Endocrinology 1998; 139[4):1494 99.
57. Ritzel R.A., Butler P.C. Replication increases beta cell vulnerability to human islet amyloid polypeptide induced apoptosis. Diabetes 2003; 52(7): 1701 8.
58. Meier J.J., Ritzel RA,MaedlerK. etal. Increased vulnerability of newlyforming beta cells to cytokine induced cell death. Diabetologia 2006; 49(1 ): 83 9.
59. Atkinson M.A., Rhodes C.J. Pancreatic regeneration in type 1 diabetes: dreams on a deserted islet? Diabetologia 2005; 48(11 ): 2200 2.
60. Yang Z., Chen М., Carter J.D. et al. Combined treatment with lisofylline and exendin 4 reverses autoimmune diabetes. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006; 344(3): 1017 22.
61. Kodama S., Kuhtreiber W., Fujimura S. et al. Islet regeneration during the reversal of autoimmune diabetes in NOD mice. Science 2003; 302(5648): 1223 7.
62. Suri A., Calderon B., Esparza T.J. et al. Immunological reversal of autoimmune diabetes without hematopoietic replacement of beta cells. Science 2006; 311 (5768): 1778 80.
63. Nishio J., Gaglia J.L., Turvey S.E. Islet recovery and reversal of murine type 1 diabetes in the absence of any infused spleen cell contribution. Science 2006; 311(5768): 1775 8.
64. Chong A.S., Shen J., Tao J. Reversal of diabetes in non obese diabetic mice without spleen cell derived beta cell regeneration. Science 2006; 311(5768):1774 5.
65. Melton D.A. Reversal of type 1 diabetes in mice. N. Engl. J. Med. 2006; 355(1): 89 90.
66. Bretzel R., Brendel М., Hering B. International Islet Transplant Registry, Newsletter №9. 2001 ; 8: 1.
67. Bretzel R., Brendel М., Hering B. International IsletTransplantat Registry, Newsletter №8. 1999.
68. Shapiro A.M., Lakey J.R., Ryan E.A. et al. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid free immunosuppressive regimen. N. Engl. J. Med. 2000; 343(4): 230 8.
69. Hirshberg B., Rother K.I., Digon B.J. 3rd. et al. Benefits and risks of solitary islet transplantation for type 1 diabetes using steroid sparing immunosuppression: the National Institutes of Health experience. Diabetes Care. 2003; 26(12): 3288 95.
70. Shapiro A.M., Lakey J.R., Paty B.W. et al. Strategic opportunities in clinical islet transplantation. Transplantation. 2005; 79(10): 1304 7.
71. Ryan E.A., Paty B.W., Senior P.A. et al. Five year follow up after clinical islet transplantation. Diabetes 2005; 54(7): 2060 9.
72. Скалецкий H.H. Трансплантация островковых клеток в лечении сахарного диабета: современное состояние и перспективы. Вестник транспл. и искусствен, органов 2005; 3:17 18.
73. Maffi P., Angeli Е., Bertuzzi F. et al. Minimal focal steatosis of liver after islet transplantation in humans: a long term study. Cell. Transplant. 2005; 14(10): 727 733.
74. Street C.N., Lakey J.R., Shapiro A.M. et al. Islet graft assessment in the Edmonton Protocol: implications for predicting long term clinical outcome. Diabetes 2004; 53(12): 3107 14.
75. Narang A.S., Mahato R.l. Biological and biomaterial approaches for improved islet transplantation. Pharmacol. Rev. 2006; 58(2): 194 243.
76. Шумаков В.И., Скалецкий Н.Н. Регуляция углеводного обмена и коррекция его нарушений при сахарном диабете. В кн.: Шумаков В.И., редактор. Очерки по физиологическим проблемам трансплантологии и искусственных органов. Тула: Репроникс Лтд; 1998.
77. Блюмкин В.Н., Скалецкий Н.Н., Кирсанова Л.А. и др. Борьба с осложнениями сахарного диабета как основная цель трансплантации островковых клеток поджелудочной железы. Гипотезы, объясняющие лечебный эффект трансплантации. Транспл. и искусствен, органы 1998; 4:65.
78. Скалецкий Н.Н., Онищенко Н.А. Клеточная трансплантация: достижения и перспективы. Вестник транспл. и искусствен, органов 2001; 3 4:94 102.
79. Levy M.F. Animal organs for human transplantation: how close are we? Proc. (Bayl. Univ. Med. Cent.). 2000; 13(1 ): 3 6.
80. Dvash T., Benvenisty N. Human embryonic stem cells as a model for early human development. Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. 2004; 18(6): 929 40.
81. Soria B., Roche E., Berna G. et al. Insulin secreting cells derived from embryonic stem cells normalize glycemia in streptozotocin induced diabetic mice. Diabetes. 2000; 49(2): 157 62.
82. Assady S., Maor G., Amit M. et al. Insulin production by human embryonic stem cells. Diabetes. 2001; 50(8): 1691 7.
83. Lumelsky N., Blondel 0., Laeng P. etal. Differentiation of embryonic stem cells to insulin secreting structures similar to pancreatic islets. Science 2001; 292(5520):1389 94.
84. Hori Y., Rulifson I.C., Tsai B.C. et al. Growth inhibitors promote differentiation of insulin producing tissue from embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002; 99(25): 16105 110.
85. Kahan B.W., Jacobson L.M., Hullett D.A. et al. Pancreatic precursors and differentiated islet cell types from murine embryonic stem cells: an in vitro model to study islet differentiation. Diabetes 2003; 52(8): 2016 24.
86. Segev H., Fishman B., Ziskind A. et al. Differentiation of human embryonic stem cells into insulin producing clusters. Stem Cells 2004; 22(3): 265 74.
87. Blyszczuk P., Czyz J., Kania G. et al. Expression of Pax4 in embryonic stem cells promotes differentiation of nestin positive progenitor and insulin producing cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2003; 100(3): 998 1003.
88. Blyszczuk P., Asbrand C., Rozzo A. et al. Embryonic stem cells differentiate into insulin producing cells without selection of nestin expressing cells. Int. J. Dev. Biol. 2004; 48(10): 1095 104.
89. Miyazaki S., Yamato E., Miyazaki J. Regulated expression of Pdx1 promotes in vitro differentiation of insulin producing cells from embryonic stem cells. Diabetes 2004; 53(4): 1030 37.
90. Leon Quinto T., Jones J., Skoudy A. et al. In vitro directed differentiation of mouse embryonic stem cells into insulin producing cells. Diabetologia 2004; 47(8): 1442 51.
91. Lee S.H., Lumelsky N., Studer L. et al. Efficient generation of midbrain and hindbrain neurons from mouse embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 2000; 18(6): 675 9.
92. Rajagopal J., Anderson W.J., Kume S. et al. Insulin staining of ES cell progeny from insulin uptake. Science 2003; 299(5605): 363.
93. Hansson M., Tonning A., Frandsen U. et al. Artifactual insulin release from differentiated embryonic stem cells. Diabetes 2004; 53(10): 2603 9.
94. Hori Y., Gu X., Xie X. et al. Differentiation of insulin producing cells from human neural progenitor cells. PLoS Med. 2005; 2(4): e103.
95. Kubo A., Shinozaki K., Shannon J.M. et al. Development of definitive endoderm from embryonic stem cells in culture. Development 2004; 131(7): 1651 62.
96. Ku H.T., Zhang N., Kubo A. et al. Committing embryonic stem cells to early endocrine pancreas in vitro. Stem Cells 2004; 22(7): 1205 17.
97. Ramiya V.K., Maraist M., Arfors K.E. et al. Reversal of insulin dependent diabetes using islets generated in vitro from pancreatic stem cells. Nat. Med. 2000; 6(3): 278 82.
98. Bonner Weir S., Taneja M., Weir G.C. et al. In vitro cultivation of human islets from expanded ductal tissue. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000; 97(14): 7999 8004.
99. Gao R., Ustinov J., Pulkkinen M.A. et al. Characterization of endocrine progenitor cells and critical factors for their differentiation in human adult pancreatic cell culture. Diabetes 2003; 52(8): 2007 015.
100. Rooman I., Lardon J., Bouwens L. Gastrin stimulates beta cell neogenesis and increases islet mass from transdifferentiated but not from normal exocrine pancreas tissue. Diabetes 2002; 51 (3): 686 90.
101. Heremans Y., Van De Casteele M., In't Veld P. et al. Recapitulation of embryonic neuroendocrine differentiation in adult human pancreatic duct cells expressing neurogenin 3. J. Cell. Biol. 2002; 159(2): 303 12.
102. Suzuki A., Nakauchi H., Taniguchi H. Prospective isolation of multipotent pancreatic progenitors using flow cytometric cell sorting. Diabetes 2004; 53(8): 2143 52.
103.Zulewski H., Abraham E.J., Gerlach M.J. etal. Multipotential nestin positive stem cells isolated from adult pancreatic islets differentiate ex vivo into pancreatic endocrine, exocrine, and hepatic phenotypes. Diabetes 2001; 50(3): 521 33.
104. Petropavlovskaya M., Rosenberg L. Identification and characterization of small cells in the adult pancreas: potential progenitor cells? Cell. Tissue Res. 2002; 310(1): 51 8.
105. Seaberg R.M., Smukler S.R., Kieffer T.J. et al. Clonal identification of multipotent precursors from adult mouse pancreas that generate neural and pancreatic lineages. Nat. Biotechnol. 2004; 22(9): 1115 24.
106. Piper K., Ball S.G., Turnpenny L.W. et al. Beta cell differentiation during human development does not rely on nestin positive precursors: implications for stem cell derived replacement therapy. Diabetologia 2002; 45(7): 1045 47.
107. Treutelaar M.K., Skidmore J.M., Dias Leme C.L. et al. Nestin lineage cells contribute to the microvasculature but not endocrine cells of the islet. Diabetes 2003; 52(10): 2503 12.
108. Delacour A., Nepote V., Trumpp A. et al. Nestin expression in pancreatic exocrine cell lineages. Mech. Dev. 2004; 121 (1): 3 14.
109. Wang R.N., Kloppel G., Bouwens L. Duct to islet cell differentiation and islet growth in the pancreas of duct ligated adult rats. Diabetologia 1995; 38(12):1405 11.
110. Rooman I., Heremans Y., Heimberg H. et al. Modulation of rat pancreatic acinoductal transdifferentiation and expression of PDX 1 in vitro. Diabetologia 2000; 43(7): 907 14.
111. Song K.H., Ko S.H., Ahn Y.B. et al. In vitro transdifferentiation of adult pancreatic acinar cells into insulin expressing cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004; 316(4): 1094 100.
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 2, 2007
Обзоры
112. Gershengorn M.C., Hardikar A.A., Wei C. et al. Epithelial to mesenchymal transition generates proliferative human islet precursor cells. Science 2004; 306(5705): 2261 4.
113. lanus A., Holz G.G., Theise N.D. et al. In vivo derivation of glucose competent pancreatic endocrine cells from bone marrow without evidence of cell fusion. J. Clin. Invest. 2003; 111 (6): 843 50.
114. Taneera J., Rosengren A, Renstrom E. et al. Failure of transplanted bone marrow cells to adopt a pancreatic p cell fate. Diabetes 2006; 55(2): 290-6.
115. Choi J.B., Uchino H., Azuma K. et al. Little evidence of transdifferentiation of bone marrow derived cells into pancreatic beta cells. Diabetologia 2003; 46(10):1366 74.
116. Lechner A., Yang Y.G., Blacken R.A. et al. No evidence for significant transdifferentiation of bone marrow into pancreatic p cells in vivo. Diabetes 2004; 53(3):616 23.
117. Jiang Y., Jahagirdar B.N., Reinhardt R.L. et al. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow. Nature 2002; 418(6893): 41 9.
118. Chen L.B., Jiang X.B., Yang L. Differentiation of rat marrow mesenchymal stem cells into pancreatic islet betacells. World J. Gastroenterol. 2004; 10(20): 3016 20.
119. Timper K., Seboek D., Eberhardt M. et al. Human adipose tissue derived mesenchymal stem cells differentiate into insulin, somatostatin, and glucagons expressing cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006; 341 (4): 1135 40.
120. Moriscot C., De Fraipont F., Richard M.J. et al. Human bone marrow mesenchymal stem cells can express insulin and key transcription factors of the endocrine pancreas developmental pathway upon genetic and/or microenvironmental manipulation in vitro. Stem Cells 2005; 23(4): 594 604.
121. Camargo F.D., Chambers S.M., Goodell M.A Stem cell plasticity: from transdifferentiation to macrophage fusion. Cell prolif. 2004; 37(1): 55 65.
122. Kinnaird T., Stabile E., Burnett M.S. et al. Marrow derived stromal cells express genes encoding a broad spectrum of arteriogenic cytokines and promote in vitro and in vivo arteriogenesis thro ugh paracrine mechanisms. Circ. Res. 2004; 94(5): 687 92.
1 23. Izumida Y., Aoki T., Yasuda D. et al. Hepatocyte growth factor is constitutively produced by donor derived bone marrow cells and promotes regeneration of pancreatic beta cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005; 333(1):273 82.
124. Sonnenberg E., Meyer D., Weidner K.M. et al. Scatter factor/hepatocyte growth factor and its receptor, the c Met tyrosine kinase, can mediate a signal
exchange between mesenchyme and epithelia during mouse development, J. Cell Biol. 1993; 123(1): 223 35.
125. Furukawa Т., Duguid W.P., Kobari M. et al. Hepatocyte growth factor and Met receptor expression in human pancreatic carcinogenesis, Am. J. Pathol. 1995; 147(4): 889 95.
126. Otonkoski Т., Cirulli V., Beattie M. et al. A role for hepatocyte growth factor/scatter factor in fetal mesenchyme induced pancreatic beta cell growth, Endocrinology 1996; 137(7): 3131 9.
127. Banerjee М., Kumar A., Bhonde R.R. Reversal of experimental diabetes by multiple bone marrow transplantation. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005; 328(1):318 25.
128. Lee R.H., Seo M.J., Reger R.L. et al. Multipotent stromal cells from human marrow home to and promote repair of pancreatic islets and renal glomeruli in diabetic NQD/scid mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2006; 103 (46): 17438 43.
129. Hess D., Li L., Martin M. et al. Bone marrow derived stem cells initiate pancreatic regeneration. Nat. Biotechnol. 2003; 21(7): 763 70.
130. Loomans C.J., de Koning E.J., Staal F.J. et al. Endothelial progenitor cell dysfunction: a novel concept in the pathogenesis of vascular complications of type 1 diabetes. Diabetes 2004; 53(1): 195 9.
131. Mathews V., Hanson P.T., Ford E. et al. Recruitment of bone marrow derived endothelial cells to sites of pancreatic beta cell injury. Diabetes 2004; 53(1): 91 8.
132. Lammert E., Cleaver 0., Melton D. Induction of pancreatic differentiation by signals from blood vessels. Science 2001; 294(5542): 564 7.
133. Шахов Н.Л., Артамонов С.Д., Сускова B.C., Новикова B.K., Никольская A.O. Первый клинический опыт использования аутологичных гемопозтических клеток для коррекции нарушений при сахарном диабете первого типа. Вестник транспл. и искусствен, органов 2005; 3: 48.
134. Fernandez Vica R., Saslavsky J., Andrin 0. et al. Feasibility of implant autologous stem cells with endovascular technique in diabetes mellitus. Cytotherapy 2004; 7 Suppl: Abstract #37.
135. Ende N., Chen R., Reddi AS. Effect of human umbilical cord blood cells on glycemia and insulitis in type 1 diabetes. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004; 325(3): 665 9.
136. Couri C.E., Foss M.C., Voltarelli J.C. Secondary prevention of type 1 diabetes mellitus: stopping immune destruction and promoting p cell regeneration. Braz. J. Med. Biol. Res. 2006; 39(10): 1271 1280.
Поступила в редакцию 18.04.2007
А
