CC BY
15
MICROBIOLOGY
МИКРОБИОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2021
Борисова О.Ю.1, Гадуа Н.Т.1, Пименова А.С.1, Шепелин А.П.2, Полосенко О.В.2, Требунских И.П.3, Сидорова Н.А.3, Борисова А.Б.1, Миронов А.Ю.1, Афанасьев С.С.1
ВОЗМОЖНОСТИ ПРАКТИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ РАЗНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ПЕРВИЧНОГО ПОСЕВА ПРИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ДИФТЕРИИ
1ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, 125212, г. Москва, Россия;
2ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, 142279, Московская область, пос. Оболенск, Россия;
3ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» Роспотребнадзора, 129626, г. Москва, Россия
Цель работы - оценка кулътуралъных и морфологических свойств клинически значимых видов коринебактерий на средах первичного посева при кулътуралъной диагностике дифтерии. Использовано 9 питательных сред для первичного посева исследуемого материала на дифтерию: питательная среда для выделения коринебактерий (Кори-небакагар); основы для приготовления кровяных теллуритовых питательных сред - Питательная среда № 1 ГРМ, Питательный агар для культивирования микроорганизмов (ГРМ агар), Питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам - среда АГВ, Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (СПА), среда Клауберга II, Hoyle Medium agar (Oxoid), Blood agar base (Conda), Columbia Agar Base (Conda). Использовано 7 тест-штаммов микроорганизмов из Государственных коллекций патогенных микроорганизмов - C. diphtheriaе биоваров gravis, mitis, intermedius, belfanti и подвида lausannense, С. ulcerans, C. pseudotuberculosis. Исследования проведены в соответствии с МУК 4.2.3065-13 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции». Описаны культурально-морфологические свойства штаммов на всех испытуемых питательных средах первичного посева через 24 и 48 часов инкубации. Анализ результатов по основным ростовым свойствам питательных сред показал, что все питательные среды обладали высокой чувствительностью - из разведения 10-7 в отношении всех испытуемых штаммов. На питательных средах визуально обнаружены колонии коринебактерий уже через 19-20 часов культивирования. При культивировании взвеси коринебактерий из разведения 10-6 на питательных средах количество колоний составило от 95±5 до 120±10. Заключение. Все питательные среды обладают дифференциально-диагностическими свойствами, обеспечивающими рост коринебактерий уже через сутки инкубации посевов.
Ключевые слова: C. diphtheriae; бактериологическая диагностика; среды первичного посева; колонии; культураль-но-морфологические свойства.
Для цитирования: Борисова О.Ю., Гадуа Н.Т., Пименова А.С., Шепелин А.П., Полосенко О.В., Требунских И.П., Сидорова Н.А., Борисова А.Б., Миронов А.Ю., Афанасьев С.С. Возможности практического применения разных питательных сред для первичного посева при лабораторной диагностике дифтерии. Клиническая лабораторная диагностика. 2021; 66 (7): 428-437. DOI: http://dx.doi.org/10.51520/0869-2084-2021-66-7-428-437
Borisova O.Yu.1, Gadua N.T.1, Pimenova A.S.1, Shepelin A.P.2, Polosenko O.V.2, Trebunskich I.P.3, Sidorova N.A.3, BorisovaA.B.1, MironovA.Yu.1, AfanasievS.S.1
POSSIBILITIES OF PRACTICAL APPLICATION OF DIFFERENT CULTURE MEDIUMS FOR LABORATORY DIAGNOSTIC OF DIPHTHERIA
1G. N. Gabrichevsky Research Institute of Epidemiology and Microbiology, 125212, Moscow, Russian Federation;
2State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, 142279, Moscow region, Obolensk, Russian Federation;
3Center of Hygiene and Epidemiology in Moscow, 129626, Moscow, Russia
The purpose of the work is to evaluate the cultural and morphological properties of colonies of clinically significant corynebacteria on culture mediums for the isolation of corynebacteria. The study used 9 culture mediums for the isolation of corynebacteria: a culture mediumfor the isolation ofcorynebacteria (Corynebacagar); Tellurite-containing blood agars on base -Culture medium № 1 GRM, Culture agar for the cultivation of microorganisms (GRM agar), Culture medium for determining the sensitivity of microorganisms to antibacterial preparations - AGV, culture agar for the cultivation of dry microorganisms (SPA), Clauberg medium II, Hoyle Medium agar (Oxoid), Blood agar base (Conda), Columbia Agar Base (Conda). The work used 7 test strains of microorganisms from the State collections ofpathogenic microorganisms - C. diphtheriae biovars gravis, mitis, intermedius, belfanti and subspecies lausannense, C. ulcerans and C.pseudotuberculosis. Studies were carried out in accordance with MUK 4.2.3065-13 «Laboratory diagnosis of diphtheria infection». We describe culture-morphological properties of strains on all tested culture mediums the isolation of corynebacteria after 24 and 48 hours of incubation. Analysis of the results on the growth properties of culture mediums showed that all culture mediums had high sensitivity - from dilution 10-7 for all test strains. Colonies of corynebacteria were visually detected on culture mediums after 19-20 hours of cultivation. When cultivating a suspension of corynebacteria from breeding 10-6 on culture mediums, the number of colonies ranged from
Для корреспонденции: Борисова Ольга Юрьевна, д-р мед. наук, проф., рук. лаб. диагностики дифтерийной и коклюшной инфекций: e-mail: olgborisova@mail.ru
МИКРОБИОЛОГИЯ
95±5 to 120±10. Conclusion. All culture mediums had differential diagnostic properties that ensure the growth of corynebacteria after the day of incubation.
Key words: C. diphtheriae; bacteriological diagnosis; culture mediums for the Isolation of corynebacteria; colonies; culture-morphological properties.
For citation: Borisova O.Yu., Gadua N.T., Pimenova A.S., Shepelin A.P., Polosenko O.V., Trebunskich I.P., Sidorova N.A., Borisova A. B., Mironov A.Yu., Afanasiev S.S. Possibilities of practical application of different culture mediums for laboratory diagnostic of diphtheria. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2021; 66 (7): 428-437 (in Russ.). DOI: http://dx.doi.org/10.51620/0869-2084-2021-66-7-428-437
For correspondence: Borisova O.Yu, doctor of medicine (MD), professor, head of laboratory of diagnostic of diphtheria and pertussis infections; e-mail: olgborisova@mail.ru Information about authors:
Borisova O.Yu., https://orcid.org/0000-0001-6316-5046; Gadua N.T., https://orcid.org/0000-0001-6247-6176; Pimenova A.S., https://orcid.org/0000-0002-6914-3531; Shepelin A.P., http://orcid.org/0000-0002-8253-7527; Polosenko O.V., http://orcid.org/0000-0001-5961-9041; Borisova A.B., https://orcid.org/0000-0003-4425-8428; Mironov A.Yu., https://orcid.org/0000-0002-8544-5230; Afanasiev S.S., https://orcid.org/0000-0001-6497-1795.
Acknowledgment. The work was carried out within the .sectoralprogram of Rospotrebnadzor. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Received 27.04.2021 Accepted 10.05.2021
Введение. Эпидемические вспышки и спорадические случаи заболеваемости дифтерией фиксиру-юся на протяжении многих десятилетий. Дифтерия являлась основной причиной детской смертности до наступления эпохи вакцинации. Масштабное применение вакцины против дифтерии в рамках плановых программ иммунизации помогло элиминировать это инфекционное заболевание в большинстве стран мира.
Внушает беспокойство возвращение дифтерии в страны, где население недостаточно охвачено медико-санитарной помощью [1-3]. Наиболее тяжёлое положение сложилось в Венесуэле, Йемене, Бангладеш (Кокс-Базаре), где интенсивный рост заболеваемости дифтерией начался в 2017 году. На население Венесуэлы пришлось 80% всех зарегистрированных случаев дифтерии в Латинской Америке. Несмотря на проводимую в настоящее время властями Венесуэлы вакцинацию населения, в 2018 г. зарегистрировано 1,2 тыс. случаев заболеваний дифтерией, из них более 80 случаев закончились летальным исходом. На Гаити зафиксировано порядка 250 случаев заболеваний, из которых 3 случая закончились летально. В Колумбии в указанный период зарегистрировано около 10 случаев заболеваний, связанных с вынужденной миграцией населения из стран, где регистрируются случаи заболевания дифтерией [1-3].
По данным Роспотребнадзора в Российской Федерации регистрируются единичные случаи заболеваемости дифтерией [4-8]. В 2017 году заболевших дифтерией лиц не зарегистрировано, в Самарской и Челябинской областях выявлено 2 бактерионосителя; в 2018 г. - зарегистрировано 4 случая заболевания (ХМАО-Югра, Новосибирская область, республика Северная Осетия-Алания) и 3 случая бактерионосительства (ХМАО-Югра), в 2019 г. - зарегистрирова-
но 5 случаев заболевания (ХМАО-Югра) и 2 случая бактерионосительства (ХМАО-Югра), в 2020 г. - 1 случай заболевания (ХМАО-Югра). Несмотря на резкое снижение заболеваемости дифтерией за последние десятилетия, данные генотипирования свидетельствуют о продолжающейся циркуляции возбудителя дифтерии на территории России - выявлены токсигенные штаммы трёх сиквенс-типов - ST25, ST8, ST67, которые входят в различные клональные комплексы и являются широко распространёнными в мире. Штаммы сиквенс-типа ST25 регистрируют на территории России, начиная с 1960-х годов по настоящее время, штаммы ST8 зарегистрированы на территории России только в 1980-е годы, вызвали эпидемический подъём заболеваемости дифтерией в 1990-х годах и до сих пор выделяются на территории нашей страны, штаммы ST67 зарегистрированы, начиная с 2012 г. [9].
Возбудитель дифтерии - Corynebacterium diphtheriae, продуцирующий дифтерийный токсин (экзотоксин). Источником инфекции является больной или бактерионоситель токсигенных штаммов С. diphtheriae. Основной механизм передачи - аэрозольный, реже контактный; механизмы передачи - воздушно-капельный и контактно-бытовой. Нетоксигенные штаммы С. diphtheriae не вызывают дифтерийную инфекцию. Вместе с тем, данные микроорганизмы могут выделяться при фарингите, артрите, эндокардите и других гнойно-воспалительных заболеваниях [10 -12]. Таксономически близкими к виду С. diphtheriae являются Corynebacterium ulcerans и Corynebacterium pseudotuberculosis - патогены крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, домашних животных, способные вырабатывать дифтериеподобный экзотоксин и вызывать заболевания у человека. Известны случаи выделения токсигенных штаммов C. ulcerans при
MICROBIOLOGY
клинической картине заболевания, сходной с дифтерией (дифтериеподобное заболевание), токсигенных штаммов C. pseudotuberculosis, вызывающих лимфадениты [13 - 15].
Культуральный метод при лабораторной диагностике дифтерийной инфекции является ведущим [16]. Культуральное исследование проводят с целью лабораторной диагностики дифтерийной инфекции, выявления источников возбудителя инфекции, подтверждения эпидемиологических связей и наблюдения за циркуляцией токсигенных штаммов С. diphtheriae в соответствии с СП 3.1.2.3109-13 «Профилактика дифтерии» и МУК 4.2.3065-13 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции».
Умение выделять коринеформные микроорганизмы (Corynebacterium spp.) служит критерием оценки качества работы бактериологических лабораторий, особенно в период снижения и спорадической заболеваемости дифтерией.
Использование высококачественных питательных сред составляет залог успеха микробиологических исследований, в том числе и при проведении исследований на дифтерию. Современная микробиология без питательных сред существовать не может, их качество во многом определяет информативность и точность микробиологического исследования. Выбор или разработка новых питательных сред для культивирования микроорганизмов основываются на точном знании биологических свойств каждого конкретного вида микроорганизма. Целью культурального исследования является выделение и идентификация возбудителя с применением минимального количества диагностических тестов, необходимых, достаточных и специфичных для получения достоверного ответа в максимально сжатые сроки.
Для выделения коринебактерий из исследуемого материала в практике здравоохранения используются селективные дифференциально-диагностические кровяные теллуритовые среды лабораторного приготовления - кровяной теллуритовый агар, среда Кла-уберга II. В качестве основы этих питательных сред используют различные агаровые основы, в которые ex tempore добавляют кровь для стимуляции роста культур коринебактерий, теллурит калия для подавления роста сопутствующей микрофлоры. Коринебакагар (КБА) широко используется в практике российских бактериологических лабораторий, поскольку он не требует внесения крови, так как в составе среды содержится стимулятор роста гемофильных микроорганизмов (СРГМ). Оригинальная технология приготовления препарата позволяет сохранить биологические свойства крови [17].
Цель работы - оценка культуральных и морфологических свойств клинически значимых видов коринебактерий на средах первичного посева при культу-ральной диагностике дифтерийной инфекции.
Материал и методы. Изучено 9 питательных сред, используемых на территории РФ для первичного посева исследуемого материала при исследовании на дифтерию: питательная среда для выделения коринебактерий (Коринебакагар) (ФСР 2007/00003);
кровяные теллуритовые питательные среды, где в качестве основ для их приготовления применены: Питательная среда для количественного определения микробной загрязнённости «Питательная среда № 1 ГРМ» (ФСР 2011/11415), Питательный агар для культивирования микроорганизмов (ГРМ-агар) (ФСР 2007/00001), Питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам - среда АГВ (ФСР 2012/13687), Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (СПА) (ФСР 2008/02386), Среда Клау-берга II, Hoyle Medium agar (Oxoid, Великобритания), Основа кровяного агара (Conda, Испания), Columbia Agar Base (Conda, Испания). В кровяные теллурито-вые среды добавлена кровь крупного рогатого скота («Лейтран», Москва) и 2% теллурит калия (МиниМед РУ № ФСР 2009/05371). Все использованные в исследовании питательные среды приготовлены в соответствии с инструкциями производителей и МУК 4.2.3065-13 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции».
Использованы 7 тест-штаммов микроорганизмов из Государственных коллекций патогенных микроорганизмов «ГКПМ-Оболенск» и ФГБУ «НЦЭСМП» МЗ РФ - C. diphtheriae биовар gravis № 665, C. diphtheriae биовар mitis № В-8628, C. diphtheriae биовар belfanti № В-8635, C. diphtheriae подвид lausannense № В-8755, C. diphtheriae биовар intermedius № 090093 (7227), С. ulcerans № 675, C.pseudotuberculosis № В-8640. Все тест-штаммы микроорганизмов типичны по своим культуральным, морфологическим, тинкториальным, биохимическим свойствам.
В соответствии с МУК 4.2.3065-13 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции» суточные культуры штаммов, выращенные на 10% сывороточном агаре, смывали изотоническим раствором натрия хлорида. Готовили исходную взвесь каждой культуры (пробирка № 0): мутность полученной суспензии соответствовала 10 ед. оптического стандарта мутности (ОСО 42-28-85 П), что условно соответствует 1 млрд бактериальных клеток в 1 мл взвеси. Из исходных взвесей культур (пробирки № 0) готовили серийные разведения в изотоническом растворе натрия хлорида (табл. 1).
Из двух последних разведений (пробирки № 6 и № 7) по 0,1 мл суспензии культур бактерий вносили в две чашки с испытуемыми средами первичного посева, досуха втирали круговыми движениями при помощи шпателя. Посевы помещали в термостат, инкубировали 24-48 ч при температуре +37±1° C. Куль-туральные свойства выросших колоний оценивали с помощью стереоскопического микроскопа SteREO Discovery V12 (Carl Zeiss, Германия) (объектив Pla-nApo S 1,0x FWD 60 мм; окуляр PI 10x23 Br foc) и фотографировали.
Результаты. Описаны культуральные и морфологические свойства 7 штаммов: C. diphtheriae биовар gravis, C. diphtheriae биовар mitis, C. diphtheriae биовар belfanti, C. diphtheriae биовар intermedius, C. diphtheriae подвид lausannense, С. ulcerans, C. pseudotuberculosis, выросших на 9 плотных питательных
МИКРОБИОЛОГИЯ
Таблица 1
Приготовление разведений культур
№ пробирки Количество физ. раствора, мл Объём вносимой суспензии, мл Условное количество микробных клеток в 1 мл взвеси
1 1,0 1,0 из исходной взвеси 5х108
2 4,5 0,5 из 1-й пробирки 5х107
3 4,5 0,5 из 2-й пробирки 5х106
4 4,5 0,5 из 3-й пробирки 5х105
5 4,5 0,5 из 4-й пробирки 5х104
6 4,5 0,5 из 5-й пробирки 5х103
7 2,0 0,5 из 6-й пробирки 103
средах первичного посева: кровяных теллуритовых средах, приготовленных на основе - ГРМ агара, Питательной среды № 1 ГРМ, среды Клауберга II, сухого питательного агара (СПА), Blood agar base,
Columbia Agar Base, Hoyle Medium agar, среды АГВ; и на Коринебакагаре. Культуральные и морфологических свойства описывали через 24 и 48 часов инкубации (табл. 2).
Таблица 2
Культуральные свойства клинически значимых коринебактерий на плотных питательных средах первичного посева при просмотре в стереоскопическом микроскопе
Микроорганизмы Время инкубации посевов
24 часа 48 часов
КТА на основе ГРМ агара
C. diphtheriae биовар gravis Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, начинает формироваться выпуклость центра колонии, лёгкая изрезанность края, маслянистые, слегка шероховатые, диаметром 1,5-2 мм Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые с выпуклым центром, слегка шероховатые, диаметром 2-3 мм, имеют радиальную исчерченность (форма «маргаритки») или выраженную краевую изрезанность, часто крошатся при прикосновении
C. diphtheriae биовар mitis и биовар belfanti, подвид lausannense Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, иногда могут быть плоскими, мягкой, маслянистой консистенции, с ровным краем, слегка шероховатые, диаметром 1-1,5 мм Колонии имеют серо-чёрную окраску («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые, но могут остаться плоскими, слегка шероховатые, мягкой, маслянистой консистенции или могут крошиться при прикосновении, с ровным краем, диаметром 1,5-2 мм
C. diphtheriae биовар intermedius Колонии имеют серо-чёрную окраску, мелкие, плоские, мягкой, маслянистой консистенции, диаметром 0,3-0,5 мм Колонии имеют серо-чёрную окраску, мелкие, плоские, гладкие, с ровным краем, мягкой, маслянистой консистенции, диаметром 0,5-1,0 мм
С. ulcerans Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, с ровным краем, маслянистые, диаметром 0,3-0,5 мм Колонии имеют серо-чёрную или черную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, выпуклые или приподнятые с выпуклым центром, мягкой, маслянистой консистенции, может быть легкая изрезанность края, диаметром 1-2 мм
C.pseudotuberculosis Колонии имеют серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, с ровным краем, маслянистые, диаметром 0,3-0,5 мм Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, с ровным краем, маслянистые, диаметром 0,8-1,0 мм
MICROBIOLOGY
Микроорганизмы
Время инкубации посевов
24 часа
48 часов
C. diphtheriaе биовар gravis
C. diphtheriaе биовар mitis и биовар belfanti, подвид lausannense
C. diphtheriaе биовар intermedius
С. ulcerans
C.pseudotuberculosis
КТА на основе Питательной среды № 1 ГРМ
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, начинает формироваться выпуклость центра колонии, лёгкая изрезанность края, маслянистые, слегка шероховатые, слегка крошатся при прикосновении, диаметром 1,5-2 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, иногда могут быть плоскими, мягкой, маслянистой консистенции, с ровным краем, слегка шероховатые, диаметром 1-1,5 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, мелкие, плоские, мягкой, маслянистой консистенции, диаметром 0,3-0,5 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка выпуклые, с ровным краем, маслянистые, диаметром 0,5-0,7 мм
Колонии имеют серую окраску, округлые, непрозрачные, с ровным краем, маслянистые, диаметром 0,5-0,7 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые с выпуклым центром, слегка шероховатые, диаметром 2-3 мм, имеют радиальную исчерченность (форма «маргаритки») или выраженную краевую изрезанность, часто крошатся при прикосновении
Колонии имеют серо-чёрную окраску («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые, но могут остаться плоскими, слегка шероховатые, мягкой, маслянистой консистенции или могут крошиться при прикосновении, с ровным краем, диаметром 1,5-2 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, мелкие, плоские, гладкие, с ровным краем, мягкой, маслянистой консистенции, диаметром 0,5-1,0 мм
Колонии имеют серо-чёрную или черную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, выпуклые или приподнятые с выпуклым центром, мягкой, маслянистой консистенции, с ровным краем, диаметром 1-2 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, с ровным краем, маслянистые, диаметром 0,8-1,0 мм
КТА на основе СПА
C. diphtheriaе биовар gravis
C. diphtheriaе биовар mitis и биовар belfanti, подвид lausannense
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, начинает формироваться выпуклость центра колонии, лёгкая изрезанность края, маслянистые, слегка шероховатые, слегка крошатся при прикосновении, диаметром 1,5-2 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, маслянистой консистенции, с ровным краем, слегка шероховатые, диаметром 1-1,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые с выпуклым центром, шероховатые, диаметром 2-4 мм, имеют радиальную исчерченность (форма «маргаритки») или выраженную краевую изрезанность, часто крошатся при прикосновении
Колонии имеют серо-чёрную окраску («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые, но могут остаться плоскими, слегка шероховатые, мягкой, маслянистой консистенции или могут крошиться при прикосновении, с ровным краем, диаметром 2-3 мм
C. diphtheriaе биовар intermedius
Колонии имеют тёмно-серую окраску, мелкие, плоские, мягкой консистенции, диаметром 0,3-0,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, мелкие, плоские, гладкие, с ровным краем, мягкой, маслянистой консистенции, диаметром 0,8-1,0 мм
С. ulcerans
C.pseudotuberculosis
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка выпуклые, с ровным краем, блестящие, маслянистые, диаметром 0,5-0,8 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, с ровным краем, маслянистые, диаметром 0,5-0,8 мм
Колонии имеют серо-чёрную или черную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, выпуклые или приподнятые с выпуклым центром, мягкой, маслянистой консистенции, с ровным краем, диаметром 1-2 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, с ровным краем, маслянистые, диаметром 0,8-1,0 мм
МИКРОБИОЛОГИЯ
Микроорганизмы
Время инкубации посевов
24 часа
48 часов
С. diphtheriaе биовар gravis
С. diphtheriaе биовар т^ и биовар Ье^апй, подвид lau.sannen.se
С. diphtheriaе биовар intermedius
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные с блестящей поверхностью, слегка приподнятые, начинает формироваться выпуклость центра колонии, лёгкая изрезанность края, иногда может просматриваться светлая периферия, маслянистые, иногда крошатся при прикосновении или имеют «водянистую» консистенцию, чаще мелкие, диаметром до 0,5-1 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, маслянистой консистенции, с ровным краем, слегка шероховатые, диаметром 1-1,5 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, мелкие, плоские, мягкой консистенции, диаметром 0,3-0,5 мм
Среда Клауберга II
Колонии имеют серо-чёрную или черную окраску округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые с выпуклым центром, шероховатые, иногда наблюдаются «гигантские» плоские колонии, диаметр колоний увеличивается в 2-3 раза и через 48 ч может доходить до 2-4 мм, имеют радиальную исчерченность (форма «маргаритки») или выраженную краевую изрезанность, может просматриваться тонкая светлая периферия, крошатся при прикосновении, часто расположены группами по несколько сливающихся колоний в виде «гусеницы»
Колонии имеют серо-чёрную окраску («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые, но могут остаться плоскими, слегка шероховатые, мягкой, маслянистой консистенции или могут крошиться при прикосновении, с ровным краем, диаметром 2-3 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, мелкие, плоские, гладкие, с ровным краем, мягкой, маслянистой консистенции, диаметром 0,8-1,0 мм
С. и1сегап..
C.pseudotuberculosis
С. diphtheriaе биовар gravis
С. diphtheriaе биовар т^ и биовар Ье^апй, подвид lau.sannen.se
С. diphtheriaе биовар intermedius
С. и^тт.
C.pseudotuberculosis
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка выпуклые, с ровным краем, блестящие, маслянистые, иногда может просматриваться светлая периферия, диаметром 0,4-0,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, с ровным краем, блестящие, диаметром 0,5-0,8 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, несколько уплощены со слегка неровными краями, слегка шероховатые, диаметром не менее 0,6 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, блестящие, с ровным краем, диаметром не менее 0,5 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, мелкие, плоские, диаметром 0,5 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, с ровным краем, с серебристым ободком по краю, блестящие, диаметром не менее 0,5 мм
Колонии имеют серую окраску, округлые, непрозрачные, с ровным краем, диаметром не менее 0,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску или чёрную окраску, с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, выпуклые или приподнятые с выпуклым центром, мягкой, маслянистой консистенции, с ровным краем, иногда может просматриваться светлая периферия, диаметром 1-2 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, с ровным краем, шероховатые, могут крошиться при прикосновении, диаметром 0,8-1,0 мм
Коринебакагар (КБА)
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, шероховатые, со складчатой поверхностью и неровными (изрезанными) краями (форма «маргаритки»), диаметром 2-3,5 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, гладкие, блестящие, с ровным краем, диаметром 1,5-3 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, мелкие, плоские, гладкие, с ровным краем, мягкой, маслянистой консистенции, диаметром 0,5-1,0 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, выпуклые, блестящие, с ровным краем, диаметром 0,5-1,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, с ровным краем, шероховатые, диаметром 0,7-1,0 мм
MICROBIOLOGY
Микроорганизмы
Время инкубации посевов
24 часа
48 часов
C. diphtheriae биовар gravis
КТА на основе Hoyle Medium agar (Oxoid)
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка шероховатые, имеют легкую изрезанность края, маслянистой консистенции, могут крошиться при прикосновении, диаметром 0,8-1 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые с выпуклым центром, шероховатые, диаметром 2-4 мм, имеют радиальную исчерченность (форма «маргаритки») или выраженную краевую изрезанность, часто крошатся при прикосновении
C. diphtheriae биовар mitis и биовар belfanti, подвид lausannense
C. diphtheriae биовар intermedius
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, слегка выпуклые, слегка шероховатые, с ровным краем, маслянистой консистенции, диаметром 0,7-1 мм
Колонии имеют серую окраску, мелкие, округлые, полупро-зразные, блестящие, диаметром 0,5-0,8 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, матовые, приподнятые с выпуклым центром, шероховатые, диаметром 2-3 мм, с ровными краями, часто крошатся при прикосновении
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, шероховатые, с ровным краем, маслянистой консистенции, диаметром 0,8-1,2 мм
С. ulcerans
C.pseudotuberculosis
C. diphtheriae биовар gravis
C. diphtheriae биовар mitis и биовар belfanti, подвид lausannense
C. diphtheriae биовар intermedius
С. ulcerans
C.pseudotuberculosis
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, с ровным краем, блестящие, маслянистой консистенции, диаметром 0,3-0,5 мм
Колонии имеют серую окраску, округлые, приподнятые, непрозрачные, с ровным краем, слегка шероховатые, диаметром 0,3-0,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, слегка шероховатые, с неровной поверхностью, с ровным краем, диаметром 1,0-1,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, с ровным краем, шероховатые, могут крошиться при прикосновении, диаметром 0,8-1,2 мм
КТА на основе Columbia agar base (Conda)
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка шероховатые, имеют лёгкую изрезанность края, могут крошится при прикосновении, диаметром 1-1,5 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка шероховатые, с ровным краем, маслянистой консистенции, диаметром 0,7-1 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, слегка приподнятые, блестящие, мастянистой консистенции, диаметром 0,3-0,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, слегка выпуклые, с ровным краем, блестящие, маслянистой консистенции, диаметром 0,5-0,8 мм
Колонии имеют серую окраску, округлые, слегка приподнятые, полупрозрачные, с ровным краем, блестящие, диаметром 0,5-0,7 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, приподнятые с выпуклым центром, шероховатые, диаметром 2-2,5 мм, имеют радиальную исчер-ченность (форма «маргаритки»), часто крошатся при прикосновении
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, приподнятые с выпуклым центром, шероховатые, с ровными краями, диаметром 1,5-2 мм, часто крошатся при прикосновении
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, шероховатые, с ровным краем, маслянистой консистенции, диаметром 0,8-1,0 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, блестящие, но могут быть слегка шероховатыми, с неровной поверхностью, ровными краями, маслянистой консистенции, диаметром 1,0-1,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, с ровным краем, блестящие, но могут быть слегка шероховатыми, могут крошиться при прикосновении, диаметром 1,0-1,2 мм
МИКРОБИОЛОГИЯ
Микроорганизмы
Время инкубации посевов
24 часа
48 часов
C. diphtheriae биовар gravis
C. diphtheriae биовар mitis и биовар belfanti, подвид lausannense
C. diphtheriae биовар intermedius
С. ulcerans
C.pseudotuberculosis
C. diphtheriae биовар gravis
C. diphtheriae биовар mitis и биовар belfanti, подвид lausannense
КТА на основе Blood agar base (Conda)
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка шероховатые, имеют легкую изрезанность края, маслянистой консистенции, могут крошится при прикосновении, диаметром 0,8-1,0 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка шероховатые, с ровным краем, маслянистой консистенции, диаметром 0,7-0,8 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, слегка приподнятые, блестящие, маслянистой консистенции, диаметром 0,3-0,5 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, слегка выпуклые, с ровным краем, блестящие, маслянистой консистенции, диаметром 0,5-0,8 мм
Колонии имеют серую окраску, округлые, слегка приподнятые, непрозрачные, с ровным краем, блестящие, диаметром 0,3-0,5 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, приподнятые с выпуклым центром, слегка шероховатые, с легкой изрезанностью края, могут иметь лёгкую радиальную исчерченность, диаметром 1,8-2 мм, часто крошатся при прикосновении
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, приподнятые с выпуклым центром, шероховатые, с легкой изрезанностью края, диаметром 1,8-2,1 мм, часто крошатся при прикосновении
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка шероховатые, с ровным краем, маслянистой консистенции, диаметром 0,8-1,0 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, слегка шероховатыми, с неровной поверхностью, маслянистой консистенции, диаметром 1,0-1,3 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, с легкой краевой изрезанностью, слегка шероховатые, диаметром 1,2-1,7 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка шероховатые, имеют лёгкую изрезанность края, маслянистой консистенции, могут крошится при прикосновении, диаметром 1,0-1,2 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, слегка шероховатые, с ровным краем, маслянистой консистенции, слегка крошится при прикосновении, диаметром 0,8-0,9 мм
КТА на основе среды АГВ
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, приподнятые, шероховатые, с изрезанным краем, могут иметь лёгкую радиальную исчерченность, диаметром 1,7-1,8 мм, часто крошатся при прикосновении
Колонии имеют серо-чёрную окраску с металлическим оттенком («цвет мокрого асфальта»), округлые, непрозрачные, приподнятые, шероховатые, с ровным краем, диаметром 1,7-1,8 мм, часто крошатся при прикосновении
C. diphtheriae биовар intermedius
С. ulcerans
C.pseudotuberculosis
C.pseudotuberculosis
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, блестящие, маслянистой консистенции, диаметром 0,5-0,7 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, с ровным краем, блестящие, маслянистой консистенции, диаметром 0,5-0,8 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, выпуклые, непрозрачные, с ровным краем, блестящие, маслянистой консистенции, диаметром 0,5-0,7 мм
Колонии имеют тёмно-серую окраску, округлые, выпуклые, непрозрачные, с ровным краем, блестящие, маслянистой консистенции, диаметром 0,5-0,7 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, приподнятые, слегка шероховатые, с ровным краем, маслянистой консистенции, диаметром 0,8-1,0 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, слегка шероховатыми, с ровным краем, маслянистой консистенции, диаметром 1,1-1,2 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, с ровным краем, шероховатые, диаметром 0,8-1,0 мм
Колонии имеют серо-чёрную окраску, округлые, непрозрачные, выпуклые, с ровным краем, шероховатые, диаметром 0,8-1,0 мм
MICROBIOLOGY
MwU /
4>
где Характер роста штаммов C. diphtheriae на питательных средах.
а - рост колоний C. diphtheriae биовар gravis № 665 на Коринебакагаре, б - рост колоний C. diphtheriae биовар mitis В-8628 на Коринебакагаре, в -рост колоний C. diphtheriae биовар gravis № 665 на КТА на основе Hoyle Medium agar, г - рост колоний C. diphtheriae биовар mitis В-8628 на основе Hoyle Medium agar, д - рост колоний C. diphtheriae биовар gravis № 665 на основе Columbia Agar Base, e - рост колоний C. diphtheriae биовар биовар mitis В-8628 на основе Columbia Agar Base.
б
в
Обсуждение. Цель культурального исследования на дифтерию - выделение и идентификация чистой культуры С. diphtheriae с применением минимального количества диагностических тестов, необходимых, достаточных и специфичных для получения достоверного ответа в максимально сжатые сроки: не менее 3 сут - отрицательный ответ, 3-4 сут - ответ о выделении токсигенных штаммов С. diphtheriae, 4-5 сут - ответ о выделении нетоксигенных штаммов С. diphtheriae или других представителей рода СогупеЬа^епит. Несвоевременное выявление носителей токсигенных штаммов С. diphtheriae куль-туральным методом может привести к «скрытому» распространению С. diphtheriae и формированию новых очагов дифтерийной инфекции. Чтобы добиться максимальной высеваемости С. diphtheriaе из исследуемого материала и роста колоний, видимых невооруженным глазом через 24 ч, необходимо создать оптимальные условия для роста, размножения этих бактерий, сохранения их биологических свойств, для ингибирования роста сопутствующей микрофлоры. Учитывая большое разнообразие питательных основ, представлена характеристика культурально-морфо-логических свойств штаммов С. diphtheriaе разных биоваров и клинически значимых коринебактерий на средах первичного посева - Коринебакагаре и кровяных теллуритовых средах на разных питательных основах, которые используются на территории России. Анализ результатов по основным ростовым свойствам питательных сред, полученных при прове-
дении лабораторных исследований на тест-штаммах коринебактерий, свидетельствует о том, что все питательные среды обладают высокой чувствительностью
- из разведения 10-7 (пробирка № 7) в отношении всех испытуемых штаммов. На питательных средах визуально обнаружен рост колоний коринебактерий уже через 19-20 часов культивирования. При культивировании взвеси бактерий из разведения 10-6 (пробирка № 6) на питательных средах количество колоний составило от 95±5 до 120±10. Все питательные среды обладают дифференциально-диагностическими свойствами, обеспечивающими рост коринебактерий уже через сутки инкубации посевов, что сокращает сроки выдачи окончательного ответа.
На ряде питательных сред: Коринебакагаре (см. рисунок, а, б), кровяных теллуритовых средах на основе
- СПА, Hoyle Medium агаре (Oxoid) (см. рисунок в, г), Columbia Agar Base (Conda) (см. рисунок, д, e) - морфология колоний С. diphtheriae двух биоваров более выражена: колонии биовара gravis - шероховатые, со складчатой поверхностью и неровными (изрезанными) краями - тип «маргаритки» (рис. а, в, д), колонии штаммов биовара mitis - гладкие с ровными краями (рис. б, г, e).
Заключение. Все исследованные питательные среды - Коринебакагар и кровяные теллуритовые среды на различных питательных основах - обладают хорошими дифференциально-диагностическими свойствами, обеспечивающими рост С. diphtheriae и клинически значимых видов коринебактерий уже через сутки инкубации посевов, и могут быть использованы
МИКРОБИОЛОГИЯ
в качестве сред для первичного посева патологического материала. При равном качестве характеристик исследованных питательных сред, Коринебакагар выгодно отличается простотой приготовления, исключающей необходимость внесения крови в питательную среду.
Финансирование. Работа выполтна в рамках ompa^eeoü программы Роспотрeбнадзора.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интeрeсов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 1-3, 10-15 см. REFERENCES)
4. О заболеваемости дифтерией, мониторинге за возбудителем и состоянием антитоксического противодифтерийного иммунитета населения России. Информационное письмо № 01/1321617-27 от 29.09.2017 г. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Available at: https://www.rospotrebnadzor.ru/ (дата обращения: 18.03.2021).
5. О заболеваемости дифтерией, мониторинге за возбудителем и состоянием антитоксического противодифтерийного иммунитета населения России. Информационное письмо № 01/165902018-27 от 19.12.2018 г. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Available at: https://www.rospotrebnadzor.ru/ (дата обращения: 18.03.2021).
6. О заболеваемости дифтерией и состоянии антитоксического противодифтерийного иммунитета населения России. Информационное письмо № 02/14390-2019-27 от 10.10.2019 г. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Available at: https://www. rospotrebnadzor.ru/ (дата обращения: 18.03.2021).
7. О заболеваемости дифтерией и состоянии антитоксического противодифтерийного иммунитета населения России. Информационное письмо № 02/24680-2020-27 от 02.12.2020 г. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Available at: https://www. rospotrebnadzor.ru/ (дата обращения: 18.03.2021).
8. О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия в Российской Федерации в 2019 году: Государственный доклад. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2020. Available at: https://www. rospotrebnadzor.ru/documents/details.php?ELEMENT_ID=14933 (дата обращения: 15.04.2021).
9. Борисова О.Ю., Гадуа Н.Т., Пименова А.С., Чаплин А.В., Чагина И.А., Урбан Ю.Н. и др. Характеристика токсигенных штаммов Corynebacterium diphtheriae, выделенных на территории России. Инфeкция и UMMyHurnern. 2020. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-0.
16. Шепелин А.П., Полосенко О.В., Борисова О.Ю., Пименова А.С., Гадуа Н.Т. Сравнительная характеристика питательных сред для выделения коринебактерий. Клuнuчeская лабораторная диагностика. 2016;1: 59-64.
17. Шепелин А.П. Отечественная питательная среда - Коринебака-гар для выделения возбудителя дифтерии. Курский научно-прак-тuчeскuй вeстнuк «Чeловeк и eго здоровьe». 2012; 4: 108-10.
REFERENCES
1. World Health Organization. Who vaccine-preventable diseases: Monitoring system 2020 global summary. Available at: https:// apps.who.int/immunization_monitoring/globalsummary (accessed: 18.03.2021).
2. Centers for Disease Control and Prevention. Diptheria [Электронный ресурс] // Manual for the surveillance of vaccine-preventable diseases. - Atlanta: Centers for Disease Control and Prevention. -Chap. 1. Available at: https://www.cdc.gov/vaccines/pubs/surv-manual/chpt01-dip.pdf (accessed: 18.03.2021).
3. Centers for Disease Control and Prevention. Diphtheria [Электронный ресурс] // Yellow Book 2020: health information
for international travel. - New York: Oxford University Press, 2020. - Œap. 4. Available at: https://wwwnc.cdc.gov/travel/ yellowbook/2020/travel-related-infectious-diseases/diphtheria (accessed: 18.03.2021).
4. On the incidence of diphtheria, monitoring the causative agent and the state of antitoxic antidiphtheria immunity of the Russian population. Information letter № 01/13216-17-27 from 29.09.2017 Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing. Available at: https://www.rospotrebnadzor. ru/ (accessed: 18.03.2021). (in Russian)
5. On the incidence of diphtheria, monitoring the causative agent and the state of antitoxic antidiphtheria immunity of the Russian population. Information letter № 01/16590-2018-27 from 19.12.2018 Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing. Available at: https://www. rospotrebnadzor.ru/ (accessed: 18.03.2021). (in Russian)
6. On the incidence of diphtheria and the state of antitoxic antidiphtheria immunity of the Russian population. Information letter № 02/14390-2019-27 from 10.10.2019 Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing. Available at: https://www.rospotrebnadzor.ru/ (accessed: 18.03.2021). (in Russian)
7. On the incidence of diphtheria and the state of antitoxic antidiphtheria immunity of the Russian population. Information letter № 02/24680-2020-27 from 02.12.2020 Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing. Available at: https://www.rospotrebnadzor.ru/ (accessed: 18.03.2021). (in Russian)
8. On the state of sanitary and epidemiological well-being in the Russian Federation in 2019: State Report. Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing. 2020. Available at: https://www.rospotrebnadzor.ru/documents/details. php?ELEMENT_ID=14933 (accessed: 15.04.2021). (in Russian)
9. Borisova O. Yu., Gadua N. T., Pimenova A. S., Shepelin A. P., Chaplin A. V., Chagina I. A., Urban Yu. N. Characterization of toxigenic Corynebacterium diphtheriae strains isolated in Russia. Infektsiya i immunitet. 2020. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-0. (in Russian)
10. Zasada A. A., Rzeczkowska M. Nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae infections, Europe. Emerging Infectious Diseases. 2019; 25(7): 1437-8.
11. Czajka U., Wiatrzyk A., Mosiej E., Forminska K., Zasada A.A. Changes in MLST profiles and biotypes of Corynebacterium diphtheriae isolates from the diphtheria outbreak period to the period of invasive infections caused by nontoxigenic strains in Poland (1950-2016). BMC Infectious Diseases. 2018; 18(1): 121.
12. Dangel A., Berger A., Konrad R., Bischoff H., Sing A. Geographically Diverse Clusters of Nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae Infection, Germany, 2016-2017. Emerging Infectious Diseases. 2018; 24(7): 1239-45.
13. Hacker E., Antunes C.A., Mattos-Guaraldi A.L., Burkovski A., Tauch A. Corynebacterium ulcerans, an emerging human pathogen. Future Microbiology. 2016; 11: 1191-1208.
14. Moore L.S.P., Leslie A., Meltzer M., Sandison A., Efstratiou A., Sriskandan S. Corynebacterium ulcerans cutaneous diphtheria. The Lancet Infectious Diseases. 2015; 15(9): 1100-7.
15. De Oliveira Dias A.A.D.S., Santos L.S., Sabbadini P.S., Santos C.S., Silva Junior F.C., Napoleao F. et al. Corynebacterium ulcerans diphtheria: an emerging zoonosis in Brazil and worldwide. Revista de Saude Publica. 2011; 45(6): 1176-91.
16. Shepelin A.P., Polosenko O.V., Borisova O.Yu., Pimenova A.S., Gadua N.T. The comparative characteristic of growth mediums for separation of Corynebacteria. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2016; 1: 59-64. (in Russian)
17. Shepelin A.P. National nutrient environment - Corynebacterial to highlight the causative agent of diphtheria Kurskiy nauchno-prak-ticheskij vestnik «Chelovek i ego zdorov'e». 2012; 4:108-10. (in Russian)
Поступила 25.04.21 Принята к печати 10.05.21
