CC BY
382
УДК 578.828.6:578.5.083.2
ВОЗМОЖНОСТИ ИФА МОЛОКА В ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Якупов Т.Р*., Хазипов Н.З*., Алимов А.М.*, Камалов Б.В.**
Казанская государственная академия ветеринарной медицины* Главное управление ветеринарии РТ* *
Ключевые слова: лейкоз крупного рогатого скота,
иммуноферментный анализ, пробы молока, антитела, иммунный комплекс.
Key words: bovine leukemia, immunoassay, samples of milk, antibodies, immune complex.
Введение. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота в нашей стране в основном представлена реакцией иммунодиффузии в геле (РИД), в то время как в Национальных программах по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота многих стран Западной Европы и Америки применяется иммуноферментный анализ (ИФА), как наиболее чувствительный, специфичный и технологичный тест.
Одним из важных преимуществ иммуноферментных методов перед РИД является то, что ИФА позволяет выявлять специфические антитела в пробах молока, молозива и сборного молока. Если учесть доступность и простоту выполнения данного метода, а также трудности связанные с взятием крови и созданием стрессовых ситуаций для животных, то исследования проб молока и сборного молока являются привлекательными для оценки благополучия хозяйств по лейкозу крупного рогатого скота.
О высокой информативности ИФА проб молока в диагностике лейкоза отмечают многие исследователи. Так, Nguyen V.K., Maes R.F. (1993) исследовали 375 проб сыворотки крови и 150 проб молока от инфицированных ВЛКРС коров, а Sargeant J.M., Kelton D.F et al., (1997) изучали значимость ИФА сборного молока в определении статуса стад коров по лейкозу. Они исследовали 97 стад с различным количеством поголовья животных и установили, что ИФА позволяет обнаруживать наличие анти-ВЛКРС антител в пробах сборного молока от стада с соотношением инфицированного и здорового поголовья в среднем на 1:13.
По данным Компании «AntelBio” метод ИФА молока в диагностике лейкоза по чувствительности не уступает ИФА-тестам сывороток крови и способен обнаруживать, анализируя пробы сборного молока, одного больного животного в стаде из 125 дойных коров.
Материалы и методы. Пробы молока получали от коров благополучных и неблагополучных по лейкозу хозяйств РТ. Иммуноферментный анализ проводили с использованием «Набора для
выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС)» производства НПО «Нарвак». Всего исследовано 362 пробы молока. Результаты исследований животных по РИД получены в Республиканской ветеринарной лаборатории.
Результаты исследований. Из благополучных по лейкозу крупного рогатого скота хозяйств было получено 25 проб молока. В иммуноферментном анализе все показали отрицательные результаты. Остальные пробы молока были получены из неблагополучных по лейкозу хозяйств, в т.ч. 227 проб от положительных и 110 проб от отрицательных по РИД коров. В иммуноферментном анализе из 227 проб молока от положительно реагирующих в РИД коров 47 прореагировало отрицательно, а из 110 проб от отрицательно реагирующих в РИД коров -13 положительно, что составляет 21% и 12% соответственно. Полученные результаты свидетельствуют о более низкой эффективности ИФА молока в диагностике лейкоза крупного рогатого скота по сравнению с РИД.
Известно, что при хронических инфекциях, вызванных вирусами семейства Яе^оутёае, в биологических жидкостях организма появляются иммунные комплексы - «антиген-антитело». Большинством исследователей отмечается, что определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) имеет большое значение в мониторинге эпизоотической ситуации по лейкозу и может служить индикатором инфицированности животных вирусом [1,2].
Нами разработан способ обработки проб сыворотки крови и молока позволяющий диссоциировать ЦИК при лейкозе и выявлять в ИФА «связанные» антитела (подана заявка на патент). Все пробы молока были исследованы иммуноферментным методом и предварительной обработкой по нашей методике. Результаты представлены в таблице.
1 .Результаты ИФА проб молока.
Всего проб ИФА без обработки проб ИФА с обработкой проб
Положит. Отрицат. Положит. Отрицат.
Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во %
РИД (+) 227 180 79 47 21 215 95 12 5
РИД (-) 110 13 12 97 88 18 16 92 84
Полученные результаты свидетельствуют о том, что обработка проб молока с целью диссоциации иммунных комплексов позволяет повысить эффективность диагностики лейкоза методом ИФА молока. Количество отрицательных проб в РИД (+) группе уменьшилось на 35, а количество положительных проб в РИД (-) группе увеличилось на 5 проб.
Параллельно все животные были исследованы на лейкоз методом ИФА сывороток крови. Полученные результаты были сопоставимы
результатами ИФА молока с диссоциацией иммунных комплексов, что подтверждает высокую чувствительность последней. Так, 5 проб молока, из группы РИД (+) животных, в ИФА показали отрицательные результаты, а из группы РИД (-) животных 18 проб показали положительные результаты (таблица 1). ИФА сывороток крови этих же животных, за исключением одного случая, полностью подтвердила результаты ИФА молока с диссоциацией иммунных комплексов.
Обсуждение и выводы. Таким образом, определение специфичных антител в составе иммунных комплексов позволяет увеличить достоверность выявления больных лейкозом животных. ИФА проб молока является достаточно чувствительным, доступным и экономически более выгодным тестом в изучении эпизоотической ситуации по лейкозу в хозяйствах.
С учетом особенностей патогенеза и развития иммунитета при лейкозе у крупного рогатого скота, возможностей методов иммуноферментного анализа, для оценки благополучия хозяйств по лейкозу, а также в оздоравливаемых от лейкоза хозяйствах, рекомендуем проводить 2-х кратное исследование методом ИФА проб сборного молока с интервалом в 3 месяца. Пробы молока использовать в ИФА с предварительной обработкой для диссоциации иммунных комплексов.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Жавненко В.М. Циркуляция антигенов, антител и иммунных комплексов в сыворотке крови коров, больных лейкозом. / В.М. Жавненко, В.В. Черняк.// Иммунология и иммунотерапия лейкозов человека и животных. Тез. докл. Всесоюзн. конф. Ташкент, 1984, С.49-50. 2. Логинов С.И. Иммунные комплексы при лейкозе крупного рогатого скота/ С.И.Логинов// Ветеринарная патология/ Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине - 2003 - №1.- с.85-87. 3. Nguyen V.K. evaluation of an enzyme-
linked immunosorbent assay for detection of antibodies to bovine leukemia virus in serum and milk / V.K. Nguyen, R.F. Maes // J.Clin.Microbiol., 1992.-31(4). -979-981. 4. Sargeant J.M., Kelton D.F., Martin E.W., Mann E.D. Evalution of bulk-milk ELISA test for the classification of herd-level bovine leukemia virus status //Prev. Vet. Med., 1997.-v.-31.-p.223-230.
ВОЗМОЖНОСТИ ИФА МОЛОКА В ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Якупов Т.Р., Хазипов Н.З., Алимов А.М., Камалов Б.В.
Резюме
Предварительная диссоциация ЦИК в пробах позволяет повысить чувствительность ИФА молока в диагностике лейкоза крупного рогатого скота. ИФА проб молока является достаточно чувствительным, доступным
и экономически более выгодным тестом в изучении эпизоотической ситуации по лейкозу в хозяйствах.
POSSIBILITIES OF MILK ELISA TEST FOR THE DIAGNOSTICS BOVINE
LEUKEMIA
Yakupov T.R., Chazipov N.Z., Alimov A.M., Kamalov B.V.
Resume
It is proved that processing of milk samples on purpose destruction immune complexes helps to increase efficiency of diagnostics of bovine leukosis by ELISA. Milk ELISA test is sensitive, accessible and economically more favorable one in studying epizootic situations on bovine leukemia in herd.
