Возможность объективного учета колориметрической методики с использованием бензидиновой пробы при ориентировочном установлении наличия крови на вещественных доказательствах Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ

© А. В. Коноваленко, В. Л. Сидоров, О. Д.Ягмуров, 2015 г. УДК [340.6:616-073.56]:543

А. В. Коноваленко, В. Л. Сидоров, О. Д. Ягмуров

ВОЗМОЖНОСТЬ ОБЪЕКТИВНОГО УЧЕТА КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОЙ МЕТОДИКИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БЕНЗИДИНОВОЙ ПРОБЫ ПРИ ОРИЕНТИРОВОЧНОМ УСТАНОВЛЕНИИ НАЛИЧИЯ КРОВИ НА ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВАХ

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский униве-ритет имени академика И. П. Павлова; Бюро судебно-медицинской экспертизы, Санкт-Петербург

ВВЕДЕНИЕ

Как считают наши отечественные [1—3] и зарубежные исследователи [4], при установлении наличия крови в следах и участках на вещественных доказательствах обычно следует начинать с ориентировочных методов исследования, а лишь затем переходить к доказательным. Предварительные (ориентировочные) тесты на присутствие крови дают возможность найти пятна и участки на вещественных доказательствах, в которых затем проводят доказательные (подтверждающие) реакции. Такие предварительные способы, как люминольный тест и реакция Kastle —Meyer, могут быть использованы как скрининг-методы [8].

Выдвинутое в XXI в. инновационное предложение устанавливать наличие крови в следах на вещественных доказательствах по РНК-маркерам [5 — 7, 9] в России не нашло какого-либо отклика из-за отсутствия необходимого оборудования и соответствующих реагентов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Нами была разработана колориметрическая модификация методики для установления ориентировочного (предварительного) присутствия крови на вещественных доказательствах с помощью бензи-диновой пробы, которая сопровождается объективной регистрацией и компьютерной обработкой результатов исследования. Для проведения реакции исследуемый материал предварительно заливают дистиллированной водой с pH = 7,2 — 7,4 и экстрагируют в течение 18 часов в условиях бытового холодильника.

Принцип метода заключается в том, что в лунки полистирольного планшета с плоским дном вносят

по 10 мкл водного экстракта из исследуемого материла (пятен и участков, на вещественных доказательствах, подозрительных на присутствие крови). Затем добавляют 50 мкл насыщенного раствор бен-зидина в уксусной кислоте и 50 мкл 3 %-го раствора перекиси водорода. При положительной реакции в лунках планшета наблюдается синее окрашивание. В качестве положительного контроля вводится экстракт из пятна заведомой крови, высушенной на марле, в качестве отрицательного контроля — дистиллированная вода.

Регистрация результатов реакции осуществляется фотометрически на регистрирующем приборе (медицинский микропланшетный «Sunrise» фирмы TECAN Austria GmbH с программным обеспечением «Magellan») при длине волны 630 нм с последующим введением результатов в компьютер, что позволяет сохранять ее результаты на жестком диске, либо на различных носителях.

Данная технология апробирована на заведомых образцах крови человека, высушенных на марле, а также при проведении большого количества практических судебно-медицинских экспертиз.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты исследование представлены в таблице. При получении положительной реакции (наличии крови в исследуемых пробах) мы наблюдали значительный рост оптической плотности с 0,059 (отрицательный контроль) до 2,605 условных единиц (жидкая кровь человека в разведении 1:100). В водных экстрактах из пятен на вещественных доказательств максимальные положительные значения реакции достигали 3,210 условных единиц оптической плотности, а минимальные составили — 0,111 условных единиц.

Предложенная нами колориметрическая модификация методики для установления ориентировочного (предварительного) присутствия крови на вещественных доказательствах с помощью бензидиновой пробы была разработана нами всего три месяца назад, но нашла широкое применение при проведении практических судебно-медицинских экспертиз. По своей специфичности и чувствительности она практически не отличается от традиционно применяемых для этой цели аналогов, но обладает двумя существенными преимуществами:

1) объективной регистрацией и возможностью компьютерной обработки результатов. Документирование результатов реакции в табличной форме позволяет дополнительно иллюстрировать заключения экспертов;

2) высокой технологичностью и производительностью.

УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ СПбГМУ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА • ТОМ XXII • №-2 • 2015

Значение оптической плотности, измеренной посредством ридера "SUNRISE" в лунках планшета, при проведении бензидиновой пробы с целью установления ориентировочного наличия крови на вещественных _доказательствах_

Исследуемые образцы Количество исследований Значения оптической плотности в у. е. (M±m)

Минимальные положи- 30 0,111±0,051

тельные значения

Максимальные положи- 30 3,210±0,066

тельные значения

Отрицательные значения 30 0,067±0,034

Отрицательный контроль (дистиллированная вода) 10 0,059±0,042

Положительный контроль 10 2,605±0,093

(жидкая кровь человека в разведении 1:100)

В ходе проведения экспертных исследований данной методикой неоднократно были получены положительные результаты в пятнах, следах и участках на вещественных доказательствах, где потом устанавливали доказательное присутствие крови методом восходящей тонкослойной хроматографии, ее видовую принадлежность — методом встречного имму-ноэлектрофореза и иммуноферментного анализа по IgGовщ. Далее при необходимости была определена групповая принадлежность крови, либо проведено ее молекулярно-генетическое исследование.

Следует особо отметить следующий факт: поскольку для предложенной нами модификации требуется всего лишь 10 мкл вытяжки, то можно в экстракте из исследуемого на присутствие крови пятна (участка) установить также наличие спермы, наличие слюны, пота, мочи, что позволяет получить максимум информация из самого малого количества исследуемого материла. Поскольку дистиллированная вода является недеструктивным реагентом, нарезанные кусочки после проведения поисковых реакций можно успешно подвергать как серологическому, так и молекулярно-генетическо-му исследованию. Особенно удобно применять предложенную нами модификацию при исследовании крупногабаритных вещественных доказательств, таких как постельное белье и предметы одежды. Но можно использовать ее также при объединении большого количество небольших экспертиз, где вещественные доказательства имеют небольшие размеры и представлены на исследование в малом количестве.

ЛИТЕРАТУРА

1. Томилин В. В., Барсегянц Л. О., Гладких А. С. Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств. — М.: Медицина, 1989. - 303 с.

2. Туманов А. К. Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств. — М.: Госюриздат, 1961. — 576 с.

3. Туманов А. К. Основы судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств. — М.: Медицина, 1975. — 407 с.

4. An J. H, Shin K. J., Yang W. I., Lee H. Y. Body fluid identification in forensics // BMB Rep. - 2012. - Vol. 45. - № 10. -P. 545-553.

5. Castello A., Frances F., Verdu F. An Alternative to the Human Hemoglobin Test in investigation of Bloodstains Treated with Active Oxigen: The Human Glycophorin A Test // The Scientific World JOURNAL. - 2011. - Vol. 11. - P. 907-916.

6. Hanson E. K., LubenowH., Ballantyne J. Identification of forensically relevant body fluids using a panel of differentially expressed microRNAs // Anal Biochem. - 2009. - Vol. 15. -№ 2. - P. 303-314.

7. Uchimoto M. L., BeasleyE., Coult N. et al. Considering the effect of stem-loop reverse transcription and real-time PCR analysis of blood and saliva specific microRNA markers upon mixed body fluid stains // Forensic Sci. Int. Genet. - 2013. -Vol. 7. - № 4. - P. 418-421.

8. Virkler K., LednevI. K. Analysis of body fluids for forensic purposes: from laboratory testing to non-destructive rapid confirmatory identification at a crime scene // Forensic Sci. Int. -2009. - Vol. 188. - № 1-3. - P. 1-17.

9. ZubakovD., Hanecamp E., Kokshoorn M. et al. Stable RNA markers for identification of blood and saliva stains revealed from whole genome expression analysis of time-wise degraded samles // Int. J. Legal Med. - 2008. - Vol. 122. - № 2. -P. 135-142.

РЕЗЮМЕ

Д. В. Коноваленко, В. Л. Сидоров, О. Д.Ягмуров

Возможность объективного учета колориметрической методики с использованием бензидиновой пробы при ориентировочном установлении наличия крови на вещественных доказательствах

В статье представлена колориметрическая модификация методики, предназначенной для ориентировочного установления наличия крови в пятнах на вещественных доказательствах с использованием бензидиновой пробы. Предложенная нами модификация сопровождается фотометрическим учетом и компьютерной обработкой результатов. Широко раскрываются производительность, объективность, а также другие возможности и преимущества данного метода при использовании его в судебно-медицинской практике.

Ключевые слова: наличие крови, вещественные доказательства, пятна крови.

SUMMARY

Д. V. Konooalenko, V. L. Sidoroo, O. D. Yagmuroo

Opportunity of objective account of the colorimetric procedure using benzidine indicative at establishing the preliminary presence of blood on the material evidences

The article presents a modification of the colorimetric method for the preliminary establishment of presence of blood in the stainson the material evidences using benzidine test. The proposed modification is accompanied by photometric accounting and computer processing of the results. Performance, objectivity, as well as other features and advantages of this method when used in forensic practice are described in detail.

Keywords: presence of blood, material evidences, bloodstains.