CC BY
587УДК 616.594.171.2:57.063-083 © Коллектив авторов, 2011.
ВОЗДЕЙСТВИЕ САПОНИНА ТАУРОЗИДА SX1 И МИРАМИСТИНА НА ДРОЖЖЕПОДОБНЫЕ ГРИБЫ, ВЫЗЫВАЮЩИЕ ОППОРТУНИСТИЧЕСКИЕ МИКОЗЫ
Ю.Л. Криворутченко, О.Н. Постникова, М.А. Кирсанова, И.Б. Андроновская, В.И. Гришковец *
Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии (зав. - проф. Ю.Л. Криворутченко), ГУ «Крымский государственный медицинский университет имени С.И.Георгиевского»; *Таврический национальный университет им. В.И. Вернадского, г. Симферополь.
THE EFFECT OF SAPONIN TAUROSID SX1 AND MYRAMISTIN ON YEAST-LIKE FUNGI CAUSING
OPPORTUNISTIC MYCOSES Yu. L. Krivorutchenko, O. N. Postnikova, M. A. Kirsanova, I. B. Andronovskaya, V. I. Grishkovets
SUMMARY
Susceptibility of 26 strains of pathogenic yeast-like fungi to saponin taurosid Sx1, and antiseptic Okomistin (0,01% myramistin) has been determined. All the strains were isolated from patients admitted to municipal hospitals in Simferopol City in 2005-2008. Using quantitative methods it was determined that taurosid Sx1 and Okomistin could effectively inhibit growth of 88,5% and 84,7% fungal strains correspondently. Taurosid Sx1 and Okomistin susceptibilities exceeded previously described susceptibility of the yeast-like fungi to such antifungal drugs as azole derivatives.
Д1Я САПОНИНУ ТАУРОЗИДУ SX1 I М1РАМ1СТИНУ НА ДР1ЖДЖОПОД1БН1 ГРИБИ, ЩО СПРИЧИНЯЮТЬ
ОПОРТУНИСТИЧН1 М1КОЗИ Ю.Л. Криворутченко, О.М. Постжкова, М.О. Юрсанова, 1.Б. Андроновська, B.I. Гришковець
РЕЗЮМЕ
Вивчено чутливють 26 шта1^в патогенних дрiжджоподiбних ^6iB до сапонину таурозиду Sx1 та антисептика Окомютину (0,01% 1^рамютину). Yci штами було iзольовано вщ пафенлв, госпiталiзованих у 2005-2008 рр. у лкарж м. ^мферополя. За допомогою сучасних кiлькiсних методiв було доведено, що таурозид Sx1 i Окомiстин ефективно пригнiчують рют 88,5% i 84,7% штамiв грибiв вiдповiдно. Чутливiсть дослiджених грибiв до таурозиду Sx1 та Окомiстину була вищою за виявлену ранiще чутливють дрiжджоподiбних грибiв до таких протигрибкових препара^в, як похiднi азолу.
Ключевые слова: мирамистин, сапонин таурозид Sx1, грибы, чувствительность.
В первом десятилетии XXI века произошло повышение общего уровня заболеваемости внутри-больничными инфекциями (ВБИ). До 2005 г. в Германии, Великобритании и Швеции их диагностировали у 6-7% больных, находившихся на стационарном лечении, в России - у примерно 5% таких больных [7, 19]. В 2008 г. среднеевропейский показатель частоты регистрации ВБИ составил уже 8%. В США они ежегодно выявляются у 2 миллионов пациентов [14]. Растущее распространение ВБИ связывают со значительными изменениями в их этиологии и патогенезе, произошедшими за последнюю треть столетия. Причинами этих изменений считаются массовое применение антибиотиков, реализация программ вакцинации населения, снизившая риск возникновения заболеваний, вызываемых высоко патогенными микроорганизмами, широкое использование инва-зивных медицинских манипуляций и другие факторы. Большое влияние на ухудшение эпидемической ситуации в отношении ВБИ играет рост удельного веса лиц, имеющих дисфункции иммунной системы (пожилые люди, лица с метаболическими расстрой-
ствами, пациенты с приобретенными иммунодефи-цитами инфекционной природы и др.). Из этих людей, имеющих повышенную чувствительность к инфекциям, сформировался обширный природный резервуар, в пределах которого быстрыми темпами проходит эволюция условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) - возбудителей оппортунистических инфекций. Её результатом стало появление новых генетически измененных форм УПМ, отличающихся повышенной устойчивостью к антимикробным препаратам и наличием других необычных факторов патогенности. К таким резистентным возбудителям ВБИ относятся метициллинрезистентные S. aureus (MRSA), E.coli, синтезирующие бета-лакта-мазы расширенного спектра (ESBL), ванкомицин-резистентные энтерококки (VRE) и другие УПМ [14]. Устойчивая циркуляция внутри больниц возбудителей ВБИ, устойчивых к антимикробным препаратам, и их выход в широкую циркуляцию среди населения вне больниц привели к признанию того, что прогрессирующее распространение резистентных форм УПМ является одной из главных проблем современ-
ной медицины [16].
Считается, что примерно половину всех ВБИ вызывают такие бактерии, как Escherichia coli, Enterococcus spp., Staphylococcus aureus и Pseudomonas spp. [23]. Среди небактериальных возбудителей ВБИ преобладают грибы рода Candida [3, 21, 27]. Они вызывают оппортунистические микозы у ВИЧ-инфицированных лиц, больных сахарным диабетом и онкогематологических пациентов, людей с иными формами дисфункции иммунной системы [6, 12, 22, 26]. В течение последнего десятилетия в Украине наблюдалось интенсивное распространение патогенных дрожжеподобных грибов, полирезистентных в отношении наиболее широко применяемых антимикотиков. Так, доля устойчивых штаммов грибов рода Candida, выделенных от больных в 20042009 гг. и изученных тремя разными группами исследователей, составила для амфотерицина В 7-36%, итраконазола - 62-100%, клотримазола - 56-84%, флю-коназола - 85-93% [5, 8, 20].
Из приведенных данных следует, что среди дрож-жеподобных грибов, циркулирующих в нашей стране, уровень резистентности к коммерческим анти-микотикам группы азолов достиг критического уровня. Целесообразность дальнейшего использования этих препаратов вызывает сомнения. В отношении полиеновых антибиотиков уровень чувствительности грибов пока остается на приемлемом уровне, хотя рост резистентности к ним и имеет тенденцию к росту. На этом фоне актуальным представляется поиск новых веществ, обладающих антифунгальными свойствами. Перспективным в этом отношении веществом является тритерпеновый сапонин таурозид Sx1 из крымского плюща. В проведенных ранее исследованиях нами было установлено, что таурозид Sx1 может подавлять жизнедеятельность дрожжеподоб-ных грибов и увеличивать выживаемость мышей, зараженных вирусом гриппа [8, 10].
Увеличение частоты возникновения ВБИ обусловлено формированием у возбудителей устойчивости не только к антибиотикам, но также и к антисептикам и дезинфектантам. После 2000 г. в Украине происходило распространение УПМ, резистентных к альдегидо- и хлорсодержащим дезинфектантам, препаратам из группы гуанидина, фурацилину и хлор-гексидину [13, 18].
Некоторыми авторами были опубликованы данные о малой бактерицидной активности антисептических препаратов на основе мирамистина, относящегося к четвертичным аммониевым соединениям [9]. Например, в одной из работ утверждалось, что глазные капли "Окомистин" (0,01% водный раствор мирамистина) совершенно не обладают бактерицидным действием в отношении S. aureus и грамнега-тивных палочковидных бактерий [15].
Однако, приведенные в этой работе сведения противоречили данным других авторов, полученным
примерно в то же самое время в России и подтверждавшим высокую эффективность применения Око-мистина и иных препаратов мирамистина для профилактики и лечения гнойно-воспалительных заболеваний глаз и других органов [2, 4, 11]. Расхождения в оценках свойств мирамистина, сделанных разными авторами, могли быть результатом как неравномерного распространения возбудителей, устойчивых к этому препарату, так и неудачного выбора некоторыми исследователями методик изучения антимикробного действия данного антисептика. В любом случае, выяснение причин указанных противоречий представлялось важным для решения вопроса о целесообразности дальнейшего применения препаратов мирамистина.
Целью работы явилось сравнительное изучение чувствительности к сапонину таурозиду Sx1 и Око-мистину дрожжеподобных грибов, изолированных в 2005-2008 гг. в больницах г. Симферополя, при использовании для анализа количественных методов, соответствующих стандартам, принятым в современной международной практике.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследования проводили на музейном штамме C. albicans CCM885 (ГИСК им Л.А. Тарасевича, г. Москва) и 25 клинических изолятах дрожжеподоб-ных грибов. Все изоляты были выделены в период с 2005 г. по 2008 г. от ВИЧ-инфицированных (17 изоля-тов) и не ВИЧ-инфицированных пациентов, госпитализированных в больницы г. Симферополя. Для изоляции грибов применяли стандартные процедуры. Их идентифицировали с помощью тест-системы "Auxocolor 2" (BioRad lab, Франция).
В работе изучали тритерпеновый сапонин таурозид Sx1 и 0,01% водный раствор мирамистина в виде глазных капель Окомистин (ЗАО "Инфамед-Ук-раина"). Таурозид Sx1 был выделен из крымского плюща Hedera taurica Carr. в Таврическом национальном университете им. В.И. Вернадского, г. Симферополь.
Чувствительность грибов к таурозиду Sx1 оценивали по минимальной ингибирующей (фунгицидной) концентрации (МИК) сапонина. МИК определяли с помощью модифицированного микро-теста [25]. По технике постановки он был близок к методике, рекомендованной NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards, USA) [21]. Таурозид Sx1 разводили в среде RPMI-1640 (ГУП ИПВЭ РАМН, Россия) и добавляли 3% плазмы крови человека. В ячейки полистироловых 96-луночных планшет вносили по 0,1 мл 2-кратных разведений сапонина и по 0,01 мл инокулята, содержащего 103 КОЕ/мл грибов. Смеси инкубировали в течение 20 ч при 28 °C в атмосфере 5 % CO2. Затем из каждой лунки брали пробы по 0,1 мл. Их наносили на агаризованную среду Сабуро и проводили культивирование 48 ч при 28°C. МИК определяли как наименьшую концентрацию таурозида
Sx1, которая обеспечивала полное подавление роста грибов.
Чувствительность микроорганизмов к Окомис-тину исследовали с помощью определения скорости инактивации грибов антисептиком. Использовали технику постановки и критерии Европейского Стандартного количественного суспензионного теста [24]. Коротко, из культур грибов, растущих в жидкой питательной среде Сабуро, готовили инокуляты с концентрацией клеток 5г106 КОЕ/мл. Ее подтверждали с помощью высевов серийных разведений микробных суспензий на агаризованную среду Сабуро. Порции инокулятов по 1 мл вносили в 9 мл раствора Окомис-тина (или дистиллированной воды в контроле). Эти смеси инкубировали при 37° С в ротационном термостате (перемешивание при 100 оборотах/минуту). Образцы смесей отбирали через 15, 35 и 60 минут инкубации и по 0,1 мл высевали на агар Сабуро. Через 48 ч культивирования при 37°С подсчитывали количество выросших колоний. Оценку результатов проводили путем сравнения выживаемости грибов, инкубированных с Окомистином, с их выживаемостью в контроле. Концентрацию живых микробов в контроле (КОЕ/мл) принимали за 100%.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Видовой состав изученных в работе грибов представлен на рис. 1-А: 24 изолята (штаммы 2-25) принадлежали к грибам рода Candida, изолят (26) - к виду Geotrichum capitatum. От ВИЧ-инфицированных пациентов было получено 17 изолятов, от больных с другой патологией - 8 изолятов (12-13, 18-19, 21, 24-26). Штамм 1 представлял собою музейную культуру.
Чувствительность грибов к таурозиду Sx1 определяли по выживаемости микроорганизмов после их инкубации с сапонином в течение 20 часов (рис. 1-А). Чувствительными считали штаммы, в отношении которых МИК таурозида Sx1 составляла 125 мкг/мл, умеренно чувствительными - для которых МИК была 250 мкг/мл, устойчивыми - 500 мкг/мл. При выборе критериев исходили из того, что в таких препаратах, как Окомистин, антисептическое вещество мирами-стин находится в близкой к выбранной для сапонина концентрации 100 мкг/мл. Кроме того, действие антигрибкового препарата «Экзодерил» (нафтифина гидрохлорид) считается приемлемым, если его МИК в отношении исследуемого изолята грибов также составляет 100 мкг/мл [17]. В соответствии с указанными критериями чувствительными к таурозиду Sx1 были признаны 27,0%, умеренно чувствительными - 61,5%, а устойчивыми - 11,5% штаммов (изоляты 5, 21, 22).
Наши результаты оказались сопоставимы с данными других авторов, изучавших тритерпеновые сапонины [28]. Таким образом, чувствительными и умеренно чувствительными к таурозиду Sx1 оказались 88,5% изученных в работе штаммов, что позво-
ляет рассматривать данный сапонин как потенциальное антифунгальное средство.
Важным свойством таурозида Sx1 является его неспособность активировать репликацию вируса иммунодефицита человека, что было показано в опытах на культуре лимфобластоидных клеток, зараженных ВИЧ-1 [10]. Эта особенность является практически ценной характеристикой сапонина, поскольку позволяет отнести таурозид Sx1 к потенциально безопасным средствам, которые моги бы быть использованы при лечении ВИЧ-инфицированных пациентов.
Воздействие Окомистина на дрожжеподобные грибы определяли по скорости их инактивации антисептиком (рис. 1-Б).
Микроорганизмы считали чувствительными к Окомистину, если после 15, 35 и 60 минут инкубации с антисептиком они имели выживаемость по сравнению с контролем на уровне менее 6%, 1% и 0,5% соответственно. Умеренно чувствительными считали штаммы, которые через 35 и 60 минут имели выживаемость на уровне менее 50% и 10% соответственно. Устойчивыми считали штаммы, выживаемость которых через 15-35 минут инкубации была более 30%, а через 1 час - 20% и более.
На основании применения приведенных критериев чувствительными к Окомистину были признаны 46,2%, умеренно чувствительными - 38,5%, а устойчивыми - 15,3% изолятов исследованных грибов. Наши данные не противоречили результатам исследования В.Г. Арзуманян с соавт., изучавших воздействие мирамистина на грибы рода Candida с помощью другой методики. В этой работе было показано, что фунгистатическое действие мирамистина проявляется при МИК 16-128 мкг/мл, причем при такой концентрации антисептика фунгицидный эффект проявлялся в отношении 57% исследованных культур [1].
С одной стороны, полученные указанными авторами сведения свидетельствуют о том, что выявленные нами значения МИК таурозида Sx1 для чувствительных изолятов грибов на уровне 125-250 мкг/ мл сравнимы с МИК для антисептика мирамистина, что дополнительно подтверждает перспективность сапонина таурозида Sx1 как потенциального антими-котика.
С другой стороны, они показывают, что уровни чувствительности к Окомистину у дрожжеподобных грибов, циркулировавших в течение последнего десятилетия в России и в Украине, были близкими.
Чувствительность клинических изолятов грибов рода Candida к Окомистину не уступала их чувствительности к амфотерицину В (7-36% устойчивых штаммов) и значительно превышала чувствительность к таким широко используемым антимикоти-кам, как клотримазол, флюконазол и итраконазол (5784%, 85-93% и 62-84% устойчивых штаммов соответственно [5, 20].
А. Чувствительность к таурозиду Sx1
Б. Чувствительность к Окомистину
в о
ю
и р
к
л о
з
C.albicans сч C.albicans
го C.albicans
C.albicans i
ю C.albicans
to C.albicans p
C.albicans i
со C.albicans p
<n C.albicans i
? C.albicans p
£ C.albicans i
^ C.albicans p
£2 C.dubliniensis
^ C.dubliniensis i
J2 C.dubliniensis
^ C.lusitaniae i
C.lusitaniae -'-i
C.parapsilosis p
C.parapsilosis i
S C.tropicalis p
Б C.tropicalis
C.famata
Й C.kefyr i
3 C.guilliermondii p
Й C.krusei i
Й G.capitatum --1
2 штамм 4 штамм 6 штамм 8 штамм 10 штамм 12 штамм 14 штамм 16 штамм 18 штамм 20 штамм 22 штамм 24 штамм 26 штамм
Э
□ 60 мин.
1 1 ■ 35 мин. □ 15 мин.
-
ЯЯЯШЛт
—,
-
h
Шщ .
0 200 400 600 МИК (мкг/мл)
0 50 100 150
Выживаемость (% к контролю)
Рис. 1. Чувствительность к таурозиду Sx1 и Окомистину дрожжеподобных грибов, изолированных в 2005-2008 гг. в больницах г. Симферополя. Чувствительность к таурозиду Sx1 (Д) определялась по выживаемости микроорганизмов после их инкубации с сапонином в течение 20 часов, а чувствительность к Окомистину (Б) - по скорости инактивации грибов антисептиком в течение
15-60 минут.
ВЫВОДЫ
1. Чувствительными и умеренно чувствительными к сапонину таурозиду Sx1 являются соответственно 27,0% и 61,5% изолятов дрожжепожобных грибов, вызывавших оппортунистические микозы у ВИЧ-инфицированных и других пациентов, госпитализированных в 2005-2008 гг. в больницы г. Симферополя.
2. Уровень чувствительности дрожжеподобных грибов к таурозиду Sx1 (МИК 125-250 мкг/мл, фунги-цидный эффект для 88,5% изолятов) близок к уровню их чувствительности к антисептику мирамистину, что позволяет рассматривать данный сапонин как потенциальное антифунгальное средство.
3. Как было показано ранее, таурозид Sx1 не активирует репликацию вируса иммунодефицита человека в культурах клеток, что указывает на безопасность его возможного применения в качестве антигрибкового средства у ВИЧ-инфицированных лиц.
4. Чувствительность к Окомистину у дрожжепо-добных грибов, циркулировавших в 2005-2008 гг. у больных в Крыму, находится на достаточно высоком уровне (менее 16% устойчивых культур), что позволяет считать целесообразным дальнейшее применение препаратов мирамистина для лечения и профилактики грибковых инфекций.
ЛИТЕРАТУРА
1. Арзуманян В.Г., Кириченко И.М. Оценка эффективности мирамистина in vitro на культурах клинически значимых дрожжевых грибов // Третий Всероссийский конгресс по медицинской микологии: материалы симпозиума «Стратегия использования мирамистина в лечении и профилактеке грибковых заболеваний», 24-25 марта 2005.-Москва, 2005.-С.19-22.
2. Блатун Л.А. Профилактика и лечение бактериально-грибковых инфекций в хирургической практи-
ке с помощью мирамистина //Третий Всероссийский конгресс по медицинской микологии: материалы симпозиума «Стратегия использования мирами-стина в лечении и профилактеке грибковых заболеваний», 24-25 марта 2005.-Москва, 2005.-С.12-15.
3. Богдатьев В.Е., Бурова С.А., Смирнов А.В. Кан-дидозная инфекция в отделении интенсивной терапии // Материалы I Всероссийского конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской ми-кологии».-Москва: Национальная Академия Микологии, 2003.- ТП.-С.209-210.
4. Гундорова Р.А., Егоров Е.А., Кривошеин Ю.С., Свистов В.В., Алексеева И.Б. и др. Применение ми-рамистина в офтальмологии / Пособие для врачей.-М., 2004.- 10 с.
5. Данилейченко Н.А., Астапова О.А., Бирюкова Т.А., Кошкина А.В., Соколова Т.С. Резистентность к противогрибковым препаратам грибов рода Candida, выделенных в г. Лисичанске Луганской области в 2009 году // Матерiали Всеукрансько! науко-во-практично! конференцп «Внутршньо-лшарняш шфекцл та методи визначення механiзмiв резистент-ностi !х збуднишв до антимiкробних препарапв», 2526.05.2010.- Кив,2010.- С.83-85.
6. Евсегнеева И.В. Грибковые поражения глаз при сахарном диабете // Материалы первого Всероссийского конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии». - М.: Национальная академия микологии, 2003.-Т.2.- С.226-227.
7. Зуева Л.П., Раисовская Е.Н. Стратегия организации борьбы с внутрибольничными инфекциями в современных условиях // РЭТ-инфо. -2003. - № 2.- С. 18-19.
8. К1рсанова М.О., Павленко О.Ю., Криворутчен-ко Ю.Л. Видовий склад грибiв роду Candida, видше-них у Криму вщ ВIЛ-iнфiкованих дiтей, i !х чутливiсть до антимiкотикiв i таурозиду Sx1 // Iнфекцiйнi хворо-би.- 2010.-№2 (60).-С.29-33.
9. Ковальчук В.П. Характеристика арсеналу анти-септичних засоб1в, зареестрованих в УкраМ // Biomedical and biosocial anthropology.- 2006.- .№6.- С. 71-76.
10. Криворутченко Ю.Л., Андроновская И.Б., Малыгина В.Ю., Кирсанова М.А. и др. Воздействие на гриппозную и ВИЧ-1 инфекции липофильных производных мурамоилдипептида и сапонина таурозида Sx1, подавляющего рост грибов // Труды крымского гос. мед. университета.- 2006.- Т. 142, Ч.У- С.80-86.
11. Кривошеин Ю.С., Рудько А.П., Свистов В.В., Смирнов И.В. Мирамистин-отечественный антисептик широкого спектра действия: стратегия создания новых лекарственных форм мирамистина для дерматологии //Третий Всероссийский конгресс по медицинской микологии: материалы симпозиума «Стратегия использования мирамистина в лечении и профилактеке грибковых заболеваний», 24-25 марта 2005.-Москва, 2005.-С.3-5.
12. Лесовой В.С., Липницкий А.В., Очкурова О.М. Микозы и СПИД: некоторые особенности их тече-
ния, лабораторной диагностики и лечения // Пробл. мед. Микологии.- 2000.- № 2(3) .- С. 12-18.
13. Марiевський В.Ф., Таран В.В., Кролевецька Н.М., Матошко Г.В., Жалко-Титаренко В.Л. Вивчен-ня процеив формування стiйкостi мiкроорганiзмiв до дезшфекцшних засобiв з рiзних груп хгшчних спо-лук // Профiлактична медицина.- 2008.- №2.-С.13-17.
14. Марсель Ж.П., Альфа М., Бакеро Ф., Етьен Ж. та ш. Внутрiшньолiкарнянi шфекцп: думай глобально, дiй локально // Матерiали Всеукрашсько! науко-во-практично! конференцп «Внутрiшньолiкарнянi шфекцл та методи визначення механiзмiв резистент-ностi !х збудник1в до антимiкробних препарапв», 2526.05.2010.- Кив, 2010.- С.91-109.
15. Мартшек О.Г. Вивчення впливу антибактер-iйних очних крапель на мжрофлору кон'юнктиви у порiвняльному аспектi // Львiвський медичний ча-сопис.- 2007.- AML XIII, №3.- С. 101-105.
16. Морозова Н.С. Дезинфектологическая профилактика внутрибольничных инфекций: проблемы и пути решения // Профшактична медицина. - 2008.- .№3.- С. 3-6.
17. Михайлец Н.В., Святенко Т.В. Рациональные подходы к выбору местного антимикотического средства // Украшський журнал дерматологи, венерологи, косметологи- 2010.-№1 (36).- С.70-75.
18. Палiй Г.К., Ковальчук В.П., Палш В.Г., Шевчук Н.М. та ш. Обгрунтування ефективносп антисептич-ного препарату "Амосепт" у профжктищ гостталь-но! шфекци //Клшчна фармаця.-2008.- №4.-С. 19-24.
19. Полшук О.1., Авдеева Л.В. Нацiональна програ-ма шфекцшного контролю - нагальна потреба у боротьбi з ВЛ1 // Вiсник наукових дослщжень .-2005.- № 3.- С.35-38.
20. Полшук О.1., Покас О.В., В"ялих Ж.Е., Василенко Л.Г., Колтукова Н.В. Чутливють до антимкотимв дрщджо-подбних грибв, вольованих вщ В1Л-шфц«ованих хворих / / Мiкробiол. журн. -2007.-Т. 69, № 3. -С.37-43.
21. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. -Москва: Триада-Х, 2001.-472 с.
22. Фалалеева Н.А., Багирова Н.С., Алексеева Т.Р., Дмитриева Н.В., Волкова М.А. Фунгемии у онкоге-матологических больных // Материалы первого Всероссийского конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии».- М.: Национальная академия микологии, 2003.-Т.2.- С.227-230.
23. Black J.G. Microbiology: principles and explorations, 5th Edition.- John Wiley&Sons, Inc., 2002.-762 p.
24. Brady A., Loughlin R., Gilpin D., Kearney P. et al. In vitro activity of tea-tree oil against clinical skin isolates of meticillin-resistant and -sensitive Staphylococcus aureus and coagulase-negative staphylococci growing planktonically and as biofilms / / J. Med. Microbiol. -2006.- V 55.- P. 1375-1380.
25. Kirsanova M.A. Modification of test for drug susceptibility of species of the yeast genus Candida // Таврический мед.-биол. вестник.-2007.-№ 3.- С.157-159.
26. Murray P.R., Rosenthal K.S., Kobayashi G.S., Pfaller M.A. Medical microbiology /4th edition.- Mosby. Inc., 2002.- 826 p.
27. Petri M.G., Konig J., Moecke H.P. et al. Epidemiology of invasive mycosis in ICU patients: a
prospective multicenter study in 435 non-neutropenic patients // Intensive Care Med.-1997.-Vol.23.-P.317-325.
28. Sparg S.G., Light M.E., van Staden J. Biological activities and distribution of plant saponins // Journal of Ethnopharmacology. - 2004.-V94.-P.219-243.
