CC BY
45
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Bleumink-Pluym N.M.C., van Dijk L., van Vliet A.H.M. et al. Phylogenetic position of Taylorella equigenitalis determined by analysis ot amplified 16S ribosomal DNA sequences. Int J Syst Bacter, 1993, 43, 618—621.
2. Brosius J., Palmer M., Kennedy P.J., Noller H.F. Complete nucleotide sequence of a 16S ribosomal RNA gene from Escherichia coli. Proc Natl Acad Sei USA, 1978, 75, 4801—4805.
3. Brosius J., Dull T.J., Sleeter D.D., Noller H.F. Gene organization andprimary structure of a ribosomal RNA operon from Escherichia coli. J Mol Biol, 1981,148, 107—127.
4. Clayton R.A., Sutton G., Hinkle P.S.Jr. et al. Intraspecific variation in small-subunit rRNA sequences in GenBank: why single sequences may not adequately represent prokaryotic taxa. Int J Syst Beater, 1995, 45, 595—599.
5. Crowhurst R.C. Genital infection in mares. Vet Ree, 1977, 100, 476.
6. Fox G.E., Wisotzkey J.D., Jurtshuk P.Jr. How close is close: 16S rRNA sequence identity may not be sufficient to guarantee species identity. Int J Syst Bacter, 1992, 42, 166—170.
7. Gorkiewicz G., Feierl G., Schober С. et al. Species-specific identification of Campylobacters by partial 16S rRNA gene sequencing. J Clin Microb, 2003, 41, 2537—2546.
8. Jang S.S., Donahue J.M., Arata A.B. et al. Taylorella asinigenitalis sp. nov. a bacterium isolated from the genital tract of male donkeys (Equus asinus). Int J Syst Evol Microb, 2001, 51, 971—976.
9. Kagawa S., Moore J.E., Murayama O., Mastuda M. Comparison of the value of pulsed-field gel electrophoresis, random amplified polymorphic-field gel electrophoresis, random amplified polymorphic DNA and amplified rDNA restriction analysis for subtyping Taylorella equigenitalis. Vet Res Commun 2001, 25, 261—269.
10. Kagawa S., Nagano Y„ Tazumi A. et al. Nucleotide sequencing and analysis of 16S rDNA and 16S-23S rDNA internal spacer region (ISR) of Taylorella equigenitalis. Vet Res Commun, 2006, 30, 4, 343—355.
11. Katz J.В.. Evans L.E., Hutto D.L. et al. Clinical, bacteriologic serologic, and pathologic features of infections with atypical Taylorella equigenitalis in mares. JAVMA, 2000, 216, 1945—1948.
12. Kolbert С.P., Persing D.H. Ribosomal DNA sequencing as a tool for identification of bacterial pathogens. Curr Microb, 1999, 2, 229—305.
13. Matsuda M., Moore J.E. Recent advances in molecular epidemiology and detection of Taylorella equigenitalis associated with contagious equine metritis (СЕМ). Vet Microb, 2003, 97,111—122.
14. Miyazawa Т., Mastuda M, Isayama Y. et al. Genotyping of strains of Taylotrlla equignitalis from thoroughbed brood mares in Japan. Vet Res Commun, 1995, 19, 265—271.
15. Miyajima M., Matsuda M.. Haga S. et al. Cloning and sequenceing of 16S rDNA and 16S-23 S rDNA internal spacer region (ISR) from urease-positive thermophilic Campylobacter (UPTC). Lett Appl Microb, 2002, 34, 287—289.
16. Ter Laak E.A., Fennema G., Jaartsveld F.H.J. Contagious equine metritis in the Netherlands. Tijdschr Dierg, 1989, 114, 189—201.
17. Ofengand J., Denman R., Negro D. et al. Structural and functional relationships at the decoding site of the E. coli ribosome. In structure and expression from proteins to ribosomes. In: Benjamin L. Genes VII. Oxford Univ Press Inc. NY, 2000, 209—228.
18. Stackebrandt E., Goebel B.M. Taxonomic note: a place for DNA-DNA reassociation and 16S rRNA sequence analysis in the present species definition in bacteriology. Int J Syst Bacter, 1994, 44, 864—849.
19. Steltz J.A. Genetic signals and nucleotide sequence in messenger RNA. In: Goldberg R.F. (Ed.). Biological regulation and development I, gene expression. Plenum Publ Co, NY, 1979, 349—389.
20. Stiege W., Stade К., Schuler D., Brimacombe R. Covalent cross-linking of poly (A) to Escherichia coli ribosomes, and localization of the cross-link site within 16S RNA. Nucleic Acids Res, 1988, 16, 2369—2388.
21. Weisburg W.G.. Barns S.M.. Pelletier D.A., Lane D.J. 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study. J Bacter, 1991, 173, 697—703.
SUMMARY
M. Matsuda, A. Tazumi, S. Kagawa, T. Sekizuka, O. Murayama, J.E. Moore, B.C. Millar. Homogeneity of the 16S rDNA sequence among geographically disparate isolates of Taylorella equigenitalis. BMC Vet Res, 2006, 2,1.
At present, six accessible sequences of 16S rDNA from Taylorella equigenitalis (T. equigenitalis) are available, whose sequence differences occur at a few nucleotide positions. Here, we clone and sequence the approximate full-length 16S rDNA from 17 strains of T. equigenitalis isolated in Japan, Australia and France, nucleotide sequence differences were demonstrated at the six loci in the 1,469 nucleotide sequence. Moreover, 12 polymorphic sites occurred among 23 sequences of the 16S rDNA, including the six reference sequences. High sequence similarity (99.5 % or more) was observed throughout, except from nucleotide positions 138 to 501 where substitutions and deletions were noted.
a in л УДК 619:616-021.3:631.1
лШЛ
СПРАВКА т^ ^
Возбудитель контагиозного метрита кобыл
Ключевые слова: бактерии, лошадь, метрит Сокращения: Кл — кобыла
Впервые Т. equigenitalis изолировали 30 лет тому назад [3]. За это время инфекцию неоднократно диагностировали не только в Великобритании, где произошла ее первая описанная в литературе вспышка, но и во многих других странах мира, в т.ч. в США, Канаде, Франции, Германии, Италии, Росии, Словении и Японии.
У Кл инфекция клинически проявляется слизисто-гной-ными истечениями из влагалища, обусловленными эндометритом, цервицитом и вагинитом, и ведет к временному бесплодию. Однако многие ее случаи у Кл протекают субклини-чески. Обычно подозрение на такую форму инфекционного метрита возникает после того, как у Кл возобновляется течка после осеменения. Переболевшие Кл в течение нескольких месяцев остаются бессимптомными носителями, заражая при половом контакте жеребцов, а те, в свою очередь, новых Кл [5]. Жеребята, рожденные инфицированными Кл, нередко становятся носителями Т. equigenitalis.
У жеребцов инфекция всегда протекает бессимптомно [6].
У Кл возбудитель локализуется преимущественно в клиторе (после клинического выздоровления его редко обнаруживают в матке), а у жеребцов — в уретре и препуции [5].
Таксономическое положение этой бактерии можно представить следующим образом: тип Proteobacteria, класс p-Proteobacteria, пор. Burkholderiales, сем. Alcaligenaceae, род Taylorella. Филогенетически она родственна возбудителю мелиоидоза.
Т. equigenitalis — весьма привередливый микроорганизм, ее трудно культивировать на питательных средах. Поэтому обычно для констатации отсутствия инфекции у лошади для бактериологического исследования берут патологический материал (выделения и смывы из уретры и половых органов, эякулят) двукратно (с интервалом в 1 нед). В случаях, когда' проводили лечение, патологический материал берут не ранее чем через 1 нед после применения антимикробных препаратов.
Доставлять в лабораторию патологический материал следует в транспортных средах с активированным углем (например, в среде Amies) [8] в условиях пониженной температуры и в максимально короткие сроки после взятия (не позднее 48 ч).
Пригодность питательных сред для культивирования Т. equigenitalis во многом определяется качеством пептонной агаровой основы и отсутствием в них ферментируемых углеводов. Чаще всего для культивирования Т. equigenitalis пользуются селективной средой Тимони. Она представляет собой шоколадный агар, содержащий 5 % крови, прогретой в течение 12 мин при температре 70...80 "С, триметоприм (1мкг/мл), клиндамицин (5 мкг/мл) и амфотерицин В (5 мкг/мл). Перечисленные антибиотики надежно ингиби-руют рост контаминирующей микрофлоры, обычно присутствующей в половых органах лошадей. Вместо этих антибио-
тиков в ряде лабораторий пользуются стрептомицином сульфатом (200 мкг/мл), однако в последние годы отмечена тенденция распространения чувствительных к нему штаммов Т. equigenitalis. Для изоляции некоторых штаммов агента в среду необходимо добавлять цистеин (0,83 ммоль), натрия сульфит (1,59 ммоль) и амфотерицин В (5 мкг/мл).
Посевы инкубируют при температуре 35...37 "С в атмосфере с 5...10 % СО,. Микроорганизм формирует видимые колонии в течение 1...2 нед [10]. Они гладкие, блестящие, окрашены в желтовато-серый цвет, достигают диаметра 2...3 мм, имеют четкие контуры. При сокультивировании пользуются как плотными, так и жидкими (СЕМ и др.) средами. На последних при медленном перемешивании или покачивании бактерия растет значительно быстрее.
Т. equigenitalis — грамотрицательная, неподвижная, плео-морфная бактерия (ее форма варьирует от бациллярной до кокко-бациллярной, а длина от 3 до 6 мкм). Некоторые клетки окрашиваются биполярно. Каталазо-, фосфатазо- и окси-дазопозитивна. Она окружена, как показали электронно-микроскопические исследования, микрокапсулой [7].
Применяемая в Нидерландах, Японии и США полиме-разная цепная реакция позволяет диагностировать инфекцию, избегая длительной и не всегда успешной изоляции Т. equigenitalis [1, 2].
Т. equigenitalis необходимо дифференцировать от ряда распространенных возбудителей эндометритов кобыл (P.aeruginosa, S. zooepidemicus, К. pneumoniae) и других оксидазопози-тивных грамотрицательных бактерий (М. haemolytica, A. equuli, В. bronchiseptica и др.). Кроме того, в США от ослов изолирована родственная тейлорелла (Т. asinigenitalis) [4], которая также может вызывать инфекцию у лошадей.
Для серотипирования Т. equigenitalis обычно пользуются реакциями агглютинации, непрямой иммунофлюоресценции и латексагглютинации. Интерпретации результатов первого из упомянутых тестов часто мешают аутоагглютинационные свойства изолятов агента, а также перекрестные реакции с М. haemolytica [9]. Для проведения иммунофлюоресцентного теста во Франции налажено производство моноклональных антител (Institute Pourquier), но чаще с этой целью применяют кроличьи гипериммунные сыворотки.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Anzai Т., Eguchi М„ Sekizaki Т. et al. Development of а PCR test for rapid diagnosis of contagious equine metritis. J Vet Med Sei, 1999, 61, 1287—1292.
2. Bleumink-Pluym N.M.C., Werdler M.E.B., Houwers D.J., et al. Development and evaluation of PCR test for detection of Taylorella equigenitalis. J Clin Microb, 1994, 32, 893—896.
3. Crowhurst R.C. Genital infection in mares. Vet Ree, 1977, 100. 476.
4. Jang S.S., Donahue J.M.. Arata A.B.et al. Taylorella asinigenitalis sp. nov., a bacterium isolated from the genital tract of male donkeys (Equus asinus). Int. J Syst Evol Microb, 2001, 51, 971—976.
5. Platt H., Atherton J.G., Dawson F.L.M., Durrant D.S. Developments in contagious equine metritis. Vet Ree, 1978, 102, 19.
6. Schlüter H., Kuller H., Freidreich U. et al. Epizootiology and treatment of contagious equine metritis (СЕМ), with particular reference to the treatment of infected stallions. Prakt Tierar, 1991, 72, 503—511.
7. Swaney L.C., Breese S.S. Ultrastructure of Haemophilus equigenitalis, causative agent of contagious equine metritis. Am J Vet Res, 1980, 41,127— 132.
8. Swerczek T.W. Inhibition of the СЕМ organism by the normal flora of the reproductive tract. Vet Ree, 1978, 103, 125.
9. Ter Laak E.A., Wagenaars C.M.F. Autoagglutination and the specificity of the indirect fluorescent antibody test applied to the identification of Taylorella equigenitalis. Res Vet Sei, 1990, 49, 117—119.
10. Ward J., Hourigan M., McGuirkJ., Gogarty A. Incubation times for primary isolation of contagious equine metritis organism. Vet Ree. 1984, 114, 298.
Сокращения: Л — лошадь
• В Словении описан первый случай инфекции Tavlorella equigenitalis У JI [Zdovc I.. Ocepek M„ Gruntar I. et al. Prevalence of Taylorella equigenitalis infection in stallions in Slovenia: bacteriology compared with PCR examination. Equine Vet J, 2005, 37, 3, 217—221 ].
• В США от Л при язвенном кератите наиболее часто изолируют Str. equi subsp zooepidemicus, синегнойную палочку и стафилококки. Все изоляты агента чувствительны к це-фалотину, хлорамфениколу и ципрофлоксацину, а 64 % из них — к бацитрацину. P. aeruginosa не проявляет резистентности к гентамицину, тобрамицину и ципрофлоксацину
[Keller R.L., Hendrix D.V. Bacterial isolates and antimicrobial susceptibilities in equine bacterial ulcerative keratitis (1993- 2004). Eq Vet J. 2005, 37, 3, 207-211].
• У погибшего на 6-й день после преждевременных родов жеребенка диагностирован! стрептококковую септицемию и инфекцию вируса коровьей осны. При его вскрытии обнаружили язвы в пищеварительном тракте, колит, полиартрит и нефрит [Ellenberger С., Schuppel K.F., MohringM. et al. Cowpox virus infection associated with a streptococcal septicaemia in a foal. J Comp Pathol, 2005, 132, 1, 101-1051.
• Комбинация триметоприма с сульфадиазином при инфекции Str. equi subsp. zooepidemicus неэффективна
[EnsinkJ.M., Bosch G., van Duijkeren E. Clinical efficacy of prophylactic administration of trimethoprim/sulfadiazine in a Streptococcus equi subsp. zooepidemicus infection model in ponies. J Vet Pharm Ther, 2005, 28, 1. 45—49|.
= КАЛЕЙДОСКОП
• У Л инфекция Str. equi может сопровождаться острым некрозом мышц, дисфункцией органов дыхания, сонливостью И атаксией ISponseller В.Т., ValbergS.J., Tenncnt-Brown B.S. et al. Severe acute rhabdomyolysis associated with Streptococcus equi infection in four horses. JAVMA, 2005, 227, 11, 1800—1807].
• Смешанная инфекция Aspergillus fumigatus и Absidia corymbifera стали причиной тяжелого заболевания 6-летней пони, сопровождавшегося некрогемморагическим колитом, спленитом, ниевмонией и энцефалитом, многочисленными кровоизлияниями во внутренних органах п головном мозге. Болезнь завершилась скоротечным летальным исходом [Thirion-Delalande С., GuillotJ., Jensen Н.Е. et al. Disseminated acute concomitant aspergillosis and mucormycosis in a pony. J Vet Med A Phys Pathol Clin Med. 2005, 52, 3, 121-124].
• Rhodococcus equi стал причиной аборта кобыл на 7...8 мсс жеребости. У абортированных плодов выявили пиогранулома-тозную пневмонию [Szeredi L„ Molnar Т., Giavits R. et al. Two Cases of Equine Abortion Caused bv Rhodococcus equi. Vet Pathol, 2006. 43, 208—211].
• р-токсин С. chauvoei проявляет дезоксирибонуклеазую активность [Carloni G.H., Bentancor L.D., de Torres R.A. Deoxvrihonuclease activity detection in Clostridium chauvoei strains. Rev Aigent Microb, 2005, 37, 2,87—88].
• Комбинацией азитромицина и рифампицина удалось вылечить жеребенка с септическим плевритом и абсцессом брюшной полости, которые были вызваны R. equi. Курс лечения составил 8 нед [ValdesA., Johnson J. R. Septic pleuritis and abdominal abscess formation caused by Rhodococcus equi in a foal. JAVMA. 2005, 227, 6, 960-963].
РВЖ СХЖ №4-2006
17
