CC BY
12
УДК 630.232.5
Хвойные бореальной зоны. 2021. Т. XXXIX, № 5. С. 401-407
ВОСПРОИЗВОДСТВО СОСНЫ КЕДРОВОЙ СИБИРСКОЙ НА ГЕНЕТИКО-СЕЛЕКЦИОННОЙ ОСНОВЕ*
Ю. Е. Щерба1, А. А. Ибе2, Т. В. Сухих2, Д. Е. Копченко3
1 Сибирский государственный университет науки и технологий имени академика М. Ф. Решетнева Российская Федерация, 660037, г. Красноярск, просп. им. газ. «Красноярский рабочий», 31;
2Некомерческое партнерство «Сибирский центр лесной сертификации» Российская Федерация, 660036, г. Красноярск, ул. Академгородок, 50а, 2 3Филиал ФБУ «Рослесозащита» - «Центра защиты леса Красноярского края» Российская Федерация, 660036, г. Красноярск, ул. Академгородок, 50 а, 2 Е-mail: shcherba_@mail.ru, aaibis@mail.ru, cherkesova-tv@yandex.ru
В статье приведены результаты изменчивости микросателлитных локусов ядерной ДНК клонового потомства плюсовых деревьев сосны кедровой сибирской 91/55, 94/58 и 100/64, произрастающее на прививочной плантации Караульного участкового лесничества Учебно-опытного лесхоза СибГУ им М. Ф. Решетнева (юг Средней Сибири).
По результатам исследований проведен отбор 8 стабильных и надежных праймеров методом полимераз-ной цепной реакции и электрофореза. Индетифицированы генотипы ДНК образцов сосны кедровой сибирской. Установлена 1,5*10— вероятность случайного совпадения аллелей у неродственных генотипов. Выявлены 4 общих ДНК-профиля.
Ключевые слова: сосна кедровая сибирская, плюсовые деревья, клоновое потомство, прививочные плантации, микросателлиты ядерной ДНК.
Conifers of the boreal area. 2021, Vol. XXXIX, No. 5, P. 401-407
REPRODUCTION OF PINUS SIBIRICA DU TOUR ON A GENETIC AND BREEDING BASIS
Iu. E. Sh^e^1, A. A. Ibe2, T. V. Sukhikh2, D. E. Kopchenko3
:Reshetnev Siberian State University of Science and Technology 31, Krasnoyarskii rabochii prospekt, Krasnoyarsk, 660037, Russian Federation 2Non-profit Partnership "Siberian forest certification center" 50 a, 2, Akademgorodok str., Krasnoyarsk, 660036, Russian Federation 3Branch of the Federal State Institution "Roslesozashchita" - "Forest Protection Center of the Krasnoyarsk Territory" 50 a, 2, Akademgorodok str., Krasnoyarsk, 660036, Russian Federation E-mail: shcherba_@mail.ru, shcherba_@mail.ru, aaibis@mail.ru, cherkesova-tv@yandex.ru
The article presents the results of variability of microsatellite loci of nuclear DNA of clone progeny of Siberian cedar pine trees 91/55, 94/58 and 100/64, growing on the grafting plantation of the Sentry district Forestry of the Educational and Experimental Forestry of the SibGU named after M. F. Reshetnev (south of Central Siberia).
Based on the research results, 8 stable and reliable primers were selected by polymerase chain reaction and electrophoresis. DNA genotypes of Siberian cedar pine samples have been identified. The probability of a random coincidence of alleles in unrelated genotypes was 1.5*10-6. 4 common DNA profiles were identified.
Keywords: siberian cedar pine, plus trees, clone progeny, grafting plantations, nuclear DNA microsatellites.
ВВЕДЕНИЕ
Сосна кедровая сибирская Pinus sibirica Du Tour является одним из важнейших лесообразующих видов, а также ценной орехоплодной породой России [12]. Отбору, изменчивости и разможению сосны кедровой сибирской по показателям урожайности и ре-
*
Работа выполнена при поддержке гранта Президента РФ для молодых ученых-кандидатов наук МК-4099.2021.5.
продуктивного развития, а впоследствии выращиванию селекционного посадочного материала для создания генетически ценных высокоурожайных орехо-продуктивных плантаций посвящено множество исследований [9; 6-13]. Прививочные плантации, созданные раметами от плюсовых деревьев, аттестованных по семеношению, являются ценным генофондом для ведения генетических исследований селектируемых признаков, что является актуальной задачей
в сфере лесной селекции на основе молекулярной генетики для создания высокоурожайных промышленных плантаций [10-12].
Изучение генетического материала клонового потомства плюсовых деревьев сосны кедровой сибирской, произрастающего на учебно-научных объектах Караульного участкового лесничества Учебно-опытного лесхоза СибГУ им. М. Ф. Решетнева является важным для сохранения и рационального использования генофондов этого вида.
Накопленные многолетние данные селекции сосны кедровой сибирской требуют проведения генетических исследований полученных результатов. В последние годы в связи с разработкой специфических праймеров широкое применение в генетических исследованиях хвойных получил 88Я-метод, в котором в качестве ДНК-маркеров используют кодоминантно наследуемые ядерные микросателлитные локусы (п88К^). Высокий полиморфизм микросателлитов позволяет с высокой точностью идентифицировать организм и выявить биологическое родство.
Цель работы - подбор генетических маркеров сосны кедровой сибирской и их тестирование путем проведения генетической паспортизации потомства плюсовых деревьев.
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ
ИССЛЕДОВАНИЙ
Объектами исследования явилось клоновое потомство трех плюсовых деревьев 91/55, 94/58 и 100/64, произрастающее на прививочной плантации Караульного участкового лесничества Учебно-опытного лесхоза СибГУ им М. Ф. Решетнева (юг Средней Сибири).
Плюсовые деревья были аттестованы по урожайности в Колыванском лесхозе Новосибирской области в 1977 году. Таксационная характеристика плюсового древостоя, где произрастают исследуемые плюсовые деревья, приведена в табл. 1. Характеристика плюсовых деревьев, на момент аттестации - в табл. 2.
На момент аттестации плюсовое дерево 91/55 отличалось шаровидной кроной с мощными ветвями с рогатками. Шишки крупные позднего срока созревания. Состояние хорошее. Дерево 94/58 имело мощную овально продолговатую форму с мощными ветвями. Охвоение густое. Женский тип сексуализации. Состояние хорошее. Дерево 100/64 имело шаровидную крону, густое охвоение и ранне созревающую форму. Состояние очень хорошее. Приживаемость черенков 91/55 составляет 88%, 94/58 - 90 %, 100/64 -97 %**.
Плюсовые деревья в 1988 году были размножены прививкой способом - сердцевиной на камбий по Е. П. Проказину. В качестве подвоя были взяты сеянцы сосны кедровой сибирской местного (бирюсинско-го) происхождения [1].
В мае 2021 года на прививочной плантации была проведена инвентаризация рамет плюсовых деревьев и нарезаны черенки для проведения генетических ис-
Данные представлены по запросу в 2021 году в Колы-ванском лесничестве Новосибирской области (карточки оценки состояния).
следований. Сбор экспериментального материала осуществлялся с 47 клоновых деревьев.
Методической основой проведения работ стал метод микросателлитного анализа, основанный на по-лимеразной цепной реакции (ПЦР). Микросателлит -ные локусы - это участки генома с повторяющимися короткими (2-6 нуклеотидов) последовательностями, называемыми мотивами [5]. Число повторов в каждом локусе изменчиво от организма к организму, поэтому каждая особь характеризуется фактически уникальным многолокусным генотипом. С помощью метода электрофореза можно обнаружить изменчивость этого параметра, определив молекулярную массу изменчивого фрагмента - в данном случае аллеля. Более тяжелые молекулы (с большим числом повторов) мигрируют медленнее и на результирующей электро-фореграмме можно наблюдать полиморфизм - наличие у отдельных особей разных дискретных вариантов, отражающих разное число повторяющихся мотивов.
Для изучения изменчивости микросателлитных локусов ядерной ДНК исследовали хвою, предварительно высушенную в сухожаровом шкафу при температуре +40 °С в течение 2-3 дней. Выделение ДНК из хвои проводилось по стандартному протоколу для растительных тканей (метод СТАВ) с применением цетилтриметиламмоний бромида [15].
Для выбора микросателлитных локусов ядерной ДНК, разработанных специально для изучения изменчивости сосны кедровой сибирской, для тестирования было отобрано 12 ядерных микросателлитных локу-сов [1], характеристика которых приведена в табл. 3.
При постановке ПЦР для всех праймеров был использован коммерческий набор GenPak®PCR Core (ООО «НПФ Генлаб», Россия), согласно инструкции фирмы-производителя.
ПЦР-амплификацию отобранных микросателлит-ных локусов проводили при следующем режиме: предварительная денатурация ДНК 94 °C - 15 мин; далее 10 циклов, включающие 1 мин плавления при 94 °C, отжиг праймеров 1 мин при 60-50 °C (-1 °C на каждый цикл) и 1 мин. элонгации при 72 °C, следующие 25 циклов состоят из 1 мин плавления при 94 °C, отжиг праймеров 1 мин при 53 °C и 1 мин элонгации при 72 °C. Завершающий цикл элонгации проходил при 72 °C в течение 20 мин.
Электрофоретическое разделение продуктов амплификации проводили в 6 % полиакриламидном геле (ПААГ), с использованием 1хТАЕ буфера в камерах для вертикального электрофореза (VE-20, ООО «Хе-ликон») при напряжении 200В в течение 2,5 часов. В качестве маркера стандартных длин использовалась ДНК плазмиды PBR322 E.coli, обработанная рестрик-тазой Нра11. Окрашивание гелей проводили раствором бромистого этидия с дальнейшей визуализацией ам-пликонов в УФ-свете с помощью системы гель-документации Gel-Imager. Считывание результатов анализа осуществляли с помощью программы Photo-Capt V.12.4 (Vilber Lourmat). Анализ установленных генотипов проводили с помощью программы (макроса) GenAlEx, свободно распространяемой надстройки для MS Excel [16].
Таблица 1
Таксационная характеристика плюсового древостоя
Состав Возраст класс/лет Средняя высота, м Средний диаметр, см Бонитет Тип леса Полнота Селекционная категория
9К 4/160 18 52 III Крт 0,6 Плюсовое по семеноше-
1С 6/110 20 44 нию
Таблица 2
Биометрические показатели сосны кедровой сибирской, отобранной по семенной продуктивности
Номер плюсового Возраст, лет Высота Диаметр ствола Диаметр кроны, м
дерева м % к Хср. см % к Хср.
91/55 140 19 105 72 138 8,5
94/58 150 23 128 72 138 10,0
100/64 110 17 94 44 84 7,0
Таблица 3
Характеристика отобранных для тестирования ядерных микросателлитных локусов сосны кедровой сибирской
№ п/п Локус Мотив Последовательность праймера (5'-3') Число аллелей, шт.
1 Р8_80612 (ААО)ю Е:СТТСТААОТОООТСАТСТТООС Я:СТОТСТАООСТТТТООССТТТА 4
2 Р8_364418 (ТОА)ю Е:ТСООАССТАААОААААОАООТО Я:ААОАТТСОТСТОАОТООАСОТТ 7
3 Р8_1502048 (ААТ)„ Е:АОАТССАТСССААТСАСАОТТС Я:АОООАССТАОСАСТТТСАТССТ 3
4 РЗ_1915155 (ТАТ)П Р:ТТ0ТТ00АТТ00СТСАТ00 Я:ТСТССАОТАСАСАССТСОАТТО 4
5 Р8_2040062 (ОАТ)12 Е:ТООТАТОААААССТТСАОССТС Я:ТААТОТСОТСТТСОТСОТСОТ 2
6 Р8_264432 (ТТС)13 Е: ОСАТТОТТОАТТТОТОТСССТА Я: ОАООСТОААААООАОААОАТОА 4
7 Р8_1375177 (САТ)ю Е: АТОООСТАОАТООТАОСАОТТС Я: ООТООТТТООСТСТСТТАААТО 3
8 Р8_31489 (АОА)6 Е: САСССАААСААОАСАААССТСТ Я: ТТСТТССТССТТССССТТАТТС 2
9 Р8_25981 (ТАТТ)5 Е: ТТОАОТОООАТООАСАТАОАО Я: ТТОССССААОТСТАСААОАТ 3
10 Р8_39709 (АТОТ)5 Е: ОТТСТСТТААССТСОААСТТОТОАТ Я: СТОААААСССТОТСАААСААСА 4
11 Р8_718958 (ТАТ)ю Е: СТАТОТАТОООТСААТООТОТСС Я: ОАТОСААСАААТОСАСАТОАСТ 2
12 Р8_650842 (ТТА)„ Е: АТОСАСТСТААСТССААОСАСА Я: АТААТОАСССААОСАТОАААСС 4
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Основным критерием отбора праймеров на этапах ПЦР и электрофореза было стабильное и надежное проявление аллелей локусов и достаточно высокий уровень полиморфизма на тестируемых образцах. На препаратах ДНК, выделенной из хвои 47 деревьев, было протестировано 12 ядерных микросателлитных локусов (табл. 3). Первичный анализ данных локусов показал, что у Рб_650842 и Рб_264432 отмечается 3 зоны амплификации, что затрудняет чтение вариантов изменчивой зоны и может привести в дальнейшем к ошибкам при интерпретации полученных данных. Локус Рб_2040062 был полиморфным, но в нем явно присутствовали «нуль-аллели» (отсутствие амплификации некоторых образцов возможно вследствие мутаций в зоне «посадки» праймера). Еще один праймер (Рб_718958) оказался мономорфным (рис. 1). После исключения вышеописанных локусов в дальнейшую работу были взяты 8 локусов, демонстрировавшие
наиболее стабильные интерпретируемые спектры (рис. 2 и 3, табл. 4).
По результатам исследования ДНК 47 образцов сосны кедровой сибирской по 8 полиморфным ядерным микросателлитным локусам был проведен анализ данных в программе ОепА1Ех на идентификацию генотипов и оценку вероятности случайного совпадения многолокусных генотипов. Вероятность случайного совпадения аллелей у неродственных генотипов, рассчитанная для каждого локуса, не должна превышать 5 %, а при использовании всего набора маркеров, вероятность ошибочного установления генетической идентичности не должна быть выше одной миллионной процента [2]. Метод также называется популяци-онной вероятностью совпадения. Он широко используется в судебной экспертизе ДНК как индикатор статистической мощности определенного набора маркерных локусов [6].
Расчеты по совокупности 8 локусов показали, что вероятность случайного совпадения неродственных генотипов составила 1,5* 10-6. Такая величина подтверждает эффективность использования данного набора микросателлитных локусов для генетической паспортизации потомства плюсовых деревьев сосны кедровой сибирской.
Анализ мультилокусных комбинаций аллелей по 8 микросателлитным локусам показал, что из 47 ис-
следованных образцов 26 относятся к разным генотипам (табл. 5). Выявлены 4 общих ДНК-профиля: генотип А - образцы № 100/64_21-16 (2) и 100/64_21-16 (4); генотип В - образцы № 100/64_2-19, 100/64_3-19, 100/64_4-17, 100/64_4-18, 91/55_6-17, 100/64_7-18; генотип С - 91/55_3-15, 91/55_3-16, 91/55_5-15а, 91/55_8а-16, 91/55_8-16, 91/55_9а-16, 91/55_10а-16, 91/55_11-16, 91/55_12-16; генотип Б - образцы № 91/55_9-16 (1), 91/55_10-16 (2).
Рис. 1. Электрофореграммы продуктов амплификации локусов Рз_718958 и Р«_2040062. 33-47 - порядковые номера образцов деревьев. М - маркер длины стандартных фрагментов
Рис. 2. Электрофореграммы продуктов амплификации локусов Рз_80612, Рз_364418, Рз_1502048, Рз_1915155. 1-47 - порядковые номера образцов деревьев. М - маркер длины стандартных фрагментов
Рис. 3. Электрофореграммы продуктов амплификации локусов Рз_3175177, Рз_25981, Р«_31489, Р«_39709. 1-40 - порядковые номера образцов деревьев. М - маркер длины стандартных фрагментов
Таблица 4
Характеристика отобранных для дальнейшей работы ядерных микросателлитных локусов сосны кедровой сибирской
№ п/ п Локус Мотив Размер фрагмента Число аллелей, шт.
1 Р8 80612 (ААО)ю 162-180 5
2 Р8 364418 (ТОА)ю 163-178 5
3 Р8 1502048 (ААТ)ц 183-201 5
4 Р8 1915155 (ТАТ)„ 162-183 7
5 Р8 1375177 (САТ)ю 203-236 4
6 Р8 31489 (АОА)6 186-189 2
7 Р8 25981 (ТАТТ)5 170-178 3
8 Р8 39709 (АТОТ)5 202-226 3
Таблица 5
Число совпадений генотипов у образцов потомства плюсовых деревьев сосны кедровой сибирской
№ п/ п Идентификационный номер Многолокусные генотипы Обозначение генотипов Число совпадений
клона (плюсового дерева) раметы
1 100/64 21-16 (2) 163163177177189189177177236236186186178178214226g А 2
2 100/64 21-16 (4)
3 100/64 2-19 163175180183189189165177236236183192174178202226g В 6
4 100/64 3-19
5 100/64 4-17
6 100/64 4-18
7 100/64 6-17
8 100/64 7-18
9 91/55 3-15 163178177180186189165177236236186186170178214226g С 9
10 91/55 3-16
11 91/55 5-15а
12 91/55 8а-16
13 91/55 8-16
14 91/55 9а-16
15 91/55 10а-16
16 91/55 11-16
17 91/55 12-16
18 91/55 10-16 (1) 166172174177186189165177236236186186170178202214g Б 2
19 91/55 10-16 (2)
20 91/55 9-16 (1) 175178174183186186177177206236186195178178202226g Е 2
21 91/55 9-16 (2)
22 100/64 2-18 163163171180186189177177206236183192178178214214g 1 0
23 100/64 3-18 1631631771801861891651772062361862011741782022 ^ 2 0
24 91/55 5-16 163163174174186186177177236236201201170178202202g 3 0
25 91/55 6-16 163178162174186189165177206236186186178178202214g 4 0
26 100/64 6-19 166175174177186189168177206236186201178178214226g 5 0
27 100/64 8-18 163163177177189189168177209236186186178178214214g 6 0
28 100/64 9-18 163163177180189189165165206236186186178178202214g 7 0
29 100/64 10-18 163166177177186189177177206236186186178178202202g 8 0
30 91/55 11 а-16 163175168171186186165177206209186186178178202214g 9 0
31 91/55 13-15 163163177177189189177177206236186186178178214214g 10 0
32 100/64 13-17 175178177177186189177180203203186186170178214226g 11 0
33 91/55 14-15 163166168168186189165180236236186186174178214214g 12 0
34 91/55 14-16 1631751771801891891771802362361861951701782022 ^ 13 0
35 94/58 15-14 163163177177186189165174236236186186174178214226g 14 0
36 94/58 16-15 (1) 163178174177189189177177206206183201178178214214g 15 0
37 94/58 16-15 (2) 178178177177186189165177236236186201178178202214g 16 0
38 94/58 17-13 166175177180186189168177236236186201178178202226g 17 0
39 94/58 17-15 163175174174186186162177236236186186178178214226g 18 0
40 94/58 18-13 1751751771831891891771802062061862011781782022 ^ 19 0
41 94/58 18-14 1631781771801861891621652362361862011781782022 ^ 20 0
42 94/58 19-13 163175177180186189177180236236186195170178214226g 21 0
43 100/64 19-18 166172177180189189165177206236186186174174214214g 22 0
Окончание таблицы 5
№ п/п Идентификационный номер Многолокусные генотипы Обозначение генотипов Число совпадений
клона (плюсового дерева) раметы
44 100/64 21-16 (1) 163175177180186189177180236236195201178178226226g 23 0
45 100/64 21-16 (3) 175175174180189189177180236236186186178178214226g 24 0
46 100/64 21-16 (5) 163163171180186189165165236236186201178178226226g 25 0
47 100/64 22-17 163175177177189189177177206206186186178178214214g 26 0
Для подтверждения соответствия полученных генотипов клонов с предполагаемыми плюсовыми деревьями № 91/55, 94/58 и 100/64, произрастающими в Новосибирской области, необходимо произвести отбор материала (хвои или древесины) с данных деревьев. Авторами планируется отбор контрольных образцов с плюсовых деревьев для определения их генетических характеристик и более детального сопоставления их генотипов с генотипами клонового потомства.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В ходе исследований были подобраны 8 ядерных микросателлитных локусов сосны кедровой сибирской, демонстрирующие наиболее стабильные интерпретируемые спектры. Вероятность случайного совпадения неродственных генотипов по данным локу-сам составила 1.5*10-6.
Выявлены 4 общих ДНК-профиля: генотип А -образцы № 100/64_21-16 (2) и 100/64_21-16 (4); генотип B - образцы № 100/64_2-19, 100/64_3-19, 100/64_4-17, 100/64_4-18, 91/55_6-17, 100/64_7-18; генотип С - № 91/55_3-15, 91/55_3-16, 91/55_5-15а, 91/55_8а-16, 91/55_8-16, 91/55_9а-16, 91/55_10а-16, 91/55_11-16, 91/55_12-16; генотип D - образцы № 91/55_9-16 (1), 91/55_10-16 (2).
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Белоконь М. М., Политов Д. В., Мудрик Е. А., Полякова Т. А., Шатохина А. В., Белоконь Ю. С., Орешкова Н. В., Путинцева Ю. А., Шаров В. В., Кузьмин Д. А., Крутовский К. В. Разработка микросателлитных маркеров сосны кедровой сибирской (Pinus sibirica Du Tour) по результатам полногеномного de novo секвенирования // Генетика. 2016. № 12 (52). С. 1418-1427.
2. Волков В. А. Использование микросателлитных маркеров для установления фактов незаконной рубки основных хвойных лесообразователей Северо-Запада России // Синергия наук. 2018. № 30. С. 2211-2219.
3. Ившина В. О. Селекция кедра сибирского как орехоплодной породы // Вавиловские чтения. Наследие Н. И. Вавилова в современной науке. 2019. С. 32-35.
4. Кузнецова Г. В. Рост привитых деревьев кедровых сосен разного географического происхождения в красноярской лесостепи // Плодоводство, семеноводство, интродукция древесных растений. Красноярск : СибГУ им. М. Ф. Решетнева. 2020. Т. 23. С. 50-53.
5. Матвеева Р. Н., Буторова О. Ф. Коллекция клонов, полусибов разных морфологическийх форм кедра
сибирского на плантациях СибГТУ (юг Средней Сибири) : справ.-учеб. пособие. Красноярск : СибГТУ, 2012. 47 с.
6. Милютин Л. И., Новикова Т. Н. Дискуссионные проблемы лесной генетики и селекции // Лесоведение. 2019. № 6. С. 585-589.
7. Паркина О. В., Третьякова Р. А., Галецкая Г. А. Динамика семеношения сосны кедровой сибирской (Pinus sibirica) в условиях Новосибирской области // Лесной вестник / Forestry bulletin. 2020. Т. 24, № 6. С. 44-50.
8. Перепечина И. О., Гришечкин С. А. Вероятностные расчеты в ДНК-дактилоскопии : метод. рекомендации. М. : ЭКЦ МВД России, 1996. 16 с.
9. Попов А. В., Велисевич С. Н. Внутрипопуляци-онная изменчивость качества шишек и семян кедра сибирского на плантации с разреженной посадкой // Вестник МГУЛ - Лесной вестник. 2021. № 3. С. 34-41.
10. Рычина Ю. К. Генетическая структура популяций сосны кедровой сибирской (Pinus sibirica Du Tour) на восточном макросклоне Кузнецкого Алатау : магистерская диссертация: 06.04.01. Красноярск : СФУ, 2019. С. 58.
11. Тараканов В. В., Паленова М. М., Паркина О. В., Роговцев Р. В., Третьякова Р. А. Лесная селекция в России: достижения, проблемы, приоритеты (обзор) // Лесо-хозяйственная информация. 2021. № 1. С. 100-143.
12. Титов Е. В. Отбор ценных генотипов-клонов кедра сибирского на прививочных плантациях // Хвойные бореальной зоны. 2016. № 5-6. С. 284-288.
13. Титов Е. В. Стратегия повышения объемов орехозаготовок кедра сибирского // Хвойные бореальной зоны. 2020. Т. 38. № 1-2.
14. Третьякова Р. А. Выделение клонов сосны кедровой сибирской по семенной продуктивности в условиях дендропарка СибНИИРС // Вавиловские чтения. Наследие Н. И. Вавилова в современной науке. 2019. С. 92-95.
15. Хедрик Ф. Генетика популяций. М. : Техносфера, 2003. 592 с.
16. Devey M. E., Bell J. C., Smith D. N., Neale D. B., Moran G. F. A genetic linkage map for Pinus radiata based on RFLP, RAPD, and microsatellite markers // Theoretical and Applied Genetics. 1996. Vol. 92, No. 6. P. 673-679.
17. Peakall R., Smouse P. E. GenAlEx V6: Genetic analysis in Excel. Population genetic software for teaching and research//Molecular Ecology Notes. 2006. Vol. 6, No. 1. P. 288-295.
REFERENCES
1. Belokon' M. M., Politov D. V., Mudrik E. A., Polyakova T. A., Shatokhina A. V., Belokon' Yu. S., Ore-shkova N. V., Putintseva Yu. A., Sharov V. V., Kuz'min D. A., Krutovskiy K. V. Razrabotka mikrosatellitnykh markerov sosny kedrovoy sibirskoy (Pinus sibirica Du Tour) po rezul'tatam polnogenomnogo de novo sekveni-rovaniya // Genetika. 2016. № 12 (52). S. 1418-1427.
2. Volkov V. A. Ispol'zovaniye mikrosatellitnykh markerov dlya ustanovleniya faktov nezakonnoy rubki osnovnykh khvoynykh lesoobrazovateley Severo-Zapada Rossii // Sinergiya nauk. 2018. № 30. S. 2211-2219.
3. Ivshina V. O. Selektsiya kedra sibirskogo kak orekhoplodnoy porody // Vavilovskiye chteniya. Nasle-diye N. I. Vavilova v sovremennoy nauke. 2019. S. 32-35.
4. Kuznetsova G. V. Rost privitykh derev'yev kedrovykh sosen raznogo geograficheskogo proiskhozh-deniya v krasnoyarskoy lesostepi // Plodovodstvo, semenovodstvo, introduktsiya drevesnykh rasteniy. Krasnoyarsk : SibGU im. M. F. Reshetneva. 2020. T. 23. S. 50-53.
5. Matveyeva R. N., Butorova O. F. Kollektsiya klonov, polusibov raznykh morfologicheskiykh form kedra sibirskogo na plantatsiyakh SibGTU (yug Sredney Sibiri) : sprav.-ucheb. posobiye. Krasnoyarsk : SibGTU, 2012. 47 s.
6. Milyutin L. I., Novikova T. N. Diskussionnyye problemy lesnoy genetiki i selektsii // Lesovedeniye. 2019. № 6. S. 585-589.
7. Parkina O. V., Tret'yakova R. A., Galetskaya G. A. Dinamika semenosheniya sosny kedrovoy sibirskoy (Pinus sibirica) v usloviyakh Novosibirskoy oblasti // Lesnoy vestnik / Forestry bulletin. 2020. T. 24, № 6. S. 44-50.
8. Perepechina I. O., Grishechkin S. A. Veroyatnos-tnyye raschety v DNK-daktiloskopii : metod. Rekomen-datsii. M. : EKTs MVD Rossii, 1996. 16 s.
9. Popov A. V., Velisevich S. N. Vnutripopulyat-sionnaya izmenchivost' kachestva shishek i semyan kedra
sibirskogo na plantatsii s razrezhennoy posadkoy // Vestnik MGUL - Lesnoy vestnik. 2021. № 3. S. 34-41.
10. Rychina Yu. K. Geneticheskaya struktura populyatsiy sosny kedrovoy sibirskoy (Pinus sibirica Du Tour) na vostochnom makrosklone Kuznetskogo Alatau : magisterskaya dissertatsiya: 06.04.01. Krasnoyarsk : SFU, 2019. S. 58.
11. Tarakanov V. V., Palenova M. M., Parkina O. V., Rogovtsev R. V., Tret'yakova R. A. Lesnaya selektsiya v Rossii: dostizheniya, problemy, prioritety (obzor) // Lesokhozyaystvennaya informatsiya. 2021. № 1. S. 100143.
12. Titov E. V. Otbor tsennykh genotipov-klonov kedra sibirskogo na privivochnykh plantatsiyakh // Khvoynyye boreal'noy zony. 2016. № 5-6. S. 284-288.
13. Titov E. V. Strategiya povysheniya ob"yemov orekhozagotovok kedra sibirskogo // Khvoynyye boreal'noy zony. 2020. T. 38. № 1-2.
14. Tret'yakova R. A. Vydeleniye klonov sosny kedrovoy sibirskoy po semennoy produktivnosti v usloviyakh dendroparka SibNIIRS // Vavilovskiye chteniya. Naslediye N. I. Vavilova v sovremennoy nauke. 2019. S. 92-95.
15. Khedrik F. Genetika populyatsiy. M. : Tekhno-sfera, 2003. 592 s.
16. Devey M. E., Bell J. C., Smith D. N., Neale D. B., Moran G. F. A genetic linkage map for Pinus radiata based on RFLP, RAPD, and microsatellite markers // Theoretical and Applied Genetics. 1996. Vol. 92, No. 6. P. 673-679.
17. Peakall R., Smouse P. E. GenAlEx V6: Genetic analysis in Excel. Population genetic software for teaching and research//Molecular Ecology Notes. 2006. Vol. 6, No. 1. P. 288-295.
© Щерба Ю. Е., Ибе А. А., Сухих Т. В., Копченко Д. Е., 2021
Поступила в редакцию 20.09.2021 Принята к печати 01.10.2021
