CC BY
120
УДК 616.001.16-092.19
ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ КАЛЬЦИЙ И цАМФ ОПОСРЕДУЮТ КАРДИОТРОПНЫЕ ЭФФЕКТЫ АГОНИСТОВ ОПИОИДНЫХ РЕЦЕПТОРОВ
Ю.Б. Лишманов1, Л.Н. Маслов1, Т.В. Ласукова1, 2, А.С. Горбунов1- 2
1НИИ кардиологии СО РАМН, Томск 2ГОУ ВПО Томский государственный педагогический университет E-mail: maslov@cardio.tsu.ru
INTRACELLULAR CALCIUM AND cAMP MEDIATED EFFECT OF OPIOID RECEPTORS ON THE RESISTANCE OF THE ISOLATED HEART
Yu.B. Lishmanov1, L.N. Maslov1, T.V. Lasukova1 2, A.S. Gorbunov1’ 2
Institute of Cardiology of the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Tomsk 2Tomsk State Pedagogical University
Цель работы: исследовать эффект активации 8t- и ^-опиоидных рецепторов на устойчивость изолированного перфузируемого сердца крыс к глобальной ишемии и реперфузии. Эксперименты проведены на изолированном перфузируемом сердце крыс. Результаты показали, что стимуляция кардиальных 8^ и ^-опиоидных рецепторов с помощью соответствующих агонистов DPDPE и U-50,488 способствует уменьшению реперфузионного выброса креатинкиназы из сердца по сравнению с контрольной группой. Оба препарата оказывали отрицательный хро-нотропный и инотропный эффекты в период, предшествующий ишемии, и в реперфузионный период. Оккупация 81-опиоидных рецепторов пептидом DPDPE не изменяла уровень цАМФ в сердце до и после ишемии. Активация к^опиоидных рецепторов препаратом U-50.488 не влияла на уровень цАМФ в миокарде до ишемии, но уменьшала содержание цАМФ в реперфузионном периоде по сравнению с контролем. Предварительное введение ингибитора Са2+-АТФазы саркоплазматического ретикулума циклопиазоновой кислоты устраняло кардиопротектор-ный эффект 81-агониста. Кардиопротекторный эффект стимуляции к^опиоидных рецепторов зависит от снижения уровня цАМФ в сердце, а Са2+-АТФаза саркоплазматического ретикулума участвует в проявлении кардиопро-текторного эффекта активации 8гопиоидных рецепторов.
Ключевые слова: опиоидные рецепторы, изолированное сердце, ишемия, реперфузия.
The effect of activation of 8t- and ^-opioid receptor (OR) on the tolerance of isolated perfused rat heart to global ischemia and reperfusion were studied. It was established that stimulation of cardiac 8f and Kj-OR by adding agonists U-50,488 encourage the decrease of reperfusion release of creatine kinase from heart compared to control group. Occupancy of 8j-OR by DPDPE did not affect the cAMP levels in the heart before and after ischemia. Occupancy of Kj-OR by U-50,488 had no effect on the cAMP levels in the myocardium pre-ischemia period but reduced the cAMP content in reperfusion period in comparison with control group. The pretreatment with inhibitor of Ca2+-ATPase of sarcoplasmic reticulum cyclopiazonic acid completely abolished the cardioprotective effect of 81-OR agonist DPDPE. It was proposed that cardioprotective effect of K1-OR stimulation is dependent on the decrease in cAMP levels in the heart but Ca2+-ATPase of sarcoplasmic reticulum is in1volved in the cardioprotective effect of 81-OR activation.
Key words: opioid receptors, isolated heart, ischemia, reperfusion.
Интерес исследователей к участию опиоидных рецепторов (ОР) в формировании устойчивости миокарда к действию ишемии и реперфузии в последние годы значительно возрос. Доминирующими типами ОР в миокарде являются 5- и к-рецепторы [19], которые, в свою очередь, подразделяются на соответствующие субтипы: 51 и 52, к1 и к2 [6, 23]. Однако значение этих рецепторов и внутриклеточные сигнальные системы, опосредующие их влияние на регуляцию сердечной деятельности в норме и при ишемии-реперфузии, окончательно не определены. Данные одних авторов свидетельствуют об участии опи-оидов в регуляции сократительной функции миокарда [8, 20], а результаты других указывают на отсутствие инот-ропных эффектов после активации ОР [3]. Нет однозначного мнения и о том, как влияет стимуляция 5- и к-ре-цепторов на насосную функцию сердца в условиях возобновления коронарной перфузии. Нет полной яснос-
ти и относительно роли названных рецепторов в формировании устойчивости миокарда к действию ишемии и реперфузии. Имеются лишь отдельные публикации о том, что после предварительной активации 5- и к-ОР замедляется формирование необратимых повреждений кардиомиоцитов в условиях коронароокклюзии in vivo [16,17]. Вместе с тем, по данным других авторов [3], к-агонист бремазоцин, напротив, усугубляет ишемические и реперфузионные повреждения сердца.
Внутриклеточные механизмы, реализующие кардио-тропные эффекты опиоидов, изучены также недостаточно. Известно, что активация ОР может приводить к снижению образования цАМФ в сердце и интактных кардио-миоцитах [22]. Именно с этим феноменом некоторые авторы связывают кардиопротекторное действие, оказываемое опиоидами в условиях ишемии-реперфузии сердца [1, 3]. В свою очередь, циклический АМФ играет важную
роль в регуляции транспорта Са2+ в клетках сердца [14]. Известно, что избыточное увеличение концентрации этого катиона в миоплазме во время ишемии служит одной из причин развития необратимых повреждений кардио-миоцитов [11]. Согласно данным К. Вентура с соавт. [20], 5- и к-ОР участвуют в регуляции транспорта кальция в кардиомиоцитах на уровне саркоплазматического рети-кулума. Однако исследований кальцийрегулирующей роли опиоидных рецепторов в условиях ишемии-реперфузии миокарда до сих пор никем не проводилось.
Настоящая работа посвящена исследованию роли 51- и к1-опиоидных рецепторов в регуляции устойчивости сердца к действию ишемии-реперфузии; оценке вклада цАМФ и внутриклеточного Ca2+ в реализацию кардио-тропных эффектов агонистов этих рецепторов.
Материал и методы
Эксперименты проведены на изолированных перфу-зируемых по Лангендорфу сердцах крыс-самцов линии Вистар массой 250-300 г. Животные содержались в стандартных условиях вивария. Тотальную нормотермическую ишемию миокарда моделировали посредством полного прекращения подачи перфузионного раствора на 45 мин, возобновляли коронарную перфузию и продолжали наблюдение в течение 30 мин.
В ходе опыта регистрировали частоту сердечных сокращений (ЧСС, уд./мин), давление, развиваемое левым желудочком (ДРЛЖ, мм рт. ст.), конечное диастолическое давление (КДД, мм рт. ст.). Степень повреждения кардио-миоцитов оценивали по уровню креатинфосфокиназы (КФК) в объеме раствора, прошедшем через сердце за период реперфузии. Активность КФК определяли с помощью энзиматических наборов “CK-NAc” компании Biocon Diagnostik (Vohl/Marienhagen, Германия). Конечный результат выражали в мкмоль NADH/мин в пересчете на 1 г ткани сердца за 30 мин реперфузии (U/г).
Для активации ОР по окончании 20-минутной адаптации сердца к условиям нормоксической перфузии и за 20 мин до моделирования ишемии в раствор Кребса-Хен-зелайта добавляли один из агонистов ОР в конечной концентрации 0,1 мкМ/л. После 10-минутной перфузии с препаратом сердце “отмывали” от лиганда в течение еще 10 мин. Стимуляцию 51-ОР проводили с помощью селективного 51-агониста H-Tyr-D-Pen-Gly-Phe-D-Pen-OH (DPDPE) [6], активацию к1-ОР селективным к1-агонистом trans(±)-3,4-Dichloro-N-methyl-N-[2-(1-pyrrolidinyl) cyclohexyl] benzeneacetamide HCl (U-50.488) [10]. Опиои-ды растворяли в физиологическом растворе перед началом опыта.
Для изучения процессов внутриклеточного транспорта Са2+ была проведена отдельная серия экспериментов с ингибитором Са2+-АТФ-азы саркоплазматического рети-кулума (СПР) циклопиазоновой кислотой в конечной концентрации 100 нМ [5]. Эксперименты проводили по вышеизложенной схеме. Контролем служили изолированные сердца, которые после 40-минутного стабилизационного периода подвергали тотальной ишемии (45 мин) с последующей реперфузией (30 мин).
Содержание циклического АМФ в ткани миокарда оп-
ределяли с помощью стандартных коммерческих радио-иммунных наборов “RIA AMPc/cAMP” (компания “Immunotech”, Марсель, Франция). Результаты всех проведенных экспериментов обработаны статистически с применением критерия Манна-Уитни.
Результаты
В контрольной группе тотальная ишемия приводила к полной остановке сердца, а возобновление коронарной перфузии сопровождалось неполным восстановлением его насосной функции и повреждением кардиоми-оцитов. Значения силы и частоты сердечных сокращений во время реперфузии были ниже исходных на 50% и 60% соответственно, а конечное диастолическое давление возросло почти в 3 раза по сравнению с доишеми-ческим уровнем (рис. 1). До ишемии выход КФК из миокарда составлял в среднем 5,5 U/г, а после реперфузии этот показатель увеличился в 4 раза (22,5 U/г).
Было установлено, что активация 51- и к1-опиоидных рецепторов снижает частоту и силу сердечных сокращений в доишемическом периоде. Так, ДРЛЖ через 10 мин после введения в перфузат ^-агониста DPDPE достоверно уменьшалось на 40%, КДД возрастало на 50% по сравнению с исходным уровнем (рис. 1 б, в). Через 10 мин от начала перфузии интактных сердец раствором Кребса-Хензелайта, содержащим к1-агонист U-50.488H, отмечалось уменьшение ЧСС (на 33%) и ДРЛЖ - на 47% по сравнению с исходным уровнем (рис. 1 а, б). Статистически значимых изменений КДД после стимуляции к1-рецеп-торов мы не отметили (рис. 1 в).
После применения агонистов 51- и к1-ОР (DPDPE и U-50.488) содержание цАМФ, измеренное в ткани сердца через 10 мин перфузии, не отличалось от показателей контрольной группы (рис. 2а).
Активация 51-и к1-опиоидных рецепторов сопровождалась усиление1м реп1 ерфузионной сократительной дисфункции сердца. После стимуляции 51-Ор частота и сила сокращений в реперфузионном периоде были примерно в 2 раза ниже соответствующих контрольных величин (рис. 1 а, б). При этом средние значения КДД статистически достоверно не отличались от соответствующих величин в контрольной группе, превышающих исходные показатели в 2,5 раза (рис. 1 в). Активация к1-ОР с помощью U-50.488 также вызывала стойкое снижение ЧСС в постишемическом периоде на 27% от значений в контрольной группе. Применение к1-агониста приводило к уменьшению ДРЛЖ (рис. 1). Постишемического увеличения КДД по сравнению с контролем не наблюдалось.
Воздействие ишемии и реперфузии на сердца крыс контрольной группы сопровождалось развитием необратимых повреждений кардиомиоцитов, о чем косвенно свидетельствовало 4-кратное (по отношению к доише-мическому уровню) увеличение активности креатинки-назы в растворе, оттекающем от сердца во время реперфузии (рис. 2 б). После стимуляции 51- или к1-ОР степень ишемического и реперфузионного повреждения миокарда существенно снижалась.
Доказательством тому послужило снижение реперфу-зионного выброса креатинкиназы в оттекающий от сер-
1./мин
мм рт. ст.
% "^контроль —©-OPDPK —Л— СРЛ
перфузия, мин реперфузня. мин
в
Рис. 1. Влияние агонистов 81- и Ц-опиоидных рецепторов БРБРЕ и и-50.488 на частоту сердечных сокращений (а), давление, развиваемое левым желудочком (б) и конечное диастолическое давление, выраженное в % от исходных показателей (в). СРА - циклопиазоно-вая кислота. Достоверные отличия от контроля: * - р<0,05; отличия от значений до ишемии: # - р<0,05; ## - р<0,01
дца раствор, на 32 и 48% соответственно по сравнению с контролем (рис. 2 б).
На 30-й мин реперфузии содержание цАМФ в миокарде снижалось в 2 раза в ответ на стимуляцию к1-ОР и не изменялось после использования 51-агониста (рис. 2 а).
Мы предположили, что кардиопротекторное действие 51-агониста связано с изменением транспорта кальция в миоплазму из СПР, и провели эксперименты с циклопиа-зоновой кислотой (блокатором Са2+-АТФ-азы СПР). Применение названного ингибитора устраняло кардиопро-
текторный эффект б^агониста DPDPE (рис. 2 б). Использование одной циклопиазоновой кислоты не влияло на уровень КФК, КДД, ЧСС, но вызывало снижение ДЛРЖ на 24% по сравнению с контролем в доишемическом периоде.
Обсуждение
Полученные данные свидетельствуют о том, что повышение устойчивости сердца к повреждающему действию ишемии-реперфузии связано с активацией 51- и к1-ОР На это указывает уменьшение реперфузи-онного выброса креатинкиназы, обнаруженное после активации названных рецепторов. Как известно, при необратимых повреждениях мембран кардиоми-оцитов некоторые внутриклеточные энзимы поступают в кровь или раствор, которым перфузируют изолированное сердце [9]. При этом гиперфер-ментемия обычно тесно коррелирует с размерами некротического поражения миокарда [9], поэтому снижение реперфузи-онного выброса КФК в ответ на активацию ОР является косвенным показателем уменьшения количества необратимо поврежденных кардиомиоцитов. Близкие по значению результаты были получены и в работах других исследователей. Так, в экспериментах in vivo было установлено, что внутривенное введение селективных к-агонистов способствует ограничению зоны реперфузионного некроза миокарда у крыс [16], а стимуляция к-рецепторов на мембранах изолированных кардиомиоцитов сопровождается снижением степени повреждения последних при аноксии-реоксигенации [21]. В то же время в экспериментах на изолированных перфузируемых сердцах крыс показано, что к2-агонист бремазоцин вызывает увеличение размеров зоны некроза сердечной мышцы [3]. Следует заметить, что авторы, применявшие к1-агонисты, обнаружили повышение устойчивости сердца действию ишемии-реперфузии [16, 17], а исследователи, использовавшие in vitro к2-агонист бремазоцин, наблюдали усиление ише-мическ2ого и реперфузионного повреждения сердца [3]. Возможно, противоречия обусловлены существованием
нМ/г 26 -24 -22 •
20 -18 -16 -14 -12 -10 -8 -6 -4 -2 -0 -
Контроль ОРОРЕ и-50.488Н Контроль ОРОРЕ 11-50,488Н
Значения до ишемии За период рспсрфузии
и/г 20 -18 -16 -14 -12 -10 -к -6 -4 "
2 "
0 -
Рис. 2. Уровень цАМФ в миокарде после предварительной стимуляции к1- и б^опиоидных рецепторов с помощью и-50.488 и БРБРЕ (а); активность креатинфосфокиназы в перфузионном растворе после предварительной стимуляции к1- и д1-опиоидных рецепторов с помощью и-50.488Н и БРБРЕ (б). Статистически значимые отличия от контроля: * - р<0,05; отличия от значений до ишемии: # - р<0,05; ## - р<0,01
Контроль ОРОРЕ и-50.488 СРА+ ОРОРЕ Значения до ишемии
Контроль ОРОРЕ и-50.488 СРА+ОРОРН За нериол ренерфу іни
на мембранах кардиомиоцитов двух субтипов к-опиоид-ных рецепторов (к1 и к2) [23]. Мы обнаружили цитопро-текторный эффект к1-агониста И-50.488Н в концентрации 0,1 мкМ, обеспечивающей взаимодействие этого лиганда только с к1-ОР [7]. Приняв во внимание данные об ингибирующем эффекте к-агонистов на активность аде-нилатциклазы [22] и, соответственно, на синтез цАМФ, мы предположили, что в реализации кардиопротекторного эффекта И-50.488Н определяющую роль играет снижение образования цАМФ в миокарде во время ишемии и реперфузии.
Механизм защитного действия к1-агониста представляется следующим. Известно, что один из основных способов повышения выживаемости клеток сердца при ишемии заключается в уменьшении потребности миокарда в кислороде [15]. Имеются данные о прямом стимулирующем действии цАМФ на активность ферментов митохондрий: сукцинатдегидрогеназы и НАД(Ф)+-трансгидроге-назы [2]. Исходя из известного постулата об увеличении утилизации кислорода в процессе окислительного фос-форилирования, логично предположить, что обнаруженное нами к1-опиоидергическое снижение образования цАМФ во время ишемии и реперфузии будет способствовать уменьшению потребности миокарда в кислороде и, в конечном итоге, приведет к замедлению формирования необратимых повреждений кардиомиоцитов [15]. Следовательно, кардиопротекторный эффект И-50.488Н
опосредуется через уменьшение уровня цАМФ.
Однако мы не обнаружили существенного влияния ^-агониста на содержание цАМФ в миокарде. 1Следовательно, цитопротектор-ный эффект, наблюдаемый после активации кардиальных 51-ОР, не связан с изменением внутриклеточного уровня цАМФ. Мы предположили, что эффект обусловлен опиоидерги-ческим изменением транспорта кальция в клетке. В пользу этого предположения говорит тот факт, что БРБРЕ в период, предшествующий ишемии, вызывал подъем КДД. Такое изменение диастолической функции сердца принято связывать с увеличением концентрации ионов кальция [Са2+] в цитоплазме. Известно, что стимуляция опиоидных рецепторов способствует усиленной мобилизации Са2+ из саркоплазматического ретикулума [20]. Однако чрезмерное увеличение концентрации Са2+ в цитоплазме должно было бы повлечь за собой повреждение кардиомиоцитов в период ишемии-реперфузии по механизму, напоминающему “кальциевый парадокс” [13], чего мы не наблюдали. Напротив, в условиях стимуляции 51-ОР происходило повышение толерантности сердца к действию ишемии-реперфузии.
Можно предположить два возможных объяснения данному феномену. Первое заключается в том, что стимуляция ОР способствует усиленной мобилизации Са2+ из сар-коплазматического ретикулума [20] с последующим истощением запасов Са2+ СПР в доишемическом периоде. Подобные изменения кальциевого гомеостаза могут, в принципе, предупреждать Са2+-перегрузку кардиомиоцитов во время ишемии и реперфузии [5, 18], а, следовательно, повышать устойчивость сердца к гипоксии и реоксигенации. В основе другого 51-опиоидерги-ческого механизма может лежать активаци1 я протеинки-назы С, которая катализирует фосфорилирование ряда белков, обеспечивающих повышение устойчивости сердца к ишемии и реперфузии [4]. В свою очередь, повышение активности названного фермента может происходить в ответ на кратковременный подъем [Са2+] [12]. Мы установили, что ингибирование Са2+-АТФ-азы СПР циклопи-азоновой кислотой устраняет как подъем КДД в ответ на стимуляцию 51-ОР, так и кардиопротекторный эффект БРБРе. Между тем известно, что циклопиазоновая кислота способствует истощению запасов Са2+ в саркоплаз-матическом ретикулуме [5] с последующим уменьшением [Са2+] а мы наблюдали снижение амплитуды сокращений сердца в ответ на добавление в перфузат названной кислоты, что можно объяснить уменьшением выброса кальция из СПР. Следовательно, в механизме 51-рецептор-обусловленной кардиопротекции определяющая роль принадлежит изменению транспорта Са2+ на уровне СПР Таким образом, полученные результаты доказывают участие кардиальных 51- и к1-опиоидных рецепторов в формировании устойчивости миокарда к повреждающе-
му действию ишемии и реперфузии. Кардиопротектор-ное действие U-50.488H связано со снижением уровня цАМФ в миокарде, а аналогичный эффект DPDPE опосредован опиоидергическим изменением транспорта кальция на уровне саркоплазматического ретикулума. Стимуляция 51- и к1-рецепторов способствует снижению сократимости изолированного сердца в условиях нормальной оксигенации и усугубляет нарушение систолической функции миокарда при возобновлении коронарной перфузии.
Материалы статьи подготовлены при поддержке грантов Министерства образования и науки (2.1.1/530 и 2.1.1/ 211), РФФИ (грант 10-04-00288-а) и Федерального агентства по науке и инновациям.
Литература
1. Ласукова ТВ., Маслов Л.Н. Опиоидные рецепторы и устойчивость сердца к патогенным воздействиям // Сибирский медицинский журнал (Томск). - 2007. - Т. 22, № 3. - С. 4650.
2. Медведев А.Е., Кунцевич А.К., Труфанова Л.В. О возможном участии протеинкиназы А в цАМФ-зависимой активации окислительных ферментов митохондрий // Сб. науч. тр. Красноярского мед. ин-та. - Красноярск, 1983. - С. 32-36.
3. Aitchison K.A., Baxter G.F., Awan M.M. et al. Opposing effects on infarction of delta and kappa opioid receptor activation in the isolated rat heart: implications for ischemic preconditioning // Basic Res. Cardiol. - 2000. - Vol. 95. - P. 1-10.
4. Clement O., Puceat M., Walsh M.P. et al. Protein kinase C enhances myosin light-chain kinase effects on force development and ATPase activity in rat single skinned cardiac cells // Biochem. J.
- 1992. - Vol. 285. - P. 311-317.
5. Du Toit E.F., Opie L.H. Antiarrhythmic properties of specific inhibitors of sarcoplasmic reticulum calcium ATPase in the isolated perfused rat heart after coronary artery ligation // J. Am. Coll. Cardiol. - 1994. - Vol. 23. - P. 1505-1510.
6. International union of pharmacology. XII. Classification of opioid receptors / B.N. Dhawan, F. Cesselin, R. Raghubir et al. // Pharmacol. Rev. -1996. - Vol. 48(4). - P. 567-592.
7. Ela C., Barg J., Vogel Z. et al. Distinct components of morphine effects on cardiac myocytes are mediated by the kappa and delta opioid receptors // J. Mol. Cell. Cardiol. - 1997. -Vol. 29. -P. 711-720.
8. Fujita S., Smart S.C., Stowe D.F. Enhanced contractile responsiveness to cytosolic Ca2+ by delta-2 opioid agonist deltorphin in intact guinea pig hearts // J. Mol. Cell. Cardiol. -
2000. - Vol. 32(9). - P. 1647-1659.
9. Karck M., Tanaka S., Bolling S.F. et al. Myocardial protection by
ischemic preconditioning and 8-opioid receptor activation in the isolated working rat heart // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. -
2001. -Vol. 122. - P. 986-992.
10. Lahti R.A., Mickelson M.M., McCall J.M. et al. [3H]U-69593 a highly selective ligand for the opioid к receptor // Eur. J. Pharmacol. -1985. - Vol. 109. - P. 281-284.
11. Lubbe W.F., Podzuweit T., Opie L.H. Potential arrhythmogenic role of cyclic adenosine monophsphate (AMP) and cytosolic calcium overload: Implications for prophilactic effects of betablockers in myocardial infarction and proarrhythmic effects of phosphodiesterase inhibitors // J. Am. Coll. Cardiol. - 1992. -Vol. 19(7). - P. 1622-1633.
12. Miyawaki H., Ashraf M. Ca2+ as a mediator of ischemic preconditioning // Circ. Res. - 1997. - Vol. 80. - P. 790-799.
13. Opie L.H. Calcium channel blockers and preconditioning // J. Mol. Cell. Cardiol. - 2000. - Vol. 32(5). - P. 859-860.
14. Osnes J.B., Skomedal T., Oye I. On the role of cyclic nucleotides in the heart muscle contraction and relaxation // Progr. Pharmacol. - 1980. - Vol. 4. -P. 47-62.
15. Ostadal B., Kolar F. Cardiac Ischemia: From Injury to Protection.
- Boston ; Dordrecht ; London : Kluwer Academic Publishers. -1999. - 173 p.
16. Peart J.N., Gross E.R., Gross G.J. Effect of exogenous kappa-opioid receptor activation in rat model of myocardial infarction // J. Cardiovasc. Pharmacol. - 2004. - Vol. 43(3). - P- 410-415.
17. Schultz J.El.J., Hsu A.K., Nagase H. et al. TAN-67, a 8t-opioid receptor agonist, reduces infarct size via activation1 of Gi/o proteins and KATP channels // Am. J. Physiol. -1998. - Vol. 274(3)
- P. H909-H914.
18. Steenbergen C., Murphy E., Levy L. et al. Elevation in cytosolic free calcium concentration early in myocardial ischemia in perfused rat heart // Circ. Res. -1987. -Vol. 60. - P. 700-707.
19. Tai K.K., Jin W.Q., Chan T.K.Y. et al. Characterization of [3H]U69593 binding sites in the rat heart by receptor binding assays // J. Mol. Cell. Cardiol. - 1991. - Vol. 23. - P. 1297-1302.
20. Ventura C., Spurgeon H.A., Lakatta E.G. et al. к and 8 opioid receptor stimulation affects cardiac myocyte function and Ca2+ release from an intacellular pool in myocytes and neurons // Circ. Res. -1992. - Vol. 70. - P. 66-81.
21. Wu S., Li H.Y., Wong T.M. Cardioprotection of preconditioning by metabolic inhibition in the rat ventricular myocyte. Involvement of kappa-opioid receptor // Circ. Res. -1999. -Vol. 84. - P. 1388-1395.
22. Yu X.C., Wang H.X., Pei J.M. et al. Anti-arrhythmic effect of к-opioid receptor stimulation in the perfused rat heart: involvement of a cAMP-dependent pathway // J. Mol. Cell. Cardiol. -1999. - Vol. 31. - P. 1809-1819.
23. Zhang W-M., Jin W.-M., Wong T.M. Multiplicity of kappa opioid receptor binding in the rat cardiac sarcolemma // J. Mol. Cell. Cardiol. - 1996. - Vol. 28. - P. 1547-1554.
Поступила 29.04.2010
