CC BY
107
Влияние внешнего облучения и криоконсервации на качество спермы быков-производителей
Асташева Н.П.1, Лазарев Н.М.2
1 Финансово-технологическая академия, Королев, Россия;
2 Институт сельскохозяйственной радиологии Национального университета биоресурсов и природопользования Украины, Киев, Украина
Для ведения животноводства после радиационных катастроф необходимо прогнозировать возможное влияние ионизирующего излучения на здоровье и репродуктивную функцию животных. Приведены результаты исследований клинико-физиологического состояния и воспроизводительных качеств быков-производителей, подвергшихся воздействию сублетальных доз внешнего облучения. Глубина изменений гематологических показателей зависела от дозы облучения и отражала типичную картину лучевой болезни. Так, на 7 сутки после облучения концентрация лейкоцитов у быков, облучённых в дозах 3 Гр и 4 Гр, снизилась на 44 и 55% по сравнению с исходным уровнем. Представлены экспериментальные данные по динамике изменения концентрации и количества мёртвых спермиев быков-производителей в течение года в зависимости от дозы облучения. Облучение быков в дозах 1-4 Гр приводило к снижению концентрации спермы через 8 недель после облучения на 40-75% по сравнению с контролем. Оценка качества спермы облучённых быков после криоконсервации выявила значительные нарушения подвижности и выживаемости спермиев. Восстановление подвижности криоконсервированной спермы наблюдали на 38-40 неделе после облучения. Глубина нарушений и срок восстановления показателей сперматогенеза зависят от дозы облучения.
Ключевые слова: внешнее облучение, быки-производители, сублетальные дозы
облучения, криоконсервация спермы, показатели крови, размораживание спермы, качество спермы.
Введение
Организация воспроизводства стада является одной из ключевых проблем животноводства в условиях радиоактивного загрязнения территории.
Результаты экспериментальных исследований показали высокую чувствительность системы воспроизводства к действию ионизирующей радиации. Было установлено, что любые виды излучения приводят к дегенеративным изменениям в семенниках и нарушению сперматогенеза у самцов. Так, реакция семенников лабораторных животных свидетельствует о значительных нарушениях сперматогенеза вплоть до стерильности [1]. В то же время, количество работ, посвящённых оценке действия радиации на воспроизводительные качества самцов сельскохозяйственных животных, невелико [2, 3].
Практически не изучена возможность криоконсервации (замораживания) спермы от быков, подвергшихся воздействию внешнего гамма-излучения. Вместе с тем промышленное животноводство и племенная работа основаны именно на методе криоконсервации спермы быков-производителей. Возможность криоконсервации спермы позволяет хранить её несколько лет и даже десятилетий, перевозить на любые расстояния, всегда иметь на станциях сперму лучших производителей, значительно увеличить количество осеменённых маток и сократить поголовье производителей. Глубокая заморозка спермы является стрессом для сперматозоидов. После размораживания определённая часть клеток погибает и при работе со спермой здоровых животных. Поэтому изучение воздействия двух факторов: внешнего облучения и последующего замораживания спермы от облучённых быков представляет большой научный и практический интерес.
Асташева Н.П .* - проф., д.б.н., Финансово-технологическая академия; Лазарев Н.М. - зав. лаб., к.б.н., УкрНИИСХР НУБиП.
*Контакты: 141075, Московская обл., Королев, ул. Гагарина, д. 42. Тел.: (905) 55-47-156; е-mail: Ast10N@mail.ru.
Цель работы: изучить сочетанное действие внешнего облучения и последующей криоконсервации на основные показатели спермопродукции быков-производителей.
Материалы и методы
В эксперименте на 16 племенных быках-производителях чёрно-пёстрой породы было изучено влияние внешнего облучения на физиологическое состояние животных, их воспроизводительные качества, а также влияние криоконсервации на качество спермы от облучённых быков.
По принципу аналогов были сформированы пять групп: контроль - 4 головы и по 3 головы в группах, подвергавшихся внешнему облучению в дозах 1, 2, 3 и 4 Гр. Облучение животных
137
проводили на установке «Гамма-панорама», источник излучения Cs, мощность дозы 1 Гр/час.
Рацион кормления животных был сбалансирован по основным питательным веществам. Водопой с помощью автопоилок без ограничения. Животные постоянно пользовались активным моционом.
Оценку клинико-физиологического состояния быков-производителей осуществляли по следующим показателям: поведение при кормлении и отборе спермы, температура тела, пульс, дыхание. Гематологические исследования проводили до облучения и на 3, 7, 15, 30, 45 и 60 сутки после радиационного воздействия, далее ежемесячно в течение года. Изучали: количество лейкоцитов, эритроцитов и концентрацию гемоглобина по общепринятым методикам.
Оценку воспроизводительных качеств облучённых производителей проводили по комплексу показателей, характеризующих спермопродукцию.
Сперму для исследований получали у быков-производителей по схеме, принятой в племенных хозяйствах, - один раз в неделю методом дуплетных садок с помощью механического станка и вагины. Свежеполученную сперму быков оценивали в лаборатории в течение 30 мин. после получения по следующим показателям: масса спермы, подвижность, концентрация, активность дыхательных ферментов и количество мёртвых спермиев [4]. После определения качественных показателей свежеполученной спермы быков эякулят разбавляли лактозо-глицерино-желточным разбавителем и замораживали в виде гранул на фторопластовых пластинах по общепринятой технологии [5]. Хранили сперму в жидком азоте. Замораживание спермы определённым образом влияет на качество спермы, полученной даже от здоровых животных. Поэтому качество спермы обязательно проверяют после размораживания перед осеменением коров по показателям подвижность и выживаемость при температуре 38 °С.
Размораживание спермы для проверки её качества осуществляли в электрической термобане с регулируемой температурой. Замороженную сперму быков после оттаивания исследовали по ГОСТ 27777-88 [4]. Оценивали выживаемость спермиев, подвижность и коли-титр. Подвижность спермиев для быков мясных пород допускается не ниже 3 баллов.
Результаты исследований
Изучение клинико-физиологического состояния быков-производителей, подвергшихся воздействию внешнего гамма-излучения, выявило типичную картину острой лучевой болезни различной степени тяжести. Так, облучение животных в дозах 1-2 Гр вызывало лучевую болезнь лёгкой степени, без значительных изменений в поведении животных и их клиническом состоянии. Облучение быков в дозах 3-4 Гр вызывало лучевую болезнь средней степени тяжести, у отдельных животных наблюдали признаки тяжёлой степени лучевого поражения с чётко
выраженной симптоматикой. Гибель одного быка, облучённого в дозе 4 Гр, наступила на 27 сутки после облучения.
У быков, облучённых в дозах 3-4 Гр, наблюдали снижение потребления корма, повышенную жажду, разжижение каловых масс, появление в них примеси крови. Животные были ослаблены, адинамичны, наблюдался тремор мышц, учащённое дыхание, точечные кровоизлияния на слизистых оболочках.
Глубина изменений гематологических показателей зависела от дозы облучения. Так, на 7 сутки после облучения концентрация лейкоцитов у быков, облучённых в дозе 1 и 2 Гр, снизилась на 28% по сравнению с исходным уровнем, а в группах, облучённых в дозах 3 и 4 Гр, - на 44 и 55% (табл. 1). Максимальное снижение количества лейкоцитов в крови быков-производителей было зафиксировано на 15 сутки после облучения и составило: при облучении в дозе 1 Гр - 37% (5,0-109/л); при дозе 2 Гр - 39% (4,5-109/л); 3 Гр - 60% (3,0-109/л) и при облучении в дозе 4 Гр - 58% (2,8-109/л).
Таблица 1
Динамика изменения количества лейкоцитов в крови быков (х109/л)
Сутки Доза, Гр
0 1 2 3 4
0 6,7 + 0,6 7,9 + 0,9 7,4 + 0,8 7,5 + 0,5 6,6 + 0,5
3 6,8 + 0,5 6,4 + 0,3 6,6 + 0,4 4,9 + 1,3* 3,1 + 0,3*
7 6,9 + 0,6 5,7 + 0,3 5,3 + 0,8 4,2 + 0,4* 3,0 + 0,2*
15 6,9 + 0,5 5,0 + 0,8* 4,5 + 1,0* 3,0 + 0,5* 2,8 + 0,9*
30 6,7 + 0,5 7,1 + 0,6 7,0 + 0,7 3,6 + 0,1* 2,0 + 0,2*
45 6,7 + 0,5 7,1 + 0,6 6,9 + 0,6 4,6 + 0,2* 4,2 + 0,2*
60 7,5 + 0,1 6,7 + 0,1 7,4 + 0,1 4,0 + 0,4 4,0 + 0,2*
90 6,5 + 0,5 6,1 + 0,5 6,7 + 0,1 6,3 + 0,5 7,1 + 0,1
200 6,3 + 0,2 6,3 + 0,3 7,2 + 0,4 7,0 + 0,5 7,7 + 0,2
346 6,6 + 0,1 6,1 + 0,1 6,2 + 0,1 6,5 + 0,5 6,0 + 0,5
* Р < 0,05.
У животных, облучённых в дозах 1 и 2 Гр, к 30 суткам концентрация лейкоцитов практически достигла исходного уровня и не отличалась от контроля; у быков, облучённых в дозе 3 Гр, в эти сроки начиналось восстановление количества лейкоцитов. В то же время у быков, облучённых в дозе 4 Гр, количество лейкоцитов продолжало снижаться и достигло на 30 сутки минимальных значений - 2,0-10э/л. Восстановление концентрации лейкоцитов до уровня контроля у животных, облучённых в дозах 3-4 Гр, произошло через три месяца после облучения.
Снижение концентрации эритроцитов наблюдали лишь у животных, облучённых в дозе 4 Гр, на 15-45 сутки после облучения - до 4,4-4,7-1012/л. Достоверное снижение концентрации гемоглобина в крови облучённых быков было зафиксировано также на 15-45 сутки при облучении в дозах 3-4 Гр.
Воспроизводительные качества быков-производителей оценивали в течение года после облучения. В разгар лучевой болезни на 10-20 сутки после облучения наблюдали снижение половой активности у быков, облучённых в дозах 3-4 Гр, они неохотно шли в станок, получение спермы затягивалось, требовалась дополнительная стимуляция половых рефлексов. Нормализация половых рефлексов у облучённых быков наступила лишь через 3-4 месяца после облучения. Объём эякулята у облучённых животных на 4 неделе после облучения снизился вдвое во всех облучённых группах. В дальнейшем отмечали периодические изменения объёма эякулята.
Одним из основных показателей качества спермопродукции быков-производителей является концентрация спермы. Следует отметить чёткую зависимость снижения концентрации спермы от дозы облучения и времени после облучения. Начало снижения концентрации спермы наблюдали через 4 недели после облучения. Максимальное снижение концентрации спермы было зафиксировано на 8-12 неделе после облучения (табл. 2).
Таблица 2
15
Динамика изменения концентрации спермиев (х10 /л)
Недели Доза, Гр
0 1 2 3 4
0 1,2 + 0,1 1,2 + 0,1 1,3 + 0,3 1,2 + 0,2 1,1 + 0,2
2 1,3 + 0,3 0,9 + 0,1 1,3 + 0,1 0,9 + 0,3 1,0 + 0,3
4 1,2 + 0,2 1,0 + 0,1 0,9 + 0,1 1,0 + 0,1 0,9 + 0,1
6 1,3 + 0,3 0,9 + 0,3 1,0 + 0,2 0,7 + 0,1 0,9 + 0,2
8 1,2 + 0,2 0,6 + 0,1 0,6 + 0,1 0,5 + 0,2 0,3 + 0,05
12 1,3 + 0,2 0,8 + 0,2 0,4 + 0,2 0,4 + 0,05 0,3 + 0,1
16 1,2 + 0,08 0,7 + 0,3 0,9 + 0,1 0,5 + 0,2 1,0 + 0,1
20 1,2 + 0,07 1,0 + 0,2 1,3 + 0,06 0,8 + 0,1 0,8 + 0,1
24 1,3 + 0,1 1,0 + 0,2 0,8 + 0,2 0,7 + 0,1 0,7 + 0,1
28 1,2 + 0,05 0,6 + 0,1 1,0 + 0,2 1,0 + 0,1 0,7 + 0,1
34 1,2 + 0,2 1,2 + 0,2 1,4 + 0,3 1,2 + 0,2 1,0 + 0,2
40 1,1 + 0,1 0,8 + 0,1 1,1 + 0,2 1,1 + 0,1 0,9 + 0,1
49 1,1 + 0,1 1,2 + 0,3 1,4 + 0,1 0,9 + 0,1 0,9 + 0,1
Так, облучение быков в дозе 1 Гр вызывало снижение концентрации спермы через 8 недель после облучения на 40%, в дозе 2 Гр - на 54%, в дозе 3 Гр - на 58% и в дозе 4 Гр - на 75% по сравнению с исходным уровнем.
Восстановление концентрации спермы до исходного уровня наступало у животных, облучённых в дозе 1 -2 Гр, на 20 неделе после облучения, в дозе 3 Гр - на 28 неделе и при облучении в дозе 4 Гр - на 32-34 неделе после облучения. У животных, облучённых в дозе 3-4 Гр, в течение года отмечали волнообразные изменения концентрации спермы, периодическое сни-
15
жение показателя до (0,6-0,8)х10 /л.
Снижение подвижности спермиев у быков, облучённых в дозах 3-4 Гр, также зафиксировано через 4 недели после облучения, а при облучении в дозах 1 -2 Гр - в более отдалённые сроки 10-12 недель.
У животных, облучённых в дозах 1-2 Гр, на 20-24 неделю (3-4 месяца) после облучения подвижность спермиев восстановилась до исходного уровня. В то же время у быков, облучённых в дозе 3-4 Гр, восстановление подвижности спермы наблюдали лишь на 44-46 неделе после облучения, практически через 11 месяцев.
Аналогичная временная зависимость наблюдается в динамике изменения активности дыхательных ферментов спермы. Достоверное снижение активности дыхательных ферментов спермы быков, облучённых в дозе 1 Гр, наблюдали в период с 4 по 22 неделю; в дозе 2 Гр - с 4 по 24 неделю, в дозе 3 Гр - с 2 по 42 неделю и в дозе 4 Гр - с 2 по 46 неделю после облучения.
Уже на второй неделе после облучения наблюдали значительное увеличение процента мёртвых спермиев у животных, облучённых в дозе 3-4 Гр, до 30-46%, при норме 16-18% (табл. 3).
Таблица 3
Количество мёртвых спермиев (%)
Недели Доза облучения, Г э
0 1 2 3 4
0 12,0 + 0,5 9,3 + 0,3 14,6 + 1,4 11,6 + 0,1 11,6 + 0,1
2 13,0 + 0,5 21,0 + 0,5 17,3 + 0,6 30,0 + 0,5 46,6 + 0,5
4 13,7 + 0,6 30,0 + 0,6 33,3 + 0,3 36,6 + 0,4 40,0 + 0,7
6 14,0 + 0,5 33,0 + 0,3 33,3 + 0,3 42,0 + 0,6 45,0 + 0,8
8 16,2 + 0,1 36,6 + 0,7 39,3 + 0,5 65,0 + 0,5 75,0 + 0,7
12 7,5 + 0,5 27,6 + 0,9 45,0 + 0,5 50,0 + 0,5 57,5 + 0,5
16 9,5 + 0,5 35,0 + 0,5 39,5 + 0,5 42,5 + 0,4 42,5 + 0,4
20 15,7 + 0,1 20,0 + 0,5 33,3 + 0,3 45,0 + 0,5 50,0 + 0,6
24 15,0 + 0,3 40,0 + 0,6 33,3 + 0,2 30,0 + 0,2 35,0 + 0,3
28 15,0 + 0,4 18,0 + 0,6 25,5 + 0,8 30,0 + 0,5 35,0 + 0,3
32 15,0 + 0,5 20,1 + 1,8 25,5 + 0,3 30,0 + 0,4 31,0 + 0,3
40 15,0 + 0,5 15,0 + 1,5 20,0 + 0,2 20,0 + 0,2 35,0 + 0,4
52 10,0 + 1,5 10,0 + 1,5 15,0 + 0,2 15,0 + 0,1 15,0 + 0,2
Максимальное количество мёртвых спермиев было отмечено на 8 неделе после облучения. Увеличение количества мёртвых спермиев составило в группе, облучённой в дозе 1 Гр, -36,6%; 2 Гр - 39,3%; 3 Гр - 65% и при дозе 4 Гр - 75%.
Снижение процента мёртвых спермиев до нормы наблюдали у животных, облучённых в дозе 1 Гр, через 28 недель после облучения, у облучённых в дозе 2 Гр - через 36 недель (7-8 месяцев).
У быков, облучённых в дозе 3 и 4 Гр, процент мёртвых спермиев снизился с максимальных значений до 25-30% на 28-30 неделю и на этом уровне регистрировался с периодическими увеличениями вплоть до 50 недель после облучения. То есть, практически на протяжении года после облучения процент мёртвых спермиев у облучённых быков был выше физиологической нормы.
Оценка качества спермы облучённых быков после криоконсервации выявила значительные нарушения подвижности и выживаемости спермиев. Так, подвижность спермиев от быков, облучённых в дозе 4 Гр, после криоконсервации уже на 4 неделе снизилась до 2,6+0,3 балла, при норме - 4,0 балла. С 8 по 20 неделю подвижность спермиев снизилась до 0. Восстановление подвижности криоконсервированной спермы зафиксировано лишь на 28 неделе (7 месяцев после облучения) при облучении в дозе 1-2 Гр и на 38-40 неделе при облучении в дозе 3-4 Гр. В то время как у контрольных животных подвижность спермиев после криоконсервации стабильно составляла 4,0 балла (табл. 4).
Таблица 4
Подвижность спермиев после криоконсервации (балл)
Недели Доза облучения быков, Гр
0 1 2 3 4
0 4 4 4 4 4
4 4 4 4 4 2,6 ± 0,3
8 4 0 0 0 0
12 4 1,3 ± 0,1 1,2 ± 0,1 0 0
16 4 0 0 0 0
20 4 0 0 2,0 ± 0,5 0
24 4 1,3 ± 0,1 2,0 ± 0,8 0 2,0 ± 0,6
28 4 4 2,6 ± 0,3 2,0 ± 0,1 2,0 ± 0,1
32 4 2,6 ± 0,3 4 2,0 ± 0,5 4
40 4 2,5 ± 0,8 0,7 ± 0,5 4 4
52 4 3,0 ± 0,2 4 4 4
Оценка выживаемости спермиев при 38 °С выявила аналогичные закономерности. В норме выживаемость спермиев после криоконсервации должна быть не менее 5 часов, что оценивается в 0,5 балла. Выживаемость криоконсервированной спермы от быков, облучённых в дозах 3-4 Гр, резко снизилась до 0, начиная с 4 недели после облучения. Восстановление выживаемости спермиев в этих группах наблюдали лишь через 40-48 недель, практически через 1012 месяцев после облучения. Выживаемость спермиев при облучении быков в дозе 1 Гр на 4 неделе была в пределах нормы (0,5 балла). Однако уже на 8 неделе она снизилась до 0,3+0,05 балла и далее с 10 по 30 недели была равна 0 (табл. 5).
Таблица 5
Выживаемость спермиев после криоконсервации (балл)
Недели Доза, Гр
0 1 2 3 4
0 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
4 0,5 0,5 0,2 + 0,01 0 0
8 0,5 0,3 + 0,1 0 0,2 0
12 0,5 0 0 0 0
16 0,5 0 0 0 0
20 0,5 0 0 0 0
24 0,5 0 0 0 0
28 0,5 0 0,3 + 0,1 0,2 + 0,1 0
32 0,5 0,8 + 0,1 0 0,5 0
40 0,5 0 0,2 + 0,1 0,3 + 0,1 0
52 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
При облучении быков-производителей в дозе 2 Гр снижение выживаемости спермиев после криоконсервации зарегистрировали на 4 неделе до 0,2+0,01 балла, далее отмечали полную гибель спермиев, восстановление этого показателя наблюдали лишь через 34 недели после облучения (8 месяцев). Сперма, полученная от быков-производителей, облучённых в дозах 1-4 Гр, не выдерживает криоконсервации на протяжении 8-12 месяцев после облучения.
Заключение
Таким образом, облучение быков-производителей в сублетальных дозах вызывает длительное нарушение сперматогенеза и, как следствие, снижение воспроизводительных качеств. Глубина нарушений и срок восстановления показателей сперматогенеза зависят от дозы облучения. Анализ подвижности, концентрации и процента мёртвых спермиев позволяет с достаточной точностью определить сроки и глубину нарушения воспроизводительной способности облучённых самцов сельскохозяйственных животных. Так, облучение быков-производителей в дозах 1 -2 Гр вызывает через 2 месяца снижение воспроизводительных качеств (на срок 3-4 месяца) примерно на 50%. Облучение в более высоких дозах 3-4 Гр вызывает нарушение воспроизводительных качеств уже через месяц после облучения на 60-70% (длительностью 8-10 месяцев). Через 8-10 месяцев после облучения в дозах 1-2 Гр невозможно получать сперму, пригодную после размораживания для искусственного осеменения коров. При облучении быков-производителей в дозах 3-4 Гр не наступает полного восстановления качества спермы и получение замороженных спермодоз практически невозможно в течение года после облучения. Соответственно использование быков-производителей для промышленного животноводства будет невозможно, что приведёт к увеличению затрат на содержание быков, уменьшению выхода приплода и отрицательно повлияет на экономические составляющие ведения животноводства в целом.
Литература
1. Конопля Е.Ф., Верещако Г.Г., Ходосовская А.М., Рыбаков В.Н. Морфофункциональное состояние репродуктивной системы крыс-самцов после хронического низкоинтенсивного облучения в дозе 1,0 Гр //Радиационная биология. Радиоэкология. 2002. Т. 42, № 2. С. 136-140.
2. Асташева Н.П., Фрунзе В.Я. Влияние различных доз облучения на воспроизводительную функцию баранов //Проблемы сельскохозяйственной радиологии: сб. научных трудов. Киев, 1993. С. 179-184.
3. Новикова О.Н. Оценка качества спермы хряков, подвергшихся однократному тотальному гамма -облучению: автореф. дис. ... канд. биол. наук. Дубровицы: ПМП ВИЖ, 1991. 28 с.
4. ГОСТ 27777-88. Сперма быков замороженная. Методы биологических исследований. М.: Стандар-тинформ, 1989. 7 с.
5. Ющенко Н.П. Замораживание спермы животных в гранулах жидким азотом //Воспроизводство и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. ВАСХНИЛ, 1990. С. 31-38.
The influence of external irradiation and cryopreservation on sperm quality of stud bulls
Astasheva N.P.1, Lazarev N.M.2
1 Financial Technological Academy, Korolyov, Russia;
2 Institute of Agricultural Radiology, National University of Bioresources and Environmental Management of Ukraine, Kyiv, Ukraine
The purpose of the study is to investigate combined effect of external radiation exposure and cryopreservation on the semen quality of fertile bulls. The study presents results of research on clinical and physiological state of stud bulls exposed to sublethal doses of external radiation and effect of cryopreservation on the semen quality. The bulls divided in 4 groups, the animals of each group were exposed to the single radiation dose of 1, 2, 3, and 4 Gy. Blood was tested in 3, 7, 15, 30, 45, 60 days after exposure. Sperm was taken every week, after testing its quality the sperm was frozen and kept in liquid nitrogen. On the 7th day after the exposure of 3 Gy and 4 Gy the concentration of white blood cells decreased by 44% and 55% respectively, as compared to the initial level. Authors present dynamic data on dead sperm cells level in the cryopreserved and thawed sperm in relation to a radiation dose received by the bulls. They demonstrate the dependence of the semen quality on dose. As compared with the control points, concentration of sperm decreased by 40-75% in 8 weeks after the exposure of the bulls to doses of 1-4 Gy, there was a significant decline in motility and viability. Sperm motility recovered in 38-40 weeks after exposure to radiation.
Key words: external radiation exposure, fertile bulls, sublethal radiation dose, sperm cryopreservation, blood test, thawing frozen semen, semen quality.
Astasheva N.P.* - Prof., Dr. Sci., Biol., Financial Technological Academy; Lazarev N.M. - Head of Lab., C. Sc., Biol., Institute of Agricultural Radiology.
‘Contacts: 42 Gagarin St., Korolyov, Moscow region, Russia, 141075. Tel.: (905) 55-47-156; e-mail: Ast10N@mail.ru.
References
1. Konoplya Ye.F., Vereshchako G.G., Khodosovskaya A.M., Rybakov V.N. Morfofunktsional'noye sostoyaniye reproduktivnoy sistemy krys-samtsov posle khronicheskogo nizkointensivnogo oblucheniya v doze 1,0 Gr [Morphofunctional-channel state of the reproductive system of male rats after chronic low-level exposure to a dose of 1.0 Gy]. Radiatsionnaia biologiia. Radioekologiia - Radiation Biology. Radioecology, 2002, vol. 42, no. 2, pp. 136-140.
2. Astasheva N.P., Frunze V.Ya. Vliyanie razlichnykh doz oblucheniya na vosproizvoditel'nuyu funktsiyu baranov [Influence of various doses of radiation on reproductive function of rams]. Problemy sel'skokhozyaystvennoy radiologii: sbornik nauchnykh trudov - Problems of agricultural radiology. Collection of scientific works. Kiev, 1993, pp. 179-184.
3. Novikova O.N. Otsenka kachestva spermy khryakov, podvergshikhsya odnokratnomu total'nomu gamma-oblucheniyu: avtoref. dis. ... kand. biol. nauk [Quality assessment of pig sperm following single whole-body gamma-radiation exposure. Cand. biol. sci. diss. synopsis]. Dubrovitsa, PMP VIZh, 1991. 28 p.
4. GOST 27777-88. Sperma bykov zamorozhennaja. Metody biologicheskih issledovani.j [State Standard 27777-88. Frozen sperm of bulls. Methods of biological test]. Moscow, Standartinform Publ., 1989. 7 p.
5. Jushhenko N.P. Zamorazhivanie spermy zhivotnyh v granulah zhidkim azotom [Freezing of granulated animal sperm in liquid nitrogen]. Vosproizvodstvo i iskusstvennoe osemenenie sel'skohozjajstvennyh zhivotnyh [Reproduction and artificial insemination of agricultural animals]. VASKhNIL - Lenin All-Union academy of Agricultural Sciences, 1990, pp. 31-38.
