CC BY
39
УДК 618.3-06:612.111.16:578.825.12
ВЛИЯНИЕ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА СОДЕРЖАНИЕ МЕТГЕМОГЛОБИНА В ЭРИТРОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БЕРЕМЕННЫХ В ПЕРИОД ГЕСТАЦИИ
О.Л.Кутепова
Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения РАМН,
675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22
РЕЗЮМЕ
Изучены процессы оксигенации эритроцитов периферической крови и факторы, их снижающие, у 50 беременных на сроке гестации 20-22 недели с хронической цитомегаловирусной инфекцией в стадии обострения. Контрольную группу составили 20 здоровых беременных на тех же сроках гестации. При морфометрическом анализе мазков эритроцитов периферической крови беременных, предварительно проинкубированных в 0,1% растворе метиленового синего, выявлено увеличение количества окрашенных эритроидных клеток до 12,0±0,9% при контроле 3,0±0,08% (р<0,001). Важной причиной выявленных нарушений явилась структурная перестройка мембран эритроцитов под действием антигенов цитомегаловируса, что приводило к функциональной и метаболической дизадап-тации, снижению активности
глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и НАДФ*Н, участвующего в восстановлении метгемоглобина. В результате в эритроцитах периферической крови накапливался метгемоглобин до 1,5±0,42% (контроль - 0,5±0,04%; р<0,001). Полученные результаты указывают на роль цитомегаловирусной инфекции в формировании условий низкой оксигенации эритроцитов, что является угрозой развития гипоксиче-ского состояния у плода.
Ключевые слова: цитомегаловирусная инфекция, метгемоглобин, метиленовый синий.
SUMMARY
INFLUENCE OF CYTOMEGALOVIRUS INFECTION ON THE CONTENT OF METHEMOGLOBIN IN ERYTHROCYTES OF PERIPHERAL BLOOD OF PREGNANT WOMEN DURING GESTATION
O.L.Kutepova
Far Eastern Scientific Center of Physiology and Pathology of Respiration of Siberian Branch RAMS,
22 Kalinina Str., Blagoveshchensk,
675000, Russian Federation
The processes of erythrocytes oxygenation in the peripheral blood and factors decreasing them were studied in 50 pregnant women with the exacerbation of chronic cytomegalovirus infection at 20-22 weeks of pregnancy. The control group included 20 healthy pregnant women at the same period of gestation. Under morphometric analysis of peripheral blood erythrocytes smear of pregnant women which was preliminarily incubated in 0.1% of methylene blue solution, the
increase of painted erythroid cells till 12.0±0.9% was revealed, while in the control it was 3.0±0.08% (p<0.001). An important cause of the revealed disturbances was a structural change of erythrocytes membranes under the influence of chronic cytomegalovirus antigens, which resulted in functional and metabolic dysadaptation, the decrease of the activity of glucose-6-phosphatededehydrogenase and NADP*H which participates in methemoglobin response. As a result in erythrocytes of the peripheral blood methemoglobin accumulated till 1.5±0.42% (in the control it was 0.5±0.04%; p<0.001). The obtained results show the role of chronic cytomegalovirus infection in the formation of erythrocytes low oxygenation, which is the threat of the fetus hypoxic state development.
Key words: cytomegalovirus, methemoglobin, methylene blue.
В безъядерных эритроцитах широко представлен пентозный цикл утилизации глюкозы, в процессе которого происходит восстановление никотинамидаденин-нуклеотидфосфата (НАДФ) в восстановленную форму НАДФ'Н [4]. За весь пентозный цикл образуется две молекулы НАДФ»Н [6]. Образующиеся НАДФ»Н участвуют в разных клеточных процессах: синтезе жирных кислот, холестерина, восстановлении метгемоглобина. Нарушение пентозного цикла связано с разрушением структур эритроцитов и наступлением их гемолиза.
Особое место в функциональной деятельности эритроцита занимает метгемоглобин, являясь той формой гемоглобина, в которой железо гема окислено до Fe3+, а потому он не способен переносить кислород.
Формирование метгемоглобина в эритроцитах происходит при отравлении нитратами, анилином, полипептидами [2, 3]. Интенсивность реакций пентозного цикла в эритроцитах заметно увеличивается в присутствии метиленового синего, что способствует восстановлению метгемоглобина в гемоглобин. Вероятно, в безъядерных эритроцитах с утратой ядра произошла и утрата одного из факторов, участвующих в общей дыхательной системе - акцептора и переносчика водорода, который может быть заменен метиленовым синим [5].
В норме восстановление метгемоглобина выполняется метгемоглобинредуктазой, при подавлении функции которой ее могут заменить неферментативные системы, такие как глютатион, аскорбиновая кислота, метиленовый синий. Однако к настоящему времени в литературе нет сведений, указывающих, что в ингибировании метгемоглобинредуктазы принимают участие антигены персистирующих инфекций, в том числе такие, как антигены цитомегаловирусной инфек-
ции.
Цель настоящей работы - показать, что обострение в организме цитомегаловирусной инфекции приводит к снижению восстановительной функции метиленового синего в эритроцитах периферической крови у беременных в период гестации.
Материалы и методы исследования
Обследовано 50 беременных на сроке гестации 20-22 недели в возрасте 18-25 лет с хронической ЦМВИ в стадии обострения (основная группа), и 20 беременных на тех же сроках гестации без патологии (контрольная группа). Симптоматически
цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз -обострение цитомегаловирусной инфекции устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а так же ДНК цитомегаловируса. Исследования проводились с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными приказом М3 РФ№266 от 19.06.2003 г.
Верификация цитомегаловируса, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами иммуноферментного анализа на спектрофотометре Stat Fax 2100 (США) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); выявление ДНК цитомегаловируса методами полимеразной цепной реакции на аппарате ДГ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва). Содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови определяли спектрофотометрическим методом по Кушаковскому [1].
Активность метиленового синего в эритроцитах периферической крови определяли следующим образом: гепаринизированную кровь, взятую из локтевой вены беременной в количестве 0,5 мл помещали в 0,5 мл 0,1% раствора метиленового синего, приготовленного на фосфатном буфере с рН=7,4, полученную взвесь эритроцитов в течение 5 минут содержали в термостате при температуре 37°С. Затем каплю взвеси помещали на предметное стекло и накрывали покровным стеклом, окантовав его парафином. Камеру со взвесью эритроцитов в 0,1% метиленовом синем изучали с помощью цифрового микроскопа МТ (Meiji Techno, Япония), при увеличении 10x100 с целью подсчета эритроцитов, окрашенных метиленовым синим на 100 единиц. Подсчет проводился как у здоровых беременных, так и у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции.
Результаты исследования и их обсуждение
При обострении цитомегаловирусной инфекции во втором триместре гестации при титре антител к цито-
мегаловирусу 1:1600, в периферической крови беременных количество окрашенных 0,1% раствором метиленового синего эритроцитов насчитывалось до 12,0±0,9% (рис. 1). У здоровых беременных на этом же сроке гестации количество эритроцитов, окрашенных метиленовым синим, составляло только 3,0±0,08% (рис. 2).
Сх Э ^ С
Ж ч Сг^_
О
(.
о
Рис. 1. Эритроциты периферической крови беременной с обострением цитомегаловирусной инфекции. Количество не восстановившихся эритроцитов, восстановленных метиленовым синим, увеличено. Окраска 0,1% раствором метиленового синего. Увеличение: 10x100.
t
г\
Рис. 2. Эритроциты периферической крови беременных, не болевших в период гестации. Имеются лишь единичные эритроциты, окрашенные метиленовым синим. Окраска 0,1% раствором метиленового синего. Увеличение: 10x100.
У здоровых беременных в периферической крови количество метгемоглобина насчитывалось до
0,5±0,04%, в то время как при обострении цитомегаловирусной инфекции содержание метгемоглобина увеличивалось до 1,5±0,42%.
Таким образом, цитомегаловирусная инфекция подавляет восстановление метгемоглобина, что выражается задержкой обесцвечивания эритроцитов, окрашенных, метиленовым синим. При создавшихся условиях снижается насыщение гемоглобина эритро-
цитов кислородом до 95,0±0,98% и возникает угроза формирования гемической гипоксии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кутаковский М.С. Клинические формы повреждения гемоглобина. Л.: Медицина, 1968. 325 с.
2. Влияние обогащенного пролином полипептида на восстановление метгемоглобина и образование супероксида под действием металлопротеинов - цитохрома Ь558111 и супрола in vitro / Г.М.Симонян [и др.] //Нейрохимия. 2007. Т.24, №1. С.37-40.
3. Механизмы повреждения эритроцитов при токсическом действии метгемоглобинобразователей /
О.Н.Филиппова [и др.] // Бюл. Сибирской медицины. 2006. Т.5, №1. С.32-37.
4. Федоров Н.А. Нормальное кроветворение и его регуляция. М.: Медицина, 1976. 543 с.
5. Энгельгардт В.А., Саков Н.Е. О механизме пастеровского эффекта//Биохимия. 1943. Т.8.,№1. С.9-36.
6. Murphy J.R. Erythrocyte metabolism. I. The equilibration of glucose-C14 between serum and erythrocytes //
J. Lab. Clin. Med. 1960. Vol.55. P.281-285.
REFERENCES
1. Kushakovskiy M.S. Klinicheskie formy povrezh-deniva gemoglobina [Clinical forms of hemoglobin damage]. Leningrad: Meditsina; 1968.
2. Simonyan G.M., Simonyan R.M., Agamyan G.R., Simonyan M.A., Galoyan A.A. Nevrokhimiva 2007; 24(1 ):37 40.
3. Filippova O.N., Shperling I.A., Rogov O.A., Sapryk-ina E.V., Ryazantseva N.V., Novitsky V.V. Bvulleten' Sibirskoy meditsiny 2006; 5(1):32—37.
4. Fedorov N.A. Normal’noe krovet\’orenie i ego reg-ulvatsiva [Normal hemogenesis and its regulation], Moscow: Meditsina; 1976.
5. Engel'gardt V.A., Sakov N.E. Biokhimiva 1943; 8(l):9-36.
6. Murphy J.R. Erythrocyte metabolism. I. The equilibration of glucose-C14 between serum and erythrocytes. J. Lab. Clin. Med. 1960; 55:281-285.
Поступила 17.07.2013
Контактная ннформацня Ольга Леонидовна Кутепова, аспирант лаборатории механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при НЗЛ, Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения РАМН,
675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22.
E-mail: helgal509_84(a)mail.ru Correspondence should be addressed to Ol'ga L. Kutepova,
MD, Postgraduate student of Laboratory of Mechanisms of Etiopathogenesis and Recovery Processes of the Respiratory System at Non-Specific Pulmonary Lung Diseases, Far Eastern Scientific Center of Physiology and Pathology ofRespiration SB K4MS, 22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation.
E-mail: helgal509_84(a)mail.ru
