CC BY
29
стояла из светлых клеток с круглыми светлыми ядрами. По величине они не отличались друг от друга. Цитоплазма гепатоцитов содержала зернистую массу, которая просветлялась и местами вакуолизировалась. В этот период формировалась балочная структура печени, которая проявлялась благодаря тонким межбалочным перегородкам, содержащим эндотелиальные клетки с нитевидными тёмными ядрами. Центральные вены были преимущественно пустыми и имели звёздчатую форму, поскольку сосудистая стенка находилась в стадии формирования и развития. Среди светлых клеток располагались поля и тяжи гепатоцитов с более компактной цитоплазмой.
В субклеточной организации гепатоцитов у поросят в 30-40-суточном возрасте продолжалась дифференциация структурных элементов ядра и цитоплазмы: уменьшалось содержание гликогена, гранулярная эндоплазматическая сеть встречалась по всей цитоплазме и тесно контактировала с митохондриями округлой формы, а межклеточные контакты уплотнялись.
У клинически здоровых поросят в 2-месячном возрасте в печени завершалось становление структурной её организации. В ней чётко выявлялось дольчатое строение. Печёночные дольки были крупными, состояли из радиальных балок светлых гепатоцитов. Центральная вена имела нежную стенку. Междольковые перегородки также состояли из нежных соединительнотканных перегородок и кровеносных сосудов (рис. 4).
Выводы. Установлено, что у телят в печени дефинитивная структурная организация отмечена в 5-10-суточном, а у поросят — в 30-40-суточном возрасте. Объём ядер гепатоцитов у 1-5-суточных телят составил 100±1,9 мкм3, а у поросят — 121,48+3,8 мкм3. У новорождённых телят общий объём цитоплазмы гепатоцитов состоял из ГЭС —
3,4%, АЭС - 40,5% и митохондрий - 44,0%, а в 5-суточном возрасте - 18,0; 40,0 и 22,0% ГЭС, АЭС и митохондрий соответственно. В печени поросят в период новорождённости наблюдались множественные фетальные очажки клеток эритробласти-ческого ряда. Формирование дольчатой структуры печени у поросят завершалось в 30-45-суточном возрасте. Относительный объём гранулярной ЭПС в гепатоцитах поросят к 2-месячному возрасту возрастал от 19,0 до 41,0%, а агранулярная ЭПС снижалась от 22,0 до 11,0%. Относительный объём митохондрий колебался в пределах 16,0-19,0% в гепатоцитах поросят в период новорождённости.
Литература
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М.: Медицина, 1990. 384 с.
2. Александровская О.В., Радостина Т.Н., Козлов Н.А. Цитология, гистология и эмбриология: учебник. М.: Агропромиздат, 1987. 448 с.
3. Анатомия домашних животных: учебник / И.В. Хрусталева [и др.]; под ред. И.В. Хрусталевой. М.: Колос, 2000. 704 с.
4. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Гистология, цитология и эмбриология. М.: Медицина, 1996. 554 с.
5. Методы морфологических исследований / С.М. Сулейманов, П.А. Паршин, Ю.П. Жарова [и др.]. Воронеж: ВНИВИПФиТ, 2000. 384 с.
6. Никитин В.Н. Возрастные изменения биохимических процессов в организме животных // Возрастная физиология животных / под ред. К.Б. Свечина. М.: Колос, 1967. 431 с.
7. Сулейманов С.М. Основы морфологических методов исследований: учеб. пособие для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности «Ветеринария», «Зоотехния» / сост. С.М. Сулейманов [и др.]. Воронеж: ВГАУ, 2015. 128 с.
8. Сулейманов С.М., Слободяник В.С., Мозговая Е.И. Структурная организация печени свиней в постнатальном онтогенезе, при патологии и её профилактике // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2013. № 4. С. 27-34.
9. Федий Е.М. Физиология пищеварения животных в онтогенезе // Возрастная физиология животных / под ред. К.Б. Свечина. М.: Колос, 1967. 431 с.
10. Хесин Я.И. Размеры ядер и функциональное состояние клеток. М.: Медицина, 1967. 423 с.
11. Moltcular cell biology / H. Lodish., A. Berk, Zipursky et al. New York: Freeman and Comp, 2000. 1200 p.
12. Слободяник В.С. Морфология печени поросят при гепато-дистрофии, ее профилактике и терапии препаратами пан-тотеновой кислоты и карнитином: дис. ... докт. биол. наук. Воронеж, 2006. 276 с.
Влияние тонуса симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы на функцию кроветворных органов у собак с разной стрессовой чувствительностью
А.И. Кузнецов, д.б.н., профессор, Т.А. Васильева, аспирантка, ФГБОУ ВО Южно-Уральский ГАУ
Основная роль в способности сохранять постоянство внутренней среды организма и приспосабливаться к изменению внешних условий принадлежит симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системам. Одним из показателей напряжения этих систем является уровень содержания гормонов в плазме крови [1—3]. В плане изучения физиологических осо-
бенностей служебных собак мы поставили перед собой цель — определить характер реакции их симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем при действии дозированного стрессового раздражителя в связи со стрессовой чувствительностью и оценить их влияние на морфологический состав крови.
Материал и методы исследования. Исследование проводили на базе центра кинологической службы УМВД России по Курганской области. Для экспериментального исследования использовали
две группы служебных собак породы немецкая овчарка в возрасте 2—6 лет. Группы собак были сформированы по уровню стрессовой чувствительности (стрессчувствительные — I гр., стрессустой-чивые — II гр.), по 7 животных в каждой группе Стрессовую чувствительность определяли методом А.И. Кузнецова, Т.А. Васильевой [4]. В основу метода был взят принцип локального адаптационного синдрома (ЛАС). Известно, что особенности течения ЛАС, как привило, соответствуют характеру проявления общего адаптационного синдрома [5—8]. В качестве раздражающего вещества, вызывающего локальную реакцию, использовали 50%-ный скипидар в дозе 0,05 мл. Раздражитель вводили безыгольным инъектором (МБИ-1) внутрикожно в середину наружной стороны ушной раковины.
Реакцию симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем на действие раздражителя определяли по количественному изменению в крови адреналина, норадреналина, кортизола и кортикостерона [9]. Оценку функционального состояния кроветворных органов в связи с состоянием симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем определяли по изменению лейкоцитарной формулы и количеству эритроцитов. Исследования уровня гормональных изменений и количественного изменения морфологического состава крови определяли общепринятыми методиками с использованием гематологического анализатора и ИФА-тестов [10].
Результаты исследования. Изменения представленных показателей симпато-адреналовой и ги-поталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы (табл. 1) были различны у животных с разной чувствительностью к стрессам после локального введения раздражителя. У собак стрессчувстви-тельной группы в исходном состоянии содержание адреналина и норадреналина составляло 3,85+0,04 и 7,80+0,12 нмоль/л соответственно, кортизола — 58,02+1,25 нмоль/л, кортикостерона — 25,60+0,81 нмоль/л. После введения скипидара, через 24 час., количество адреналина и норадреналина изменилось в сторону увеличения соответственно на
40,5 и 16,7%, при этом показатели кортизола и кортикостерона повысились на 41,8 и 46,9% соответственно. Через 36 часов диагностировали увеличение показателей адреналина и норадреналина на 84,9 и 32,6%, а кортизола и кортикостерона — на 35,3 и 28,3%. Данные изменения свидетельствует о включении механизмов стрессовой реакции в организме данной группы собак. В дальнейшем показатели гормонального обмена снизились до первоначального значения. Следует отметить, что глюкокортикоиды демонстрировали максимальное увеличение через 24 часа, а пик активности катехоламинов наблюдался через 36 часов после локального введения скипидара. Через 72 часа наблюдали следующие значения показателей: адреналина — 114,5, норадреналина — 108,6, кортизола — 110,7, кортикостерона — 104,3%. Такие изменения являются характерными для стрессового состояния животного.
В группе стрессустойчивых животных в исходном состоянии показатель адреналина был на уровне 3,25+0,03 нмоль/л, норадреналина — 5,90+0,22 нмоль/л. Регистрировали нестабильность в показателях адреналина после внутрикожного введения раздражителя, что характеризовалось повышением его уровня через 24 часа на 30,8%, через 36 часов — на 38,8%, а в дальнейшем отмечалось снижение величины этого показателя. Изменение значений норадреналина проявилось в небольшом его снижении вплоть до 48 часов, а затем в незначительном повышении на 3,4% через 72 часа после введения скипидара.
Анализируя показатели глюкокортикоидов у стрессустойчивых собак, мы наблюдаем, что исходный уровень кортизола 56,04+1,04 нмоль/л через 24 часа изменился незначительно, а через 36 часов повысился незначительно — на 2,8%. При этом содержание кортикостерона первоначально составляло 19,25+0,75 нмоль/л, через 24 часа снизилось на 15,6%, через 36 часов повысилось в сравнении с исходным значением на 11,4%. Следует отметить, что наблюдаемая нами реакция повышения адреналина в крови свидетельствовала
1. Картина реакции гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы служебных собак на действие скипидара в дозе 0,05 мл в концентрации 50% (п = 7; X+Sx)
Показатель, нмоль/л Группа Исходное значение Период после тестирования, час.
24 % к ис-ходн. 36 % к исхода. 48 % к исхода. 72 % к исходи.
Адреналин I II 3,85±0,04 3,25±0,03 5,41±0,22*** 4,25±0,37 140,5 130,8** 7,12±0,85*** 4,51±0,38 184,9 138,8*** 4,01±0,13 3,51±0,11*** 104,2 108,0 4,41±0,04* 3,51±0,07 114,5 108,0
Норадре-налин I I 7,80±0,12* 5,90±0,22 9,10±0,21 5,75±0,24 116,7* 97,5 10,35±0,31 5,61±0,15 132,6** 95,0 9,01±0,15 5,65±0,27 115,5* 95,8 8,47±0,08* 6,10±0,01 108,6 103,4
Корти- зол I II 58,02±1,25 56,04±1,04 82,25±1,8** 56,10±1,12 141,8 100,1 78,50±1,51** 57,61±0,80 135,3 102,8 67,75±1,68* 54,61±1,51 116,8 97,4 64,25±1,07* 47,81±1,46 110,7 85,3
Кортико-стерон I I 25,60±0,81* 19,25±0,75 37,61±0,71*** 16,25±0,82 146,9 84,4 32,85±0,83** 21,45±0,41 128.3 111.4 30,51±0,91** 21,21 ± 0,10 119,2 110,2 26,71±0,24 17,75±0,08 104,3 92,2
Примечание: *Р<0,05; **Р<0,01; ***Р<0,001
о болевой реакции, которая возникает у животных на внутрикожное введение скипидара и процесс взятия крови. В целом по изменению гормонов в крови стрессустойчивых служебных собак можно говорить о высокой адаптивности организма к условиям воздействия стресс-фактора.
Разный характер реакции симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы у собак с разной стрессовой чувствительностью на действие дозированного вещества позволил нам наблюдать изменения морфологи -ческих показателей крови в связи с различным напряжением этих систем.
По таблице 2 видно, что после локального введения скипидара изменения морфологических показателей у животных, имеющих разную стрессовую чувствительность, разнились. После введения скипидара, через 24 часа, наблюдали повышение гематокрита на 5,2%, количества эритроцитов — на 21,8, содержания гемоглобина — на 5,8, общего количества лейкоцитов — на 13,8, нейтрофилов — 19,2%. Содержание эозинофилов снижалось на 26,2, лимфоцитов — на 12,3%. Подобные изменения показателей наблюдали и через 36 часов, при этом выше исходного значения были значения гематокрита — на 8,9%, эритроцитов — на 32,7, гемоглобина — на 5,7, общего количества лейкоцитов — на 15,2, нейтрофилов — на 14,9%. Содержание эозинофилов и лимфоцитов снизилось на 50,9 и 23,4% соответственно. Величины определяемых показателей через 72 часа были близки к исходному состоянию и составляли: гематокрит — 49,3+1,77% (в исходном состоянии — 50,4 +1,45%), количество эритроцитов — 178,41+1,69 мл/мкл (в исходном состоянии — 5,71+0,18 мл/мкл), содержание гемоглобина — 178,41+1,69 г/л (в исходном состоя-
нии — 177,92+1,70 г/л), общее количество лейкоцитов — 7,31+0,69 тыс/мкл (в исходном состоянии — 7,40+0,40 тыс/мкл), нейтрофилов — 70,73+ 1,03% (в исходном состоянии — 69,82+0,76%), эозинофилов — 5,31+0,39% (в исходном состоянии - 5,10 +0,99%), лимфоцитов - 20,95 +2,56% (в исходном состоянии 22,15+1,64%). Наблюдаемые нами изменения показателей крови отражали состояние стресса в группе стрессочувствительных собак.
В группе стрессустойчивых собак исследуемые морфологические показатели не имели ярко выраженных изменений. Но через 24 часа с момента введения скипидара наблюдалось снижение гемато-крита в сравнении с первоначальным значением на 10,4% и палочкоядерных нейтрофилов — на 20,2%. Наиболее яркие изменения наблюдались в реакции показателя эозинофилов. Через 24 часа величина этого показателя повысилась на 20,2% в сравнении с исходным значением. Через 36 часов показатель эозинофилов повысился на 29,2%, а через 48 часов — на 10,8%, в дальнейшем он восстановился до первоначального уровня. Наблюдаемые изменения в крови характеризуют стрессустойчивое состояния.
Выводы. 1. У стрессчувствительных собак реакция симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы на действие дозированного стрессового раздражителя выражается достоверным повышением их тонуса, что сопровождается выраженными изменениями морфологических показателей крови, характерных для стрессового состояния.
2. У стрессустойчивых собак реакция сим-патоадреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы на действие дозированного стрессового раздражителя незначительна
2. Морфологические показатели крови служебных собак с разной стрессовой чувствительностью при действии дозированного раздражителя (X+Sx), п=7
Показатель Группа Исходное значение Период после введения скипидара, час.
24 % к исходу 36 % к исходу 48 % к исходу 72 % к исходу
Гематокрит, % I II 50,4±1,45 53,1±1,64 53,0±1,21* 47,6±1,18 105,2 89,6 54, 9±1,31* 49,3±1,16 108,9 92,8 53,0±1,19* 52,1±1,36 105,2 98,1 49,3±1,77 51,4±1,26 97,8 96,8
Эритроциты, 1012/л I II 5,52±0,26 5,64±0,31 6,70±0,36** 5,51±0,25 121,8 97,6 7,31±0,26*** 5,54±0,34* 132,7 98,2 6,10±0,16* 5,52±0,28 110,9 97,8 5,71±0,18 5,51±0,25 103,6 97,6
Гемоглобин, г/л I II 178,41±0,69 161,72±1,1 188,91±2,08* 160,40±1,68 105,8 99,1 188,60±1,83* 159,70±1,11* 105,7 98,8 182,42±1,20 159,0±2,04 102,2 98,3 177,92±1,70 159,70±1,39 99,8 98,8
Лейкоциты, 109/л I II 7,31±0,69 7,71±0,25 8,32±0,45** 7,61±0,05 113,81 98,7 8,42±0,35** 7,71±0,21 115,2 100,0 7,94±0,14* 7,83±0,99 108,6 101,5 7,40±0,40 7,30±0,92 101,2 107,6
Лимфоциты, % I II 20,95±2,56 22,93±2,19 18,4±0,19 22,2±1,85 87,7 101,2 16,0±0,58** 22,4±2,03 76.6 97.7 18,58±1,03* 23,0±1,16* 88,7 100,3 22,15±1,64 23,88±1,76 105,7 104,0
Эозинофилы, % I II 5,31±0,39 4,44±0,29 3,92±0,12** 5,34±0,70* 73,8 120,2 2,61±0,73*** 5,74±0,03** 49,1 129,2 3,70±0,16** 4,92±0,03* 69,6 110,8 5,10±0,99 4,42±0,29 96,0 99,5
Нейтрофилы, (п/я) % I II 3,01±0,07 2,02±0,07 4,4 1±0,29*** 1,73±0,03* 146,5 85,6 5,3±0,03*** 1,61±0,09** 176,0 79,7 4,42±0,73*** 2,11±0,99 146,8 104,5 2,93±0,83 2,0±0,99 97,3 99,0
Нейтрофилы, (с/я)% I II 70,73±1,03 70,61±1,05 73,27±2,31** 70,71±1,03 103,59 100,1 76,0±3,84* 70,25±0,73 114,9 99,7 73,30±1,58 69,97±0,83 103,6 99,0 69,82±0,76 69,70±1,16 98,7 98,7
Примечание: *Р<0,05; **Р<0,01; ***Р<0,001
и проявляется в незначительном повышении стрессовых гормонов, которое связаны с болевой реакцией на взятие крови. При такой реакции отсутствуют изменения функционального состояния кроветворных органов.
Литература
1. Городецкая И.В. Роль тиреоидных гормонов в адаптивных реакциях организма на антагонистические стрессоры // Патологическая физиология. 2000. № 3. С. 32.
2. Нотова С.В., Дускаева А.Х., Мирошников С.В. Оценка влияния пищевого стресса на психофизиологические и метаболические показатели // Вестник Оренбургского государственного университета. 2012. № 10 (146). С. 54—57.
3. Санин А.В. Понятие стресса и стрессорных факторов // Ветеринарная клиника. 2005. № 6. С. 8—11.
4. Кузнецов А.И., Васильева Т.А. Способ определения стрессовой чувствительности служебных собак // Актуальные проблемы в ветеринарии, биологии и экологии: матер. междунар. науч.-практич. конф., посвящ. 100-летию со дня
рождения проф. А.В. Есютина. Троицк: Изд-во ЮУрГАУ, 2016. С. 40-45.
5. Кузнецов А.И. Характеристика обмена веществ у стресс-чувствительных свиноматок в условиях промышленной технологии // Свиноводство. 1990. № 4. С. 4.
6. Кузнецов А.И., Сунагатуллин Ф.А. Способ оценки по стрессчувствительности // Свиноводство. 1991. № 1. С. 6.
7. Мифтахутдинов А.В., Терман А.Н. Методологические основы определения стрессовой чувствительности кур путём моделирования локального адаптационного синдрома // Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки: матер. VIII междунар. науч.-практич. конф. молодых учёных, посвящ. 75-летию проф. А.Т. Фарниева. Ч. 2. Владикавказ: Изд-во «Горский госагроуниверситет», 2012. С. 120-122.
8. Мифтахутдинов А.В. Экспериментальные подходы к диагностике стрессов в птицеводстве (обзор) // Сельскохозяйственная биология. 2014. № 2. С. 20-30.
9. Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И. Стресс и система крови. М.: Медицина, 1983. 239 с.
10. Джексон М. Ветеринарная клиническая патология. Введение в курс / перев. Т. Лисицыной. М.: Аквариум-Принт, 2009. 384 с.
Гистоархитектоника кишечника цыплят-бройлеров в постинкубационном онтогенезе
О.А. Матвеев, к.б.н., А.А. Торшков, д.б.н., профессор, ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ
Промышленное птицеводство в Российской Федерации в настоящее время развивается успешно и вносит значительный вклад в обеспечение населения продуктами питания, являясь наиболее скороспелой и экономически выгодной отраслью животноводства [1].
Для получения современных представлений о гистофизиологии пищеварительной системы птицы и обоснования применения кормовых добавок и кормов для формирования её продуктивных качеств требуется изучение особенностей гистологического строения кишечника, характерных для каждого кросса [2].
Гистологическому строению кишечника птиц различных кроссов посвящены работы многих авторов [3—7], но морфологических исследований, касающихся гистоархитектоники кишечника цыплят-бройлеров кросса Arbor Acres, в доступной литературе нами не обнаружено.
Цель исследования — изучить гистологическое строение двенадцатиперстной, слепой и прямой кишки цыплят-бройлеров в постинкубационном онтогенезе.
Материал и методы исследования. Объектом для изучения гистологического строения кишечника служили цыплята-бройлеры кросса Arbor Acres в возрасте 1, 7, 14, 21, 28 и 45 сут. Убой и обескровливание цыплят-бройлеров в висячем положении осуществляли по общепринятой методике (резекция больших нёбных артерий и вен по А.В. Комарову). В течение 15—20 мин. после убоя вскрывали грудобрюшную полость птиц и отбирали материал для изготовления гистологических
срезов — образцы поперечных фрагментов тонкого и толстого отделов кишечника. Полученный материал промывали в 0,85%-ном растворе натрия хлорида, затем фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, блоки заливали в парафин [8]. На ротационном микротоме Accu-Cut® SRM™ 200 (Сакура) готовили срезы толщиной 5—7 мкм, окрашивали их гематоксилином и эозином. Для фотографирования микропрепаратов кишечника использовали микроскоп «Микмед-6» с оптико-механическим адаптером АОТ-lC-Canon для фотоаппарата Canon EOS с соответствующим программным обеспечением.
Результаты исследования. Кишечник суточных цыплят-бройлеров имеет типичное строение для трубчатых органов всех позвоночных и состоит из трёх слоёв — слизистого, мышечного и серозного.
Слизистая оболочка двенадцатиперстной кишки цыплят-бройлеров образует выросты — ворсинки и трубчатые углубления — крипты, в эпителии, выстилающем кишечные ворсины, выделяют две субпопуляции клеток: каёмчатые и бокаловидные, соотношение которых равно 9:1. Каёмчатые клетки имеют типичную цилиндрическую форму, цитоплазма слабо оксифильная, ядра базофильные, овальной формы (рис. 1 А, Б). Цитоплазма бокаловидных клеток пенистая, слабо оксифильная, треугольное ядро смещено к базальному полюсу клетки.
Крипты — трубчатые структуры, глубоко врастающие в собственную пластинку слизистой оболочки. Эпителий дна крипты представлен низко дифференцированными формами клеток, пребывающих в состоянии пролиферации. По мере продвижения эпителиоцитов от дна крипты в дистальные отделы кишечной ворсинки проис-
