CC BY
31
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 УДК 616-018.1-092.612.017.1
Вольский Н.Н., Перминова О.М., Гойман Е.В., Гаврилова Е.Д.
ВЛИЯНИЕ TH1/TH2-СООТНОШЕНИЯ НА РАЗВИТИЕ ОСТРОЙ РТПХ В ПОЛУАЛЛОГЕННОЙ СИСТЕМЕ C57BI/6 ^ (C57BI/6 x DBA/2)F1
НИИ фундаментальной и клинической иммунологии, 630099, Новосибирск, Россия
В работе исследовали влияние агентов, сдвигающих ТМ/Т112-баланс, на клиническую картину острой реакции трансплантат против хозяина (РТПХ), индуцированной в стандартной полуаллогенной системе C57BI/6 ^ (C57BI/6 x DBA/2)F1. В экспериментах оценивали интенсивность Thl-зависимых (степень деструкции тимуса) и Th2-зависимых (выраженность спленомегалии) иммунных реакций. Также определяли динамику смертности в контрольных и опытных группах мышей. Обнаружено, что агент, сдвигающий ТМ/Т112-баланс в сторону Th1 (полок-самер 407), увеличивает смертность животных и повышает степень деструкции тимуса в поздние сроки развития иммунопатологического процесса. Пентоксифиллин, который сдвигает ТМЯ112-баланс в сторону Th2, уменьшал смертность мышей и степень деструкции тимуса, но увеличивал выраженность спленомегалии в ранний период острой РТПХ и замедлял наблюдаемую впоследствии инволюцию селезёнки. В то же время агент, обладающий ци-тостатической активностью (5-азацитидин), существенно снижал смертность животных, но вызывал выраженную инволюцию тимуса и селезёнки в ранний период острой РТПХ.
Полученные результаты подтверждают представление о параллельном развитии Th1- и Т1п2-зависимых иммунных процессов при острой РТПХ. Кроме того, показано, что эта экспериментальная модель может быть использована в качестве простой тест-системы для выявления агентов, сдвигающих ТМ/Т1п2-соотношение.
Ключевые слова: острая реакция трансплантат против хозяина; Ш1/Ш2-баланс; деструкция тимуса; спле-номегалия.
Для цитирования: Вольский Н.Н., Перминова О.М., Гойман Е.В., Гаврилова Е.Д. Влияние ТЫ/1Ъ2-соотношения на развитие острой РТПХ в полуаллогенной системе C57B1/6 ^ (C57B1/6 x DBA/2)F1. Иммунология. 2018; 39(1): DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-26-31
Volsky N.N., Perminova O.M., Goiman E.V., Gavrilova E.D.
EFFECT OF THE TH1/TH2 RATIO ON THE DEVELOPMENT OF ACUTE GVHD IN THE SEMIALLOGENEIC SYSTEM C57BI/6 ^ (C57BI/6 x DBA/2)F1
Institute of Fundamental and Clinical Immunology, 630099, Novosibirsk, Russia
The effects of Th1/Th2 ratio shifting agents on the clinical picture of acute GvHD induced in standard semiallogeneic system C57Bl/6 ^ (C57Bl/6 x DBA/2)F1 were studied. It was established that the intensity of Thl-dependent (the degree of thymic destruction) and Th2-dependent (the extent of splenomegaly) immune reactions was evaluated. The value of the experimental and control groups of mice mortality rate was also determined. It has been found that Th1/Th2 ratio towards Th1 (poloxamer 407) shifting agent increases the mortality rate of mice and augmentes the degree of thymic destruction in late periods of disease. Pentoxiphylline that shifts the Th1/Th2 ratio towards Th2, it decreases the mortality rate of mice and reduces the degree of thymic destruction. However, it increases the severity of splenomegaly in early period of acute GvHD and slowes down the subsequent involution of the spleen. While the administration of agent with cytostatic effect (5-azacytidine), the markedly decreasing of the mortality rate of experimental animals has been found, but at the same time it leads to the both thymus and spleen involution at the early stage of acute GvHD.
The obtained results confirm the assumption of both Th1- and Th2-dependent immune processes parallel development in acute GvHD. Furthermore it was shown that this experimental model can be used as a simple test system for identifying of agents that shifting Th1/Th2 ratio.
Keywords: acute graft versus host disease; Th1/Th2 ratio; thymic destruction; splenomegaly.
For citation: Volsky N.N., Perminova O.M., Goiman E.V., Gavrilova E.D. Effect of the Th1/Th2 ratio on the development of acute GVHD in the semiallogeneic system C57Bl/6 ^ (C57Bl/6 x DBA/2)F1. Immunologiya. 2018; 39(1): 26-31. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-26-31
For correspondence: Olga M. Perminova, PhD, Researcher, Laboratory of Experimental Immunotherapy, Institute of Fundamental and Clinical Immunology, E-mail: pom.57@yandex.com Information about authors:
Volsky N.N., http://orcid.org/0000-0002-9341-1997 Perminova O.M., http://orcid.org/0000-0003-0142-019X Goiman E.V., http://orcid.org/0000-0002-6443-6917 Gavrilova E.D., http://orcid.org/0000-0002-2014-3397
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Acknowledgments. The study had no sponsorship.
Received 06.06.17 Accepted 16.08.17
Для корреспонденции: Перминова Ольга Михайловна, канд. мед. наук, научный сотрудник лаборатории экспериментальной иммунотерапии НИИ фундаментальной и клинической иммунологии, E-mail: pom.57@yandex.com.
На сегодняшний день большинство исследователей придерживается хорошо обоснованного мнения о том, что реакция трансплантат против хозяина (РТПХ), индуцируемая введением мышам-гибридам первого поколения лимфоидных
донорских клеток одной из родительских линий, может проявляться в виде двух клинических вариантов этой патологии: при доминировании Thl-зависимых процессов развивается острая РТПХ, в то время как преобладание №2-зависимых иммунологических реакций приводит к развитию хронической РТПХ [1, 2]. Этот устоявшийся взгляд на иммунопатологические процессы, возникающие в такой полуаллогенной системе, базируется на результатах экспериментов, которые однозначно свидетельствуют, что в развитии острой РТПХ (оРТПХ), протекающей с высокой смертностью животных в первые 3 - 4 нед после переноса донорских клеток, главную роль играют цитотоксические CD8+ -клетки, формирующиеся под контролем Thl-лимфоцитов, в случаях же развития хронической РТПХ (хРТПХ) её основные клинические проявления связаны с поликлональной активацией B-клеток и генерацией больших количеств аутоантител, т. е. с процессами, прямо зависящими от активности №2-лимфоцитов [3]. В пользу такого воззрения на роль ТЫЛЪ2-соотношения в индукции того или иного варианта РТПХ в обсуждаемой здесь экспериментальной модели говорят и результаты тех исследований, в которых генерация и активность Thl-лимфоцитов подавлялась с помощью различных экзогенных воздействий. Так было установлено, что ингибирование продукции IFN-y или IL-12, играющих определяющую роль в развитии Thl-зависимых иммунных реакций, ведет к заметному снижению интенсивности клинических проявлений оРТПХ и к уменьшению смертности животных [4, 5].
Однако за последние десятилетия накопились разнообразные данные, которые позволяют, не оспаривая принципиальной верности вышеописанного взгляда на патогенез острой и хронической РТПХ, поставить вопрос о влиянии ТЫЛЪ2-баланса и степени поляризации этого соотношения хелперных клеток на процессы развития как оРТПХ, так и хРТПХ. В частности, давно было обнаружено, что ранние стадии индукции обоих вариантов РТПХ характеризуются яркими проявлениями активности как Th1-, так и ТЬ2-лимфоцитов [6]. При этом в первые дни после переноса донорских клеток, индуцирующих оРТПХ, наблюдалось преобладание в сыворотке мышей-реципиентов цитокинов, продуцируемых №2-клетками, и лишь затем (к седьмому дню от начала реакции) было обнаружено резкое возрастание сывороточной концентрации IFN-y - основного маркера сдвига ТЫЛЪ2-баланса в сторону Thl [6]. В работах, выполненных в нашей лаборатории ранее, показано, что процесс хРТПХ, индуцированный в полуаллогенной системе переносом родительских лимфоидных клеток от мышей линии DBA, также зависит от обоих типов хелперных клеток и протекает по двум вариантам: Thl-зависимому, приводящему к развитию выраженного иммунодефицита, и ТЬ2-зависимому, имеющему исходом формирование иммунокомплексного гломерулонефрита. При этом соотношение между этими клиническими формами хРТПХ может быть изменено благодаря воздействиям, сдвигающим ТЫ/ТЬ2-баланс в сторону преобладания хелперов первого или второго типов [7, 8]. Естественно предположить, что и при развитии оРТПХ сдвиги ТЫЛЪ2-соотношения в организме мышей-реципиентов могут играть аналогичную роль.
Цель настоящей работы - исследование динамики показателей, зависимых от активности Thl- и №2-лимфоцитов, во время развития оРТПХ в полуаллогенной системе C57B1/6 ^ (C57B1/6 x DBA/2)F1 и оценка влияния на эти процессы веществ, способных сдвигать ТЫЛЪ2-баланс в ту или иную сторону.
Материал и методы
Эксперименты выполнены на 670 мышах-самках линии C57BL/6 и гибридах (C57B1/6 x DBA/2)F1, полученных из экспериментально-биологической клиники лабораторных животных НИИФКИ (Новосибирск) в возрасте 2,5 - 3 мес.
ORIGINAL ARTICLE
Мыши получали комбикорм, сбалансированный по потребностям в белках, жирах, углеводах, витаминах, минеральных веществах и микроэлементах. Все эксперименты проводили в стандартных условиях содержания животных, соблюдения температурного режима, освещенности. Экспериментальные исследования выполнены в полном соответствии с требованиями Международной конвенции по гуманному обращению с подопытными животными (Страсбург, 1986), а также Приказом МЗ РФ № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики» от 19.06.2003 г.
Исследуемые препараты, способные изменять Th1/Th2-соотношение в организме животных, вводили в соответствии со следующими схемами:
Полоксамер 407 (Pluronic F-127; Sigma) вводили внутри-брюшинно в дозе 7,5 мг/мышь через сутки в течение двух недель, как это было описано ранее [9]. Такой курс из семи инъекций препарата заканчивался за сутки до индукции оРТПХ.
Пентоксифиллин (Трентал; Aventis Pharma, Индия) вводили внутрибрюшинно в дозе 1 мг/мышь троекратно: в день переноса донорских клеток и два последующих дня.
5-азацитидин (Sigma) вводили подкожно в дозе 50 мкг/ мышь. Курс введения препарата состоял из 7 ежедневных инъекций, начиная со дня, следующего за переносом донорских лимфоцитов.
Животным в контрольных группах вводили соответствующее количество растворителя.
Острую РТПХ индуцировали внутривенным введением мышам-гибридам (C57B1/6 x DBA/2)F1 спленоци-тов, полученных от родительской линии C57B1/6, в дозе 100 млн клеток/мышь. Индукцию оРТПХ у контрольных животных и у мышей, подвергавшихся воздействию используемых препаратов, выполняли во всех экспериментах в один и тот же день.
В части экспериментов после введения препаратов и индукции оРТПХ животные как контрольных, так и опытных групп наблюдались в течение 50 дней для оценки динамики их выживания. В другой части экспериментов у животных на 5, 12 и 20-й дни (считая день переноса донорских спленоцитов за нулевой день) определяли (в группах по 4 - 5 мышей) массу и клеточность лимфоид-ных органов - тимуса и селезенки.
Полученные данные приводятся в виде средних величин параметров, измеренных в нескольких (двух - трёх) независимых экспериментах. Статистическую значимость различий между исследуемыми показателями оценивали с помощью непараметрического критерия Вилкок-сона-Манна-Уитни.
Результаты
Данные, полученные в экспериментах, представлены на рис. 1, 2 и в таблице. Они убедительно подтверждают вывод, сделанный V. Rus [6] о том, что начальный период оРТПХ характеризуется преобладанием активности TkZ-клеток. Действительно, на 5-е сутки после переноса лимфоцитов донора единственным признаком развивающегося процесса (как в контрольных группах, так и в группах мышей с воздействием полоксамера 407 и пен-токсифиллина) является резко выраженная спленомега-лия, т. е. показатель В-клеточной пролиферации, контролируемой активностью Th2. Этот, на первый взгляд кажущийся парадоксальным, факт был ранее хорошо известен, и в ту пору, когда модели хРТПХ были ещё не разработаны, выраженность спленомегалии считалась самым ярким и надёжным показателем интенсивности иммунопатологического процесса, развивающегося при оРТПХ [9].
В более поздние сроки на первый план в клинической картине оРТПХ выходит деструкция тимуса (ТЫ-зависимый показатель, связанный с активностью цитотоксических кле-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ток), а спленомегалия постепенно уменьшается вследствие общего опустошения лимфоидных органов, и на 20-й день величина селезенки у мышей с оРТПХ приближается к значениям, наблюдающимся у интактных мышей, которые не подвергались никаким экспериментальным воздействиям.
Таким образом, данные, представленные на рисунках и в таблице, свидетельствуют о том, что картина оРТПХ складывается из двух параллельно идущих процессов: деструкции тканей (включая лимфоидную ткань) и поликлональной активации В-клеток, приводящей к увеличению селезёнки на ранних этапах развития оРТПХ.
Результаты экспериментов свидетельствуют о том, что воздействие Р407, сдвигающего баланс хелперов в сторону ТЫ [10], приводит к заметной интенсификации деструктивных процессов в организме мышей с оРТПХ: масса тимуса, характеризующая степень активности цитотоксических CD8+-клеток, оказалась на все сроки измерения существенно меньше в группе с введением Р407, нежели в контрольной группе с оРТПХ (см. рис. 1, а). О том же свидетельствует и сравнение динамики смертности мышей в контроле и опыте: средний срок жизни мышей, подвергавшихся воздействию Р407, уменьшился с 34 до 23 дней (см. таблицу, серия 1). В то же время полученные данные не позволяют говорить о том, что данный препарат стимулирует развитие оРТПХ в целом, поскольку выраженность спленомегалии, являющейся другим показателем интенсивности этого процесса, оказалась после воздействия Р407 сниженной по сравнению с контрольной группой (см. рис. 2, а).
Аналогичным образом пентоксифиллин - препарат, вызывающий сдвиг соотношения хелперов в сторону ТЬ2 [11, 12], не только уменьшает интенсивность деструктивных процессов в организме мышей с оРТПХ, что выражается как в уменьшении эффектов цитотоксических клеток в тимусе (см. рис. 1, б), так и в увеличении срока жизни мышей, которым вводили этот препарат (см. таблицу, серия 2), но и увеличивает у них степень развития спленомегалии (см. рис. 2, б). Таким образом, общий эффект действия этого препарата нельзя - как и в случае Р407 - считать тормозящим процесс развития оРТПХ. Пентоксифиллин, как свидетельствуют полученные нами данные, подавляет ТЫ-зависимые реакции, участвующие в этом процессе, но одновременно стимулирует его ТЬ2-зависимые компоненты, что хорошо согласуется с его давно известным действием на ТЫЛЪ2-баланс.
Влияние исследуемых веществ на среднюю продолжительность жизни мышей и на динамику ТЫ- и ТЬ2-зависимых показателей интенсивности острой РТПХ
Серия экспери- Средний Срок после индукции оРТПХ, сутки
ментов срок жизни, сут 5 -е 12-е 20-е
Т С Т С Т С
Серия 1 оРТПХ 34 98 162 59 187 30 142
оРТПХ + Р407 23 82 160 34* 145 11* 79*
Серия 2 оРТПХ 19 102 169 43 179 14 123
оРТПХ + ПОФ 27 104 196* 55 199 27* 112
Серия 3 оРТПХ 20 104 162 57 185 34 129
оРТПХ + 5-АЗА 44 32* 80* 27* 132* 73* 108
Примечание. Т - тимус, С - селезёнка; Р407 - полоксамер 407, ПОФ - пентоксифиллин, 5-АЗА - 5-азацитидин. Размеры тимуса и селезёнки выражены в процентах от средней величины этих показателей у интактных (т. е. не подвергавшихся никаким воздействиям) животных. * - Достоверное отличие от соответствующего контроля (р < 0,05).
50 -40 -30 -20 -10 -0 -
50 ■ 40 -30 -20 -10 -0 -
Вес тимуса, мг
а
!гь
1
А
50 ■ 40 -30 -20 -10 -0
*
I
*
I
5 12 20
Интактный
Срок после индукции о РТПХ, сутки контроль
Рис. 1. Влияние использованных препаратов на степень деструкции тимуса в динамике острой РТПХ.
По оси абсцисс - срок после индукции оРТПХ, сутки; по оси ординат -масса тимуса, мг. Здесь и на рис. 2: светлые столбики - оРТПХ (контроль), темные столбики - оРТПХ + препарат, серые столбики - интактный контроль (животные, не подвергавшиеся никаким воздействиям). а - оРТПХ + полоксамер 407, б - оРТПХ + пентоксифиллин, в - оРТПХ + 5-азацитидин. * - достоверное отличие от контроля (р < 0,05).
Совершенно другой тип воздействия на развитие оРТПХ - явно отличающийся от эффектов Р407 и пентоксифилли-на - был обнаружен в опытах с 5-азацитидином. Несмотря на имеющиеся в литературе указания о возможности сдвига хелперов в сторону №2 под влиянием этого вещества [13], данные наших экспериментов не могут быть объяснены с этой точки зрения. В отличие от вышеописанных препаратов, влияющих на относительную роль ТЫ - и №2-зависимых реакций в развитии оРТПХ у конкретных животных, эффект 5-азацитидина заключается в резком подавлении всех типов иммунных реакций при оРТПХ, что легко объяснимо его цитостатическим действием на клетки иммунной системы (именно как цитостатик, данный лекарственный препарат довольно широко использовался в клинике [14]). Как видно
ORIGINAL ARTICLE
Вес селезёнки, мг
a
Интактный
Срок после индукции о РТПХ, сутки контроль
Рис. 2. Влияние использованных препаратов на выраженность спле-номегалии в динамике острой РТПХ.
По оси абсцисс - срок после индукции оРТПХ, сутки; по оси ординат -масса селезёнки, мг.
из рис. 1, в и 2, в и таблицы, введение 5-азацитидина приводит к значительному уменьшению лимфоидных органов (как тимуса, так и селезёнки) уже на 5-й день после индукции оРТПХ. В последующие сроки наблюдается постепенное восстановление лимфоидной ткани и не обнаруживается никаких характерных для развития оРТПХ признаков. Давно известные иммуносупрессивные свойства 5-азацитидина объясняют и его выраженный защитный эффект при исследуемом иммунопатологическом процессе (срок жизни мышей увеличивается более чем вдвое на фоне введения 5-аза-цитидина - см. таблицу, серия 3).
Обсуждение
Из данных, приведённых в таблице, видно, что средний срок выживания мышей-реципиентов в контрольных группах (без каких-либо иных воздействий кроме переноса лим-
фоцитов доноров) колеблется от одной серии экспериментов к другой. Точно так же колеблется и количество контрольных животных, выживших в течение 50 дней с момента индукции оРТПХ (за период наблюдения), - этот показатель варьирует от 10 до 50% от исходного количества животных в группе. В группах мышей, на которых (в тех же экспериментах) воздействовали вещества, сдвигающие соотношение хелперов в сторону Thl или Th2, эти показатели либо закономерно увеличивались (по сравнению с соответствующим контролем), либо уменьшались, в зависимости от направления Th1/Th2-сдвига. Исходя из такой динамики процесса, можно предположить, что наблюдаемые в контрольных группах мышей различия в течении (и, соответственно, исходах) оРТПХ в существенной мере определяются теми индивидуальными значениями ТЫ/Т112-соотношения, которые складываются в организме конкретных животных к моменту индукции оРТПХ.
По аналогии с уже изученной картиной хРТПХ, развивающейся в сходной полуаллогенной системе по двум клинически различным вариантам, можно сказать, что генетически идентичные мыши-гибриды, входящие в состав контрольной группы и не подвергавшиеся до того никаким экспериментальным воздействиям, функционально вовсе не однородны и различаются по ряду параметров, значения которых складываются в предшествующей индивидуальной жизни животных и закрепляются с помощью широко понимаемых эпигенетических механизмов, поддерживающих их на определённом уровне. Одним из таких эпигенетически закреплённых параметров может быть величина Th1/Th2-соотношения. Поэтому при ответе на одно и то же экспериментальное воздействие (всем реципиентам вводится одна и та же аликвота из общей суспензии родительских клеток) у генетически однородных мышей-гибридов развиваются различные варианты оРТПХ: у мышей с исходным сдвигом Th1/Th2-соотношения в сторону Thl - интенсивно протекающая оРТПХ с выраженной деструкцией тканей хозяина (в том числе, клеток лимфоидных органов и костного мозга) и гибелью в течение 3—4 нед, в то время как у мышей, исходно имевших сдвиг хелперного соотношения в сторону относительного преобладания Th2, развитие популяции клеток-киллеров (зависящее от активности Thl-лимфоцитов) в определённой степени тормозится и формируется более мягкий вариант развития оРТПХ - с меньшей деструкцией лимфоидной и гемопоэтической систем и их последующим восстановлением (у выживших животных с 20-го дня после момента индукции наблюдается постепенное восстановление содержания лейкоцитов в периферической крови). Именно эти животные - с №2-зависимым вариантом развития
Введение
лимфоцитов
донора
Реципиент
Острая РТПХ
Деструкция тканей Гибель животных
? ? ?
Хроническая РТПХ Th2
Иммунодефицит
Люпус-подобный гломерулонефрит
Рис. 3. Влияние ТЫ/ТЬ2-соотношения на развитие клинических вариантов острой и хронической РТПХ.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
оРТПХ - и составляют, как можно предположить, основную массу тех реципиентов, которые остались живыми в течение всего срока наблюдения.
Вышеизложенный взгляд на различные клинические варианты развития РТПХ в полуаллогенных системах наглядно представлен на рис. 3. Исходя из этой схемы, можно сделать вывод, что, несмотря на постулируемую сегодня полярную противоположность между острой и хронической формами РТПХ, эти, казалось бы, совершенно различные типы аутоиммунных процессов обладают и определённым структурным сходством. Основное их подобие можно увидеть в том, что как хроническая, так и острая форма иммунного конфликта, индуцируемого введением в организм хозяина донорских лимфоцитов, не ведут к возникновению однородной клинической картины заболевания, а распадаются - каждая внутри себя и без какого-либо воздействия извне - на различные клинические варианты, со своей симптоматикой и прогнозом заболевания. Здесь можно также заметить, что такой «спонтанный», т. е. не обусловленный какими-либо манипуляциями экспериментатора, выбор патологическим процессом направления своего дальнейшего развития весьма схож с той пёстрой картиной многочисленных вариантов течения аутоиммунных заболеваний, которая наблюдается у индивидуальных больных в клинике, и это делает используемую нами модель особенно интересной и перспективной в плане изучения внутренних механизмов аутоиммунитета и «срывов» толерантности к собственным антигенам организма.
На иллюстрирующей вышеизложенное предположение схеме (см. рис. 3) показано, что первичное разделение на острую и хроническую форму РТПХ обусловлено генетическими различиями между родительскими линиями мышей, которые, как известно, играют решающую роль в развитии данного иммунопатологического состояния [2]. Давно установлено [15], что неспособность клеток линии DBA/2 продуцировать значительное количество активных цитоток-сических лимфоцитов (CD8+), распознающих антигены реципиента, и, следовательно, приводить к развитию острой формы РТПХ связана с неким генетическим дефектом, имеющимся у этой линии мышей. Сущность этого дефекта остается до конца не выясненной. Однако относительно недавно обнаружено [16], что линия DBA/2 (в отличие от линии С57В1/6) несёт в своём геноме мутантный ген клеточного рецептора GPR84, эндогенными лигандами которого считаются жирные кислоты со средней длиной цепи (от С9 до С14) и который экспрессируется в больших количествах на клетках лимфоидных органов (в основном на макрофагах и нейтро-фильных лейкоцитах). Поскольку основная (выясненная на сегодняшний день) функция этого рецептора заключается в стимуляции экспрессии белка р40, вызванной действием провоспалительных факторов [17], и поскольку этот белок представляет собой одну из субъединиц ГЬ-12 - важнейшего стимулятора пролиферации ТЫ-клеток, - можно предположить, что именно отсутствие у линии DBA/2 функционально активного белка GPR84 мешает лимфоцитам этой родительской линии формировать достаточное количество цитотокси-ческих клеток, вызывающих массивную деструкцию тканей в организме реципиента. Однако вопрос о возможной роли такого механизма в развитии РТПХ ещё не разрешён и требует дальнейшего исследования.
Разделение хРТПХ на два клинических варианта течения и симптомы, им соответствующие, исследованы нами ранее [7, 8]. Что же касается ТЫ - и ТЬ2-зависимых вариантов развития оРТПХ, то достаточно полно изучен лишь первый из этих вариантов, который и отождествляется с острой формой заболевания в целом. Те же мыши, которые выживают после индукции оРТПХ (и, по нашему предположению, представляют собой индивидуумов с развитием ТЬ2-зависимого варианта заболевания), не привлекали внимания экспериментаторов, и про них мало что известно. Единственное, что
можно про них утверждать, - это отсутствие в картине их заболевания классических признаков хРТПХ: иммуноком-плексного гломерулонефрита с массивной протеинурией и гиперхолестеринемией. Клиническая картина этого варианта оРТПХ требует детального изучения, и на сегодняшний день можно лишь предполагать, основываясь на соображениях определённой симметрии в развитии острой и хронической форм РТПХ, что некоторые симптомы, характерные для ТЬ2-зависимого варианта оРТПХ, могут быть сходны с теми, которые обнаруживаются у ТЫ-зависимого варианта хРТПХ (выраженное подавление гуморального иммунного ответа на антигенную стимуляцию и т.п.)
Кроме того, можно с достаточной степенью уверенности утверждать, что выживание части животных после переноса им клеток от линии С57В1/6 нельзя объяснить простым предположением о том, что развитие оРТПХ у этих индивидов идёт тем же самым путём, что и у их погибших сородичей, но лишь с меньшей интенсивностью, а потому им удаётся избежать гибели в обычные сроки. Против этого говорят данные, полученные нами в экспериментах с 5-азацитидином - препаратом, который благодаря своей цитостатической активности снижает интенсивность проявлений аутоиммунного заболевания, развивающегося в ответ на введение лимфоцитов донора. Введение мышам-реципиентам 5-азацитидина значительно снижает смертность животных и увеличивает среднюю продолжительность жизни в экспериментальных группах с индукцией оРТПХ. И в этом препарат оказывается даже более эффективным, чем вещества, сдвигающие баланс хелперов в сторону ТЬ2. Однако динамика состояния лимфоидных органов у мышей, получавших инъекции этого цитостатика, резко отличается от их стандартных изменений в ходе развития оРТПХ и показывает, что его влияние на выживаемость мышей-реципиентов связано с подавлением пролиферации лимфоцитов: это вещество снижает интенсивность проявлений оРТПХ за счёт торможения всех иммунных реакций. В то же время вещества, воздействующие на ТЫЛЪ2-баланс, не отменяют естественного развития этих реакций, а влияют лишь на соотношение между их относительной интенсивностью, направляя тем самым развитие целостного иммунопатологического процесса в ту или иную сторону.
Суммируя изложенное, можно сказать, что полученные результаты экспериментов хорошо согласуются с представлением о том, что как в случае развития хронической формы заболевания, вызванного введением мышам-гибридам лимфоцитов одной из родительских линий, так и при развитии острой формы того же иммунопатологического процесса иммунные реакции, находящиеся под контролем ТЫ - и ТЬ2-клеток, протекают одновременно и параллельно друг другу. При этом клинические проявления аутоиммунного процесса в целом зависят от соотношения интенсивностей этих видов иммунных реакций и в конечном итоге от ранее сложившегося в организме ТЫЛЪ2-соотношения. Именно это соотношение, создавшееся в организме мышей-реципиентов до индукции РТПХ или складывающееся на самой ранней стадии этого процесса и затем поддерживаемое благодаря ещё не вполне расшифрованным эпигенетическим механизмам, оказывает решающее влияние на развитие у генетически однородных реципиентов того или иного варианта иммунопатологического процесса и, следовательно, того или иного исхода заболевания не только в случае хронической формы РТПХ (что было показано нами ранее), но и в случае развития острой формы этого заболевания.
Следует также упомянуть, что с практической точки зрения результаты описанных выше опытов свидетельствуют о возможности использования модели оРТПХ как простой тест-системы, в которой можно оценивать способность различных веществ влиять на баланс ТЫ- и ТЬ2-лимфоцитов в организме. Эта модель для первичного скрининга иммуноактивных
препаратов может иметь определённое преимущество в сравнении с ранее описанной нами моделью на базе хРТПХ [7], поскольку результаты оценки могут быть получены в более краткие сроки (эксперименты занимают не три месяца - как в случае использования хРТПХ, - а лишь три-четыре недели).
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 1-6, 8, 9, 11, 13-16 см. REFERENCES
7. Козлов В.А., Кудаева О.Т., Колесникова О.П., Сафронова И.В., Лактионов П.П., Рыкова Е.Ю., Обухова Л.А. Th1- и Th2-зависимые варианты хронической реакции трансплантат против хозяина. Иммунология. 2002; 23(3): 143-6. 10. Перминова О.М., Вольский Н.Н., Кудаева О.Т., Гойман Е.В., Козлов В.А. Дислипидемия и ТЬ1/ТЬ2-соотношение на разных этапах развития хронической реакции "трансплантат против хозяина". Иммунология. 2009; 6: 341-5. 12. Кудаева О.Т., Гойман Е.В., Лыков А.П., Колесникова О.П., Козлов В.А. Влияние препаратов, изменяющих соотношение Th1/ Th2, на частоту развития клинических вариантов хронической реакции трансплантат против хозяина. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005; 140(3): 325-7.
REFERENCES
1. Allen R.D., Staley T.A., Sidman C.L. Differential cytokine expression in acute and chronic murine graft-versus-host-disease. Eur. J. Immunol. 1993; 23 (2): 333-7.
2. Schroeder M.A., DiPersio J.F. Mouse models of graft-versus-host disease: advances and limitations. Dis. Model. Mech. 2011; 4 (3): 318-33.
3. Via C.S. Advances in lupus stemming from the parent-into-F1 model. Trends Immunol. 2010; 31(6): 236-45.
4. Ellison C.A., Fischer J.M., HayGlass K.T., Gartner J.G. Murine graft-versus-host disease in an F1-hybrid model using IFN-gamma gene knockout donors. J. Immunol. 1998; 161(2): 631-40.
5. Williamson E, Garside P, Bradley J.A., More IA, Mowat A.M. Neutralizing IL-12 during induction of murine acute graft-versus-host disease polarizes the cytokine profile toward a Th2-type alloimmune response and confers long term protection from disease. J. Immunol. 1997; 159(3): 1208-15.
6. Rus V., Svetic A., Nguyen P., Gause W.C., Via C.S. Kinetics of Th1
ORIGINAL ARTICLE
and Th2 cytokine production during the early course of acute and chronic murine graft-versus-host disease. Regulatory role of donor CD8+ T cells. J. Immunol. 1995; 155(5): 2396-406.
7. Kozlov V.A., Kudaeva O.T., Kolesnikova O.P., Saphronova I.V., Laktionov P.P., Rykova E.Yu., Obukhova L.A. Th1- and Th2-depen-dent variants of chronic graft-versus-host reaction. Immunologiya. 2002; 23(3): 143-6. (in Russian)
8. Kudaeva O.T., Kolesnikova O.P., Goiman E.V., Tkachev V.O., Vol-sky N.N., Perminova O.M. et al. The experimental model of the autoimmune glomerulonephritis induced by the chronic graft versus host reaction. In: Prabhakar S.S., ed. An update on glomerulopathies -Etiology and pathogenesis. Rijeka: In Tech; 2011: 49-86.
9. Simonsen M. Graft versus host reactions. Their natural history, and applicability as tools of research. Prog. Allergy. 1962; 6: 349-467.
10. Perminova O.M., Volsky N.N., Kudaeva O.T., Goiman E.V., Kozlov V.A. Dyslipidemia and Th1/Th2 relationship at different stages of chronic "graft-versus-host" reaction. Immunologiya. 2009; 6: 341-5. (in Russian)
11. Laurat E., Poirier B., Tupin E., Caligiuri G., Hansson G.K., Bariety J., Nicoletti A. In vivo downregulation of T helper cell 1 immune responses reduces atherogenesis in apolipoprotein E-knockout mice. Circulation. 2001; 104(2): 197-202.
12. Kudaeva O.T., Goiman E.V., Lykov A.P., Kolesnikova O.P., Kozlov V.A. Effects of preparations modifying Th1/Th2 ratio on the incidence of clinical variants of chronic graft-versus-host reaction. Byulleten'eksperimental'noy biologii i medetsiny. 2005; 140(3): 325-7. (in Russian)
13. Quddus J., Johnson K.J., Gavalchin J., Amento E.P., Chrisp C.E., Yung R.L., Richardson B.C. Treating activated CD4+ T cells with either of two distinct DNA methyltransferase inhibitors, 5-azacyti-dine or procainamide, is sufficient to cause a lupus-like disease in syngeneic mice. J. Clin. Invest. 1993; 92(1): 38-53.
14. Wang C., McCulloch E.A. Sensitivity to 5-azacytidine of blast progenitors in acute myeloblastic leukemia. Blood. 1987; 69(2): 553-9.
15. Chu Y.W., Gress R.E. Murine models of chronic graft-versus-host disease: insights and unresolved issues. Biol. Blood Marrow Transplant. 2008; 14(4): 365-78.
16. Perez C.J., Dumas A., Vallieres L., Guenet J.L., Benavides F. Several classical mouse inbred strains, including DBA/2, NOD/Lt, FVB/N, and SJL/J, carry a putative loss-of-function allele of Gpr84. J. Hered 2013; 104(4): 565-71.
17. Alvarez-Curto E., Milligan G. Metabolism meets immunity: The role of free fatty acid receptors in the immune system. Biochem. Pharmacol. 2016; 114: 3-13.
Поступила 06.06.17 Принята в печать 16.08.17
