CC BY
28
УДК 612.173.3+612.398.12+612.123
Вестник СПбГУ. Сер. 3. 2011. Вып. 3
К. Н. Коротаева, А. Д. Ноздрачев, В. И. Циркин
ВЛИЯНИЕ СЫВОРОТКИ КРОВИ НЕБЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН И ЛИЗОФОСФАТИДИЛХОЛИНА НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ АКТИВАЦИИ М-ХОЛИНОРЕЦЕПТОРОВ МИОКАРДА КРЫСЫ
Введение
Ранее в опытах с изолированным сердцем лягушки и полосками миокарда кролика было показано, что 5-кратное разведение сыворотки крови лягушки, крысы и кролика снижает способность ацетилхолина (АХ) оказывать отрицательный инотропный эффект [1-3]. При этом было установлено, что подобный эффект оказывает липидная фракция сыворотки крови, содержащая лизофосфатидилхолин (ЛФХ). Как известно, ЛФХ является естественным компонентом клеток, а его содержание в крови возрастает при активации ПОЛ (перекисное окисление липидов), при стрессе [4], гипоксии [5], инфаркте миокарда [6] и других патологических состояниях. Это означает, что высокий уровень ЛФХ может снизить эффективность активации М-холинорецепторов (М-ХР) миокарда. В нашей лаборатории в опытах на сердце лягушки впервые было показано, что сыворотка крови мужчин и женщин, подобно сыворотке крови лягушки, крысы и кролика, также проявляет М-холиноблокирующую активность, причем эту активность сыворотка проявляет при достаточно большом (50-, 100- и 500- кратном) разведении [7, 8]. Авторы объяснили этот эффект наличием в крови эндогенного блокатора М-ХР (ЭБМХР); при этом предполагалось, что его компонентом является ЛФХ. Вместе с тем до настоящего времени не исследовалась способность сыворотки крови человека и животных, а также ЛФХ проявлять М-холиноблокирующее действие в отношении миокарда крысы, который часто используется в экспериментальных исследованиях. Учитывая важную роль вагуса в регуляции деятельности сердца человека и животных, в работе была поставлена цель изучить способность сыворотки крови человека (в разведениях 1:5, 1:10, 1:50, 1:100, 1:500, 1:1000 и 10000) и ЛФХ (2 • 10-6-2 • 10-4М) изменять эффективность активации М-ХР изолированного миокарда крысы при воздействии АХ (5 • 10-7 или 5 • 10-6М).
Методика исследований
В работе использовано 89 белых беспородных крыс — самцов весом 250-350 г, у которых под эфирным наркозом иссекали полоску миокарда (5-8 мм х 3-4 мм х 1-2 мм) из правого желудочка сердца. Для регистрации сокращений, проводимой по методике Ю. А Пенкиной и соавторов [9], полоску миокарда помещали в рабочую камеру (объемом 1 мл) «Миоцитографа» (фирма «Норис», Россия) и соединяли с изометрическим датчиком силы (Honeywell, USA), сигнал с которого подавался на компьютер через аналого-цифровой преобразователь ЛА-70. Полоску растягивали микроманипулятором до длины, при которой сила сокращений была максимальной, и с помощью шприцево-
© К. Н. Коротаева, А. Д. Ноздрачев, В. И. Циркин, 2011
го дозатора непрерывно перфузировали со скоростью 2,0 мл/мин оксигенированным раствором Кребса (37 °С). Сокращения полоски на протяжении всех этапов эксперимента вызывали непрерывной стимуляцией от электростимулятора ЭСЛ-01 с частотой 1 Гц при длительности импульсов 5 мс и амплитуде 25-30 В через стальные электроды, погруженные в рабочую камеру.
Проведено 5 серий опытов, в которых изучали зависимость отрицательного ино-тропного эффекта АХ от его концентрации в среде (серия 1), влияние шести разведений нативной (1:5-1:10000) или двух разведений инактивированной (1:500, 1:10) сыворотки крови небеременных женщин на ответы миокарда при действии АХ (соответственно серии 2 и 3), влияние прозерина на эффект сыворотки крови (серия 4) и влияние ЛФХ на ответы миокарда при воздействии АХ (серия 5).
Кровь в объеме 7-8 мл из локтевой вены получена от 44 доноров крови — женщин репродуктивного возраста (32 ± 1 года) на станции переливания крови. Сыворотку получали центрифугированием (15 мин при 1000 об/мин) полностью свернувшейся крови и разводили ее раствором Кребса соответственно в 5, 10... 10 000 раз. Раствор Кребса (pH 7,4) содержал (мМ): NaCl — 136; KCl — 4,7; CaCl2 — 2,52; MgCl2 — 1,2; KH2PO4 — 0,6; NaHCO3 — 4,7; C6H12O6 — 11. В работе использовали ацетилхолина хлорид (Acros, Бельгия), лизофосфатидилхолин (Харьковский завод бактерийных препаратов, Украина), прозерин (ОАО «ДАЛЬХИМФАРМ», Россия). Результаты исследования подвергнуты статистической обработке (в тексте они даются в виде M ± m). Различия оценивали по критерию Уилкоксона и считали их достоверными при р < 0,05 [10].
Результаты исследования и их обсуждение
Анализ фоновой амплитуды вызванных сокращений миокарда крысы и ее изменение под влиянием различных концентраций ацетилхолина (серия 1). В серии 1, которую проводили по схеме: раствор Кребса (РК) — АХ; 5,5-10-9 М — РК — АХ; 5,5-10-8 М — РК — ...— АХ; 5,5-10-4 М — РК, установлено, что в условиях непрерывной перфузии
оксигенированным раствором Кребса изолированный миокард правого желудочка сердца крысы в ответ на электростимулы генерирует сокращения (рис. 1). АХ в концентрациях 5,5-10-9 М и 5,5-10-8 М не изменял амплитуду вызванных сокращений, а в концентрациях
5,5 (10-7, 10-6, 10-5 и 10-4М) дозозависимо и обратимо понижал ее соответственно до 82,1, 72,5, 71,9 и 64,4% от фона. Расчеты показали, что константа диссоциации для АХ составляет (5 ± 0,1) •Ю-6 М. В целом на основании этих результатов исследования мы посчитали целесообразным в сериях 2, 3 и 4 применять АХ в концентрации 5,5-10-6 М, эффект которого иллюстрирует рис. 1.
Влияние нативной сыворотки крови небеременных женщин на проявление отрицательного инотропного эффекта АХ (серия 2). Серию 2 проводили по схеме: РК — АХ (5,5-10-6 М) — РК — сыворотка крови (СК, в одном из разведений) — СК (в этом
Сыв+АХ
Рис. 1. Механограмма изолированного миокарда правого желудочка сердца крысы, отражающая способность 500-кратного разведения сыворотки крови (Сыв) небеременных женщин блокировать отрицательный инотропный эффект ацетилхолина (5,5 • 10-6 М; АХ) РК — раствор Кребса. Калибровка — 1 мН, 1 мин.
же разведении) + АХ — РК — АХ — РК. В данных опытах АХ исходно, т. е. на 2-м этапе, вызывал достоверное и обратимое снижение амплитуды вызванных сокращений (табл. 1; см. рис. 1). Сама по себе сыворотка крови, судя по результатам 4-го этапа этой серии,
Таблица 1. Амплитуда вызванных сокращений (% к фону) полосок миокарда правого желудочка сердца крыс на восьми этапах экспериментов, в которых изучалось влияние нативной (серия 2) и инактивированной (серия 3) сыворотки (СЫВ) крови на проявление отрицательного инотропного эффекта ацетилхолина (АХ) в концентрации 5,5 • 10-6 М
Серия Разведение сыворотки п Этапы эксперимента
1 2 3 4 5 6 7 8
РК АХ РК СЫВ СЫВ+АХ РК АХ РК
2 10000 11 100 84,0 ± 5,8(1) 100 95,5 ± 6,1 81,8 ± 3,5 (4) 100 87,9 ± 7,6 100
1000 10 100 81,9 ± 6,1(1) 100 88,6 ± 6,7 78,2 ± 4,4 (4) 100 83,9 ± 3,9(6) 100
500 11 100 75,3 ± 5,2(1) 100 85,7 ± 4,7 (3) 91,2 ± 4,6 (2) 100 93,8 ± 3,1(2) 100
100 10 100 70,7 ± 1,9(1) 100 96,9 ± 5,9 85,8 ± 4,3(2,4) 100 92,7 ± 4,2(2) 100
50 10 100 75,9 ± 3,1(1) 100 84,5 ± 5,2 91,2 ± 4,9 (2) 100 85,9 ± 5,3(6) 100
10 10 100 80,3 ± 3,2(1) 100 107,4 ± 5,1 95,4 ± 5,5 (2) 100 82,1 ± 4,8(6) 100
5 12 100 83,5 ± 4,5(1) 100 134,5 ± 8,1(3) 89,2 ± 2,4 (4) 100 94,8 ± 6,8 100
3 10 (ин.) 10 100 80,3 ± 2,4(1) 100 72,8 ± 2,7 (3) 87,9 ± 3,8 (4) 100 100,4 ± 4,1 100
500 (ин.) 10 100 81,7 ± 3,6(1) 100 59,0 ± 2,3 (3) 82,3 ± 5,9 (4) 100 87,6 ± 4,3(6) 100
Примечание. (1, 2 3 7) — отличие от соответствующего этапа достоверно (р< 0,05) по критерию Уилкоксона. Для значений 5-го этапа за 100% принята величина амплитуды на 4-м этапе. РК — раствор Кребса.
в разведениях 1:10000, 1:1000, 1:100, 1:50 и 1:10 не влияла на амплитуду вызванных сокращений. Однако в разведении 1:500 она достоверно снижала ее (до 85,7% от фонового уровня), что можно объяснить наличием в сыворотке крови так называемого эндогенного ингибитора сократимости миоцитов (ЭИСМ). В разведении 1:5 сыворотка крови, наоборот, повышала амплитуду сокращений (до 134,5%), что возможно, обусловлено наличием в ней эндогенного активатора сократимости миоцитов (ЭАСМ). Результаты 5-го этапа, т. е. воздействия АХ совместно с сывороткой крови, зависели от кратности ее разведения (см. табл.1). В разведениях 1:10000 и 1:1000 сыворотка не влияла на эффект АХ. Так, в опытах с 1000-кратным разведением исходно (т. е. на 2-м этапе) АХ достоверно снижал амплитуду сокращений до 81,9% от фона, при воздействии совместно с сывороткой (5-й этап) или после ее удаления (7-й этап) он снижал ее соответственно до 78,2 и 83,9% от фона. Это означает, что 1000-кратное (как и 10 000-кратное) разведение не проявляет М-холиноблокирующую активность. Мы объясняем это тем, что при таком большом разведении концентрация ЭБМХР становится ниже пороговой. Попутно отметим, что результаты исследования 10000- и 1000-кратных разведений сыворотки крови дают основание утверждать, что при отсутствии в среде ЭБМХР или при низких его концентрациях инотропный эффект АХ, по крайней мере при трех последовательных его воздействиях, остается постоянным.
Нами установлено, что в более низких разведениях (1:500, 1:100, 1:50 и 1:10) сыворотка крови снижает отрицательный инотропный эффект АХ (см. табл. 1), причем не только в момент ее воздействия, но и после ее удаления (это отмечено для разведений 1:500 и 1:100), т. е. проявляет М-холиноблокирующий эффект. Приведем два примера. Первый касается опытов с 500-кратным разведением (см. табл. 1), в которых
исходно (2-й этап) АХ снижал амплитуду сокращений до 75,3% от фона, а при воздействии совместно с сывороткой (5-й этап) или после ее удаления (7-й этап) не влиял не нее (амплитуда сокращений составила соответственно 91,2 и 93,8% от фона). Второй пример касается опытов с 50-кратным разведением сыворотки, в которых амплитуда сокращений на 2, 5 и 7-м этапах составила соответственно 75,9, 91,2 и 85,9% от фонового уровня. В целом эти данные показывают, что сыворотка крови человека способна снижать эффективность активации М-ХР не только у миокарда лягушки, как было показано ранее [7, 8], но и у миокарда крысы. Полагаем, что выявленная нами М-холиноблокирующая активность связана с наличием в сыворотке крови ЭБМХР, т. е. комплекса веществ, снижающего эффективность передачи сигнала от М-ХР внутрь кардиомиоцитов.
При исследовании 5-кратного разведения сыворотки крови, которое, как отмечено выше, само по себе повышало амплитуду сокращений миокарда до 134,5% от фонового уровня, нами установлено, что это разведение проявляет М-холиноблокирующую активность лишь после удаления сыворотки крови, т. е. с 10-минутным латентным периодом, в этих опытах амплитуда сокращений при действии АХ на 2, 5 и 7-м этапах составила соответственно 83,5, 89,2 и 94,8% от фона (см. табл. 1). Мы не исключаем, что подобная реакция сердечной мышцы на воздействие 5-кратного разведении сыворотки крови обусловлена тем, что это разведение содержит фактор, препятствующий проявлению М-холиноблокирующей активности. Ранее предположение о наличии в крови такого фактора, названного эндогенным сенсибилизатором М-ХР (ЭСМХР), было высказано Е. Н. Сизовой и В. И. Циркиным [12]. Возможно, что после удаления сыворотки эффект ЭСМХР быстро исчезает и это позволяет наблюдать М-холиноблокирующую активность сыворотки крови.
Влияние инактивированной сыворотки крови на проявление отрицательного инотропного эффекта АХ (серия 3). С целью изучения природы М-холино-блокирующей активности сыворотки крови нами была проведена серия 3, в которой оценивалось влияние инактивированной (в течение 40 мин при 80 °С) сыворотки крови на М-холинореактивность миокарда крысы. Опыты проводили по той же схеме, что в предыдущей серии. В этих опытах мы ограничились изучением лишь двух разведений сыворотки крови — 1:500 и 1:10, которые, как отмечалось выше, в нативном состоянии проявляют выраженную М-холиноблокирующую активность. Установлено, что сами по себе оба разведения сыворотки крови снижали амплитуду вызванных сокращений (см. табл. 1). Косвенно это подтверждает наличие в сыворотке крови ЭИСМ и говорит о том, что ЭИСМ является термостабильным фактором, а ЭАСМ, который обнаруживается при исследовании 10-кратного разведения нативной сыворотки, является термолабильным фактором.
При исследовании влияния 500-кратного разведения инактивированной сыворотки установлено, что оно не изменяет эффект АХ. Так, исходно, на фоне сыворотки и после ее удаления (т. е. на 2, 5 и 7-м этапах опытов) АХ снижал амплитуду вызванных сокращений миокарда соответственно до 81,7, 82,3 и 87,6% (см. табл. 1). Это означает, что тепловая денатурация разрушает ЭБМХР, содержащийся в 500-кратном разведении.
При исследовании 10-кратного разведения показано, что на его фоне АХ сохранял способность уменьшать амплитуду вызванных сокращений, а после ее удаления АХ утрачивал эту способность. Действительно, амплитуда сокращений при трех воз-
действиях АХ (исходно, совместно с сывороткой и после ее удаления) составила соответственно 80,3, 87,9 и 100,4% (см. табл. 1). Это означает, что инактивация 10-кратного разведения разрушает ЭБМХР, но не полностью.
В целом результаты исследования 500- и 10-кратного разведений инактивирован-ной нагреванием сыворотки крови позволяют утверждать, что в составе ЭБМХР имеются два компонента — термолабильный и термостабильный. Последний, очевидно, содержится при небольших разведениях сыворотки (1:10).
Влияние прозерина на проявление М-холиноблокирующей активности 500-кратного разведения сыворотки крови (серия 4). Как известно [13], в крови человека находится холинэстераза (ХЭ), которая быстро разрушает АХ. Поэтому закономерно возникает предположение о том, что М-холиноблокирующий эффект сыворотки крови может быть следствием наличия в ней ХЭ, тем более что результаты предыдущей серии опытов не противоречат данному предположению. По этой причине мы провели опыты с целью изучить влияние на отрицательный инотропный эффект АХ нативной сыворотки крови, в которую вносился ингибитор ХЭ прозерин в концентрации 2,9 • 10-6 М. В данных опытах мы ограничились исследованием 500-кратного разведения сыворотки крови, обладающего, как показано выше, М-холиноблокирующей активностью. Опыты проводили по схеме: РК — АХ (5,5 • 10-6 М) — РК — сыворотка 1:500 — сыворотка 1:500 + АХ + прозерин — РК — АХ — РК (п = 10). Нами установлено, что исходно АХ достоверно (р < 0,05) проявлял отрицательный инотропный эффект — он снижал амплитуду вызванных сокращений до 69,8 ± 2,9% от фона (рис. 2). При втором воздействии, т. е. совместно с сывороткой и прозерином АХ также достоверно (р < 0,05) оказывал отрицательный инотропный эффект, снижая амплитуду сокращений до 80,0 ± 3,9%, однако величина этого эффекта в определенной степени была ниже,
А,%
120 г 100 -80 -60 -40 -20 -0 —
257 257 257
Сыв ЛФХ Прозерин
Рис. 2. Амплитуда (А) вызванных сокращений миокарда правого желудочка сердца крыс (в процентах к фоновой амплитуде) при трех воздействиях ацетилхолина, в том числе на 2-м этапе (исходно), на 5-м этапе (совместно с 500-кратным разведением сыворотки крови (Сыв), лизофосфатидилхолином (ЛФХ), 2 • 10-5 М, и прозери-ном, 2,9 • 10-6 М), на 7-м этапе (после удаления сыворотки, ЛФХ или
прозерина)
Ацетилхолин использовался в концентрациях 5,5 • 10-6 М в опытах с сывороткой крови и прозерином и 5,5 • 10-7 М в опытах с ЛФХ. Цифры под столбиками означают номера этапов экспериментов, а цифры над столбиками отражают достоверные (р < 0,05 по критерию Уилкоксона) различия с соответствующими этапами эксперимента, указанными в тексте.
чем при первом тестировании (р > 0,054). При третьем тестировании, т. е. после удаления сыворотки и прозерина, АХ также достоверно (р < 0,05) проявлял отрицательный инотропный эффект (амплитуда сокращений снижалась до 82,2 ± 5,1% от фона), но его выраженность была достоверно (р<0,05) меньше, чем при первом тестировании. Таким образом, можно утверждать, что, несмотря на ингибирование ХЭ, 500-кратное разведение сыворотки крови сохранило способность снижать эффективность активации М-ХР, что проявилось и в период воздействия сыворотки, и после ее удаления. Это означает, что М-холиноблокирующая активность сыворотки крови обусловлена наличием в ней ЭБМХР, а не ХЭ. В то же время, при исследовании содержания в крови и других жидких средах организма ЭБМХР или при изучении его природы, очевидно, что использование ингибитора ХЭ, например прозерина, является важным методическим приемом, снижающим до минимума допущение о влиянии ХЭ на результаты исследования.
Влияние ЛФХ на проявление отрицательного инотропного эффекта АХ (серия 5). Ранее было высказано предположение о том, что одним из компонентов ЭБМХР является ЛФХ [12]. Для доказательства этого предположения в отношении миокарда крысы мы провели опыты серии 5, в которой оценивали влияние ЛФХ (его использовали в трех концентрациях — 2 • 10-6, 2 • 10-5 и 2 • 10-4 М) на эффект АХ. Опыты проводили по схеме: РК — АХ (5,5 • 10-7 М) — РК — ЛФХ (в одной из трех концентраций) — ЛФХ (в этой же концентрации) + АХ — РК — АХ — РК. При исследовании ЛФХ в концентрации 2 • 10-6 М нами установлено (табл. 2), что сам по себе ЛФХ не влиял на амплитуду сокращений (при действии ЛФХ она составила 93,1% от фона). В этих опытах АХ при первом тестировании достоверно снижал амплитуду сокращений до 78,7% от фона, при втором тестировании, т. е. совместно с ЛФХ, также достоверно снижал ее (до 87,4% от фона), а при третьем тестировании (т. е. после удаления ЛФХ) он не изменял амплитуду сокращения (она составила 91,1% от фона). Это означает, что ЛФХ снижает эффективность активации М-ХР, но не в момент воздействия, а после удаления ЛФХ.
Таблица 2. Амплитуда вызванных сокращений (М ± т в % к фону) полосок миокарда правого желудочка сердца крыс на восьми этапах экспериментов, в которых изучалось влияние трех концентраций лизофосфатидилхолина (ЛФХ) на проявление отрицательного инотропного эффекта ацетилхолина
(АХ) в концентрации 5,5 • 10-7 М (серия 3)
Концентрация ЛФХ Этапы эксперимента
N 1 2 3 4 5 6 7 8
РК АХ РК ЛФХ ЛФХ+АХ РК АХ РК
10 2 • 10-6М 100 78,7 ± 5,7(1) 100 93,1 ± 6,4 87,4 ± 4,8(4) 100 91,1 ± 7,1 100
10 2 • 10-5М 100 69,3 ± 4,6(1) 100 80,0 ± 7,9(3) 88,6 ± 6,7 100 89,1 ± 5,9(2) 100
10 2 • 10-4М 100 74,9 ± 4,3(1) 100 74,2 ± 7,1(3) 79,0 ± 4,2(4) 100 97,8 ± 6,8(2, 5) 100
Примечание. (1, 2 3 7) — отличие от соответствующего этапа достоверно (р< 0,05) по критерию Уилкоксона. Для значений 5-го этапа за 100% принята величина амплитуды на 4-м этапе.
При исследовании ЛФХ в концентрации 2 • 10-5 М установлено, что сам по себе ЛФХ снижает амплитуду сокращений до 80,0%. В этих опытах АХ при первом тестировании достоверно снижал амплитуду сокращений до 69,3% от фона, а при втором и третьем тестированиях он достоверно не снижал ее (она составила соответственно 88,6 и 89,1% от фона). Таким образом, ЛФХ в концентрации 2 • 10-5 М уменьшает
эффективность активации М-ХР, причем этот эффект наблюдается не только в момент воздействия, но и спустя 10 мин после удаления ЛФХ.
При исследовании ЛФХ в концентрации 2 • 10-4 М установлено, что сам по себе ЛФХ снижает амплитуду сокращений до 74,2% от фона. В этих опытах АХ при первом тестировании достоверно снижал амплитуду сокращений до 74,9% от фона, а при втором и третьем тестированиях — до 79,0 и 97,8% от фона. Таким образом, ЛФХ в концентрации 2 • 10-4 М, как и ЛФХ в концентрации 2 • 10-6 М, снижает эффективность активации М-ХР, но не во время воздействия, а лишь после удаления его из среды.
В целом данные опыты показали: ЛФХ, с одной стороны, в высоких концентрациях (2 • 10-5 и 2 • 10-4 М) сам по себе способен проявлять отрицательный инотропный эффект, что согласуется и с данными литературы [14, 15]. С другой стороны, установлено, что ЛФХ во всех трех исследованных нами концентрациях снижает эффективность активации М-ХР. Это наблюдается либо в момент воздействия ЛФХ (отмечено для концентрации 2 • 10-5 М), либо через 10-минутный латентный период, т. е. после удаления ЛФХ (отмечено для всех трех концентраций ЛФХ).
Очевидно, что в этом случае М-холиноблокирующая активность ЛФХ связана не с процедурой удаления ЛФХ, а с наличием 10-минутного латентного периода в действии ЛФХ. Ранее М-холиноблокирующая активность ЛФХ была отмечена в опытах с миокардом лягушки и кролика, в которых ЛФХ использовался в концентрации 1,2-1,3 • 10-5 М [3]. Следовательно, можно утверждать, что ЛФХ проявляет М-холиноблокирующую активность в отношении миокарда всех млекопитающих, независимо от их вида. Согласно данным литературы, ЛФХ оказывает свое влияние на клетки за счет активации орфановых рецепторов типа GPR4 и G2A [16, 17]. Мы не исключаем, что и при реализации М-холиноблокирующей активности ЛФХ также активирует орфановые рецепторы.
В целом результаты опытов серии 5 позволяют нам рассматривать ЛФХ в качестве одного из возможных компонентов ЭБМХР. Об этом свидетельствует аналогия М-холиноблокирующей активности сыворотки крови и ЛФХ. Расчеты также подтверждают наше предположение. Действительно, если учитывать, что в сыворотке крови содержание ЛФХ достигает 2-8 • 10-5 М, т. е. 20-80 мкМ [2], или в среднем 50 мкМ, то минимальная концентрация ЛФХ в среде при разведении сыворотки крови в 500, 100, 50 и 10 раз должна составлять соответственно 10-7 М, 5 • 10-7 М, 10-6 М, 5 • 10-6М. Исходя из этого полагаем, что М-холиноблокирующая активность 100-, 50- и 10-кратных разведений (вероятно, и 500-кратных разведений) может быть следствием наличия в крови ЛФХ. Также не исключено, что помимо ЛФХ в составе ЭБМХР могут быть и другие вещества. Поэтому до полной идентификации фактора, вызывающего снижение эффективности активации М-ХР, мы предлагаем использовать для его названия термин ЭБМХР.
Как известно, содержание ЛФХ в крови может существенно возрастать, например, при стрессе [4], при инфаркте миокарда [6] и других состояниях. Это означает, что эффективность активации М-ХР в подобных ситуациях может существенно снижаться, что должно приводить к нарушению работы сердца.
Заключение
В опытах с изолированным миокардом крысы сыворотка крови небеременных женщин в разведении 1:500, 1:100 и 1:50, 1:10 и в определенной степени 1:5, снижает способность АХ проявлять отрицательный инотропный эффект, т. е. сыворотка проявляет М-холиноблокирующую активность. Тепловая инактивация сыворотки крови частично снижает эту активность, что говорит о термолабильном и термостабильном компонентах ЭБМХР. Прозерин не препятствует проявлению М-холиноблокирующей активности сыворотки крови. Косвенно это говорит о том, что ЭБМХР по своей природе не является холинэстеразой. Лизофосфатидилхолин (ЛФХ) снижает эффективность активации М-ХР. Данный факт указывает на то, что ЛФХ может быть одним из компонентов ЭБМХР.
* * *
Авторы выражают признательность за помощь в работе доктору медицинских наук А. А. Костяеву — руководителю лабораторией консервирования крови ФГУ «Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России» (г. Киров) и Н. В. Про-казовой — кандидату химических наук, заведующей отделом биохимии липидов Института экспериментальной кардиологии РКНПК (г. Москва).
Литература
1. Effect of lysolecithin and lecithin of blood serum on the sensitivity of heart to acetylcholine / Zvezdina N. D., Prokazova N. V., Vaver V. A., Bergelson L. D., Turpaev Т. М. // Biochem. Pharm. 1978. Vol. 27, N 10. Р. 2793-2801.
2. Суслова И. В., Коротаева А. А., Проказова Н. В. Изменение параметров равновесного связывания [3Н] хинуклидинилбензилата на мембранах предсердия кролика под действием лизо-фосфатидилхолина // ДАН. 1995. Т. 342. № 2. С. 273-276.
3. Проказова Н. В., Звездина Н. Д., Коротаева А. Л. Влияние лизофосфатидилхолина на передачу трансмембранного сигнала внутрь клетки. Обзор // Биохимия. 1998. Т. 63, вып. 1. С. 38-46.
4. Fuchs B., Schiller J. Lysophospholipids: their generation, physiological role and detection. Are they important disease markers? // Mini Rev. Med. Chem. 2009. Vol. 9, N 3. Р. 368-378.
5. A new approach to the development of anti-ischemic drugs. Substances that counteract the deleterious effect of lysophosphatidylcholine on the heart / Hashizume H., Hoque A., Magishi K., Hara A., Abico Y. // Jpn. Heart. 1997. Vol. 38, N 1. Р. 11-25.
6. Торкунов П. А., Сапронов Н. С., Новоселова Н. Ю. Фосфолипиды сердца в динамике экспериментального инфаркта миокарда у крыс // Пат. физиол. и эксп. терапия. 1997. № 2. С. 21-23.
7. Циркин В. И., Ноздрачев А. Д., Трухин А. Н., Сизова Е. Н. Влияние эндогенных модуляторов в-адрено- и М-холинореактивности на вариабельность сердечного ритма // ДАН. 2004. Т. 394, №4. С. 562-565.
8. Демина Н.Л., Циркин В. И., Тарловская Е. И., Кашин Р. Ю. а и в-адрено-, М-холино-модулирующая активность сыворотки крови при артериальной гипертензии // Кардиоваск. терапия и профилактика. 2008. № 2. С. 16-22.
9. Пенкина Ю. А., Ноздрачев А. Д., Циркин В. И. Влияние сыворотки крови человека, гисти-дина, триптофана, тирозина, милдроната и лизофосфатидилхолина на инотропный эффект адреналина в опытах с миокардом лягушки и крысы // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3: Биология. 2008. Вып. 1. С. 55-68.
10. Гланц С. Медико-биологическая статистика / пер. с англ. М.: Практика, 1999. 459 с.
11. Циркин В. И., Трухин А. Н., Сизова Е. Н., Дворянский С. А. Изменение М-холинореактивно-сти миокарда лягушки под влиянием сыворотки пуповинной крови человека // Рос. кардиол. журн. 2004, № 2. С. 64-69.
12. Сизова Е. Н., Циркин В. И. Физиологическая характеристика эндогенных модуляторов в-адрено- и М-холинореактивности. Киров: Изд-во ВСЭИ, 2006. 183 с.
13. Ветров В. В., Маслова М. Н. Влияние комплексной эфферентной терапии при гестозе на активность ацетилхолинэстеразы в сыворотке крови // Вестн. Рос. ассоц. акушеров-гинекологов. 2000. № 2. С. 13-15.
14. Биленко М. В., Булгаков В. Г., Моргунов А. А. Отрицательный инотропный и вазоконстрик-торный эффект окисленных фосфолипидов // Кардиология. 1989. Т. 29, № 6. С. 88-93.
15. Hoque E., Haist J., Karmazyn M. Na+-H+ exchange inhibition protects against mechanical, ultrastructural, and biochemical impairment induced by low concentrations of lysophosphatidylcholine in isolated rat hearts // Circ. Res. 1997. Vol. 80, N 1. Р. 95-102.
16. Inflammatory stress increases receptor for lysophosphatidylcholine in human microvascular endothelial cells / Lum H., Qiao J., Walter R., Huang F., Subbaiah P., Kim K., Holian O. // Am J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2003. Vol. 285, N 4. Р. 1786-1789.
17. Matsumoto T., Kobayashi T., Kamata K. Role of lysophosphatidylcholine (LPC) in atherosclerosis // Curr. Med. Chem. 2007. Vol. 14, N 30. Р. 3209-3220.
Статья поступила в редакцию 17 марта 2011 г.
