Научная статья на тему 'Влияние степени протонирования хитозана на некоторые его свойства'

Влияние степени протонирования хитозана на некоторые его свойства Текст научной статьи по специальности «Химические науки»

CC BY
732
326
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
КОНФОРМАЦИЯ МАКРОМОЛЕКУЛ / ПРОТОНИРОВАНИЕ / ФЕРМЕНТАТИВНАЯ ДЕСТРУКЦИЯ / ХИТОЗАН / CONFORMATION OF MACROMOLECULES / PROTONATION / ENZYMATIC DESTRUCTION / CHITOSAN

Аннотация научной статьи по химическим наукам, автор научной работы — Кузина Л. Г., Мурзагильдина А. С., Чернова В. В., Кулиш Е. И.

Обнаружена корреляция между степенью протонирования хитозана в растворе уксусной и соляной кислот и конформационным состоянием макромолекул полимера, а также его способностью к ферментативному разложению.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по химическим наукам , автор научной работы — Кузина Л. Г., Мурзагильдина А. С., Чернова В. В., Кулиш Е. И.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

INFLUENCE OF PROTONATION DEGREE OF CHITOSAN ON SOME OF ITS PROPERTIES

The correlation between the protonation degree of chitosan in the solution of acetic and hydrochloric acids and the conformational state of the macromolecules of polymer, and also its capability for enzymatic decomposition are discovered.

Текст научной работы на тему «Влияние степени протонирования хитозана на некоторые его свойства»

УДК 541.64:536.7

ВЛИЯНИЕ СТЕПЕНИ ПРОТОНИРОВАНИЯ ХИТОЗАНА НА НЕКОТОРЫЕ ЕГО СВОЙСТВА

© Л. Г. Кузина, А. С. Мурзагильдина, В. В. Чернова, Е. И. Кулиш*

Башкирский государственный университет Россия, Республика Башкортостан, 450074 г. Уфа, ул. Заки Валиди, 32.

E-mail: alenakulish@ rambler. гы

Обнаружена корреляция между степенью протонирования хитозана в растворе уксусной и соляной кислот и конформационным состоянием макромолекул полимера, а также его способностью к ферментативному разложению.

Ключевые слова: конформация макромолекул, протонирование, ферментативная деструкция, хитозан.

Полисахарид хитозан, представляющий собой частично дезацетилированное производное полимера природного происхождения хитина (рис. 1), в последнее время привлекает внимание большого числа исследователей.

CH2OH

N

H

OH

CH2OH

N

H

OH

C=O

I

CH3

Рис. 1. Строение мономерного звена хитозана.

Причина этого - комплекс превосходных свойств хитозана, среди которых совместимость с тканями живых организмов, биодеградируемость, высокая сорбционная емкость и т.д. [1, 2]. Одним из неоспоримых достоинств хитозана по сравнению с его ближайшими аналогами - хитином и целлюлозой, является то, что он легко растворяется в кислых водных средах, образуя вязкие растворы, которые затем перерабатываются в пленки и находят разнообразное применение. При растворении аминогруппы хитозана протонируются, в результате чего соотношение компонентов в бинарном растворителе кислота-вода, определяет не только степень протонирования полимера, но и конформационное состояние макромолекулы в растворе. Конформация макромолекулы, в свою очередь, может сказаться на вязкостных характеристиках хитозана и некоторых его свойствах. Целью данной работы стал поиск корреляции между степенью протонирования хитозана в бинарных растворителях - соляная кислота-вода и уксусная кислота-вода, его вязкостными характеристиками и реакционной способностью в процессе ферментативной деструкции.

Экспериментальная часть

В качестве объектов исследования использован образец хитозана (ХТЗ) производства ЗАО

«Биопрогресс» (Россия), полученный щелочным дезацетилированием крабового хитина (степень деацетилирования ~80%), с Мп=80000. Растворителями служили растворы уксусной и соляной кислот Концентрация ХТЗ в растворе варьировалась от 0.0025 до 0.125 мономоль/л. Величину рН растворов контролировали с помощью pH - метра АНИОН 4100. Определение степени протонирования ХТЗ в растворе а проводили согласно методике, описанной в работе [3]. Значение характеристической вязкости, по величине которой судили о конформационном состоянии хитозана, определяли в растворе уксусной кислоты соответствующей концентрации. Реакционную способность хитозана в процессе ферментативной деструкции в растворе уксусной кислоты оценивали по величине эффективной константы скорости ферментативной деструкции аналогично подходу, развитом в [4]. Константу скорости

определяли из уравнения

1

1

kэф • t

2МП '

М n(t) Mn( 0 ) 2^0

где M n(t) и M n(0) - исходная и текущая среднечисловая молекулярные массы ХТЗ, М0 -молекулярная масса звена хитозана. Для расчета среднечисловой молекулярной массы пользовались

М п

уравнением: Мn = -----—у— > где

М„ -

М = ■ ,

" [Г (2 + а]

средневязкостная молекулярная масса, Г - гамма функция, а - экспонента в уравнении Марка-Куна-Хаувинка. Средневязкостную молекулярную массу рассчитывали по величине характеристической вязкости ХТЗ, определенной в растворе ацетатного буфера с рН=4.5 [5], используя уравнение Марка-Куна-Хаувинка с К=1.38*10-4 и а=0.85.

В качестве ферментного препарата была использована гиалуронидаза (ГУП «Иммунопрепарат», Уфа). Соотношение хитозан: фермент в растворе составляло 95:5. Раствор ферментного препарата вносили в 2% раствор ХТЗ непосредственно перед началом изучения процесса ферментативной деструкции.

Обсуждение результатов Хорошо известно, что в растворе сильной кислоты, например, соляной, количество свободных

H

H

O

H

H

2

Y

X

* автор, ответственный за переписку

ионов водорода тем больше, чем больше концентрация соляной кислоты в растворе. Соответственно, растворение ХТЗ в этом случае сопровождается интенсивным понижением рН раствора, поскольку степень протонирования его макромолекул увеличивается монотонно по мере увеличения количества свободных ионов водорода. В нашем случае, максимально возможного для ХТЗ значения (с учетом степени деацетилирования его звеньев) степень протонирования достигает при мольном отношении соляная кислота/ХТЗ, равным 0.8 (рис. 1).

0,002 0,004 0,006

Концентрация кислоты в растворе, моль/л

Рис. 2. Зависимость степени протонирования хитозана концентрации 0.0025 (1), (2) 0.005и 0.0075 (3) моль/л от концентрации соляной кислоты в растворе.

В случае использования в качестве растворителя растворов слабой кислоты, например уксусной, ситуация несколько иная. Степень диссоциации уксусной кислоты как слабого электролита уменьшается с увеличением ее концентрации в растворе, но общее количество вещества при этом увеличивается. Очевидно по этой причине, зависимость степени протонирования ХТЗ в растворе уксусной кислоты носит сложный, экстремальный характер (рис. 3). Обращает на себя внимание три момента. Во-первых, степень протонирования ХТЗ в растворе уксусной кислоты имеет меньшие значения, нежели при растворении в соляной кислоте. Во-вторых, меняется мольное отношение кисло-та/ХТЗ, при котором достигается максимальная степень протонирования, данное отношение становится равным 7. В-третьих, с увеличением концентрации ХТЗ в растворе, степень его протонирования уменьшается, вероятно вследствие уменьшения доступности звеньев ХТЗ при переходе к более концентрированным растворам. Общий характер зависимости и мольное соотношение между кислотой и ХТЗ при этом сохраняется.

Более того, именно при данном мольном соотношении компонентов наблюдается наибольшее значение эффективной константы скорости ферментативной деструкции ХТЗ (рис. 3).

0,2 1,о

Концентрация кислоты в растворе, моль/л

Рис. 3. Зависимость степени протонирования хитозана концентрации 0.0075 (1), (2) 0.075и 0.125 (3) моль/л от концентрации уксусной кислоты в растворе.

1,0 1,5 2,0

Концентрация уксусной кислоты в растворе, моль/л

Рис. 4. Зависимость эффективной константы деструкции хитозана концентрацией 0.125 моль/л от концентрации уксусной кислоты, используемой в качестве растворителя под действием фермента гиалуронидазы.

Полученные данные перекликаются с данными работы [6, 7] по изучению деструкции ХТЗ под действием окислительно-восстановительной системы. Авторы [6] работы обнаружили экстремальную зависимость между молекулярной массой образовавшегося в процессе деструкции олигохитозана и концентрацией уксусной и соляной кислоты в составе растворителя (рис. 5). При этом, мольное соотношение кислота:ХТЗ, при котором наблюдается экстремум на кривой зависимости «молекулярная масса олигохитозана» - состав бинарного растворителя составляет 5.3 в случае использования уксусной и 0.8 в случае использования соляной кислоты, что практически совпадает с полученными нами данными. При этих же соотношениях компонентов (5.3 и 0.8) наблюдаются и максимумы на кривых зависимостей относительной и динамической вязкостей от содержания кислоты. Более того, именно при таком соотношении компонентов исчезает аномалия вязкости, т.е. растворы ХТЗ начинают вести себя как нью-

тоновские жидкости. Учитывая тот факт, что в процессах термической [8, 9], термоокислительной [10, 11] и ферментативной [12] деструкции полимеров неоднократно обнаруживалось проявление надмолекулярных и конформационных эффектов очевидно, что наблюдаемые закономерности тоже можно трактовать именно с позиций проявления макромолеку-лярных эффектов.

0,2 0,4 0,6 0,8

Концентрация кислоты в растворе, моль/л

Рис. 5. Зависимость молекулярной массы деградированного хитозана от состава растворителя: водные растворы соляной (1) и уксусной кислоты (2). Содержание хитозана в растворе 0.006 моль/л [7].

Так, известно, что нативный ХТЗ имеет высокоупорядоченную структуру, жесткость и стабильность которой поддерживается системой водородных связей [13]. При низкой степени протонирования непротонированные аминогруппы могут оставаться связанными водородной связью, поддерживающими жесткость и исходную спиральную конформацию макромолекул ХТЗ. Однако, при достижении некоторой «критической» степени протонирования может произойти конформационный переход спираль-клубок, обусловленный кооперативным разрушением водородных связей. О том, что макромолекулы ХТЗ находятся в спиральной конформации при мольном отношении уксусная кислота:ХТЗ меньше чем 5.3, и в конформации клубка при мольном отношении уксусная кислота:ХТЗ больше чем 5.3, авторы работы [7] судят на основании значения определенных ими значений констант а в уравнении Марка-Куна-Хаувинка [п]~Ма, которые составили 1.5 и 0.83, соответственно. Таким образом, в области перехода, по мнению авторов, реализуется состояние вытянутых неассоциированных макромолекул с наибольшей доступностью гликозидных связей. Именно при максимально возможной доступности гликозидных связей для воздействия деструкти-рующих реагентов, как в случае работ [6, 7] или ферментных препаратов как в нашем случае, и реа-

лизуется максимально возможная при данных условиях скорость и степень деструкции ХТЗ.

С нашей точки зрения, возможно и несколько иная интерпретация полученных результатов. Экстремальная зависимость степени протонирования ХТЗ в растворе уксусной кислоты обуславливает экстремальную зависимость размера макромолеку-лярного клубка в растворе. Соответственно, при небольших концентрациях уксусной кислоты (малой степени протонирования) ХТЗ находится в конформации клубка. При увеличении степени протонирования ХТЗ, клубок начинает разворачиваться и при мольном соотношении уксусная кислота: ХТЗ равным, в нашем случае 7, соответствующий максимально возможному значению степени протонирования ХТЗ, достигает максимально развернутого состояния. В этих случаях и реализуется наибольшая скорость и степень деструкции ХТЗ. Таким образом, если допустить, что в разбавленных растворах уксусной кислоты, исходная высокоупорядоченная структура ХТЗ все-таки разрушается, то полученные данные можно описать не с позиции перехода спираль-клубок, а напротив, с позиции перехода клубок-спираль. В растворе соляной кислоты степень протонирования ХТЗ в растворе изменяется не экстремально, а монотонно, постепенно достигая максимально возможного значения при мольном соотношении соляная кислота: ХТЗ равным 0.8. Поэтому на кривой зависимости молекулярной массы деградированного ХТЗ от состава растворителя для растворов ХТЗ в соляной кислоте (рис. 5 кривая 1) экстремальной зависимости не наблюдается. Повышенные значения константы а в уравнении Марка-Куна-Хаувинка, определенные для растворов ХТЗ в разбавленной уксусной кислоте, с нашей точки зрения, можно отнести за счет повышенной склонности ХТЗ не только к меж-, но и внутримолекулярной агрегации, что неоднократно отмечалось, например в работах [14, 15].

Таким образом, изучение растворов ХТЗ методом потенциометрии позволяет сделать вывод о том, что при мольном соотношении уксусная кисло-та:ХТЗ равном 5-7 и соляная кислота:вода равном

0.8 достигается максимально возможная для данного образца ХТЗ степень протонирования. В результате при изменении состава бинарного растворителя и увеличения степени протонирования происходит реализацией такого конформационного состояния, при котором доступность гликозидной связи ХТЗ для взаимодействия с ферментом гиалуронидазой становится максимально возможной. Именно этот факт может стать причиной экстремально зависимости степени и скорости ферментативной деструкции ХТЗ от соотношения кислота-ХТЗ.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ 11-03-97016-р_поволжье_а.

ЛИТЕРАТУРА

1. Muzzarelli R.A. Chitin. Oxford: Pergamon Press, 1977. 309 p.

2. Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение / Под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М.: Наука, 2002. 365 с.

3. Rinaudo M., Pavlov G., Desbrieres J. Influence of acetic acid concentration on the solubilization of chitosan // Polymer. 1999. V. 40. P. 7029-7032.

4. Рогожин С. В., Г амзазаде А. И., Членова М. А., Леонова Е. Ю., Скляр А. М., Дотдаев С. Х. Частичный кислотный гидролиз хитозана // Высокомолекулярные соединения. 1988. Т. ХХХ(А). №3. С. 610-616.

5. Рафиков С. Р., Будтов В. П., Монаков Ю. Б. Введение в физи-ко-химию растворов полимеров. М.: Наука, 1978. 320 c.

6. Федосеева Е. Н., Семчиков Ю. Д., Смирнова Л. А. Деструкция хитозана в растворах под действием окислительновосстановительной системы // Высокомолекулярные соединения. Сер. Б. 2006. Т. 48. №10. С. 1930-1935.

7. Федосеева Е. Н., Смирнова Л. А., Федосеев Б. Ф. Вязкостные свойства хитозана и его реакционная способность // Вестник Нижегородского университета. 2008. №4. С. 59-64.

8. Колесов С. В., Кулиш Е. И., Минскер К. С. Роль надмолекулярной структуры в процессе деструкции поливинилхлорида в растворе // Высокомолекулярные соединения. 1994. Сер. Б. Т. 36. №8. С. 1383-1384.

9. Кулиш Е. И., Колесов С. В., Минскер К. С., Заиков Г. Е. Влияние структурно-физического состояния поливинилхло-

рида в растворе на его термический распад // Высокомолекулярные соединения. 1998. Сер. А. Т. 4. №»8. С. 1309-1313.

10. Кулиш Е. И., Герчиков А. Я., Чирко К. С., Колесов С. В., Заиков Г. Е. Особенности окисления полибутадиена в растворе // Высокомолекулярные соединения. 2004. Сер. Б. Т. 46. №2. С. 349-353.

11. Эмануэль Н. М., Бучаченко А. Л. Химическая физика старения и стабилизации полимеров. М.: Наука, 1982. 360 с.

12. Кулиш Е. И., Володина В. П., Фаткуллина Р. Р., Колесов С. В., Заиков Г. Е. Макромолекулярные эффекты при ферментативной деструкции хитозана в растворе // Высокомолекулярные соединения. 2008. Серия Б. Т.50. №7. С. 1277-1280.

13. Горбачева И. Н., Овчинников Ю. К., Гальбрайх Л. С., Трофимов Н. А., Мажоров В. В. Рентгенографическое изучение структуры хитозана // Высокомолекулярные соединения. 1988. Т. 30 А. №12. С. 2512-2515.

14. Вихорева Г. А., Роговина С. З., Пчелко О. М., Гальбрайх Л. С. Фазовое состояние и реологические свойства системы хитозан-уксусная кислота-вода // Высокомолекулярные соединения. 2001. Серия Б. Т.43. №6. С. 1079-1084.

15. Скляр А. М., Гамзазаде А. И., Роговина Л. З., Титкова Л. Р., Павлова С.-С. А., Рогожин С. С., Слонимский Г. А. Исследование реологических свойств разбавленных и умеренно концентрированных растворов хитозана // Высокомолекулярные соединения. 1981. Серия А. Т.23. №6. С. 1396-1403.

Поступила в редакцию 15.0S.2012 г.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.