CC BY
66
УДК 57.052:115:616.151.5
ВЛИЯНИЕ СОЧЕТАНИЙ ВИТАМИНОВ-АНТИОКСИДАНТОВ НА ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ
А.Ш. Бышевский, Е.М. Шаповалова
Тюменская государственная медицинская академия, г. Тюмень
В экспериментах на крысах-самцах (280 особей) изучены эффекты сочетаний витаминов-антиоксидантов (А, Е, В5, Ви и С) на толерантность организма к тромбину, выявлена их способность повышать устойчивость организма к гипертромбинемии за счет неполной суммации эффектов, показано, что включение в изучавшиеся сочетания витамина С в дозах, обладающих проокси-дантным влиянием, ограничивает рост толерантности к тромбину. Обсуждается значение полученных данных в выборе доз витамина С при наклонности к ускоренному тромбинообразованию.
Ключевые слова: витамины-антиоксиданты, толерантность к тромбину.
Введение. Анализ данных литературы, касающихся влияния витаминов-антиоксидантов (А, Е, В5, В]2 и С), наиболее часто используемых с целью направленного воздействия на состояние гемостаза при заболеваниях, сопровождающихся гемостатиче-скими нарушениями, не позволил сформулировать представление об их эффективности как средств ограничения тромбофилических сдвигов [1, 2, 10]. Экспериментальные исследования выявили, что эффекты этих витаминов на гемостаз сопряжены со степенью их влияния на процессы липидпероксида-ции (ЛПО) в тромбоцитах [13], хотя и не обнаруживается равно выраженная зависимость между влиянием дефицита или избытка в рационе того или иного витамина-антиоксиданта на интенсивность ЛПО и антиоксидантный потенциал (АОП) тромбоцитов, на уровень маркеров непрерывного внутри-сосудистого свертывания крови (НВСК) и фибри-нолиз. Отклонения от нормы интегрального показателя состояния гемостаза - толерантности к тромбину - при авитаминозах А, Е, С и ЕЦ примерно одинаковы, и лишь при исключении из рациона витамина В12 снижение толерантности к тромбину (ТкТР) менее выражено, чем при других видах ави-таминного питания. По степени влияния на ТкТР избытка витаминов они располагаются иначе: на первом месте витамин А, на втором - витамин Е, на третьем - витамин В12, на четвертом - витамины С и Р5 (это сочетание повысило ТкТР при наибольшей из доз). По приросту эффекта в разные периоды наблюдений витамины располагаются в той же последовательности [11]. Отсутствуют, однако, экспериментальные данные о влиянии перечисленных витаминов на гемостаз в сочетаниях, хотя чаще витамины используются в комбинациях по два и более. Важным представляется выяснить в какой мере и по какому типу кооперируются их эффекты на состояние гемостаза.
Цель настоящего исследования - установить, как влияют все возможные сочетания витаминов-антиоксидантов А, Е, В5, В12 и С на толе-
рантность организма к тромбину, следовательно, на его способность адекватно реагировать на воздействия, ускоряющие тромбиногенез.
Материалы и методы исследований. Опыты проведены на белых крысах-самцах (280 ± 27 г), число п в отдельных группах и разных этапах опытов представлено в табл. 1-4). При выборе показателя состояния гемостаза — толерантность к тромбину - принято во внимание важное значение толерантности как интегрального показателя состояния многих систем, обеспечивающих реакцию организма на экзо- или эндогенную гипер-тромбинемию. Такая роль ТкТР, установленная ещё в начале XX века [8], экспериментально подтверждена при разработке количественного метода оценки ТкТР [13], апробированного при многих экспериментальных ситуациях [3, 6,7, 9].
Принимая во внимание множество сочетаний (всего 20), мы начали с простейшего (по 2 из 5), используя две дозы витаминов, в четыре и в восемь раз превосходящих суточную потребность (это эквиваленты лечебных доз).
Вводили каждое из сочетаний в течение восьми недель, чтобы сопоставить их эффекты при возможно максимальных изменениях ТкТР. Результаты экспериментов в виде интенсивных величин (изменение ТкТР, выраженное в процентах относительно контроля, принимаемого за 100 %) представлены в табл. 1. Здесь же помещены для сравнения данные, полученные при введении с рационом такого же избытка витаминов, при их введении порознь.
Данные табл. 1 свидетельствуют, что при введении витаминов во всех возможных сочетаниях по два увеличивается степень их влияния на ТкТР в сравнении с влиянием, выявленным при введении каждого из них порознь.
Далее в опытах, проведенных по такой же схеме, изучили влияние на ТкТР сочетаний по три, по четыре и эффект одновременного введения избытка всех пяти изучавшихся витаминов на ТкТР (табл. 2).
Проблемы здравоохранения
Таблица 1
Значения ТкТР при сочетании по два витамина А, В5, В12, С и Е (4- и 8-кратный избыток каждого в рационе в течение 4 и 8 недель - верхняя и нижняя строки соответственно)
Сочетания витаминов ТкТР в контроле (п = 10) Крысы (п = 10 на каждом этапе) получали в избытке витамины, обозначенные в столбце 1-м
4-кратный избыток 8-кратный избыток
Е+С 100,0 + 4,1 125.0 ±2,3* 129.0 ±2,1* 125.0 ±2,4* 140.0 ± 2,7*
Е+РР 125.0 ±2,7* 127.0 ±2,3* 126.0 ± 2,4* 139.0 ±2,7*
Е+А 140.0 ±2,1* 147.0 ± 2,4* 150.0 ±2,8* 174.0 ±3,1*
Е+В12 127.0 ± 2,2* 135.0 ±2,7* 138.0 ±2,2* 154.0 ± 2,9*
С+РР 120,0 ± 2,6 132,0 ± 1,8 130.0 ±3,4* 137.0 ±3,1*
С+А 131.0 ±2,8 140.0 ± 3,7 139.0 ±4,1 148.0 ± 2,7
с+в12 115.0 ±2,2 118.0 ± 1,3 120.0 ±3,2 128.0 ±2,9
РР+А 143.0 ± 3,2* 162.0 ± 4,5* 152.0 ± 3,6* 165.0 ±4,1*
РР+В12 129.0 ±2,1* 137.0 ±2,6* 133.0 ±3,1* 154.0 ± 4,7*
АиВ12 134.0 ±2,1* 140.0 ± 2,6* 152.0 ± 3,4* 159.0 ±4,3*
*Достоверное отличие от контроля.
Таблица 2
Значения ТкТР при сочетании по три, четыре и пять витаминов Е, С, РР, А и В12 (4- и 8-кратный избыток каждого) в рационе в течение 4 и 8 недель (верхняя и нижняя строки соответственно)
Перечень сочетаний ТкТР Крысы (п = 10 на каждом этапе) получали в избытке витамины, обозначенные
витаминов по три, в контроле в первом столбце
четыре и пять (п = 10) 4-кратный избыток 8-кратный избыток
Е+С+РР 129.0 ± 2,2* 136.0 ±2,1* 129.0 ±2,1* 146.0 ± 2,8*
Е+С+А 157.0 ±3,1* 179.0 ±4,1* 150.0 ± 2,8* 198.0 ±5,1*
е+с+в!2 140,0 ± 3,3* 162,0 ±4,5*
167,0 ± 2,9* 189,0 ±5,2*
С+РР+А 143.0 ±3,2* 159.0 ±4,1* 166.0 ±3,7* 176.0 ±5,2*
С+РР+В12 100,0 ± 5,0 125.0 ± 2,3 145.0 ± 2,7 133.0 ±3,4 148.0 ± 3,9
РР+А+В^ 145.0 ± 3,0* 150.0 ±3,2* 161.0 ±3,6* 165.0 ±4,2*
е+с+рр+в12 149.0 ± 4,0* 171.0 ±4,3* 157.0 ±3,8* 178.0 ±4,3*
е+с+рр+а 153.0 ±3,5* 175.0 ±4,6* 160.0 ± 3,9* 181.0 ±4,4*
с+рр+в12+а 160.0 ± 3,5* 173.0 ±4,7* 163.0 ±4,2* 178.0 ±4,7*
Е+С+Р Р+В12+А 157.0 ±3,6* 193.0 ± 4,6* 166.0 ±4,5* 198.0 ±4,8*
Достоверное отличие от контроля.
Бышевский А.Ш., Шаповалова ЕМ.
Влияние сочетаний витаминов-антиоксидантов ________________на толерантность к тромбину
Здесь видно, что при сочетаниях витаминов по три эффекты несколько заметнее, чем при сочетаниях по два (сравнить с табл. 1), и становятся ещё значительнее при сочетаниях по четыре. Наибольший эффект найден в случае одновременного введения избытка всех пяти испытывавшихся витаминов.
Несомненно и то, что при всех испытанных сочетаниях влияние витаминов на ТкТР нарастает при большей продолжительности введения - через 8 недель эффект во всех случаях выше, чем через 4 недели.
Являются ли эффекты сочетаний по два и более аддитивными, либо отражают антагонизм или синергизм, позволяет выяснить их анализ приемом М. Диксона и Э. Уэбба [5], результаты использования которого представлены в табл. 3. Здесь видно, что при всех сочетаниях (исключая сочетания с витамином С) обнаруживается неполная суммация эффектов на ТкТР.
Во всех сочетаниях, включающих витамин С, выявился антагонизм во влиянии на степень изменения ТкТР или отсутствует суммация эффектов (в случае сочетания витаминов Е и С). Исключение составляет лишь сочетание всех пяти исследуемых витаминов - здесь обнаружился относительно небольшой, по-крайней мере, меньший, чем в других случаях, прирост ТкТР.
Дело в том, что витамин С в высоких дозах проявляет прооксидантные свойства, активируя ЛПО и ускоряя НВСК, что снижает ТкТР [12]. В связи с этим возник вопрос, не связано ли ограничение влияния на ТкТР с этим свойством высоких доз витамина С. Чтобы ответить на этот вопрос мы провели опыт, в котором животные получали комбинацию из пяти витаминов, с той разницей, что витамин С вводили в количестве, проявляющем антиоксидантную активность, - 22 мг/кг, т.е. в четырехкратном против потребности количестве (табл. 4). В этом случае ТкТР у животных увеличилась до 232,0 ± 5,1 (т.е. на 132 %), следовательно, в большей степени, чем в случае введения того же сочетания, содержащего витамин С в восьмикратной дозе (сравнить с табл. 3, где видно, что в аналогичных условиях толерантность к тромбину выросла только на 98,0 ± 4,8 %).
Таким образом, снижение дозы витамина С с 8-кратной до 4-кратной (в сочетании из пяти витаминов) увеличило влияние на толерантность к тромбину.
Видимо, ограничение прироста эффекта в присутствии витамина С в сочетании, в количестве, превосходящем потребность в 8 раз, связано тем, что эта доза не обладает прооксидантными свойствами.
Таблица 3
Сдвиг (в процентах к контролю) величин ТкТР (выделены полужирным шрифтом) при введении витаминов А, Е, В12, В5 и С порознь и в сочетаниях по два, три, четыре и пять в течение 8 недель (доза каждого витамина 8-кратна против суточной потребности)
Вводили порознь витамины Сдвиг ТкТР при введении витаминов порознь, %, п= 10 Степень сдвига ТкТР и характер взаимодействия при попарном введении витаминов, п =10 Степень сдвига ТкТР и характер взаимодействия при введении витаминов в сочетаниях по три, четыре и пять, п = 10
А 54 Вводили (А+Е) 74 (неполная суммация) Вводили (Е+С+В5) 46 (антагонизм)
Е 42 Вводили (А+Вп) 59 (неполная суммация) Вводили (Е+С+А) 98 (антагонизм)
Ви 28 Вводили (А+В5) 65 (неполная суммация) (Е+С+В12) 89 (антагонизм)
В5 33 Вводили (А+С) 48 (антагонизм) Вводили С+В5+А) 76 (антагонизм)
с 12 Вводили (Е+Вп) 54 (неполная суммация) Вводили (С+В5+В12) 48 Вводили (антагонизм)
Вводили (Е+В5) 39 (неполная суммация) Вводили (В5+А+В12) 65 (неполная суммация)
Вводили (Е+С) 40 (отсутствие суммации) Вводили (Е+С+В5+В12) 78 (антагонизм)
Вводили (В12+В5) 54 (неполная суммация) Вводили (Е+С+В5+А) 81 (антагонизм)
Вводили (В12+С) 28 (антагонизм) Вводили (С+В5+В12+А) 78 (антагонизм)
Вводили (В5+С) 37 (антагонизм) Вводили (Е+С+В5+В12+А) 98 (антагонизм)
Примечание. После выделенных полужирным шрифтом чисел в столбцах 3 и 4 в скобках указан характер взаимодействия, установленный с помощью уравнения Уэбба [6].
Проблемы здравоохранения
Таблица 4 Значения ТкТР при введении сочетания витаминов (А, Е, В5, и В12 в 8-кратном, и С в 4-кратном избытке) в течение 8 недель
ТкТР в контроле (п = 10) Крысы (п = 5 на каждом этапе) получали в избытке витамины
100 ±4,1 232 ±5,1*
*Достоверное отличие от контроля.
Выводы
1. Наиболее часто используемые в практике витамины-антиоксиданты в дозах, эквивалентных лечебным, примерно в одинаковой степени повышают толерантность животных к тромбину, т.е. их способность адекватно реагировать на воздействия, ускоряющие тромбинообразование.
2. При введении тех же витаминов во всех возможных сочетаниях их эффекты на толерантность к тромбину суммируются, исключая сочетания с витамином С в дозах, проявляющих проок-сидантные свойства.
3. При введении витаминных сочетаний, включающих витамин С, у лиц с наклонностью к тром-бофилии следует избегать использования доз, проявляющих прооксидантные свойства.
Литература
1. Буковская, А.Я. Влияние аскорбиновой кислоты на тромбообразующие свойства крови при применении её у больных атеросклерозом: авто-реф. дис. ... канд. мед. наук/А.Я. Буковская. - М., 1959.-23 с.
2. Бышевский, А.Ш. Витамины и гемокоагуляция / А.Ш.Бышевский. - Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство, 1978. —124 с.
3. Влияние аскорбиновой кислоты на липид-пероксидацию и внутрисосудистое свертывание крови при гипероксидации / А.В. Багумян, А.Ю. Рудзевич, М.К. Умутбаева и др. // Зависимость гемостаза от С-витаминной обеспеченности организма. — М.: Медицинская книга, 2007. — С. 7-71.
4. Бышевский, А.Ш. Антиоксиданты в коррекции гемокоагуляционных сдвигов / А.Ш. Бышевский, М.К Умутбаева, Р.Г. Алборов. — М.: Медицинская книга, 2004. — 79 с.
5. Диксон, М. Ферменты /М. Диксон, Э. Уэбб. — М.: Мир, 1966. - 816 с.
6. Забара, Е.В. Влияние ниацина на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину: автореф. дис. ... канд. мед. наук / Е.В. Забара. - Тюмень, 2009. - 26 с.
7. Зороастрова, Н.Н. Содержание маркеров внутрисосудистого свертывания крови, коагуляционная активность тромбоцитов и липидперок-сидация у беременных и родильниц с поздним гес-тозом: автореф. дис. ... канд. мед. наук / Н.Н. Зороастрова. — Тюмень, 2006. — 23 с.
8. Лычковский, М.Л. Материалы к вопросу о гемофилии: дис. ... д-ра мед. наук / М.Л. Лычковский.-СПб., 1911.-311 с.
9. Матейкович, Е.А. Влияние половых стероидов (этинилэстрадиола и левоноргестрела) на взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Тюмень, 2006.-21 с.
10. Мищенко, В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и гемостаз / В.П. Мищенко, И.В. Мищенко, О.И. Цебржинский. - Полтава: АСМИ(Украина), 2005. -159 с.
11. Неспецифическая коррекция изменений гемостаза при заболеваниях, протекающих с гиперкоагуляцией / Е.М. Шаповалова, И.В. Зверева, А.Ш. Бышевский и др. // Актуальные проблемы науки и образования, III научная международная конференция.-Варадеро (Куба), 20-30 марта 2008.
12. Пустынников, А.В. Витамин С, липидпе-роксидация и непрерывное внутрисосудистое свертывание крови / А.В. Пустынников, Е.М. Шаповалова, А.Ю.Рудзевич / Современные наукоемкие технологии. — 2007. - № 11. — С. 99—100.
13. Способ определения толерантности животных к тромбину / А.Ш. Бышевский, Л.В. Михайлова, П.Я. Шаповалов и др. // Патент № 2219546, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003.
Поступила в редакцию 16 февраля 2009 г.
