CC BY
55
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ГАСТРОЭНТЕРОЛОГИЯ
experimental gastroenterology
ВЛИЯНИЕ СХЕМ КВАДРИТЕРАПИИ ВТОРОЙ ЛИНИИ НА ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ НЕКОТОРЫХ ФАКТОРОВ ЗАЩИТЫ В СЛИЗИСТОЙ ЖЕЛУДКА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЯЗВЕ
Якубов А. В., Пулатова Н. И., Хамраев А. А.
Ташкентская медицинская академия
Пулатова Наргиза Ихсановна
E-mail: nargizahon13@yahoo.com
РЕЗЮМЕ
Цель исследования. Изучить влияние схем квадритерапии второй линии на состояние слизистого барьера желудка и систему NO образования при экспериментальной язве.
Материалы и методы. В исследование включено 60 белых крыс-самцов смешанной популяции массой 150-190 г. Изучено влияние стандартных схем терапии второй линии на содержание фракций НГП, показатели системы NO образования и анаэробного гликолиза в слизистой ткани желудка при экспериментальной язве.
Результаты. Квадритерапия, включающая омепразол, де-нол, амоксициллин и тетрациклин, стимулирует механизмы защитного барьера, оказывает положительное влияние на механизмы NO образования. Схема из омепразола, де-нола, тетрациклина и метронидазола подавляет синтез слизистого барьера, ингибирует ключевые механизмы NO образования.
Заключение. Квадритерапия с омепразолом, де-нолом, амоксициллином, тетрациклином эффективна для коррекции механизмов цитопротекции в слизистой желудка. Ключевые слова: экспериментальная язва; лечение; цитозащита; окись азота.
SUMMARY
The aim of investigation. To study the effect of schemes second line quadruple therapy on the state of gastric mucosal barrier and NO formation in experimental ulcer.
Material and methods. The study included 60 white male rats weighing 150-190 gr, mixed population. The effect of the standard second-line regimens on the content of the fractions of insoluble glycoproteins, on indicators of NO formation and anaerobic glycolysis in gastric mucosal tissue in experimental ulcer. Results. Quadruple therapy consisting of omeprazole, de-nol, amoxicillin and tetracycline stimulates mechanisms of protective barrier, which has a positive effect on the mechanisms of NO formation. Scheme with omeprazole, de-nol, tetracycline and metronidazole inhibits the synthesis of mucosal barrier, the key mechanisms of NO formation.
Conclusion. In the plan of correction of mechanisms of cytoprotection in the gastric mucosal tissue quadruple therapy with omeprazole, de ethanol, amoxicillin, and tetracycline is considered to be effective. Keywords: experimental ulcer; treatment; cytoprotection; nitric oxide.
OJ
Язвенная болезнь — гетерогенное хроническое рецидивирующее с различной периодичностью заболевание, с разными вариантами течения и прогрессирования, у части больных приводящее к осложнениям. Основные факторы риска развития язвенной болезни — генетическая предрасположенность и нарушение равновесия между факторами агрессии и защиты. Агрессивными факторами являются кислота, пепсин, желчные кислоты, протеазы панкреатического сока и нарушение моторики гастродуоденальной системы, инфекция Helicobacter pylori (Нр). Согласно данным литературы, изучается в основном влияние противоязвенной терапии на факторы агрессии. Действие же различных схем эрадикационной терапии на факторы защиты практически не изучено, а результаты исследований зачастую носят противоречивый характер. Так, по одним данным
[1], успешная эрадикация Нр приводит к нормализации состояния слизистой оболочки желудка в 51,2% случаев. Другие исследователи какой-либо разницы в состоянии слизистой оболочки желудка у больных, у которых 7 лет назад была успешно проведена эрадикация Нр, и больных, которым эрадикация Нр не проводилась, не обнаружили
[2]. Как утверждает И. М. Белова и соавт. [3], эра-дикационная антимикробная терапия задерживает репарацию язвенных дефектов слизистой. А. В. Канонова и соавт. [4] при эрадикационной терапии хронических гастритов наблюдали повышение индекса апоптоза. Эти факты свидетельствуют о необходимости изучения влияния эффективности схем противоязвенной терапии второй линии на факторы защиты в слизистой гастродуоденальной зоны.
Цель исследования — изучить влияние схем квадритерапии второй линии на состояние слизистого барьера желудка и системы NO образования при экспериментальной язве.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования проводили на 60 белых крысах-самцах смешанной популяции массой 150-190 г, которые содержались в виварии на обычном рационе. Экспериментальную язву (ЭЯ) воспроизводили по методу В. А. Вертелкина в модификации И. А. Лосева и соавт. [5]. Выполнено две серии экспериментов в 5 группах животных по 6 особей в каждой: 1-я группа — интактная; 2-я группа — ЭЯ; 3-я группа — ЭЯ + Н2О (без лечения); 4-я группа — ЭЯ + омепрозол + де-нол + амокси-циллин + тетрациклин; 5-я группа — ЭЯ + оме-празол + де-нол + тетрациклин + метронидазол. Используемые препараты вводили перорально в виде водной суспензии в течение 10 дней в следующих дозах: омепразол 50 мг/кг [6], де-нол 10 мг/кг [7], метронидазол 50 мг/кг [8], тетрациклин 50 мг/ кг [9], амоксициллин 40 мг/кг [10]. Применяемые схемы рекомендованы третьим Маастрихтским
соглашением. Интактную группу составили ложнооперированные животные, контрольной группой служили животные с ЭЯ, которые в течение 10 дней получали Н2О.
Для проведения биохимических исследований животных забивали под эфирным наркозом путем одномоментной де-капитации. Желудок извлекали, очищали и промывали холодным физиологическим раствором, удаляли преджелудок, выскабливали слизистый слой, взвешивали и гомогенизировали в физиологическом растворе. Содержание нерастворимых гли-копротеинов (НГП) в гомогенате оценивали по содержанию сиаловых кислот и фукозы. Сиаловые кислоты определяли по методу Л. И. Линевика [11], фукозу — методом, предложенным П. Д. Рабиновичем и соавт. [12], содержание общего белка — по методу O. H. Lowry и соавт. [13].
Образование NO в слизистой ткани желудка изучали путем определения содержания его продуктов нитритов и нитратов [14] в ми-кросомальной фракции гомогената. Содержание аминокислоты L-аргинина определяли в надо-садочной фракции гомогената слизистой по методу A. Steven и соавт. [15], активность маркеров NO синтазы — НАДФ-Н-диафоразы — по методу V. T. Hope и соавт. в модификации А. С. Комарина и соавт. [16].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В табл. 1 представлены результаты изучения влияния стандартных схем терапии второй линии на содержание фракций НГП в слизистой ткани желудка при экспериментальной язве.
Как видно из таблицы, при экспериментальной язве содержание НГП и его фракций в слизистой ткани желудка значительно снижалось. Содержание сиаловых кислот уменьшалось в 2,3 раза, фукозы и общего белка — соответственно в 3 и 2 раза. В сумме содержание НГП в 1 мл суспензии слизистой ткани было в 2,2 раза ниже, чем у интакт-ных животных. У животных группы без лечения эти показатели практически не менялись.
Квадритерапия, включающая омепразол, де-нол, амоксициллин и тетрациклин, стимулировала синтез слизистого барьера. У крыс этой группы содержание сиаловых кислот было выше, чем у животных без лечения, на 89,0%, фукозы — на 116,6%, общего белка — на 67,8%. Сумма фракций НГП увеличивалась на 77,5%.
При применении другой схемы квадритерапии: омепразол + де-нол + тетрациклин + метронидазол результаты были несколько иными, то есть эта схема оказывала на синтез НГП слизистого барьера ингибирующий эффект. По сравнению с группой без лечения у животных этой группы содержание сиаловых кислот снижалось на 38,0%, фукозы — на
Б >
ст
So L с
01
0£ QJ CT
Н1Ё
91
h £
и
га
L Б
га
X
j
га н
X
ш
2 S а ш с и
V
m
m
Таблица 1
СОДЕРЖАНИЕ ФРАКЦИЙ НЕРАСТВОРИМЫХ ГЛИКОПРОТЕИНОВ В СЛИЗИСТОЙ ЖЕЛУДКА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЯЗВЕ
Группа животных Сиаловые кислоты, мкг/мл Фукоза, мг/мл Общий белок, мг/мл Сумма фракций НГП, мкг/мл
Интактная 3,44 ± 0,178 5,66 ± 0,25 15,42 ± 0,75 21083,4
ЭЯ 1,52 ± 0,11а 1,89 ± 0,12а 7,51 ± 0,46а 9401,5
ЭЯ + Н2О 1,74 ± 0,182а 2,11 ± 0,19а 8,44 ± 0,37а 10551,7
ЭЯ + О + Д + А + Т 3,29 ± 0,187б 4,57 ± 0,28аб 14,16 ± 0,65аб 18733,2
ЭЯ + О + Д + Т + М 1,08 ± 0,031аб 1,34 ± 0,12аб 6,10 ± 0,38аб 9441,78
Таблица 2
ПОКАЗАТЕЛИ СИСТЕМЫ N0 ОБРАЗОВАНИЯ В СЛИЗИСТОЙ ЖЕЛУДКА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЯЗВЕ
Группа животных Продукты ЫО, мкмоль/ мг белка L-аргинин, нмоль/мг белка НАДФ^Н-диафораза, нмоль/мин/мг белка
Интактная 9,14 ± 0,65 19,55 ± 0,681 8,40 ± 0,63
(ЭЯ) 3,16 ± 0,19 8,34 ± 0,48 4,70 ± 0,22
ЭЯ + Н2О 4,28 ± 0,21 9,26 ± 0,55 4,56 ± 0,28
ЭЯ + О + Д + А + Т 10,53 ± 0,60б 20,34 ± 0,968б 9,11 ± 0,55б
ЭЯ + О + Д + Т + М 4,12 ± 0,24 12,46 ± 0,60б 3,13 ± 0,17б
Примечание к табл. 1 и 2: р < 0,05: а — по сравнению с показателями интактной группы; б — по сравнению с данными животных без лечения. О — омепразол, Д — де-нол, А — амоксициллин, Т — тетрациклин, М — метронидазол.
36,5%, общего белка — на 27,8%. Сумма фракций НГП уменьшалась на 22,6%.
Результаты изучения влияния стандартных схем терапии второй линии на показатели системы N0 образования в слизистой ткани желудка при экспериментальной язве представлены в табл. 2.
Как видно из таблицы, при экспериментальной язве содержание продуктов N0 снижалось почти в 3 раза. У животных группы без лечения наблюдалось некоторое увеличение продуктов N0 (> 0,05). Экспериментальная язва сопровождалась снижением содержания L-аргинина в 2,1 раза, активности НАДФ-Н-диафоразы — в 1,8 раза.
При применении квадритерапии наиболее эффективной оказалось схема с омепразолом, де-нолом, амоксициллином и тетрациклином. У крыс этой группы содержание продуктов N0 было выше, чем у животных без лечения, на 146,0%. Полученные результаты недостоверно отличались от результатов интактной группы.
В группе животных, леченных омепразолом, де-нолом, тетрациклином и метронидазолом, содержание продуктов N0 не менялось.
Обе примененные нами стандартные схемы увеличивали содержание Ь-аргинина, но схема
с омепразолом, де-нолом, амоксициллином и тетрациклином оказалась более эффективной. Однако эти схемы действовали на активность НАДФ-Н-диафоразы разнонаправленно. Квадритерапия с омепразолом, де-нолом, амоксициллином, тетрациклином достоверно увеличивала активность НАДФ-Н-диафоразы. Схема с омепразолом, де-нолом, тетрациклином, метронидазолом оказывала на активность НАДФ-Н-диафоразы ингибирующий фармакодинамический эффект.
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Установлено, что из факторов «защиты» в развитии ульцерогенеза наряду с кровотоком, системой N0 образования особую роль играет защитный слизистый барьер, на 95% состоящий из НГП. В составе НГП большое значение имеют такие углеводные компоненты, как фукоза и сиаловые кислоты, обеспечивающие упругость и вязкость слизистого барьера [17].
При применении квадритерапии, включающей омепразол, де-нол, амоксициллин и тетрациклин, отмечалось увеличение содержания НГП.
Вероятно, это обусловлено примечательными свойствами де-нола. Как известно, препараты висмута оказывают на слизистую желудка и двенадцатиперстной кишки цитопротективное действие, повышая локальный синтез простагландина Е (в среднем на 50%), что в свою очередь увеличивает секрецию бикарбонатов и слизи, улучшает микроциркуляцию в слизистой, стимулирует ангиогенез, поддерживает реконструкцию внеклеточного матрикса, оказывает противовоспалительное действие [18].
Квадритерапия, состоящая из омепразола, де-нола, тетрациклина и метронидазола, подавляла механизмы защитного барьера. Эти результаты согласуются с утверждением И. М. Беловой и соавт. [3], которые отмечают, что схемы тройной и ква-дритерапии, включающие омепразол, метронида-зол и фуразолидон, обладают довольно активным эрадикационным и антисекреторным действием, однако при этом они отрицательно влияют на механизмы цитопротекции. Аналогичное мнение высказывают и другие авторы [19; 20]. Видимо, при квадритерапии с омепразолом, де-нолом, амокси-циллином и тетрациклином ингибирующий эффект омепразола не проявляется, а преобладает стимулирующий эффект де-нола.
Установлено, что одним из важных факторов цитозащиты в слизистой гастродуоденальной зоны является N0. Состояние N0 образования представляет собой основное звено обеспечения микроциркуляции. Сообщают, что недостаточное функционирование системы N0 образования служит основополагающим патологическим фактором ульцерогенеза [21; 22]. Устойчивость к экзо- и эндогенным факторам слизистой оболочки желудка в значительной мере зависит от регионарного кровотока.
А. С. Абасова [23] и Э. М. Эседов [24], изучавшие содержание продуктов окиси азота в желудочном соке при применении различных схем
эрадикационной терапии у больных с язвенной болезнью, отмечают, что лучшей комбинацией для коррекции синтеза N0 является тройная терапия омепразолом, кларитромицином и амоксициллином, а при применении тройной терапии оме-празолом, кларитромицином и метро-нидазолом содержание продуктов N0 в желудочном соке снижается. Авторы утверждают, что схемы, содержащие омепразол и метронидазол, подавляют синтез N0. Это мнение подтверждают результаты, полученные нами при применении квадритерапии, включающей омепразол, де-нол, тетрациклин и метронидазол.
Данные наших исследований аргументированно свидетельствуют о том, что при комбинированном применении омепразола с де-нолом, амоксициллином, тетрациклином ингибирующий фармакодинамический эффект омепразола на ключевые механизмы N0 образования не проявляется. В случае комбинации омепразола с метронидазолом (омепразол + де-нол + тетрациклин + метронидазол) ингибирующие эффекты омепразола, метронидазола проявляются в виде фармакодинамического синергизма.
ВЫВОДЫ
1. Квадритерапия, включающая омепразол, де-нол, амоксициллин и тетрациклин, стимулирует синтез слизистого барьера желудка, что обусловлено положительным влиянием этой схемы на механизмы N0 образования.
2. Квадритерапия с омепразолом, де-нолом, тетрациклином, метронидазолом ингибирует ключевые механизмы N0 образования, что приводит к снижению синтеза нерастворимых гликопротеи-нов в слизистом барьере желудка.
Б >
ст
So L с
01
0£
QJ о
Н1Ё
91
h £
и
га
L Б
га
X
*
га н
X
ш
2 S а ш с и
v
m
ЛИТЕРАТУРА
1. Zerbib, F. Study of Helicobacter pullorum proinflammatory properties on human epithelial cells in vitro / F. Zerbib, F. Megraud, C. et al. Varon // Gut. — 2009. — Vol. 58, № 5. — Р. 629-635.
2. Forbes, J. Use of spinal manipulative therapy in the treatment of duodenal ulcer: a pilot study / J. Forbes // J. Manipulative Physiol. Ther. — 1995. — Vol. 18, № 9. — Р. 637-638.
3. Белова, И.М. Фармакотерапевтическая эффективность антисекреторных и эрадикационных схем в лечении язвенной болезни, ассоциированной с Helicobacterpylori / И. М. Белова, О. Л. Белова // Клиническая фармакология в России: достижения и перспективы: Мат. науч. — практ. конф. — М., 2004. — С. 23-25.
4. Канонов, А. В. Цитопротекция слизистой оболочки желудка: молекулярно-клеточные механизмы / А. В. Канонов // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. — 2006. — № 3. — С. 12-16.
5. Лосев, И. А. Влияние холинопотенцирующих средств на репа-ративные процессы в поврежденной слизистой оболочке желудка крыс / И. А. Лосев, И. Н. Кузнецова // Эксперим. и клин. фармакол. — 1992. — № 5. — С. 15-17.
6. Даминов, Ш. Н. Сравнительная оценка действия кваматела и оме-за на систему глутатиона различных отделов пищеварительной системы при экспериментальной язве двенадцатиперстной кишки / Ш. Н. Даминов, Ф. Х. Иноятова // Эксперим. и клин. фармакол. — 1998. — № 4. — С. 26-28.
7. Lambert, J. R. Pharmacology of bismuth containing compounds / J. R. Lambert // Rev. Infec. Dis. — 1991. — Vol. 13, № 8 (Suppl.) —
Р. 691-695.
8. Гавриленко, Я.В. К вопросу о лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки метронидазолом (клинико-экспериментальное исследование) / Я. В. Гавриленко, В. Е. Вазило, Е. М. Паршков // Тер. арх. — 1976. — № 5. — С. 74-79.
9. Moses, O. Systemic tetracycline delays degradation of the three different collagen membranes in rat calvaria / O. Moses, A. Shemesh, G. Aboodi et al. // Clin. Oral. Implants Res. — 2009. — Vol. 20, № 2. — Р. 189-195.
10. Luths, S. 4-day triple therapy with rabeprozole, amoxicillin and claritromycin in the eradication of Helicobacter pylori in patients with peptic ulcer disease — a pilot study / S. Luths, S. Teyssen, C. B. Kalbel, M. V. Singer // Gastroenterology. — 2001. — Vol. 39, № 4. — Р. 279-281, 284-285.
11. Линевик, Л. И. Успехи биологической химии / Л. И. Линевик. — М., 1962. — Т. 4. — 199 с.
12. Рабинович,П. Д. Биологическое окисление и основные функции желудка у больных язвенной болезнью / П. Д. Рабинович, П. В. Ли-люшкин // Тер. арх. — 1979. — № 11. — С. 103-105.
13. Lowry, O. H. Protein measurement with the folin phenol reagent / O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr, R. J. Randoll // J. Biol. Chem. — 1951. — Vol. 193, № 1. — Р. 265-275.
LЛ
•о
14. Green, L. C. Analysis of nitrate, nitrite and [15N] nitrete in biological fluids / L. C. Green, D. A. Wanger, A. L. Glowsky et al. // Analyt. Bio-chem. — 1982. — Vol. 126. — Р. 131-138.
15. Steven, A. Amino Acid Analysis utilizing Fhenglysotiocyanata Derivatives / A. Steven, D. J. Cohen // Analyt. Biochem. — 1988. — Vol. 17, № 1. — Р. 11-16.
16. Комарин, А. С. Диагностическое значение определения нитратре-дуктазной активности и продуктов оксида азота при острых токсических поражениях печени: Метод. рекомендации / А. С. Комарин, В. Н. Горбунов, Л. Т. Даминова. — Ташкент, 2001. — 13 с.
17. Лапина, Т. Л. Возможности лекарственного взаимодействия на цитопротективные свойства гастродуоденальной слизистой оболочки / Т. Л. Лапина // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., ко-лопроктол. — 2006. — № 5. — С. 75-80.
18. Лапина, Т.Л. Возможности лекарственного воздействия на цитопротективные свойства гастродуоденальной слизистой оболочки / Т. Л. Лапина // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. — 2006. — № 5. — С. 2-7.
19. Канонов, А. В. Морфология поверхностного и атрофического гастрита при эрадикации Helicobacter pylori / А. В. Канонов, С. И. Мозговой, М. А. Лизван и др. // Арх. пат. — 2005. — Т. 67, № 3. — С. 17-20.
20. Хамраев, А. А. Некоторые механизмы рубцевания язвы желудка при применении различных схем противоязвенной терапии / А. А. Хамраев // Самарский мед. журн. — 2005. — № 1-2. — С. 75-76.
21. Руденко, С. А. Влияние антисекреторной терапии на метаболизм оксида азота у больных кислотозависимыми заболеваниями / С. А. Руденко, С. В. Чепур, О. А. Саблин, Н. А. Старосельская // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. — 2004. — № 2-3. — С. 124-125.
22. Сернеховская, Н. Е. Комплексное лечение язвенной болезни с помощью оксида азота / Н. Е. Сернеховская, В. К. Шишло, Д. М. Че-репянчев и др. // Аллергол. и иммунол. — 2005. — № 2. — С. 253.
23. Абасова, А. С. Комплексный анализ влияние схем эрадикацион-ной терапии на активность оксида азота в желудочном соке у больных с гастродуоденальными заболеваниями, ассоциированными с Helicobacter pylori / А. С. Абасова // Антибиотикорезистентность и антимикробная химиотерапия: Мат. 2-й Всерос. науч. — практ. конф. — Махачкала, 2008. — С. 23-24.
24. Эседов, Э. М. Влияние различных схем эрадикационной терапии на активность оксида азота в желудочном соке у больных хеликобак-тер-ассоциированными заболеваниями гастродуоденальной зоны / Э. М. Эседов // Врач XXI века: сегодня и завтра: Съезд терапевтов Юга России. — Ростов н/Д, 2009. — С. 96-97.
