CC BY
45
Влияние селенсодержащих препаратов на структурно-функциональное состояние яичников норок
Л.В. Иванова, аспирантка, Т.И. Лапина, д.б.н., профессор, Ставропольский ГАУ
На сегодняшний день селен признан незаменимым микроэлементом для организма. Он участвует в окислительно-восстановительных процессах, обладает антиоксидантным, противовирусным и антитоксическим действием. Селен привлекает внимание специалистов животноводства как биотический эссенциальный элемент, крайне необходимый для роста, развития и существования животных.
В настоящее время препараты селена широко применяются в качестве повышения воспроизводительной функции животных, улучшения их качественных показателей, сохранности потомства. Нами для эксперимента были выбраны препараты «Е-селен» и «Селенолин®».
Препарат «Е-селен» представляет собой воднодисперсный комплекс витамина Е и неорганической формы селена в виде селенита натрия. «Се-ленолин®» — лечебно-профилактический препарат нового поколения, создан на основе селеноорганического соединения. «Селенолин®» нами применяется на пушных зверях впервые.
Целью эксперимента является изучение структурно-функционального состояния яичников норок при применении селенсодержащих препаратов.
Объект и методы исследования. Научно-практический эксперимент проводили на половозрелых самках норок, принадлежащих ЗАО «Лесные ключи» Шпаковского района Ставропольского
края. Эксперимент проводили в 2 этапа. На 1 этапе половозрелым норкам вводили селенсодержащие препараты до гона. Их влияние оценивали по качеству полученного потомства. На 2 этапе эксперимента по принципу аналогов были сформированы 3 группы (по 22 гол. половозрелых самок в каждой). Первая группа служила контролем, норкам 2-й группы применяли препарат «Е-селен» в дозе 0,04 мл/гол. за месяц до убоя. Самкам 3-й группы вводили препарат «Селенолин®» в дозе 0,01 мл/гол. за месяц до убоя. Ввиду применения малых доз «Е-селен» разводили стерильной водой, «Селенолин®» — стерильным маслом. Препараты инъецировали внутримышечно во внутреннюю сторону бедра.
Для гистологических и гистохимических исследований отбирали яичники самок норок 2 этапа опыта. Органы фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине и жидкости Карнуа с последующей заливкой в парафин. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм изготавливали по общепринятым методикам, окрашивали гематоксилином и эозином для обзорных исследований, ставили комбинированную ШИК-реакцию с альциановым синим для выявления углеводсодержащих биополимеров [1].
Результаты исследования. Гистологические и цитологические исследования яичников самок норок показаны в работах О.В. Александровском (1987).
Яичник — половая железа, выполняющая экзокринную и эндокринную функции. Первая сводится к образованию яйцеклеток (оогенез),
вторая — к циклической секреции женских половых гормонов — эстрогена и прогестерона [2].
При микроскопическом исследовании выявили, что яичник самок норок контрольной группы состоит из коркового и мозгового вещества. Сверху яичник покрыт однослойными эпителиальными клетками кубической формы. Ядра эпителиоцитов имеют округлую или овальную конфигурацию. Площадь ядра клеток покровного эпителия составляет 12,3±0,4 мкм2, размеры протоплазмы — 20,65±0,6 мкм2 и ядерно-протоплазменное отношение — 0,59±0,1. Расположенная под эпителием белочная оболочка состоит из соединительной ткани. От белочной оболочки внутрь яичника отходят тонкие соединительнотканные прослойки.
Отличительной особенностью гистологической структуры яичника норок от других животных является то, что основу коркового и мозгового вещества составляют интерстициальные клетки, которые по строению сходны с эпителиальными клетками. Они лежат обычно группами. Клетки стромы яичника имеют округлое ядро, хроматин в них мелкозернистый, форма клеток полигональная. Они располагаются в виде тяжей, напоминают выводные протоки и концевые отделы трубчато-альвеолярных желез. В яичниках самок интактной группы эти структуры располагаются рыхло. Корковое и мозговое вещество имеет обильную васкуляризацию. В строме коркового вещества яичника норок контрольной группы лежат временные морфологические структуры: примордиальные фолликулы, развивающиеся фолликулы, атретические фолликулы и тела.
На периферии коркового вещества под белочной оболочкой располагаются примордиальные фолликулы, часто группами. «Покоящийся» фолликул представлен ооцитом с крупным ядром, окружен одним слоем плоских малоактивных фолликулярных клеток. Количество примордиальных фолликулов на площади среза яичника у норок контрольной группы составляет 38,7±7,9.
В корковом веществе также находятся первичные и вторичные фолликулы, которые прослеживаются и до мозгового вещества, что, по нашему мнению, является спецификой гистостроения овариальных желез норок.
Наличие третичных, или преовуляторных фолликулов (Граафовых пузырьков), желтых тел у норок контрольной группы мы наблюдали лишь в единичных случаях.
Вокруг ооцита первичного фолликула образуется блестящая оболочка, что является отличительным признаком от «покоящегося» фолликула. Фолликулярные клетки приобретают кубическую форму и лежат в 1—2 слоя. Количество первичных фолликулов на площади среза варьирует от 2 до 4.
Вторичные фолликулы представлены ооци-том, окруженным блестящей оболочкой, в котором фолликулярный эпителий становится многослойным. Во вторичном фолликуле появляются первые признаки развития мелких полостей между фолликулярными клетками, заполненных жидкостью. Последняя секретируется фолликулярными клетками, и именно ее накопление приводит к образованию полостей. На площади среза вторичных фолликулов встречается от нуля до двух.
Обращает на себя внимание присутствие большого количества атретических тел (30,25±6,7 на площади среза яичника). Наблюдается атрезия растущих фолликулов (до 3-х на площади одного среза).
Существующие мнения ученых о начале процесса атрезии носят противоречивый характер. У норок нами отмечены два типа атрезии растущих фолликулов. В первом случае атрезия фолликулов начинается с замещения их интерстициальными клетками стромы, и только потом гибнет ооцит. Во втором случае процесс атрезии начинается с гибели ооцита путем развития глубоких необратимых структурных изменений. Затем разрушается фолликулярный эпителий, и он замещается интерстициальными клетками стромы. При атрезии антральных фолликулов (вторичных фолликулов с полостями), по нашему мнению, их полость прорастает соединительнотканными клетками, фолликулярные клетки подвергаются дегенеративным изменениям, затем происходит гибель ооцита.
При постановке ШИК-реакции выявили много положительных веществ (++++) в оболочке атретических тел. В блестящей оболочке вторичных и первичных фолликулов несколько меньше (+++). Вещества, содержащие гликоза-мингликаны, выделяют фолликулярные клетки вторичного фолликула. Между эпителиальными структурами имеются гладкомышечные клетки, в них ШИК-положительных веществ меньше (+++). В стенке кровеносных сосудов — (++), незначительное количество этих веществ в интерстициальных клетках, которые составляют строму яичника. Клетки покровного эпителия яичника с крупным овальным ядром — выделяют ШИК-позитивные вещества на (0,5 — +).
При микроскопии гистосрезов яичников норок испытуемых групп установили следующую картину. Ядра эпителиоцитов покровного эпителия также имеют округлую или овальную конфигурацию, но клетки с крупным овальным ядром встречаются значительно чаще. По морфометрическим показателям эпителиоциты покровного эпителия фактически не отличались от таковых в контроле. Площадь ядра клеток покровного эпителия у норок с применением «Е-селена» составляет 12,5±0,4 мкм2, величина протоплазмы —
20,7±0,7 мкм2 и ядерно-протоплазменного отношения — 0,6±0,1. Размеры ядра эпителиоцитов у норок с применением «Селенолина» соответствуют 13±0,4 мкм2, протоплазмы — 19,1±0,5 мкм2 и ядерно-протоплазменного отношения — 0,67±0,1. Разница показателей между группами статистически недостоверна (Р<0,5).
Отличительной особенностью гистологической композиции яичника норок опытных групп от контрольной является то, что составляющие строму эпителиальные (интерстициальные) тяжи располагаются более компактно.
В строме коркового вещества яичника норок опытных групп лежат функциональные структуры: примордиальные, первичные, вторичные и зрелые фолликулы, желтые тела, атретические фолликулы и атретические тела.
Выявлено увеличение количества примордиальных фолликулов (на площади среза яичника) у норок с применением «Е-селена» на 98% по сравнению с контрольной группой (76,75±5,1). Численность примордиальных фолликулов у норок с применением «Селенолина» составила 78,5±4,5, что на 102% превосходит таковой показатель в контроле и на 2,3% норок 2-й группы (при Р<0,05) (табл.).
Первичные фолликулы у самок опытных групп также прослеживаются до мозгового вещества. Их количество варьирует от 2 до 4 на площади гистосреза яичника.
Вторичные фолликулы содержат хорошо развитые полости (пузырьки). Полости подразделяют фолликулярный эпителий на две части: зернистую оболочку, окружающую ооцит, и пристеночные клетки. Текальная оболочка фолликулов хорошо развита.
У опытных животных выявлено появление антральных фолликулов до 2 на площади одного среза.
Спецификой овариальных желез норок испытуемых групп является наличие в каждом яичнике зрелых, достигших максимального развития фолликулов (Граафовых пузырьков). Количество
третичных фолликулов в яичниках норок опытных групп варьирует от 3 до 5. Граафовы пузырьки имеют типичное строение.
В овариальных железах норок с применением «Селенолина» прослеживаются преовуляторные фолликулы со стигмой (конусовидный выступ в зернистом слое фолликула), в области которой образуется разрыв во время овуляции.
Желтые тела как у самок 2-й группы, так и у 3-й находятся на разных стадиях развития. Часть их выявляется на первой стадии развития (стадия пролиферации и васкуляризации), когда полость желтого тела прорастает соединительной тканью и заполняется фолликулярными клетками. А часть их находится на стадии железистого метаморфоза, когда гранулезные клетки превращаются в лютеиновые.
Желтые тела расположены в яичниках в виде округло-овальных образований в количестве от 2 до 4 на площади одного гистосреза.
В строме яичников у норок с применением «Е-селена» количество атретических тел составляет 16,25±1,3, что на 46,3% меньше такового показателя по сравнению с контролем. Атрезия растущих фолликулов наблюдалась в единичных случаях.
Число атретических тел у самок с применением «Селенолина» составило 15,8±0,5, что на 47,76% и 2,8% меньше аналогичного показателя по сравнению с контрольной и 3-й группами соответственно (при Р<0,05).
При постановке ШИК-реакции в яичниках норок опытных групп выявили много ШИК-положительных веществ в оболочке атретических тел и в цитоплазме ооцита третичного фолликула (++++).
В эпителиоцитах покровного эпителия яичника и в блестящей оболочке первичных и вторичных фолликулов ШИК-положительных веществ несколько меньше (+++). В полости антрального фолликула содержатся гранулы ШИК-поло-жительных веществ (+++) и кислые сульфатиро-ванные углеводы, выделяемые фолликулярными
Количество временных функциональных структур в яичниках у норок опытных групп (на площади гистосреза)
Название структур Группы Примор- дальные фолликулы Первичные фолликулы Вторичные фолликулы Третичные фолликулы Желтые тела Атрети- ческие тела Атрезия растущих фолликулов
Контроль 38,7±7,9 от 2 до 4 до 2-х или отсутст. встреч. в единич. случ. встреч. в единич. случ 30,25±6,75 До 3-х
2 группа (Е-селен) 76,8±5,1* от 2 до 4 до 2-х от 3 до 5 от 2 до 4 16,25±1,3* Встречаются в единич. случ.
З группа (Селенолин®) 78,5±4,5** от 2 до 4 до 2-х от 3 до 5 от 2 до 4 15,75±0,5** Встречаются в единич. случ
(* — разница достоверна при Р<0,05 между 1 и 2 группами; ** — разница достоверна при Р<0,05 между 1 и 3 группами)
клетками. В цитоплазме примордиальных фолликулов ШИК-положительных веществ незначительное количество (+—++).
Применение селенсодержащих препаратов самкам норок до гона инициирует оогенез у их потомства, о чем свидетельствует большее количество примордиальных фолликулов у самок, полученных от норок первого этапа эксперимента. Применение селенсодержащих препаратов самкам норок обеспечивает активизацию роста фолликулов, их созревание и овуляцию, что подтверждает присутствие в их яичниках преовуля-торных фолликулов и желтых тел. В яичниках
норок с использованием «Е-селена» и «Селенолина» меньшее количество фолликулов подвергается атрезии.
Таким образом, применение самкам норок селенсодержащих препаратов оказывает стимулирующее воздействие на генеративную функцию яичников.
Литература
1. Меркулов, Г.А. Курс патологической техники / Г.А. Меркулов. Л.: Медицина, 1969. 326 с.
2. Александровская, О.В. Цитология, гистология и эмбриология / О.В. Александровская и др. М.: Агропромиздат, 1987. С. 421.
