CC BY
33
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
логическими сдвигами системного иммунитета, что предполагает применение иммуномодулирующих лекарственных средств в гинекологической практике.
Целью данного исследования явилось изучить динамику иммунологических параметров в результате комплексного лечения с включением иммунокорригирующей терапии у женщин с различной степенью ЦИН. Было обследовано 58 женщин с ЦИН I и II степени, проживающие в регионе Приаралья. Возраст обследованных женщин был в пределах 20-40 лет. Иммунологические исследования проводили до и после лечения изучением количества лимфоцитов с фенотипом CD3, CD4, CD8, СD16, CD20 с помощью моноклональных антител серии ЕГ ( Ин-т иммунологии, ТОО «Сорбент», Москва, Россия). Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли с использованием латексных частиц. Уровень иммуноглобулинов определяли методом радиальной иммунодиффузии по МапсЫт (моноспецифические сыворотки института им. Н.Ф. Гамалеи, Москва). В качестве корригирующего препарата использовали Эндоферон (ГАК «УЗФАРМСАНОАТ» РУз) и Цикло-ферон. В зависимости от вида лечения все больные были разделены на две группы: I группу составили 25 женщин, которым назначали Циклоферон в/м по схеме. II группу составили 33 пациентки, которым назначали Эндоферон в/м по схеме: по 2 мл на 1, 2, 4, 6 и 8 день лечения. При показании проводилась лазеровапоризация патологических участков шейки матки, влагалища, наружных половых органов и кондилом. Через 1 месяц курс лечения проводился повторно. Было выявлено, что при ЦИН у женщин наблюдается уменьшение числа CD4+Т-клеток (Р < 0,05), повышение содержания CD8+Т-клеток (р < 0,05), депрессия иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+ (р < 0,01). Повышение числа CD8+ клеток, по-видимому, связано с усилением цитотоксической активности в зоне диспла-зии шейки матки. Уровень CD16+ и CD20+ клеток у женщин с ЦИН был достоверно повышенным по сравнению с контрольными значениями (р < 0,01).
При исследовании гуморального звена иммунитета у обследованных женщин отмечено повышение уровня ^М (Р < 0,01) и сниженный уровень IgG и (р < 0,05). Фагоцитарная активность нейтрофилов у женщин с ЦИН была сниженной в 1,3 раза (р < 0,05). Степень выраженности количественного дефицита активно фагоцитирующих нейтрофилов была прямо пропорциональна усугублению тяжести ЦИН. Повторное исследование по изучению некоторых параметров иммунной системы показало, что лечение с включением Циклоферона способствовало положительной динамике изученных параметров. Сравнительный анализ проведенных исследований показал, что под влиянием применения Эндоферона наблюдалось восстановление содержания в крови CD3+, CD4+, CD8+ лимфоцитов, а так же индекса иммунорегуляции (CD4+/CD8+), приблизилось к норме и процентное содержание фагоцитарной активности нейтрофилов. На этом же фоне уровень CD16+ клеток достоверно снизился (Р < 0,01). Положительная динамика наблюдалась и в содержании иммуноглобулинов основных классов (Р < 0,05).
Полученные результаты свидетельствуют о повышении иммунологической эффективности проведенного комплексного лечения с включением иммунокорриги-рующих препаратов у женщин с ЦИН. Клиническая эффективность как Циклоферона, так и Эндоферона проявилось в улучшении состояния.
ВЛИЯНИЕ СЕЛЕКТИВНОГО МОДУЛЯТОРА РЕЦЕПТОРОВ ПРОГЕСТЕРОНА НА ПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ МАКРОФАГОВ ЭНДОМЕТРИЯ У ПАЦИЕНТОК С ЛЕЙОМИОМОЙ МАТКИ БОЛЬШИХ РАЗМЕРОВ
Нагорный С.Н., Воронин Д.Н., Малышкина А.И., Анциферова Ю.С., Кирсанов А.Н.
ФГБУ«Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н.Городкова» Министерства здравоохранения РФ, Иваново, Россия
Введение. Развитие и рост лейомиомы матки, доброкачественной опухоли миометрия, происходит на фоне выраженных нарушений иммунного ответа в эндометрии, непосредственно прилегающем к миометрию. Предполагают, что триггерным фактором, запускающим патологический процесс в миометрии, является прогестерон, которые через свои рецепторы регулируют в опухоли транскрипционную активность генов, ассоциированных с клеточной пролиферацией. В связи с этим, в последнее время интенсивно разрабатываются медикаментозные препараты, относящиеся к классу селективных модуляторов рецепторов прогестерона, применение которых, блокируя действие прогестерона, позволило бы добиться уменьшения размеров опухоли. Однако механизм действия этих препаратов изучен недостаточно. Нет данных о влиянии модуляторов рецепторов прогестерона на состояние и функцию фагоцитов эндометрия.
Цель и задачи. Целью исследования было установить влияние селективного модулятора рецепторов прогестерона — улипристала ацетата на уровень М1 и М2 макрофагов в эндометрии пациенток с лейомиомой матки больших размеров.
Материалы и методы. Было обследовано 37 пациенток с лейомиомой матки, из них 20 пациенток прошли курс предоперационной подготовки, получая в течение 3 месяцев 5 мг улипристала ацетата ежедневно, 17 пациенток были без предоперационной подготовки. Всем женщинам проводилось оперативное лечение лейомиомы матки. Материалом для исследования служили взятые в ходе операции биоптаты ткани миоматозных узлов и эндометрия, расположенного непосредственно под миоматоз-ным узлом и локализованного вдали от опухоли. У пациенток, получавших улипристала ацетат, эндометрий брался дважды — до начала лечения и в ходе операции. Эндометрий 10 фертильных здоровых пациенток использовали в качестве контроля. Из эндометрия выделяли популяцию мононуклеарных клеток. Уровень М1 (Ш-12+, Ш-1Р+, №N7+) и М2 (TGF-pl+, Ш-10+, CD163+) эндоме-триальных макрофагов определяли с помощью моноклональных антител методом проточной цитометрии. Кроме того, методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени в миоматозных узлах определяли экспрессию Ю-67.
Результаты. Отличительной чертой эндометрия различной локализации при лейомиоме матки больших размеров было повышенное по сравнению с контрольной группой содержание Ш-10+, ГЕ-ф+ и ^N7+ макрофагов. При этом пациентки с пролиферирующими Ю-67+ мио-матозными узлами характеризовались высоким уровнем TGF-pl+, CD163+ макрофагов и сниженным содержанием ГЕ-12+ и ^N7+ макрофагов в эндометрии, тогда как при лейомиомах с низкой пролиферативной активностью (Ю-67-) отмечался высокий уровень Ш-1Р+ и №N7+ эндометриальных макрофагов. Таким образом, проли-
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология репродукции Immunology of reproduction
феративная активность клеток лейомиомы коррелирует с содержанием М1 и М2 макрофагов в эндометрии, что свидетельствует о возможном вовлечении эндометриаль-ных макрофагов в регуляцию роста лейомиомы матки. Терапия улипристала ацетатом позволила в целом добиться уменьшения размеров опухоли, однако значимые изменения отмечались только у 60% пациенток, тогда как в 40% случаев размеры опухоли не изменялись или даже увеличивались. Связи динамики размеров узлов с активностью пролиферации опухолевых клеток мы не выявили. Анализ популяционного состава эндометриальных макрофагов показал, что уменьшение размеров опухоли в результате лечения происходило в тех случаях, когда в эндометрии изначально было повышено количество TGF-ß1+ макрофагов, а после лечения в эндометрии, расположенном в непосредственной близости от опухоли, увеличивалось содержание IFNy+ и CD163+ макрофагов. У тех пациенток, у которых происходило увеличение размеров миомы матки после лечения улипристала ацетатом, изначально в эндометрии, локализованном в непосредственной близости от опухоли, отмечалось максимально высокое содержание IL-10+, CD163+ и IFNy+ макрофагов при низком уровне IL-12+ макрофагов. После лечения у этих пациенток падало содержание CD163+ и TGF-ß1+ макрофагов вдали от узла и повышался уровень IL-12+ клеток вблизи от опухоли.
Заключение. Таким образом, эффективность терапии улипристала ацетатом зависит от изначального иммунологического фона в эндометрии. Уменьшение размеров узлов происходит в тех случаях, когда лечение приводит к сбалансированной активации М1 и М2 пулов макрофагов, тогда как увеличение размеров опухоли наблюдается при активации провоспалительных М1 клеток. (Работа поддержана грантом РФФИ № 15-04-05042).
ЗАВИСИМОСТЬ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ ЖЕНЩИНЫ ОТ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СВОЙСТВ СЕМЕННОЙ ПЛАЗМЫ ПОЛОВОГО ПАРТНЕРА
Николаева М.А., Бабаян А.А., Степанова Е.О., Смольникова В.Ю., Калинина Е.А., Иванец Т.Ю., Ванько Л.В.
ФГБУ«Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
В многочисленных экспериментальных исследованиях было установлено, что семенная плазма (СП) оказывает иммуномодулирующее действие на функции эндометрия, в связи с чем и были предприняты попытки использовать введение СП в репродуктивный тракт женщин для усиления рецептивности эндометрия и повышения эффективности программы ЭКО. Однако до сих пор не удалось подтвердить позитивное влияние введения СП партнера в цикле ЭКО/ИКСИ. Результаты экспериментальных исследований подтверждают, что содержащийся в СП трансформирующий фактор роста ß1 (TGF-ß1) является ключевым фактором формирования иммунной толерантности матери к антигенам плода, влияя на уровень регуляторных Т-клеток (Трег). Мы предположили, что эффекты введения СП могут определяться не только содержанием TGF-ß1, но и уровнем других цитоки-нов, возможно, препятствующих реализации эффектов
TGF-ß1. Ранее установлено, что антагонизм в отношении к TGF-ß1 проявляет интерлейкин-18 (IL-18)
Целью настоящего исследования явилось определение прогностической значимости определения содержания TGF-ß1 и IL-18 в СП полового партнера при оценке эффективности лечения методом ЭКО/ИКСИ и зависимости между содержанием TGF-ß1 и IL-18 в СП полового партнера и уровнем Трег с фенотипом CD4+CD25highCD127low/- в периферической крови пациенток.
В исследование были включены супружеские пары (n = 71), проходившие лечение бесплодия методом ЭКО/ ИКСИ, дополненного интравагинальным введением СП партнера в день проведения трансвагинальной пункции (ТВП). Содержание в СП цитокинов TGF-ß1 и IL-18 оценивали с использованием наборов Human TGF-ß1 и IL-18 FlowCytomix Simplex Kits (Bender MedSystems, Vienna, Австрия). Забор крови проводили в день проведения ТВП яичников. Для оценки процентного содержания Treg среди CD4+ лимфоцитов использовали стандартный набор моноклональных антител (Human Regulatory Т Cell Cocktail, Becton Dickinson, США). Количественную оценку концентраций цитокинов и уровня Treg-клеток проводили с помощью проточного цитофлюориметра FACSCalibur (Becton Dickinson, США).
У пациенток с успешным исходом лечения концентрация IL-18 в СП партнера была статистически значимо ниже по сравнению с аналогичным показателем половых партнеров женщин, у которых беременность не наступила (р = 0,018). Концентрация TGF-ß1 в СП партнеров пациенток с успешным и неудачным исходами программы ЭКО/ИКСИ не различалась. В то же время соотношение TGF-ß1/IL-18 в группе пациенток с успешным исходом лечения было значимо выше по сравнению с аналогичным показателем в группе женщин с неудачной попыткой ЭКО и составило 470±228 и 363±146, соответственно (р = 0,02). С помощью ROC-анализа было показано, что наиболее значимым предиктором успеха программы ЭКО/ИКСИ является общее содержание IL-18 в эякуляте (AUC = 75%, чувствительность и специфичность теста — 94% и 51%, соответственно). В группе пациенток, эякулят половых партнеров которых содержал относительно низкое количество IL-18 (< 1432,4 пг) частота наступления беременности была в 6,7 раз выше по сравнению с пациентками, в СП половых партнеров которых отмечался относительно высокий уровень IL-18 ( > 1432,4 пг), и составляла 61,2% и 9,1% соответственно (p < 0,0001).
Была обнаружена позитивная корреляционная зависимость между содержанием Трег клеток в день ТВП как от концентрации IL-18 (r = 0,47; p = 0,01), так и от общего количества IL-18 в эякуляте (r = 0,42; p = 0,02). При оценке корреляционной связи между содержанием Трег клеток в периферической крови пациенток в день ТВП и соотношением TGF-ß1/IL-18 в СП половых партнеров отмечалась статистически значимая обратная корреляционная зависимость (r = -0,52; p = 0,008). У пациенток с наступившей беременностью было выявлено снижение доли Treg среди CD4+ лимфоцитов по сравнению с пациентками с неудачной попыткой ЭКО/ИКСИ (P = 0,0045) - медиана составила 5,0% (3,0-7,6%) и 6,7% (3,8-14,2%) соответственно.
