CC BY
11Ученые записки Крымского федерального университета имени В. И. Вернадского Биология. Химия. Том 7 (73). 2021. № 2. С. 134-144.
УДК 612.159:615.3
ВЛИЯНИЕ САЛИЦИЛАТОВ CO2+, NI2+, ZN2+, MN2+, LI+ И MG2+ НА БОЛЕВУЮ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ САМЦОВ КРЫС
Раваева М. Ю., Черетаев И. В., Чуян Е. Н., Шехмамбетов Н. Р., Стягина Д. В., Грузинов Е. Н., Кузнецова А. А., Каширина А. В.
Таврическая академия (структурное подразделение) ФГАОУ ВО «Крымский федеральный
университет имени В. И. Вернадского», Симферополь, Республика Крым, Россия
E-mail: Shexmambetov@mail.ru
В статье представлены результаты оценки влияния салицилатов Co2+, Zn2+, Ni2+, Mn2+, Li+ и Mg2+ в дозах 5, 10 и 20 мг/кг на болевую чувствительность самцов крыс. Эксперименты проведены на 119 лабораторных крысах-самцах линии Вистар в тест-моделях острой термической боли («tail-flick» и «hot plate»). Показано, мирчто ацетилсалициловая кислота (АСК) снижает болевую чувствительность крыс на спинальном и супраспинальном уровне. Введение металлов-комплексообразователей (Co2+, Zn2+, Ni2+, Mn2+, Li+ и Mg2+) в основном приводит к снижению анальгетического действия АСК. Ключевые слова: ацетилсалициловая кислота (АСК), болевая чувствительность, анальгетический эффект, перцептуальный компонент боли, спинальный и супраспинальный механизмы регуляции боли.
ВВЕДЕНИЕ
Ацетилсалициловая кислота (АСК) уже много лет используется как не только как универсальное анальгезирующее, жаропонижающее и противовоспалительное средство [1, 2], но и как уникальный источник для получения самых различных координационных соединений, позволяющий синтезировать новые производные с металлами-комплексообразователями и различными биологически активными молекулами и лигандами [3]. Получаемые таким образом новые соединения на основе АСК лишены её отрицательных побочных эффектов и с успехом используются в качестве противоопухолевых, противовоспалительных и противомикробных веществ [4, 5].
Положительные результаты исследований биологической эффективности производных АСК позволяют считать перспективным комплексообразование на основе двухвалентных металлов и салицилатов [5], поскольку такие производные с биметаллами (Fe, Zn, Co, Cu и др.) имеют меньше побочных воздействий и большее выраженные эффекты, чем обычный аспирин.
В связи с этим целью настоящего исследования явилось выявление анальгетических эффектов салицилатов (АС) Co2+, Zn2+, Ni2+, Mn2+, Li+ и Mg2+ на пороги болевой чувствительности крыс.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Экспериментальная часть работы выполнена в Центре коллективного пользования научным оборудованием «Экспериментальная физиология и биофизика» кафедры физиологии человека и животных и биофизики Таврической академии (структурное подразделение ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В. И. Вернадского»). Животных, участвующих в эксперименте, содержали в стандартных условиях вивария при температуре 18-22 оС на подстиле «Рехофикс МК 2000» (на основе початков кукурузы) с естественным 12-часовым свето-темновым циклом, свободным доступом к воде (ГОСТ 33215-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур») и полноценному гранулированному корму ГОСТ Р-50258-92. Исследование проведено в соответствии с ГОСТ Р-53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики» и правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей.
В эксперименте использовались лабораторные крысы-самцы линии Вистар массой 200-250 г., которые были разделены на 22 группы по 7 крыс в каждой (табл. 1).
Исследуемые вещества были синтезированы на кафедре общей и неорганической химии факультета биологии и химии Таврической академии ФГАОУ «Крымский федеральный университет им. В. И. Вернадского» (химическая чистота составляла не менее 98,0 %) под руководством проф. А. Н. Гусева.
Тестирование порогов болевой чувствительности крыс проводили через 20 мин после инъекций в моделях острого болевого стресса «tail-flick» и «hot plate». Перед проведением теста «tail-flick» после инъекций животных помещали в специальные фиксаторы для крыс (AE1001-R0, НПК «Открытая Наука», Россия).
В тесте «tail-flick» оценивали перцептуальный компонент боли, основным показателем данного теста служил латентный период реакции отведения хвоста (ЛПРОХ) в ответ на свето-термальное раздражение, который определяли по значению времени (с) проявления реакции отдергивания хвоста. Измерения проводили на приборе LE7106 Tail-flick Meter (Pan Lab Panlab Harvard Apparatus, Испания). На хвост каждой крысы, сидящей в фиксаторе, осуществляли 3 предъявления свето-термального раздражителя с последующим расчетом среднего значения ЛПРОХ в секундах у каждого животного. Данный тест основан на спинальном флексорном рефлексе, возникающем в ответ на локальное воздействие на хвост высокой температуры, и позволяет судить о болевой чувствительности животных преимущественно на спинальном уровне [6-9].
В тесте «hot plate» (экспериментальная установка Cold and hot plate CHP, Bioseb, Франция) регистрировали латентный период болевой реакции (ЛПБР) животного, который определяли по значению времени (с) проявления реакции отдергивания и лизания конечностей и (или) вокализации. Тест позволяет судить о болевой чувствительности животных на супраспинальном уровне [9-12].
Расчеты, статистическая обработка и графическое оформление полученных в работе данных проводились с использованием программы Microsoft Excel и программного пакета Graph Pad Prism 7.0. Достоверность статистических различий
между контрольной и экспериментальными группами с различными дозами введения АСК и салицилатов металлов определяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ЛКОУЛ) с апостериорным тестом Тьюки.
Таблица 1
Организация экспериментальных исследований влияния салицилатов на болевую чувствительность крыс
Группа Номер группы Доза соединения Объем Кол-во особей(п)
Контроль (физраствор) 1. 0,9 % №С1 0,2 мл п=7
АСК 2. 5 мг/кг 0,2 мл п=7
3. 10 мг/кг 0,2 мл п=7
4. 20 мг/кг 0,2 мл п=7
АССо2+ 5. 5 мг/кг 0,2 мл п=7
6. 10 мг/кг 0,2 мл п=7
7. 20 мг/кг 0,2 мл п=7
АС№2+ 8. 5 мг/кг 0,2 мл п=7
9. 10 мг/кг 0,2 мл п=7
10. 20 мг/кг 0,2 мл п=7
АСZn2+ 11. 5 мг/кг 0,2 мл п=7
12. 10 мг/кг 0,2 мл п=7
13. 20 мг/кг 0,2 мл п=7
АСМп2+ 14. 5 мг/кг 0,2 мл п=7
15. 10 мг/кг 0,2 мл п=7
16. 20 мг/кг 0,2 мл п=7
АСMg2+ 17. 5 мг/кг 0,2 мл п=7
18. 10 мг/кг 0,2 мл п=7
19. 20 мг/кг 0,2 мл п=7
АСЫ+ 20. 5 мг/кг 0,2 мл п=7
21. 10 мг/кг 0,2 мл п=7
22. 20 мг/кг 0,2 мл п=7
Для анализа эффективности биологического действия АС с металлами по сравнению с молекулой предшественницей (АСК) проводился расчет коэффициента эффективности (КЭ) по формуле:
КЭ = (АСмет. - АСК)/АСК, (1)
где АСмет. - показатели кардиореспираторной системы, зарегистрированные у животных при введении АС металлов Со2+, Zn2+, №2+, Мп2+, Ы+ и Mg2+;
АСК - показатели кардиореспираторной системы, зарегистрированные у животных при введении АСК.
КЭ приближается к нулю, если эффективность изучаемого соединения (АСмет.) в отношении изучаемого показателя соответствует таковой для АСК.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Как показали результаты исследования, введение АСК в дозах 5, 10 и 20 мг/кг существенно уменьшает болевую чувствительность у крыс (рис. 1). Об этом свидетельствует достоверное увеличение (ЛПРОХ) в тесте «tail-flick» на 58,7 (р<0,05), 80,4 (р<0,001) и 114,4 % (р<0,001) и ЛПБР в тесте «hot plate» на 61,1 % (р<0,01) в дозе 10 мг/кг и 78,8 % (р<0,001) в дозе 20 мг/кг относительно данных показателей в контрольной группе крыс.
tail-flick
hot plate
15
10
I
rv
I
# # ^
15-
10-
i
J*
fy
J Jt
v-
Рис. 1. Влияние ацетилсалициловой кислоты в дозах 5, 10 и 20 мг/кг на показатели болевой чувствительности крыс в тестах «tail-flick» и «hot plate».
Примечание: * - p<0,05; **- p<0,01; *** - p<0,001 - достоверность отличий показателя по сравнению с контролем.
АССо2+ в дозе 20 мг/кг увеличивал ЛПРОХ на 107 % (р<0,001) и ЛПБР на 81,7 % (р<0,001) по отношению данным параметрам у контрольной группы животных (рис. 2). В остальных дозах АССо2+ достоверно не изменял значения этих показателей.
В тесте «tail-flick» АС№2+ увеличивал ЛПРОХ в дозе 5 мг/кг на 35,19 % (р<0,05), а в дозе 20 мг/кг - на 35,00 % (р<0,05) относительно контроля (рис. 3). В тесте «hot plate» наблюдалось достоверное повышение ЛПБР при введении АС№2+ в дозе 10 мг/кг - на 62,14 % (р<0,001), а в дозе 20 мг/кг - на 66,17 % (р<0,001) относительно значений в контрольной группе (табл. 2, рис. 3).
tail-flick
hot plate
15п
10-
5-
I
15'
10
I
I
i
I
«
¿r
/ # #
/-ЧУ
cP
V-
•v
rO
P
of »
Рис. 2. Влияние салицилата Co + на показатели болевой чувствительности крыс в тестах «tail-flick» и «hot plate».
Примечание: как на рис. 1.
tail-flick
hot plate
M.
m
S
ХУ
y <f
V*
^ ^ ^
y
Рис. 3. Влияние салицилата Ni2+ на показатели болевой чувствительности крыс в тестах «tail-flick» и «hot plate». Примечание: как на рис. 1.
В тесте «tail-flick» АС/п2+ только в дозе 10 мг/кг достоверно увеличивал ЛПРОХ на 45,6 % (р<0,05) относительно значений контроля (рис. 4). В тесте «hot plate» во всех дозах, а также в тесте «tail-flick» в дозах 5 и 20 мг/кг под влиянием ACZn2+ пороги болевой чувствительности достоверно не изменялись.
tail-flick
hot plate
л* X
^ J?
10n
8-
6-
4-
2-
X
I
JF *
T?
I
/ ¡Ф A^
V- v-
Рис. 4. Влияние салицилата Zn2+ на показатели болевой чувствительности крыс в тестах «tail-flick» и «hot plate».
Примечание: как на рис. 1.
В тесте «tail-flick» АСМп2+ в дозах 5, 10 и 20 мг/кг у крыс достоверно увеличивал ЛПРОХ на 45,6 (р<0,05), 122,3 (р<0,001) и на 77,5 % (р<0,001) соответственно относительно контроля. В тесте «hot plate» выявлен значительный анальгетический эффект АСМп2+ только в дозе 20 мг/кг, выражавшийся в достоверном увеличении ЛПБР на 47,6 % (p<0,01) относительно контроля.
15п
10-
5-
4?
К4
<V
tail-flick
ш
I
* # jf
F
V
ч-
к-С-
V
V-
10П
6-
4-
2-
hot plate
Хп 1
I
/ ■
;Ф ¿Ф <Ф
/
Рис. 5. Влияние ацетилсалицилата Мп2+ на пороги болевой чувствительности крыс-самцов в тестах «tail-flick» и «hot plate».
Примечание: как на рис. 1.
В тесте «tail-flick» АСМ§2+ (рис. 6) достоверно увеличивал ЛПРОХ на 39,2 (р<0,05) и на 89,3 % (р<0,001) в дозах 10 и 20 мг/кг соответственно относительно контроля. ЛПБР в тесте «hot plate» под влиянием ACMg2+ во всех дозах достоверно не изменялся.
tail-flick
hot plate
10-1 86420
I
I
I
5 4
¡u a m
I
I
A*
V*
T? *Й>
Г
г* ^
v- v-
Рис. 6. Влияние салицилата Mg + на показатели болевой чувствительности крыс в тестах «tail-flick» и «hot plate». Примечание: как на рис. 1.
В тесте «tail-flick» АСЫ+ достоверно увеличивал ЛПРОХ на 70,5 (р<0,001) и 64,5 % (р<0,01) в дозах 5 и 10 мг/кг соответственно относительно таковых у контрольной группы. В тесте «hot plate» ЛПБР под влиянием всех исследуемых доз АСЫ+ достоверно не изменялся.
tail- flick
ю 86-
к
s ф
m 420
I
I
8-|
6-
u к
ь 4
о» Q.
m
20
hot plate
I
I
Aft
ST
V
Рис. 7. Влияние салицилата Li+ на показатели болевой чувствительности крыс в тестах «tail-flick» и «hot plate». Примечание: как на рис. 1.
Таким образом, АСК и салицилаты металлов увеличивают пороги болевой чувствительности, что демонстрирует наличие у данных соединений анальгетических свойств в зависимости от дозы соединений и применяемого болевого раздражителя.
Известно [9, 10-12], что увеличение ЛПРОХ свидетельствует об участии перцептуального компонента и спинального механизма регуляции болевой чувствительности, а увеличение ЛПБР - о влиянии на супраспинальные механизмы болевой чувствительности. Исходя из этого, можно заключить, что АСК и АССо2+, АС№2+, АС2и2+, АСМп2+, АСMg2+ и АСЫ+ в различных дозах оказывают анальгетический эффект с участием различных механизмов регуляции боли.
Анализ зависимости «химическая структура-свойства», которая в данном случае является отражением эффективности биологического действия соединений АС с металлами по сравнению с молекулой предшественницей (АСК) показал, что введение металлов в структуру АСК снижает анальгетический эффект новосинтезированных салицилатов по сравнению с АСК, о чем свидетельствуют достоверно низкие показатели порогов болевой чувствительности, представленные в табл. 2. и Кэ (рис. 8, 9), рассчитанный как отношение эффекта соответствующего АС с металлом к эффекту АСК. Как видно из рис. 8, 9 практически все показатели эффективности тестируемых АС металлов находятся в отрицательной области гистограммы, что свидетельствует о меньшем анальгетическом эффекте соединений по сравнению с АСК. Исключением является АСМп2+, анальгетический эффект которого в дозе 10 мг/кг превосходит таковой у АСК, однако, значимость данного эффекта не достоверна. Вероятно, что наличие анальгетических свойств у АССо2+, АС№2+, АС7и2+, АСМп2+, АСMg2+ и АСЫ+ обусловлено присутствием салициловой кислоты в тестируемых соединениях.
Tail-flick
КЭ АССо2+ ACNi2+ ACMn2+ ACZn2+ ACMg2+ ACIJ+
1г IP 1 IfL
■ 5 мг/кг □ 10мг/кг □ 20 мг/кг
Рис. 8. Коэффициент эффективности (КЭ) анальгетического действия салицилатов Со2+, Ni2+, Zn2+, Mn2+, Mg2+ и Li+ в тесте «tail-flick» в дозах 5, 10 и 20 мг/кг.
Hot plate
КЭ АССо2+ ACNÍ2+ АСМп2+ ACZn2+ ACMg2+ ACL¡+
Г Г" ч II
-0,4 -о,:
-o,s
■ 5 мг/кг DIO мг/кг 20мг/кг
Рис. 9. Коэффициент эффективности (КЭ) анальгетического действия салицилатов Со2+, Ni2+, Zn2+, Mn2+, Mg2+ и Li+ в тесте «hot plate» в дозах 5, 10 и 20 мг/кг.
Можно заключить, что введение металлов-комплексообразователей снижает анальгетические свойства АС металлов, а подобный дизайн соединений не целесообразен при создании высокоактивных анальгетиков.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. АСК во всех дозах оказывает выраженное анальгетическое действие с участием спинального и супраспинального механизмов регуляции болевой чувствительности. Об этом свидетельствует достоверное увеличение порогов болевой чувствительности в тестах термической острой боли «tail-flick» и «hot plate».
2. Анальгетические эффекты АС№2+, АСМп2+и АСLi+ развивались при их введении во всех дозах, АСMg2+- в дозах 10 и 20 мг/кг, АСZn2+ - только в дозе 10 мг/кг, АССо2+ - только в дозе 20 мг/кг.
3. Введение металлов-комплексообразователей снижает анальгетические свойства АС металлов, а подобный дизайн соединений не целесообразен при создании высокоактивных анальгетиков.
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 20-33-70142 на экспериментальном оборудовании Центра коллективного пользования научным оборудованием «Экспериментальная физиология и биофизика» кафедры физиологии человека и животных и биофизики Таврической академии (структурное подразделение) ФГАОУВО «Крымский федеральный университет им. В. И. Вернадского».
Список литературы
1. Левых А. Э. Ацетилсалициловая кислота как эффективная и безопасная основа антиагрегантной терапии / А. Э. Левых, В. И. Мамчур // Артериальная гипертензия. - 2015. - №6 (44). - С. 57-63.
2. Венгеровский А. И. Лекции по фармакологии / Венгеровский А. И. - Томск: СибГМУ, 2007. - 390 с.
3. Ignatyev I. Synthesis and characterization of cobalt (II) complexes with triethanolamine and succinate and/or nitrate anions / Ignatyev I. [et. al]. // J. Transition Metal Chemistry. - 2018. - 43 (2). - P. 127-136.
4. Alfonso L. F. Aspirin inhibits camptothecin-induced p21CIP1 levels and potentiates apoptosis in human breast cancer cells / L. F. Alfonso, K. S. Srivenugopal, T. V. Arumugam [et al.]. // Int. J. Oncol. - 2009. -Vol. 34, No 3. - P. 597-608. doi: 10.3892/ijo_00000185 PMID: 19212664
5. Bica K. In search of pure liquid salt forms of aspirin: ionic liquid approaches with acetylsalicylic acid and salicylic acid / K. Bica, C. Rijksen, M. Nieuwenhuyzena [et al.]. // Phys. Chem. Chem. Phys. - 2010. -Vol. 12. - P. 2011-2017.
6. Determination of Adrenergic and Imidazoline Receptor Involvement in Augmentation of Morphine and Oxycodone Analgesia by Clonidine and BMS182874 / Gulati A., Bhalla S., Matwyshyn G. [et al]. // Pharmacology. - 2011. - Vol. 83. - P. 45-58.
7. Smith E. S. Nociceptors: a phylogenetic view / E. S. Smith, G. R. Lewin // J. Comp. Physiol. A. Neuroethol. Sens. Neural. Behav. Physiol. - 2009. - Vol. 195 (12). - P. 1089-1106.
8. Xu F. The neurotoxicity of intrathecal lidocaine is enhanced in postpartum compared to virgin rats / F. Xu, B. Zhang, T. Li // Fundam Clin Pharmacol. - 2013. - Vol. 27, № 4. - P. 427-433
9. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / А. Н. Миронов, Н. Д. Бунатян, А. Н. Васильев [и др.]. - Ч. 1. М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.
10. Woolfe G. The evaluation of the analgesic action of pethidine hydrocholoride (Demerol) / G. Woolfe, A. D. Macdonald // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1944. - Vol. 80, № 3. - P. 300-307.
11. Влияние L-аргинина на электрокожную и температурную болевую чувствительность у крыс / Л. А. Северьянова, И. И. Бобынцева, Н. А. Кирьянова [и др.]. // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2005. - № 2. - С. 44-49.
12. Василенко А. М. Корреляции болевой чувствительности и гуморального иммунного ответа у мышей при термораздрожении / А. М. Василенко, О. Г. Яновский, О. В. Коптелев // Бюлл. экспер.-мед. - 1995. - №4. - С. 405-408.
EFFECT OF SALICYLATES CO2+, NI2+, ZN2+, MN2+, LI+ AND MG2+ ON THE PAIN SENSITIVITY OF MALE RATS
Ravaeva M. Yu., Cheretaev I. V., Chuyan E. N., Shekhmambetov N. R., Styagina D. V., Gruzinov E. N., Kuznetsova A. A., Kashirina A. V.
V. I. Vernadsky Crimean Federal University, Simferopol, Crimea, Russian Federation E-mail: Shexmambetov@mail.ru
The article presents the results of evaluating the effect of salicylates Co2+, Zn2+, Ni2+, Mn2+, Li+ and Mg2+ at doses of 5, 10, and 20 mg/kg on the pain sensitivity of male rats. Experiments were carried out on 119 male Wistar laboratory rats in test models of acute thermal pain ("tail-flick" and "hot plate"). It has been shown that acetylsalicylic acid (ASA) reduces the pain sensitivity of rats at the spinal and supraspinal levels. The introduction of complexing metals (Co2+, Zn2+, Ni2+, Mn2+, Li+ and Mg2+) mainly leads to a decrease in the analgesic effect of ASA.
ASA in all doses has a pronounced analgesic effect with the participation of spinal and supraspinal mechanisms of regulating pain sensitivity. This is evidenced by a significant increase in the thresholds of pain sensitivity in the tests of thermal acute pain «tail-flick» and «hot plate».
Analgesic effects of АСNi2+, АСMn2+ and АСLi+ developed when they were administered at all doses, АСMg2+ - at doses of 10 and 20 mg / kg, АСZn2+ - only at a dose of 10 mg/kg, АСCo2+ - only at a dose of 20 mg / kg.
The introduction of complexing metals reduces the analgesic properties of AC metals, and such a design of compounds is not advisable when creating highly active analgesics.
Keywords: acetylsalicylic acid( ASA), pain sensitivity, analgesic effect, perceptual component of pain, spinal and supraspinal mechanisms of pain regulation.
References
1. Levyh A. Je., Mamchur V. I. Acetilsalicilovaja kislota kak jeffektivnaja i bezopasnaja osnova antiagregantnoj terapii, Arterial'naja gipertenzija, 6 (44), 57 (2015).
2. Vengerovskij A. I., Lectures on Pharmacology, 390 p. (Tomsk, SibGMU, 2007).
3. Ignatyev I. Synthesis and characterization of cobalt (II) complexes with triethanolamine and succinate and/or nitrate anions, J. Transition Metal Chemistry, 43 (2), 127 (2018).
4. Alfonso L. F., Srivenugopal K. S., Arumugam T. V., Abbruscato T. J., Weidanz J. A., Bhat G. J., Aspirin inhibits camptothecin-induced p21CIP1 levels and potentiates apoptosis in human breast cancer cells, Int. J. Oncol, 34, 3, 597 (2009).
5. Bica K., In search of pure liquid salt forms of aspirin: ionic liquid approaches with acetylsalicylic acid and salicylic acid, Phys. Chem. Chem. Phys, 12, 2011 (2010).
6. Gulati A., Bhalla S., Matwyshyn G., Zhang Z., Andurkar S. V., Determination of Adrenergic and Imidazoline Receptor Involvement in Augmentation of Morphine and Oxycodone Analgesia by Clonidine and BMS182874, Pharmacology, 83, 45 (2011).
7. Smith E. S., Lewin G. R., Nociceptors: a phylogenetic view, J. Comp. Physiol. A. Neuroethol. Sens. Neural. Behav. Physiol, 195 (12), 1089 (2009).
8. Xu F., Zhang B., Li T., The neurotoxicity of intrathecal lidocaine is enhanced in postpartum compared to virgin rats, Pharmacology, 27, 4, 427 (2013).
9. Mironov A. N., Bunatjan N. D., Vasil'ev A. N. i dr., Rukovodstvo po provedeniju doklinicheskih issledovanij lekarstvennyh sredstv. Ch. 1. 944 s. (Moskva: Grif i K, 2012).
10. Woolfe G., Macdonald A. D., The evaluation of the analgesic action of pethidine hydrocholoride (Demerol), J. Pharmacol. Exp. Ther, 80, 3, 300 (1944).
11. Sever'yanova L. A., Bobyncev I. I., Kir'yanova N. A., Dolgincev M. Е., Vliyanie L-arginina na elektrokozhnuyu i temperaturnuyu bolevuyu chuvstvitel'nost' u krys, Kurskij nauchno-prakticheskij vestnik «Chelovek i ego zdorov'e», 2, 44, 2005.
12. Vasilenko A. M., Yanovskij O. G., Koptelev O. V., Korrelyacii bolevoj chuvstvitel'nosti i gumoral'nogo immunnogo otveta u myshej pri termorazdrozhenii, Byull. eksper.-med.,4, 405 (1995).
