CC BY
7
ФИЗИОЛОГИЯ И БИОХИМИЯ ГИДРОБИОНТОВ
PHYSIOLOGY AND BIOCHEMISTRY OF HYDROCOLE
Научная статья УДК 639.3.09
https://doi.org/10.24143/2073-5529-2021-4-115-125
Влияние растворов пероксида водорода на рост микромицетов сем. Saprolegniaceae на яйцевых оболочках эмбрионов белуги (Huso huso) и на показатели ее эмбрионального развития в период инкубации
Виктория Владимировна БариноваАнна Александровна Бахарева2, Маргарита Евгеньевна Перунова3, Ралина Расимовна Тангатарова4
1,3,4Волжско-Каспийский филиал Всероссийского научно-исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии, Астрахань, Россия, batina87@bk.ruM
2Астраханский государственный технический университет, Астрахань, Россия
Аннотация. Приведены данные экспериментальных работ по оценке степени влияния растворов пероксида водорода разных концентраций (0,05; 0,10; 0,20; 0,30; 0,40 %) на рост микромицетов сем. Saprolegniaceae на яйцевых оболочках эмбрионов белуги (Huso huso) и ход ее эмбрионального развития. В условиях все большей интенсификации аквакультуры острой проблемой остается дефицит разрешенных лекарственных препаратов для борьбы с распространенным в рыбоводстве заболеванием - сапролегниозом. Данное заболевание вызывают виды разных родов, самыми распространенными из которых являются Achlya и Saprolegnia, относящиеся к царству Chromista (Stramenopila), отделу Oomycota, классу Oomycetes, порядку Saprolegniales, семейству Saprolegniaceae. Оценку степени влияния экспериментальных растворов пероксида водорода на эмбриональное развитие белуги и уровень заражения эмбрионов сапролегниевыми микромицетами проводили по рыбоводно-биологическим показателям: количеству оплодотворенных ооцитов, количеству выживших эмбрионов и вылупившихся предличинок, количеству эмбрионов, зараженных микромицетами сем. Saprolegniaceae, и аномально развивающихся особей. Также был проведен гистологический анализ развивающихся эмбрионов на разных стадиях развития. Экспериментальные работы проводили в производственных условиях в инкубационном аппарате типа «Осетр». Были сформированы опытные группы в соответствии с концентрациями экспериментальных растворов. В результате проведенных исследований сделан вывод об эффективности использования 0,05 %-го раствора пероксида водорода с экспозицией 10 мин. Данный раствор подавлял рост микромицетов сем. Saprolegniaceae, не оказывая негативного влияния на ход эмбрионального развития. Остальные экспериментальные растворы в большинстве случаев оказывали негативное влияние на эмбриональное развитие белуги (Huso huso), вызывая увеличение смертности и повышение уровня заражения сапролегниями.
Ключевые слова: белуга (Huso huso), эмбрион, сапролегниевые микромицеты, пероксид водорода, выживаемость эмбрионов, аномалии, заражение эмбрионов, предличинки
Для цитирования: Баринова В. В., Бахарева А. А., Перунова М. Е., Тангатарова Р. Р. Влияние растворов перок-сида водорода на рост микромицетов сем. Saprolegniaceae на яйцевых оболочках эмбрионов белуги (Huso huso) и на показатели ее эмбрионального развития в период инкубации // Вестник Астраханского государственного технического университета. Серия: Рыбное хозяйство. 2021. № 4. С. 115-125. https://doi.org/10.24143/2073-5529-2021-4-115-125.
© Баринова В. В., Бахарева А. А., Перунова М. Е., Тангатарова Р. Р., 2021
Original article
я
Effect of hydrogen peroxide solutions on growth of micro mycetes Saprolegniaceae on egg membranes of beluga (Huso huso) embryos and on indicators of its embryonic development during incubation
Victoria V. Barinova1^, Anna A. Bakhareva2, Margarita E. Perunova3, Ralina R. Tangatarova4
4Volga-Caspian branch of 'All-Russian Research Institute of Fisheries and Oceanography,
1,3,4 j,
Astrakhan, Russia, batina87@bk.ruM ffi 2
u Astrakhan State Technical University,
o Astrakhan, Russia
Abstract. The article describes the data of the experimental works on assessing the influence of hydrogen peroxide solutions (0.05, 0.10, 0.20, 0.30, 0.40%) in different concentrations on the growth of the micromycetes Saprolegniaceae on egg membranes of beluga embryos and its embryonic development. In conditions of increasing intensification of aquacultures there is an acute problem regarding to the shortage of approved drugs for treating a common disease in fish farming - saprolegniosis. This disease is caused by species of different genus, the most common of which are the genus Achlya and Saprolegnia belonging to the biological kingdom Chromista (Stramenopila), the Oomycota phylum, the Oomycetes class, the Saprolegniales order, the Saprolegniaceae family. The impact of experimental hydrogen peroxide solutions on the beluga embryonic development and infection with saprolegnial micromycetes was assessed by fish-breeding biological indicators: the number of inseminated oocytes, number of survived embryos and hatched prelarvae, number of embryos infected with the micromycetes Saprolegniaceae and abnormally developing fish. His-tological analysis of embryos at different stages of development was also carried out. The experimental works were carried out under production conditions in an incubation apparatus of "Sturgeon" type. The experimental groups were formed in accordance with the experimental solutions' concentrations. Upon the result of the studies it has been inferred that using a 0.05% hydrogen peroxide solution with a 10-minute-exposure proves effective. This solution suppressed growth of micromycetes Saprolegniaceae without any negative impact on the embryonic development. Other experimental solutions had a negative impact on beluga (Huso huso) embryonic development of in most cases, causing the increased mortality and, as a consequence, the increased infection rate.
Keywords: beluga (Huso huso), embryo, saprolegnium micromycetes, hydrogen peroxide, survival of the embryos, abnormalities, infection of the embryos, prolarvae
For citation: Barinova V. V., Bakhareva A. A., Perunova M. E., Tangatarova R. R. Effect of hydrogen peroxide solutions on growth of micromycetes Saprolegniaceae on egg membranes of beluga (Huso huso) embryos and on indicators of its embryonic development during incubation. Vestnik of Astrakhan State Technical University. Series: Fishing
" я я a
¡ю Industry. 2021;4:115-125. (In Russ.) https://doi.org/10.24143/2073-5529-2021-4-115-125 ч и
га S
я
Сч ц; . О
Рч Я g &
о с
CP и g -
Введение порядку Saprolegniales. Количество зараженной Исследования в области охраны здоровья объ- икры в процессе инкубации может варьировать ектов аквакультуры на сегодняшний день весьма и составлять более 50 % [1], что приносит огромен | актуальны, т. к. список лекарственных препаратов ный экономический урон рыбоводным хозяйствам. н | для применения в аквакультуре ограничен, а его Большинство средств, используемых в аквакульту-и" о расширение позволит интенсифицировать произ- ре для борьбы с сапролегниозом, в настоящее вре-
§ водственные процессы, получая продукцию высо- мя не входят в государственный реестр лекарей
§ 5 кого качества. ственных средств для ветеринарного применения. ^ § Осетроводство было и остается одним из важ- Несмотря на обширный список химических ве-
е ных направлений как искусственного воспроизвод- ществ с фунгицидными свойствами, а также множе-
^ £ ства, так и товарной аквакультуры. Критическим ство проведенных исследований [2-9] по примене-
<D
< ц этапом биотехнологии осетровых видов рыб явля- нию этих веществ в аквакультуре, разрешенные
и | ется инкубация оплодотворенных ооцитов, дли- препараты практически отсутствуют, что может
«х I тельность которой составляет всего 6-8 суток при быть связано с длительностью процесса их апроба-
м и температуре воды 13-17 °С (в зависимости от вида ции и внедрения в рыбоводную практику. Суще-
га ® осетровых). Данные температуры являются опти- ствует ряд лекарственных препаратов, использую-
га мальными для развития микромицетов сем. щихся в аквариумистике для лечения и профилак-
Saprolegniaceae, относящихся к царству Chromista тики сапролегниоза, но использование их в аква-
^гатепорНа), отделу Ооту^а, классу Oomycetes, культуре не разрешено, т. к. в большинстве случаев
S о
Я t*
w
они содержат органические красители. В связи с этим поиск новых фунгицидных или фунгистати-ческих веществ в отношении сапролегниевых мик-ромицетов, а также разработка методики обработки икры во время инкубации являются на сегодняшний день наиболее актуальными направлениями исследований в области аквакультуры.
Цель исследования состояла в оценке степени влияния растворов пероксида водорода разной концентрации на рост сапролегниевых микромице-тов на яйцевых оболочках эмбрионов белуги (Huso huso) и на ход ее эмбрионального развития.
Методика исследований
Исследования проводили на базе научно-экспериментального комплекса аквакультуры «БИОС» Волжско-Каспийского филиала Всероссийского научно-исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии (ФГБНУ «ВНИРО» («КаспНИРХ»)). Объектом исследований являлись оплодотворенные ооциты и развивающиеся эмбрионы белуги (Huso huso). Экспериментальные работы вели в период инкубации белуги
(Huso huso) в инкубационных аппаратах типа «Осетр» в условиях замкнутого водоснабжения (рН = 8,1 ± 0,5; t = 14,9 ± 0,8 °С) в течение семи суток. Обработку экспериментальными растворами осуществляли в два этапа, на 21-22 и 27-28 стадии развития [9, 10], методом кратковременных лечебных ванн [11].
Оценку степени воздействия растворов перок-сида водорода на эмбриональное развитие белуги (Huso huso) проводили по следующим показателям: количество оплодотворенных ооцитов, количество выживших эмбрионов и вылупившихся предличинок [12], количество эмбрионов, зараженных микромицетами сем. Saprolegniaceae, и аномально развивающихся особей [3]. Показатели определяли с использованием микроскопа «Биомед МС-1 Стерео». Количество вылупившихся предличинок определяли весовым методом [12]. Результаты подвергали статистической обработке с использованием программы Microsoft Excel. Схема проводимых экспериментальных работ представлена в таблице.
n
Ri
О n
n o v n a
iV
Схема экспериментальных работ Scheme of the experimental works
Вид Химическое вещество Концентрация раствора, % Экспозиция, мин
Контроль' 0 0,00
0,05 10,00
Белуга (Huso huso) 0,10 10,00
Пероксид водорода 0,20 10,00
0,30 10,00
0,40 10,00
о С
m a b о
y . §>
,
d P
Ct> CD
v u ln
o o p v
в &
t. dM С
ga
n
n'Cg
c S
о .
M
ста
CD
В p
С o
i d
В g
'Контрольная группа с икрой, которая не подвергается обработке.
Для инкубирования и обработки эмбрионов белуги (Huso huso) были использованы 12 вкладышей аппарата «Осетр», соответствовавших опытным группам. В двух контрольных группах инкубируемые эмбрионы не обрабатывали экспериментальными растворами. Каждая опытная группа была в двух повторностях.
Для проведения исследований были использованы растворы пероксида водорода разных концентраций: от 0,05 до 0,40 %.
Пероксид водорода, являясь сильным окислителем, обладает бактерицидными свойствами. В Европе используется для обработки икры форели [8]. Эмбрионы белуги обрабатывали с одинаковой экспозицией - 10 мин. Растворы готовили путем разбавления маточного раствора до необходимой концентрации.
Гистологический анализ развивающихся эмбрионов проводили в лаборатории молекулярной генетики и физиологии Волжско-Каспийского филиала ФГБНУ «ВНИРО» («КаспНИРХ»). Были отобраны пробы (по 10 эмбрионов в яйцевых оболочках в одной пробе) после оплодотворения на разных стадиях развития. Гистологические иссле-
дования проводили стандартными гистологическими методами [13]. При изготовлении гистологических препаратов использовали окраску гематоксилин-эозином и кислым фуксином с доокрас-кой по Маллори. Просмотр препаратов проводился под микроскопом OLYMPUS ВХ40. Фотографии изготовили с помощью цифровой камеры-окуляра для микроскопа ДСМ500.
Результаты
Важным показателем для оценки степени влияния того или иного фактора на эмбриональное развитие является выживаемость эмбрионов. При анализе результатов следует учитывать, что выживаемость эмбрионов снижается в ходе развития, но обработка растворами химических веществ может спровоцировать их гибель, поэтому необходимо выбрать оптимальную концентрацию раствора, которая не будет провоцировать увеличение смертности в эмбриональный период развития. На рис. 1 показана динамика выживаемости эмбрионов белуги (Huso huso) в соответствии с экспериментальными группами.
3
y
80 70 60 50 40 30 20 10 0 -10
-i
R2 = 0,8456
0,00
I
nh
Г1
0,40
0,05 0,10 0,20 0,30
Концентрации растворов пероксида водрода, % i i 18-19 ст. развития i i 24-25 ст. развития i i 28-29 ст. развития ..........Линейная динамика (28-29 ст. развития)
Рис. 1. Количество выживших эмбрионов белуги (Huso huso) на разных стадиях развития в контрольной и опытных группах
Fig. 1. The number of beluga (Huso huso) survived embryos at different stages of development in the control and experimental groups
E 35 та S vo
и í
cu s . n
Рч о _ s a
CO
о
a -
та CO
И a . о
о x
со м
о ü
® X
^ о
cf
^ и < X
3 §
О Л
ST м ñ та й и
та п
Практически во всех опытных группах, кроме опытной группы с использованием 0,05 %, регистрировали снижение выживаемости от 18-19 к 28-29 стадии развития. При этом на фоне значений выживаемости в контрольной группе (28-29 стадия развития - 60,00 ± 0,00 %) максимальная выживаемость эмбрионов отмечена в группе с применением 0,05 %-го раствора (28-29 стадия развития - 73,50 ± 2,50 %), минимальная - с 0,40 %-м раствором (28-29 стадия развития - 7,50 ± 0,50 %). Рассчитанный по показателям выживаемости эм-
s
3 £ о. „
о й
г'п
0
1 I
П5 Л
О со ь
fr-
п
■
брионов на 28-29 стадиях развития коэффициент аппроксимации (Я2) стремится к единице. Это подтверждает предположение о том, что повышение концентрации растворов пероксида водорода оказывает негативное влияние на выживаемость.
Обработка инкубируемой икры растворами химических веществ может влиять на количество аномально развивающихся эмбрионов. Количество аномально развивающихся эмбрионов белуги (Huso huso) в контрольной и опытной группах показаны на рис. 2.
R2 = 0,828
ib
г'п
Ъ
4
0,05 Концентрации
ОД 0,2 0,3
растворов пероксида ворода,%
0,4
I 18-19 ст. развития И 28-29 ст. развития
i i 24-25 ст. развития ........"Линейная динамика (28-29 ст. развития)
Рис. 2. Количество аномально развивающихся эмбрионов белуги (Huso huso) на разных стадиях развития в контрольной и опытных группах
Fig. 2. Number of abnormally developing embryos of beluga (Huso huso) at different stages of development in the control and experimental groups
¡S о
S ж
На каждом этапе эмбрионального развития отмечены разные виды аномалий. Если на 18-19 стадии развития регистрируются нарушения, связанные с гаструляцией (формирование тела эмбриона при открытом бластопоре), на 28-29 стадиях отме-
чены морфологические изменения (искривление и укорочение тела эмбриона).
Минимальное количество аномально развивающихся эмбрионов на 28-29 стадии развития отмечено в опытных группах с применением 0,05 %-го
раствора пероксида водорода (2,50 ± 2,50 %), а максимальное - с 0,40 %-м раствором (5,50 ± 1,90 %). Коэффициент аппроксимации (Я2), рассчитанный по показателю количества аномально развивающихся эмбрионов на 28-29 стадиях развития, стремится к единице, подтверждая предположение о том, что повышение концентрации растворов пероксида водорода приводит к увеличению количества аномально развивающихся эмбрионов.
Помимо вышеперечисленных аномалий при воздействии растворов химических веществ на яйцевые
оболочки эмбрионов белуги (Huso huso) были отмечены нарушения в их строении, которые подтверждаются результатами гистологического анализа.
Изменения в структуре оболочек эмбрионов белуги (Huso huso) были отмечены и в контрольной группе, которая не подвергалась воздействию экспериментальных растворов. У некоторых эмбрионов выявлено локальное разрушение студенистой оболочки, отслоение оболочек (рис. 3).
n ш
o S в o v в a
dv
£
сл Г
m a
y >
B>
л ^ d P
e ct>
v u
o
p v g »
na
в
B'g
> >
б
Рис. 3. Фрагменты оплодотворенной икры белуги (Huso huso) контрольной группы (окраска кислым фуксином с докраской по Маллори): а - 18-19 стадия развития (ув. 10 х 10); б - 28-29 стадия развития (ув. 4 х 10): 1 - расслоение оболочек, отслоение студенистой оболочки; 2 - зачаток хорды; 3 - целом , вторичная полость тела); 4 - содержимое икры
Fig. 3. Fragments of fertilized beluga (Huso huso) eggs of the control group (staining with sour fuchsin with finishing paint after Mallory): a - 18-19 stages of development (magnification 10 б - 28-29 stage of development (mag. 4 х 10): 1 - flaking of shells, exfoliation of gelatinous shell; 2 - primordium of the notochord; 3 - coelome; 4 - roe content
10);
3 p
B d
в
TO
В опытной группе с применением 0,05 %-го раствора пероксида водорода отмечено отслоение оболочек, а также полости в содержимом икры
непосредственно под оболочками, заполненными веществом невыясненной природы (рис. 4).
а б
Рис. 4. Фрагменты оплодотворенной икры белуги (Huso huso), обработанной 0,05 %-м раствором пероксида водорода (окраска кислым фуксином с докраской по Маллори): а - 18-19 стадия развития (ув. 4 х 10); б - 28-29 стадия развития (ув. 10 х 10): 1 - отслоение оболочки; 2 - полости в содержимом икры, заполненные веществом невыясненной природы
Fig. 4. Fragments of fertilized eggs of beluga (Huso huso) treated with 0.05% hydrogen peroxide solution (Staining with acid fuchsin with coloring after Mallory): a - 18-19 stage of development (mag. 4 х 10); б - 28-29 stage of development (mag. 10 х 10): 1 - shell exfoliation; 2 - cavities in the roe content filled with an uncleared substance
От греч. koiloma - углубление, полость.
а
х
У эмбрионов опытных групп с использованием расслоение и отслоение оболочек, образование 0,10 %-го раствора пероксида водорода отмечено полостей в содержимом икры (рис. 5).
я
>я к
а б
Рис. 5. Фрагменты оплодотворенной икры белуги (Huso huso), обработанной 0,10 %-м раствором пероксида водорода (окраска кислым фуксином с докраской по Маллори): а - 18-19 стадия развития (ув. 4 х 10); б - 28-29 стадия развития (ув. 4 х 10): 1 - отслоение оболочки; 2 - полости в содержимом икры
Fig. 5. Fragments of fertilized beluga (Huso huso) roe treated with 0.10% hydrogen peroxide solution (stained with acid fuchsin with Mallory's finish): a - 18-19 stage of development (mag. 4 х 10); б - 28-29 stage of development (mag. 4 х 10): 1 - shell exfoliation; 2 - cavities in the roe content
При обработке икры 0,20 %-м раствором пероксида водорода отмечено образование вакуолей, заполненных содержимым невыясненной природы,
разрывы и отслоение оболочки от формирующегося эмбриона (рис. 6).
2 Я
S Я S я
я ю
В ^
И
я £
rt Я р ш
б
Ш м
о 3 я я
о Ср я
д о-
С10
Рис. 6. Фрагменты оплодотворенной икры белуги (Huso huso), обработанной 0,20 %-м раствором пероксида водорода (окраска кислым фуксином с докраской по Маллори): а - 18-19 стадия развития (ув. 4 х 10); б - 28-29 стадия развития (ув. 4 х 10): 1 - отслоившаяся оболочка; 2 - вакуоль с содержимым невыясненной природы; 3 - полость в содержимом икры
< я " 5
и g
С1 та
X ¡J¿
ir
и
га, й ш
go
К СЛ.
Fig. 6. Fragments of fertilized beluga (Huso huso) roe treated with 0.20% hydrogen peroxide solution (acid fuchsin staining with Mallory's finish): a - 18-19 stage of development (mag. 4 x 10); 6 - 28-29 stage of development (mag. 4 x 10): 1 - exfoliated shell; 2 - vacuole with unclear content; 3 - cavity in the roe content
В опытных группах с применением 0,30 %-го раствора пероксида водорода отмечено отслоение
оболочек от содержимого икры, расслоение студенистой оболочки и желточных оболочек (рис. 7).
а
n ш
o S n o v n a
dv
б
о r
m a §>
о ^ e ct>
v u
o
p v g »
Рис. 7. Фрагменты оплодотворенной икры белуги (Huso huso), обработанной 0,30 %-м раствором пероксида водорода (окраска кислым фуксином с докраской по Маллори): а - 18-19 стадия развития (ув. 4 х 10); б - 28-29 стадия развития (ув. 40 х 10): 1 - отслоение оболочки; 2 - расслоение желточных оболочек
Fig. 7. Fragments of fertilized beluga (Huso huso) roe treated with a 0.30% hydrogen peroxide solution (acid fuchsin staining with Mallory's finish): a - 18-19 stage of development (mag. 4 х 10); б - 28-29 stage of development (mag. 40 х 10): 1 - shell exfoliation; 2 - delamination of the vitelline membranes
na
n
S'Cra
о .
При обработке инкубируемой икры 0,4 %-м раствором пероксида водорода отмечены следующие аномалии: отслоение оболочек от содержимо-
го икры, их разрывы, расслоение студенистой и желточной оболочек, образование вакуолей с веществом невыясненной природы (рис. 8).
в p
i
3
то
а б
Рис. 8. Фрагменты оплодотворенной икры белуги (Huso huso), обработанной 0,40 %-м раствором пероксида водорода (окраска кислым фуксином с докраской по Маллори): а - 18-19 стадия развития (ув. 4х10); б - 28-29 стадия развития (ув. 10х10): 1 - отслоение оболочки; 2 - разрывы оболочки; 3 - вакуоль, заполненная содержимым невыясненной природы; 4 - расслоение оболочек
Fig. 8. Fragments of fertilized beluga (Huso huso) roe treated with 0.40% hydrogen peroxide solution (acid fuchsin staining with Mallory's finish): a - 18-19 stage of development (mag. 4 х 10); b - 28-29 stage of development (mag. 10 х 10): 1 - detachment of the shell; 2 - shell ruptures; 3 - vacuole filled with unclear contents; 4 - shell delamination
Основным показателем, характеризующим эффективность использования растворов пероксида водорода, является степень заражения эмбрионов.
Количество зараженных сапролегниевыми микро-мицетами эмбрионов представлено на рис. 9.
а
я
>я к
120
а 100
80
60
40
20
-20
irb
0,00
R2 = 0.5506
fiJl ¿ft
0.05
rfi
одо
0.20
0.30
Концентрации растворов пероксида водрода. %
0,40
24-25 ст. развития I I 34-35 ст. развития
□ 28-29 ст. развития
■ Линейная динамика (34-35 ст. развития)
2 Я
S Я S Я
я ю
В ^
И
Рис. 9. Количество зараженных эмбрионов белуги (Huso huso) на разных стадиях развития в контрольной и опытных группах
Fig. 9. Number of infected beluga (Huso huso) embryosat different stages of development in the control and experimental groups
В результате обработки инкубируемой икры белуги растворами пероксида водорода заражение сапролегниевыми микромицетами удалось снизить в опытной группе с использованием 0,05 %-го раствора (на 34-35 стадиях развития - 5,50 ± 3,50 %). В опытной группе с применением 0,10 %-го раствора (35,50 ± 4,50 %) также отмечено снижение заражения относительно значений в контрольной группе (55,50 ± 0,01 %). Коэффициент аппроксимации (Я2), рассчитанный по показателю количества зараженных эмбрионов на 28-29 стадиях развития, не стремится к единице, следовательно, повышение концентрации растворов пероксида водорода не оказывает влияние на количество зараженных эмбрионов. Таким образом, повышение концентрации растворов для обработки эмбрионов белуги не приводит к снижению заражения, т. к.
высокие концентрации губительно действуют на развивающиеся эмбрионы, снижая выживаемость. Как следствие, в опытных группах увеличивалось количество мертвой икры, которая являлась легкодоступным субстратом для микромицетов, что приводило к увеличению заражения. Использование 0,05 %-го раствора пероксида водорода приводило к снижению заражения инкубируемых эмбрионов, т. к. данная концентрация не приводила к их гибели и являлась достаточной для подавления роста сапролегниевых микромицетов.
В результате инкубации эмбрионов белуги были получены предличинки. Их количество является показателем эффективности проведенных обработок растворами пероксида водорода. Количество полученных предличинок в контрольной и опытной группах показано на рис. 10.
1,38 % 0,05 %
7,99 %
я fc
rt Я р ш
Ш м
о 3 я я
о Ср я
д о-
С10
< я
" 5
и g
ei та
1рз
X ¡¡й
г* ir
27,21 %
14,05 %
43,7 %
□ Контрольная группа ш 0,05%-й раствор ЕВ 0,1%-й раствор и 0,2%-й раствор я 0,3%-й раствор и 0,4%-й раствор
И
га,
ш
go
S сл.
Рис. 10. Количество полученных предличинок белуги (Huso huso) в результате инкубации в контрольной и опытной группах
Fig. 10. Number of beluga (Huso huso) prelarvae obtained after incubation in the control and experimental groups
Максимальное количество предличинок было получено в опытной группе с использованием 0,05 %-го раствора пероксида водорода (43,70 ± 1,50 %), что больше значений в контрольной группе (27,20 ± ± 1,90 %). Минимальное количество свободных эмбрионов получено при применении 0,40 %-го раствора пероксида водорода (0,05 ± 1,80 %).
Обсуждение
По результатам исследования установлено, что максимальное ингибирующее действие на рост мик-ромицетов сем. Saprolegшaceae оказывает раствор пероксида водорода концентрацией 0,05 %. Этот вывод подтверждается экспериментальными данными.
Выживаемость эмбрионов в контрольной группе соответствовала нормативу (60 %) [14], тогда как в опытной с использованием 0,05 %-го раствора превышала значение нормативного показателя на 13,5 % и составила 73,50 ± 2,50 %.
Количество аномально развивающихся эмбрионов, согласно [10], при использовании качественного рыбоводного материала не должно превышать 14 %. Однако использование химических веществ при обработке инкубируемой икры может привести к увеличению аномалий у развивающихся эмбрионов. В ходе экспериментальных работ отмечено снижение количества аномалий во всех опытных группах от 18-19 к 28-29 стадии развития, а также смена качественного состава аномалий. Если на 18-19 стадии развития (период га-струляции) и на 24-25 стадии (период нейруляции) регистрировали формирование тела эмбриона при открытом бластопоре, то к 28-29 стадии развития основными видами аномалий стали морфологические (искривление и укорочение тела эмбриона). При этом с увеличением концентрации растворов
пероксида водорода количество аномалии возрастало, но не превышало 6 %, что говорит о хорошем качестве половых продуктов производителей. Минимальное количество аномалий регистрировали при использовании 0,05 %-го раствора пероксида водорода (2,50 ± 2,50 %). Гистологический анализ показал, что изменения в оболочках были и в контрольной, и в опытных группах, но степень проявления данных повреждений увеличивалась с возрастанием концентрации растворов.
Заражение сапролегниевыми микромицетами может достигать более 50 % [15], а при отсутствии должных лечебно-профилактических мероприятий вызывает 100 % гибель эмбрионов [16]. При использовании 0,05 %-го раствора пероксида водорода заражение эмбрионов на 34-35 стадии развития (перед вылуплением предличинок) составило 5,50 ± 3,50 %, что значительно ниже значений в контрольной (55,50 ± 0,01 %) и других опытных группах.
Максимальное количество предличинок белуги (Huso huso), полученных в результате инкубации, регистрировали в опытной группе с использованием 0,05 %-го раствора пероксида водорода (43,70 ± 1,50 %), что является важным показателем эффективности использования данного химического вещества.
Заключение
В соответствии с полученными результатами можно сделать вывод: наиболее эффективным является 0,05 %-й раствор пероксида водорода с экспозицией 10 мин: данный раствор подавляет рост са-пролегниевых микромицетов у эмбрионов белуги в ходе инкубации, при этом не оказывает негативного влияния на развитие и выживаемость эмбрионов.
ш
3 <
У .
о ■
i. О , d P
V r
e u og
a a
a a t.
S'H
сю в a era c t S-e
.
и f
3 "O
i d
Список источников
1. Флоринская А. А. Сапролегниевые грибы-возбудители заболеваний рыб и икры в хозяйствах Северо-Запада РСФСР, их систематика, экология и патогенное значение: автореф. дис. ... канд. биол. наук. Л.: Гос. науч.-исслед. ин-т озер. и реч. рыб. хоз-ва, 1969. 19 с.
2. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб / под ред. А. М. Наумова. М.: Отдел маркетинга АМБ-агро, 1998. 310 с.
3. Акимова Н. В. Атлас нарушений в гаметогенезе и строении молоди осетровых. URL: http://dspace. vniro.ru/handle/123456789/1918 (дата обращения: 20.10.2021).
4. Глаголева Т. П., Маликова Е. М. Влияние малахитовой зелени на состав крови у молоди балтийского лосося // Рыбное хозяйство. 1968. № 5. С. 15-18.
5. Задорожная Н. А. О чувствительности молоди осетровых рыб к некоторым лечебным препаратам // Проблемы развития пресноводной аквакультуры: Всерос. совещ. М.: Изд-во ВНИИПРХ, 1993. 40 с.
6. Казарникова А. В., Шестаковская Е. В. Основные заболевания осетровых рыб в аквакультуре. М.: Изд-во ВНИРО, 2005. 104 с.
7. Мусселиус В. А., Филиппова Н. Т. Испытание новых препаратов для борьбы с ихтиофтириозом в прудо-
вых хозяйствах // Тр. ВНИИПРХ. М.: Пищ. пром-сть, 1969. Т. XVI. С. 288-300.
8. Нейш Г., Хьюз Г. Микозы рыб: пер. с англ. С. Р. Золотарева. М.: Лег. и пищ. пром-сть, 1984. 96 с.
9. Нечаева Т. А. Оценка эффективности применения Монклавита-1 с целью повышения сохранности инкубируемой икры радужной форели и защиты ее от сапро-легниоза // Вопр. нормативно-правового регулирования в ветеринарии. 2009. № 4. С. 41-43.
10. Детлаф Т. А., Гинзбург А. С. Зародышевое развитие осетровых рыб (севрюги, осетра и белуги) в связи с вопросами их разведения. М.: Изд-во Акад. наук СССР, 1954. 228 с.
11. Рахконен Р., Веннерстрем П., Ритамяки П., Кан-нел Р. Здоровая рыба. Профилактика, диагностика и лечение болезней. Хельсинки: ^курато, 2012. 180 с.
12. Сборник инструкций и нормативно-методических указаний по промышленному разведению осетровых рыб в Каспийском и Азовском бассейнах. М.: Изд-во ВНИРО, 1986. 271 с.
13. Ромейс Б. Микроскопическая техника. М.: Изд-во иностр. лит., 1954. 718 с.
14. О внесении изменений в Методику расчета объема добычи (вылова) водных биологических ресурсов,
необходимого для обеспечения сохранения водных биологических ресурсов и обеспечения деятельности рыбоводных хозяйств, при осуществлении рыболовства в целях аквакультуры (рыбоводства), утвержденную приказом Минсельхоза России от 30 января 2015 года № 25: Приказ Министерства сельского хозяйства Российской Федерации от 25 августа 2015 г. № 377. URL: http://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_188208 /2ff7a8c72de3994f30496a0ccbb1ddafdaddf518/ (дата обращения: 22.10.2020).
15. Ларцева Л. В., Обухова О. В., Алтуфьев Ю. В. Сапролегниоз икры ценных видов рыб при искусственном разведении в дельте р. Волги: таксономия, экология, профилактика и терапия. Астрахань: Сорокин Роман Васильевич, 2017. 98 с.
16. Вишторская А. А., Романова Н. Н., Головин П. П. О сроках выведения трифенилметановых красителей после обработки рыб // Рыбное хозяйство. 2020. № 3. С. 94-100.
я >я к
References
S я S Я S Я
s ^
я ю
Рч Я
ч
я fc
rt Я р ш
м с о 3 я я
о Ср я
С iö
< я
и g
С1 та
X ¡¡й
S «
CQ з
S сл.
W Cil
1. Florinskaia A. A. Saprolegnievye griby-vozbuditeli zabolevanii ryb i ikry v khoziaistvakh Severo-Zapada RSFSR, ikh sistematika, ekologiia i patogennoe znachenie: avtoreferat dissertatsii ... kand. biol. nauk [Saprolegnium fungi-causative agents of fish and caviar diseases in farms of North-West of USSR, their taxonomy, ecology and pathogenic significance: dissertation abstract on awarding the degree of candidate of biological sciences]. Leningrad, Gos. nauch.-issled. in-t ozernogo i rechnogo rybnogo khoz-va, 1969. 19 p.
2. Sbornik instruktsiipo bor'be s bolezniami ryb [Collection of instructions to control of fish diseases]. Pod redaktsiei A. M. Naumova. Moscow, Otdel marketinga AMB-agro, 1998. 310 p.
3. Akimova N. V. Atlas narushenii v gametogeneze i stroenii molodi osetrovykh [Atlas of violations in gameto-genesis and structure of sturgeon juveniles]. Available at: http://dspace.vniro.ru/handle/123456789/1918 (accessed: 20.10.2021).
4. Glagoleva T. P., Malikova E. M. Vliianie malakhitovoi zeleni na sostav krovi u molodi baltiiskogo lososia [Influence of malachite greens on blood composition in Baltic salmon juveniles]. Rybnoe khoziaistvo, 1968, no. 5, pp. 15-18.
5. Zadorozhnaia N. A. O chuvstvitel'nosti molodi osetrovykh ryb k nekotorym lechebnym preparatam [On sensitivity of sturgeon juveniles to certain medicinal preparations]. Problemy razvitiia presnovodnoi akvakul'tury: Vserossiiskoe soveshchanie. Moscow, Izd-vo VNIIPRKh, 1993. 40 p.
6. Kazarnikova A. V., Shestakovskaia E. V. Osnovnye zabolevaniia osetrovykh ryb v akvakul'ture [Main diseases of sturgeon fish in aquaculture]. Moscow, Izd-vo VNIRO, 2005. 104 p.
7. Musselius V. A., Filippova N. T. Ispytanie novykh preparatov dlia bor'by s ichthyophthyriosis v prudovykh khoziaistvakh [Testing new drugs to combat ichthyophthy-riosis in fish farms]. Trudy VNIIPRKh. Moscow, Pishchevaia promyshlennost' Publ., 1969. Vol. XVI. Pp. 288-300.
8. Neish G. A., Hughes G. C. Fungal Disease of Fishes. New Jersey, T.F.H. Publication, Neptune City, 1980. (Russ. ed.: Neish G., Kh'iuz G. Mikozy ryb: perevod s angliiskogo S. R. Zolotareva. M.: Legkaia i pishch. prom-st', 1984. 96 s.).
9. Nechaeva T. A. Otsenka effektivnosti primeneniia Monklavita-1 s tsel'iu povysheniia sokhrannosti inkubirue-moi ikry raduzhnoi foreli i zashchity ee ot saprolegnioza [Evaluating effectiveness of using Monclavit-1 to increase safety of incubated eggs of rainbow trout and protect it from saprolegniosis]. Voprosy normativno-pravovogo reguliro-vaniia v veterinarii, 2009, no. 4, pp. 41-43.
10. Detlaf T. A., Ginzburg A. S. Zarodyshevoe razvitie osetrovykh ryb (sevriugi, osetra i belugi) v sviazi s voprosa-mi ikh razvedeniia [Embryonic development of sturgeon fish (stellate sturgeon, sturgeon and beluga) in connection with issues of their breeding]. Moscow, Izd-vo Akademii nauk SSSR, 1954. 228 p.
11. Rakhkonen R., Vennerstrem P., Ritamiaki P., Kannel R. Zdorovaia ryba. Profilaktika, diagnostika i lechenie boleznei [Healthy fish. Prevention, diagnosis and treatment of diseases]. Khel'sinki, Nykypaino, 2012. 180 p.
12. Sbornik instruktsii i normativno-metodicheskikh uka-zanii po promyshlennomu razvedeniiu osetrovykh ryb v Kaspiiskom i Azovskom basseinakh [Collection of instructions and normative-methodical guidelines on industrial breeding of sturgeons in Caspian and Azov basins]. Moscow, Izd-vo VNIRO, 1986. 271 p.
13. Romeis B. Mikroskopicheskaia tekhnika [Microscopic technique]. Moscow, Izd-vo inostr. lit., 1954. 718 p.
14. O vnesenii izmenenii v Metodiku rascheta ob"ema dobychi (vylova) vodnykh biologicheskikh resursov, ne-obkhodimogo dlia obespecheniia sokhraneniia vodnykh biolog-icheskikh resursov i obespecheniia deiatel'nosti rybovodnykh khoziaistv, pri osushchestvlenii rybolovstva v tseliakh ak-vakul'tury (rybovodstva), utverzhdennuiu prikazom Minsel'kho-za Rossii ot 30 ianvaria 2015 goda № 25: Prikaz Ministerstva sel'skogo khoziaistva Rossiiskoi Federatsii ot 25 avgusta 2015 g. № 377 [On amendments to the Methodology for calculating the volume of catch of aquatic biological resources necessary to ensure the conservation of aquatic biological resources and ensure the activities of fish farms, when fishing for aquaculture (fish farming), approved by order of the Ministry of Agriculture of Russia dated January 30, 2015 No. 25: Order of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation of August 25, 2015 No. 377]. Available at: http://www.consultant.ru/document/ cons_doc_LAW_188208/2ff7 a8c72de3994f30496a0ccbb 1 ddaf daddf518/ (accessed: 22.10.2020).
15. Lartseva L. V., Obukhova O. V., Altufev Iu. V. Saprolegnioz ikry tsennykh vidov ryb pri iskusstvennom razvedenii v del'te r. Volgi: taksonomiia, ekologiia, profil-aktika i terapiia [Saprolegniosis of eggs of valuable fish species during artificial breeding in Volga Delta: taxonomy, ecology, prevention and therapy]. Astrakhan', Sorokin Roman Vasil'evich, 2017. 98 p.
16. Vishtorskaia A. A., Romanova N. N., Golovin P. P. O srokakh vyvedeniia trifenilmetanovykh krasitelei posle obrabotki ryb [On terms of eliminating triphenylmethane dyes after fish processing]. Rybnoe khoziaistvo, 2020, no. 3, pp. 94-100.
Статья поступила в редакцию 09.11.2021; одобрена после рецензирования 23.11.2021; принята к публикации 30.11.2021 The article is submitted 09.11.2021; approved after reviewing 23.11.2021; accepted for publication 30.11.2021
Информация об авторах / Information about the authors
Виктория Владимировна Баринова - начальник центра аквакультуры; Волжско-Каспийский филиал Всероссийского научно-исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии; Астрахань, ул. Савушкина, 1; batina87@bk.ru
Анна Александровна Бахарева - доктор сельскохозяйственных наук, доцент; заведующий кафедрой аквакультуры и рыболовства; Астраханский государственный технический университет; Астрахань, ул. Татищева, 16; bahareva.anya@yandex.ru
Маргарита Евгеньевна Перунова - ведущий специалист лаборатории молекулярной генетики и физиологии; Волжско-Каспийский филиал Всероссийского научно-исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии; Астрахань, ул. Савушкина, 1; kaspnirh@vniro.ru
Ралина Расимовна Тангатарова - специалист сектора товарной аквакультуры; Волжско-Каспийский филиал Всероссийского научно-исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии; Астрахань, ул. Савушкина, 1; kaspnirh@vniro.ru
Victoriya V. Barinova - Aquaculture Center Supervisor; Volga-Caspian branch of All-Russian Research Institute of Fisheries and Oceanography; Astrakhan, Savushkina street, 1; batina87@bk.ru
Anna A. Bakhareva - Doctor of Agricultural Sciences, Assistant Professor; Head of the Department of Aquaculture and Fisheries; Astrakhan State Technical University; Astrakhan, Tatishcheva street, 16; bahareva.anya@yandex.ru
Margarita E. Perunova - Leading Specialist of Laboratories of Molecular Genetics and Physiology; Volga-Caspian branch of All-Russian Research Institute of Fisheries and Oceanography; Astrakhan, Savushkina street, 1; kaspnirh@vniro.ru
о в
3 o
,-. v
3 a
c.
t,
s o
3 v
& a
У .
о ■
3. .
V 3
3 T
ста a 3 3 3 ста о t
& a
Ralina R. Tangatarova - Specialist of Commercial Aquaculture Sectors; Volga-Caspian branch of All-Russian Research Institute of Fisheries and Oceanography; Astrakhan, Savushkina street, 1; kaspnirh@vniro.ru
и f
