CC BY
33
МАТЕРИАЛЫ.
ДГЭАС на этапе дифференцировки приводит к достоверному усилению продукции №N-7, а на этапе созревания ДК - к 4-кратному увеличению синтеза TNF-a. Гормон не оказывал заметного влияния на секрецию Ш-2 и Ш-12(р70), а также ^2/противовоспалительных цитокинов (Ш-5, ^-4, Ш-13, Ш-10). Исследование характера продукции ТМ/ГЪ2 цитокинов в супернатантах СКЛ выявило усиление продукции №N-7 (4791±1377 vs 2543±604 пг/мл), но не Ш-4 (71±27 vs 87±25 пкг/мл) под влиянием ДК, генерированных в присутствии ДГЭАС. В то же время обработка ДК гормоном на этапе дозревания существенно не влияла на спектр ТМ/ГЪ2 цитокинов, продуцируемых в СКЛ.
Заключение. Таким образом, ДК подвержены регуляции со стороны ДГЭАС, который усиливает их аллостимуляторную и ТМ-поляризующую активность за счет индукции экспрессии костиму-ляторных молекул (СD80 и СD86) и сдвига баланса продуцируемых цитокинов в сторону медиаторов (№N-7, TNF-a), участвующих в запуске и контроле воспалительных и клеточно-опосредованных иммунных реакций. в целом, представленные результаты раскрывают новый механизм иммуноэндокринных взаимодействий, в частности регуляторного влияния гормона коры надпочечников ДГЭАС на функции ДК и их участие в активации ТМ и ^2-клеток.
Работа поддержана грантами РФФИ № 07-04-00967 и № 08-04-00 700.
А.А. Лигачева, М.Г. Данилец, Н.В. Бельская, Ю.П. Бельский, Е.Г. Учасова, Е.С. Трофимова, А.М. Гурьев*, М.В. Белоусов*, Р.Р. Ахмеджанов*, М.С. Юсубов*, В.И. Агафонов
влияние растительных водорастворимых полисахаридов НА продукцию iGE И iGG1
нии фармакологии Томского научного центра со рАМн; * ГОу ВпО сибирский государственный медицинский университет росздрава, г Томск
Аллергические заболевания, среди которых наиболее распространены различные формы реакции немедленного типа (атопический дерматит, бронхиальная астма, атопический ринит, крапивница и др.), обусловлены, как известно, избыточным Th2 ответом, для которого характерен высокий уровень секреции ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-13, а также аллерген-специфических IgE и IgG4 (у мыши IgE и IgG1). Наиболее распространенными способами терапии этих патологий являются: аллерген-неспецифическое воздействие (например, применение бло-каторов гистаминовых рецепторов, глюкокортикоидов, стабилизаторов мембран тучных клеток), направленное на предотвращение или уменьшение негативных эффектов IgE; специфическая иммунотерапия (СИТ), позволяющая переключить продукцию антител с IgE и IgG4 на IgG1 благодаря десенсибилизирующим введениям аллергена, а также фармакотерапия, направленная на снижение уровня IgE с помощью препарата, содержащего моноклональные антитела к IgE (omalizumab или E25) [Johansson S.G., 2002; Holgate S.T., 2005; Williams P.B., 2005; Casale T.B., 2006]. Разрешенных к применению лекарственных средств, которые были бы направлены на ключевое звено патогенеза - на подавление избыточной секреции Th2 цитокинов, пока не создано [Хаитов Р.М., 2003], однако необходимость их очевидна.
Цель исследования: выявить вещества, ингибирующие Th2 иммунный ответ и таким путем подавляющие продукцию IgE и IgG1. Для этого были использованы водорастворимые растительные полисахариды (ПС), поскольку известно, что эта группа веществ обладает широким спектром иммуномодуляторных потенций [Tzianabos A.O., 2000; Retini C., 2001], однако сведения о влиянии ПС на иммунный ответ противоречивы: они могут активировать как Th1 [Saito K., 2003], так и Th2 [Williams P.B., 2005].
Материал и методы. Использованы мыши линии BAlb/cY. Иммунный ответ Th2 типа моделировали овальбумином (OVA) [Laitinen T, 2004]. Водорастворимые полисахариды (ПС) были выделены из фармакопейного растительного сырья на каф. химии СибГМУ по стандартной методике. В качестве контроля использовали мура-милдипептид (N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглютамин, МДП). Содержание IgG1 и IgE в сыворотке крови животных определяли им-муноферментным методом или методом пассивной кожной анафилаксии (ПКА), интенсивность реакции оценивали по площади окрашенных участков кожи. Реакцию непрямой дегрануляции тучных клеток проводили общепринятым способом, показатель дегра-нуляции тучных клеток (ПДТК) подсчитывали по формуле: ПДТК -1а+2б+3с+4д, где а, б, с, д - количество дегранулированных клеток с соответствующей степенью дегрануляции.
Результаты. В экспериментах были использованы водорастворимые ПС, выделенные из мать-и-мачехи, березы, аира, клевера, полыни,
календулы и девясила. Для выявления способности влиять на Th2 иммунный ответ мы оценили, как меняется летальность в результате анафилактического шока у животных, получивших курс ПС. Один из образцов (ПС березы) увеличивал смертность (на 33%), остальные ПС и МДП снижали её (МДП - на 10%, ПС мать-и-мачехи - на 33%, ПС аира - на 25%, ПС клевера - на 37,5%, ПС полыни - на 12,5%, ПС девясила - на 20%). Исследование дегранулирующих свойств сыворотки мышей, получавших ПС берёзы, показало, в ней имеются аллерген-специфические антитела к ПС берёзы. Таким образом, у этих животных развивается одновременно Th2 ответ на OVA и на ПС берёзы. ПС уменьшали концентрацию IgE: ПС аира в 1,7 и 3,4 раза (при 1- и 2-кратной иммунизации соответственно), ПС мать-и-мачехи - в 1,6 и 2,6 раза (при 1- и 2-кратной иммунизации соответственно), ПС полыни в - 2,4 раза (при 1-кратной иммунизации), ПС календулы - в 2 раза (при 1-кратной иммунизации), ПС девясила -в 1,9 раза (при 1-кратной иммунизации), ПС клевера - в 2,3 раза (при 1-кратной иммунизации). МДП на фоне 1-кратной сенсибилизации не влиял на данный показатель, а при 2-кратной иммунизации понижал его в 3,4 раза. У дважды иммунизированных животных курсовое введение исследуемых веществ вызывало понижение концентрации IgG 1: МДП уменьшал данный показатель в 1,8 раза, ПС аира - в 2,1 раза, ПС мать-и-мачехи - в 1,3 раза, ПС полыни - в 1,6 раза, ПС календулы - в 1,9 раза, ПС девясила - в 2 раза, ПС клевера -в 2,2 раза. Исследование методом ПКА содержания OVA-специфиче-ских IgG1 и IgE в сыворотке крови мышей, получавших ПС мать-и-мачехи, показало снижение их концентрации (при разведениях 1/4, 1/8 и 1/16 - на 60%, 85% и 90% соответственно для IgG1 и на 73%, 85% и 76% соответственно для IgE).
Заключение. Представленные результаты показывают, что ПС аира, мать-и-мачехи, полыни, календулы, девясила и клевера ингиби-руют продукцию IgE и IgG1 и, как следствие этого, снижают тяжесть анафилактического шока. Таким образом, данные вещества можно считать перспективными кандидатами на роль лекарственных средств, необходимых для терапии IgE-зависимых заболеваний.
Н.В. Литвяков, Е.Ю. Гарбуков, А.А. Пономарева, М.Н. Стахеева,
Е.М. Слонимская, Н.В. чердынцева
эКСПРЕССИЯ ГЕНоВ CCR5 И RANTEs В ЛЕЙКоЦИТАХ
крови и опухоли больных раком молочной железы
Гу нии онкологии Томского научного центра сО рАМн
Введение. CCR5 - один из рецепторов мононуклеарных клеток к ряду ключевых хемокинов: MIP-1, MCP-2a, MCP-2,8, RANTES. Экспрессия CCR5 и RANTES в лейкоцитах крови может определять их миграционную активность и способность к опухолевой инфильтрации. Связывание CCR5 с лигандом приводит к хемотаксису клеток памяти и активированных Th0, моноцитов, В-лимфоцитов, а также активации Thl и T^ клеток. Инфильтрация опухоли этими клетками может отражаться на результатах лечения и, в частности на эффективности химиотерапии.
Цель работы: определить уровень экспрессии CCR5 и RANTES в лейкоцитах крови и опухоли больных РМЖ и оценить ее взаимосвязь с показателями иммунного статуса и эффективностью неоадъ-вантной химиотерапии.
Материал и методы. В работе обследовано 75 больных с операбельной формой рака молочной железы, находящихся на лечении в клинике ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН, с морфологически верифицированным диагнозом (T^No^Mo), которые в неоадъвант-ном режиме получали 2-4 курса химиотерапии по схемам CMF, FAC, CAF или CAX(кселода). Эффективность неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) оценивали по критериям ВОЗ. В крови определяли количество лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, абсолютное и %-ное содержание субпопуляций CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD25+, CD72+ стандартными методами. Экспрессия генов CCR5 и RANTES оценивалась с помощью метода обратно-транскриптазной ПЦР в режиме реального времени в процентах по отношению к гену-рефери GAPDH (glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase). Оценивали коэффициент корреляции Спирмена, статистические различия средних значений показателей между выборками оценивали с помощью критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.
Результаты. Уровень экспрессии гена CCR5 в лейкоцитах крови больных РМЖ до лечения составил 60,79±4,27% (4 - 178%). Экспрессия RANTES до лечения составила 56,31 ±10% (0 - 287%). Экспрессия CCR5 и RANTES практически не коррелировали друг с другом (г--0,22), что может указывать на независимые механизмы их регуляции. Выявлена взаимосвязь экспрессии CCR5 и RANTES с основными клинико-морфологическими параметрами заболевания, а также с эффективностью НАХТ.
