Влияние растительного средства «Ноофит» на выработку условных рефлексов активного и пассивного избегания у белых крыс

Разуваева Янина Геннадьевна; Николаев Сергей Матвеевич; Верлан Надежда Вадимовна; Цыреновна Базарова Надежда

ВЛИЯНИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «НООФИТ» НА ВЫРАБОТКУ УСЛОВНЫХ РЕФЛЕКСОВ АКТИВНОГО И ПАССИВНОГО ИЗБЕГАНИЯ У БЕЛЫХ КРЫС

Янина Геннадьевна Разуваева1, Сергей Матвеевич Николаев1-2,

Надежда Вадимовна Верлан2, Базарова Надежда Цыреновна1 ('Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор — д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов; 2Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, г. Иркутск, ректор — д.м.н.,

проф. В.В. Шпрах)

Резюме. Исследовали влияние жидкого экстракта растительного средства «Ноофит» на выработку условных рефлексов пассивного и активного избегания. Установлено, что введение белым крысам линии Wistar экстракта «Ноофит» стимулирует у животных выработку условных рефлексов пассивного и активного избегания и вызывает сохранность памятного следа в отдаленные после обучения сроки.

Ключевые слова: растительное средство «Ноофит», условный рефлекс пассивного избегания, условный рефлекс активного избегания.

INFLUENCE OF EXTRACT OF PHYTOREMEDY «NOOPHYT» ON DEVELOPMENT OF A CONDITIONED REFLEX OF ACTIVE AND PASSIVE AVOIDING AT WHITE RATS

Ya.G. Razuvaeva, S.M. Nikolaev N.V. Verlan, N.Ts. Bazarova

('Institute of General and Experimental Biology SB RAS; 2Irkutsk State Institute of Postgraduate Medical Education,

Irkutsk, 3Buryat State University, Ulan-Ude)

Summary. Investigated influence of a liquid extract of phytoremedy of “Noofit” on development of conditioned reflexes of passive and active avoiding. It is established that introduction to white rats of line Wistar of an extract of “Noofit” stimulates development of conditioned reflexes of passive and active avoiding at animals and causes safety of a memorable trace in the terms kept away after training.

Key words: phytoremedy of “Noofit”, a conditioned reflex of passive avoiding, a conditioned reflex of active avoiding.

На сегодняшний день, в связи с широким распространением нарушений интегративных функций мозга, актуальным является разработка и внедрение новых профилактических и лечебно-восстановительных средств. Особый интерес в лечении данных патологических состояний представляют лекарственные средства растительного происхождения, обладающие выраженным фармакотерапевтическим действием, широким спектром биологической активности и низкой токсичностью. Так, в народной и традиционной медицине для лечения заболеваний нервной системы издавна применяются такие растения, как валериана лекарственная, пион уклоняющийся, женьшень, аралия маньчжурская, лимонник китайский, а также созданные на их основе фитосборы [1, 2, 4, 6].

В связи с этим, разработан жидкий экстракт растительного средства, условно названный «Ноофит», в состав которого входят Scutellaria baicalensis Georgi, Rhaponticum carthamoides WILLD, Valeriana officinales L., Mentha piperita L., Polygonum aviculare L., Urtica dioica L. и Achillea millefolium L.

Целью исследования явилось определение влияния жидкого экстракта растительного средства «Ноофит» на выработку условных рефлексов активного и пассивного избегания.

Материалы и методы

Исследования проведены на 106 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой тела 160-180 г. Животные находились в стандартных условиях содержания и кормления в виварии (Приказ Минздрава СССР №1179 от 10.10.1983 г.). Эксперименты на животных осуществляли в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. Деалкоголизированный экстракт «Ноофита» в объемах 0,2; 0,5 и 1,0 мл/100г вводили животным опытных групп в течение 5 суток до проведения исследований, последний раз за 30 мин до эксперимента. Животные контрольной группы получали воду очищенную в объеме 0,5 мл/100г по аналогичной схеме. В

качестве препарата сравнения использовали пирацетам в дозе 200 мг/кг.

Условный рефлекс пассивного избегания (УРПИ) вырабатывали у животных в двухсекционной камере [3]. Во время обучения крысу помещали в освещенный отсек камеры. После захода в темный отсек установки животное получало электроболевое раздражение, наносимое через электродный пол. Сила и длительность болевого раздражения подбирались индивидуально, до тех пор, пока животное не возвращалось в освещенный отсек установки. Проверку рефлекса осуществляли через 1 час, 24 часа и 7 суток после выработки рефлекса. Регистрировали латентный период захода животных в темный отсек установки и количество животных с выработанным и сохранившимся рефлексом. Выработку условной реакции зрительной дифференцировки (УРЗД) осуществляли в У-образном лабиринте с электрифицированным полом [3]. В качестве условного раздражителя служил свет, в качестве безусловного — электроболевое раздражение (50-100 Гц, 20-30 В, 10 мсек). Крыс помещали в один из отсеков установки и через десять секунд в случайном порядке включали свет в одном из двух других отсеков на пять секунд, после чего через электродный пол наносили на лапы животного электрокожное раздражение. Условную реакцию считали выработанной в том случае, если животное совершало 5 правильных пробежек подряд в освещенный отсек лабиринта, выполненных до нанесения электро-болевого раздражения. Регистрировали количество проб затраченных на обучение до первого правильного ответа, до критерия обучения, время поиска «безопасного» отсека, время выполнения реакции в секундах.

Значимость различий между указанными параметрами среди экспериментальных групп оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия считали статистически значимыми при р<

0,05 [5].

Результаты и обсуждение

Результаты исследований показали, что курсовое введение животным деалкоголизирванного жидкого

Таблица 1

Влияние экстракта растительного средства «Ноофит» и пирацетама на выработку и сохранность условного рефлекса пассивного избегания у белых крыс

№ п/п Группы животных Через 1 час Через 24 часа Через 7 суток

Латентный период, с

1. Контрольная (Н20), п=12 89,2±21,7 107,3±18,6 43,2±19,1

2. Опытная («Ноофит», 0,2 мл/100г), п= 12 180,0± 11,8* 140,5±18,1 81,3±17,6

3. Опытная («Ноофит», 0,5 мл/100г), п= 12 168,8±25,3* 162,2±19,3 116,0±20,4*

4. Опытная («Ноофит», 1,0 мл/100г), п=10 141,0±26,7 124,0±17,6 89,6±27,1

5. Опытная (пирацетам, 200 мг/кг), п= 12 155,0±18,6 167,5±19,1 79,8±18,6

Количество животных с сохранившемся ре< ілексом, %

1. Контрольная (Н20), п=12 34% 51 % 17%

2. Опытная («Ноофит», 0,2 мл/100г), п= 12 85% 68% 34%

3. Опытная («Ноофит», 0,5 мл/100г), п= 12 85% 85% 42%

4. Опытная («Ноофит», 1,0 мл/100г), п=10 60% 60% 40%

5. Опытная (пирацетам, 200 мг/кг), п= 12 85% 85% 34%

Примечание: здесь и далее * — различия статистически значимы между контрольной и опытной группами при р<0,05; п — количество животных в группе.

экстракта «Ноофит» в объемах 0,2; 0,5 и 1,0 мл/100г увеличивает латентный период через 1 час после выработки рефлекса в 2,0; 1,9 и 1,6 раза соответственно по сравнению с данными у крыс контрольной группы, и сокращает общее время пребывания их в темном отсеке. У 85% животных опытных групп, получавших «Ноофит» в объеме 0,2 и 0,5 мл/100г, а также пирацетам в дозе 200 мг/кг, отмечается выработка рефлекса, тогда как у животных контрольной группы данный показатель составил 34 % (табл.1).

При проверке рефлекса через 24 часа и 7 суток установлено, что введение животным «Ноофита» в объемах 0,2 и 0,5 мл/100г вызывает более прочную тенденцию сохранности памятного следа, по сравнению с показателями у животных контрольной группы (табл. 1). Так, латентный период у животных, получавших «Ноофит» в объемах 0,2 и 0,5 мл/100г, был выше аналогичного показателя у животных контрольной группы через 24 часа в 1,3 и 1,5 раза и на 7 сутки наблюдений — в 1,9 и 2,6 раза соответственно (табл. 1). При этом на 7 сутки исследований количество животных с сохранившемся рефлексом во всех опытных группах значимо не отличалось, и было в среднем в 2 раза выше такового показателя в контрольной группе.

Результаты исследований, представленные в таблице 2 показывают, что курсовое введение животным экстракта «Ноофита» во всех исследуемых объемах вызывает у крыс улучшение выработки рефлекса активного избегания на условный раздражитель — свет. Так, у животных, получавших «Ноофит» в объемах 0,5 и 1,0 мл количество проб затраченных до первого правильного ответа ниже в 1,5 раза, в объеме 0,2 мл/100г — в 1,3 раза по сравнению с таковыми показателями у животных контрольной группы. У животных данных опытных групп количество проб, затраченных на выработку критерия обучения (пять правильных пробежек), уменьшается на 22 % по сравнению с показателями у контрольных крыс (табл. 2). У животных, получавших препарат сравнения — пирацетам, количество проб, за-

траченных на обучение до первого правильного ответа, было выше, а до критерия обучения ниже таковых показателей у крыс, получавших «Ноофит».

Введение животным «Ноофита» в объемах 0,2; 0,5 и 1,0 мл/100г снижало время поиска безопасного отсека в первой пробе в 2,2; 1,3 и 1,4 раза соответственно. Введение крысам «Ноофита» в объемах 0,5 и 1,0 мл/100г

не оказывает значимо-

Таблица 2 го действия на время

выполнения реакции. Введение животным «Ноофита» в объеме 0,2 мл/100г, оказывает максимальное снижение времени выполнения реакции, по сравнению с таковыми у животных контрольной и других опытных групп.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что курсовое введение жидкого экстракта «Ноофит» во всех исследуемых объемах стимулирует когнитивные функции у крыс, что выражается в ускорении выработки условных рефлексов пассивного и активного избегания и сохранности памятного следа в отдаленные после обучения сроки. Наиболее выраженное ноотропное действие, сопоставимое с таковым препарата сравнения — пирацетама, оказывает исследуемое средство в объеме 0,5 мл/100г. Данный фармакологический эффект экстракта «Ноофита» обусловлен широким спектром биологически активных веществ (флавоноидов, полисахаридов, эфирных масел, комплекса витаминов, органических кислот, макро- и микроэлементов и других веществ), содержащихся в значительных количествах в компонентах исследуемого растительного средства.

Влияние экстракта растительного средства «Ноофит» и пирацетама на выработку условной реакции зрительной дифференцировки у белых крыс

№ п/п Группы животных Количество проб, затраченных на обучение Время поиска безопасного отсека в 1 пробе, с Время выполнения реакции, с

До первого правильного ответа До критерия обучения

1. Контрольная (Н20), п=10 30,3±2,4 64,0±5,6 25,0±1,9 6,0±0,5

2. Опытная («Ноофит», 0,2 мл/100г), п=9 24,8±1,6 50,1 ±6,3 11,3±1,4* 2,5±0,4*

3. Опытная («Ноофит», 0,5 мл/100г), п=9 19,6±0,1* 50,8±5,4* 19,1±1,6* 6,8±1,6

4. Опытная («Ноофит», 1,0 мл/100г), п=10 19,0±3,2* 51,0±4,5* 17,8±2,4* 5,5±0,8

5. Опытная (пирацетам, 200 мг/кг), п=10 27,0±2,7 46,0±2,7* 10,3±0,9* 4,0±0,3

ЛИТЕРАТУРА

1. Арушанян Э.Б. Ноотропные свойства препаратов Гинго билобо //Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2008. — Т. 71, № 4. — С. 37-63.

2. Барнаулов О.Д., Поспелова М.Л. Сравнительная оценка влияния препаратов классических адаптогенов и цветков лабазника вязолистного на нарушенное исследовательское поведение мышей //Психофармакология и биологическая наркология. — 2006. — Т. 6, Вып.1.- С. 1232-1238.

3. Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиниче-

скому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2005. — С. 153-161.

4. Гольдберг А.Д., Дыгай А.М. Литвиненко В.И. и др. Шлемник байкальский. Фитохимия и фармакологические свойства. — Томск, 1994. — 222 с.

5. Сергиенко В.И., Бондаренко И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. — М., 2006. — 256 с.

6. Шилов И.В., Суслов Н.И., Краснов Е.А. Адаптогенные и ноотропные свойства густого экстракта из надземной части Atragene sibirica L. // Растительные ресурсы. — 2001. — Т. 37. — Вып.3. — С. 78-88.

Информация об авторах: 670013, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, ИОЭБ СО РАН, ОБАВ, e-mail: tatur75@mail.ru, тел. (3012) 433463.

Разуваева Янина Геннадьевна — к.б.н., научный сотрудник,

Николаев Сергей Матвеевич — д.м.н., профессор, заведующий отделом, Надежда Вадимовна Верлан — д.м.н., профессор, декан,

Базарова Надежа Цыреновна — аспирант.

ТРИТЕРПЕНОВЫЕ ГЛИКОЗИДЫ — ПЕРСПЕКТИВНЫЙ КЛАСС ПРИРОДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ДЛЯ СОЗДАНИЯ НОВЫХ ФИТОПРЕПАРАТОВ

Ирина Александровна Лупанова1, Майя Федоровна Минеева1,

Владимир Карлович Колхир1, Альберт Михайлович Мартынов2 ('Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР), директор — д.т.н., акад. РАМН, акад. РАСХН, проф. В.А. Быков, отдел экспериментальной и клинической фармакологии, зав. — д.м.н. В.К. Колхир; 2Иркутский государственный институт усовершенствования врачей,

ректор — д.м.н., проф. В. В. Шпрах)

Резюме. Впервые в одном исследовании изучается ряд тритерпеновых гликозидов (ТГ), отличающихся между собой строением генина — тритерпена и/или строением углеводной части. В работе оценивается непосредственное влияние изучаемых ТГ на ферменты глутатионредуктазу (ГР), каталазу (КАТ), НАДФН-оксидазу и пируваткиназу (ПК), играющие регуляторную роль в процессах адаптации. Установлено, что сходство и различия в структуре изучавшихся тритерпеновых гликозидов проявляются в непосредственном взаимодействии с ферментами, выполняющими различные функции в обмене веществ. Полученные результаты показывают перспективность применения тритерпеновых гликозидов как сырья для создания препаратов с различными молекулярными механизмами действия.

Ключевые слова: тритерпеновые гликозиды, ферментные биотест-системы.

TRITERPENE GLYCOSIDES ARE THE PROSPECTIVE CLASS FOR INNOVATIVE HERBAL DRUGS

I.A. Lupanova, M.F. Mineeva, V.K. Kolhir, A.M. Martynov ^All-Russian Research Institute of Medicinal and Aromatic Herbs (VILAR),

2Irkutsk State Institute for post diplomer Education Doctors)

Summary. For the first time in one research were studied triterpene glycosides, different among themselves in a structure of a carbohydrate part. Direct influence studied triterpene glycosides on enzymes glutationreductase (GR), catalase (CAT), NADPH-oxidase, tyrosine hydroxylase and pyruvate kinase (PK) that are playing a regulatory role in adaptation processes was defined. It is established that similarity and differences in the structure of the carbohydrate part of triterpene glycosides show up in quantitively differential effect on the essential enzymes of homeostasis. Our results show the perspective of triterpene glycosides as a raw material for drugs with different molecular mechanism of action.

Key words: triterpene glycosides, enzymatic biotest-systems.

Тритерпеновые гликозиды — хорошо изученный класс соединений растительного происхождения. Известно, что многие представители данного класса веществ обладают адаптогенными, иммуномодулирующими, противоопухолевыми, тонизирующими и другими свойствами, проявляя высокую биологическую активность различной направленности [6], в том числе седативную, противовоспалительную, отхаркивающую, противомикробную и другие. Однако молекулярные механизмы фармакологического действия этих соединений изучены недостаточно. По-прежнему актуально изучение связи между химическим строением соединений класса тритерпеновых гликозидов и их биологической активностью с целью дальнейшего создания фитопрепаратов различной направленности.

Целью работы явилось выявление значимости строения углеводного остатка в молекуле тритерпенового гликозида для исследования молекулярных механизмов действия, определяющих спектр фармакологической активности на примере близких по структуре тритерпеновых гликозидов из качима двуцветного (ОурзорНИа Ьгсо1ог) — биколорозидов А и В, различающихся тем, что биколорозид-В содержит в углеводной части при третьем положении два остатка глюкозы, а биколорозид-А — один.

Материалы и методы

Реактивы: НАДФН, глутатион окисленный, фос-фоенолпируват (ФЕП), аденозиндифосфат (АДФ), никотинамидадениндинуклеотид восстановленный (НАДН), а также высокоочищенные ферменты глута-тионредуктаза, каталаза, лактатдегидрогеназа, пиру-ваткиназа и лактатдегидрогеназа — реактивы фирмы “Sigma-Aldrich”, США. Соляная кислота осч, фосфат натрия и калия, хлорид калия и магния, перекись водорода — отечественные реактивы. Объекты исследования: индивидуальные тритерпеновые гликозиды из качима двуцветного (БКА и БКВ), выделенные в лаборатории ВИЛАР. В качестве препарата сравнения использовали стандартизованный сухой экстракт корней женьшеня, содержащий все тритерпеновые гликозиды (панаксози-ды), присущие корню женьшеня. Источником NADPH-оксидазы и тирозингидроксилазы служили спокойные полиморфноядерные лейкоциты периферической крови кролика [5]. Исследование проводилось с применением специфических ферментных биотест-систем in vitro, позволяющих выявлять адаптогенную [1], иммуномодулирующую [2], дофаминергическую [7], энергизиру-ющую активность биологически активных соединений (БАС). Применяли глутатионредуктазную (ГР), ката-лазную (КАТ), НАДФН-оксидазную, тирозингидрок-силазную и пируваткиназную (ПК) биотест-системы. Тритерпеновые гликозиды добавляли в интервале кон-

Influence of extract of phytoremedy «Noophyt» on development of a conditioned reflex of active and passive avoiding at white rats

Текст научной работы на тему «Влияние растительного средства «Ноофит» на выработку условных рефлексов активного и пассивного избегания у белых крыс»