CC BY
4УДК: 617.832-054:31-002.2 DOI: 10.37279/2413-0478-2022-28-3-51-53
Вальдхайм Т. А.
ВЛИЯНИЕ ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ ПСИХОЛОГО-ПЕДАГОГИЧЕСКОЙ СТОМАТОЛОГИЧЕСКОЙ ПОМОЩИ НА ИЗМЕНЕНИЕ МИКРОФЛОРЫ РОТОВОЙ ПОЛОСТИ У ПОЗДНИХ НЕДОНОШЕННЫХ ДЕТЕЙ
Медицинский университет имени Карла Марциновского, г. Познань, Польша
Waldheim Т. А.
THE INFLUENCE OF PREVENTIVE PSYCHOLOGICAL AND PEDAGOGICAL DENTAL CARE ON THE CHANGE OF THE ORAL MICROFLORA IN LATE PREMATURE INFANTS
Karl Marcinowski Medical University, Poznan, Poland РЕЗЮМЕ
Актуальность. Одной из наиболее доступных для изучения является микрофлора ротовой полости, которая представляет собой обширную экосистему. Детей, которые были рождены поздними недоношенными, часто называют часто болеющими, и одной из теорий этого является несостоятельность биологических пленок, в которых преобладают условно-патогенные и патогенные микроорганизмы. Целью работы было комплексное изучение микрофлоры ротовой полости поздних недоношенных детей в возрасте трех лет и внедрение психолого-педагогической стоматологической профилактики, которая улучшит состояние микрофлоры ротовой полости. Материалы и методы. В работе использованы микробиологические, биохимические и молекулярно-генетические методы исследования, включая электронную микроскопию и клинические методы. Из смешанных микробных биопленок, полученных из слюны обследованных детей, проводился посев на микрофлору и антибиотикочувствительность данной микрофлоры. Заключение. Выявлены различия в составе микробиоты ротовой полости детей, которым не проводились профилактические стоматологические мероприятия, и детей, которым сделана данная работа. Доказана эффективность психолого-пе-догагической стоматологической помощи и улучшение микрофлоры после 6 месячного проведения мероприятий. Ключевые слова: стоматологические заболевания, заболевания, дети, микробиота, ротовая полость, недоношенные дети, биопленки.
SUMMARY
One of the most accessible to study is the microflora of the oral cavity, which is an extensive ecosystem. Children who were born late prematurely are often called often ill, and one of the theories of this is the failure of biological films in which conditionally pathogenic and pathogenic microorganisms predominate. The aim of the work was a comprehensive study of the oral microflora of late premature infants at the age of three years and the introduction of psychological and pedagogical dental prevention, which will improve the state of the oral microflora. Materials and methods. The work uses microbiological, biochemical and molecular genetic research methods, including electron microscopy and clinical methods. Mixed microbial biofilms obtained from the saliva of the examined children were seeded for microflora and antibiotic sensitivity of this microflora. Conclusion. Differences in the composition of the oral microbiota of healthy children and children born late prematurely were revealed. The effectiveness of psychological and pedagogicaldental care and the improvement of microflora after 6 months of activities have been proven.
Key words: dental diseases, diseases, children, microbiota, oral cavity, preterm baby, biofilms.
В настоящее время микрофлора играет огромную роль в стабильности гомеостаза организма, влияющего на развитие ребенка, его физиологию и морфогенез. С нарушениями состава и функционирования микрофлоры связывают развитие различных соматических заболеваний. Установлено, что колонизация слизистой ротовой полости рядом услов-нопатогенных и патогенных бактерий в значительной степени повышает вероятность возникновения не только местных патологических изменений, но и служит причиной формирования ряда различных соматических заболеваний. В значительной степени это связано с нарушением микробных биоплёнок, особенно у детей, рожденных поздними недоношенными [1].
Трудности в работе с незрелыми микробиотами недоношенного ребенка связаны, прежде всего, с отсутствием современных программ, позволяющих суммировать и анализировать большие объемы различной информации, полученной в результате исследования микроорганизмов классическими мик-
робиологическими, биохимическими и современными молекулярно-генетическими методами [2]. Кроме того, необходима разработка новых экспериментальных подходов, позволяющих выделить смешанные микробные биопленки, изолировать и идентифицировать входящие в их состав различные ранее не культивируемые бактерии. Условия, необходимые для роста таких бактерий, пока считаются невоспроизводимыми в лабораторных условиях [3].
Несмотря на очевидную актуальность, проблема распространения условно-патогенных и патогенных бактерий при различной патологии, в том числе, у детей, рожденных раньше срока гестации, остается неизученной. Оценка микробиоты поздних недоношенных детей и проведение психолого-педагогических профилактических мероприятий в полости рта стоматологом играет важную роль в формировании микробиоты. Определение состава биопленок поздних недоношенных детей является актуальным и имеет не только теоретическое, но и практическое значение.
В последние годы по результатам мировых исследований расширилось представление о микрофлоре организма недоношенных детей и многообразии её функций. С каждым годом появляются новые данные о том, какие именно микроорганизмы отвечают за определённый процесс взаимодействия микро-биоты в естественных условиях, а также о роли микробных ассоциаций в патогенезе инфекционных и неинфекционных заболеваний [4]. Одновременно все больше различных заболеваний связывают с нарушениям состава и функционирования микрофлоры [6]. Среди них, такие патологические состояния как сахарный диабет тип 2, ожирение, атопический дерматит, псориаз, аллергические реакции и бронхиальная астма [7].
Показано, что бактерии доминируют среди микроорганизмов, составляющих микрофлору полости рта. Приблизительно 340 видов бактерий, обитающих в полости рта, культивированы, описаны и имеют видовое имя [8].
С пониманием важности микрофлоры в развитии организма и формировании предрасположенности к широко распространённым патологическим состояниям, возник большой интерес к изучению микрофлоры, в том числе у детей. Большая часть исследований носит локальный характер, охватывая такие хорошо известные проблемы, как кариес зубов у детей и подростков, аллергические реакции, атопический дерматит, детское и подростковое ожирение, без акцента на особенности этих заболеваний у недоношенных детей. В то же время, микрофлора при других заболеваниях остается практически неизученной и лишь единичные работы посвящены исследованию нормальной микробиоты ротовой полости поздних недоношенных детей [9, 10].
Цель исследования - оценка состава и свойств смешанных микробных сообществ микробиоты слюны поздних недоношенных детей, под воздействием психолого-педагогических стоматолониче-ских профилактических мероприятий.
Материалы и методы
Данные о состоянии здоровья полости рта получали от лечащих врачей и медицинского персонала учебных заведений соответственно. Материал собирали у детей, у которых на момент проведения исследования по данным последнего осмотра в ходе лечения основного заболевания или профилактического осмотра не было выявлено стоматологических заболеваний. К исследованию допускались дети, проходившие в прошлом лечение по поводу заболеваний полости рта и успешно завершившие его. Из исследования исключались пациенты, проходящие ортодонтическое лечение. В результате, материал для исследования был собран в клинике Медицинского университета имени Карла Марциновского у 200 детей в возрасте от 3 до 7 лет: 3 года - 48 (24 %) пациентов, 4 года - 37 (18,5 %) детей, 5 лет -26 (13 %), 6 лет - 45 (22,5 %) детей, 7 лет - 44 (22 %) обследованных. Дети были распределены по тендерному признаку следующим образом: 120 мальчиков (60 %) и 80 девочек (40 %). Реабилитационная программа стоматологического профиля была разработана совместно с к.м.н. Рыбалко О. Н. кафедры педиатрии, физиотерапии и курортологии под руководством профессора, д.м.н. Каладзе Н. Н. Родители и дети обучались базовым методикам орофациальной релаксации перед посещением стоматолога и методикам гигиены полости рта по Фонеса и Басс.
Нестимулированную слюну собирали в стерильные пластиковые контейнеры с широким горлышком, объёмом 15 мл, содержащие 1 мл тиогликолевой среды в течение одной-двух минут. Идентификацию микроорганизмов осуществляли на основе рутинных бактериологических методов с учётом тинкториальных, морфологических, культу-ральных и биохимических свойств с использованием Справочника Берджи по систематике бактерий, а также по секвенированной последовательности гена 16S рибосомальной РНК. Чувствительность бактерий к антибиотикам определяли на плотной питательной среде диско-диффузионным методом. На поверхность плотной питательной среды (агар Мюллер-Хинтон), засевали тест-микроб (бактериальную суспензию вносили в количестве, соответствующем стандарту мутности 0,5
по Mc Farland) и накладывали стандартные диски, содержащие различные антибиотики. Результат учитывали после 24-48 часовой инкубации. Определение чувствительности дрожжеподобных грибов рода Candida к противогрибковым препаратам проводилось отдельно. Для определения чувствительности дрожжеподобных грибов рода Candida к противогрибковым препаратам культуры, изолированные в ходе исследования из биоплёнок, культивировали на среде Сабуро с добавлением декстрозы (bio Merieux, Франция).
Результаты
В ходе анализа данных было установлено, что микробиота у поздних недоношенных детей после профилактики не идентична микробиоте поздних недоношенных детей, которым не проводилась психолого-педагогическая стоматологическая работа. Начальная микрофлора характеризуется обеднённым разнообразием культивируемых микроорганизмов - присутствие представителей 3-х Грамот-рицательных и 2-х Грамположительных родов, выявлением дрожжеподобных грибов и повышенной резистентностью к различным антибиотикам у 82 % детей. После профилактической стоматологической работы по оптимизации гигиены полости рта дрожжеподобные грибы отсутствовали, появились представители лакто и бифидофлоры у 67 % детей. Показано, что смешанные бактериальные сообщества, полученные из материала ротовой полости детей, обладают определённой стабильностью, воспроизводятся при пересевах и содержат культивируемые и пока не культивируемые бактерии, многие из которых не удаётся получить в виде чистых культур на использованных известных питательных средах.
В результате установлено, что во всех образцах исследуемые грамположительные кокки имели идентичную последовательность гена, кодирующего 16S рРНК, в частности распределились следующим образом: Streptococcus oralis - у 53 % детей, Streptococcus mitis - у 31 % детей, Streptococcus pneumoniae - 10 % детей, Streptococcus pseudopneumoniae - 6 % обследованных. Присутствие положительной флоры было минимальное: L. Acidophilus - у 10 % детей, L. Casei - у 5 % обследованных.
После проведения гигиенических стоматологических профилактических процедур были проведены последующие посевы через 6 месяцев и отмечалось значительное снижение патогенной микрофлоры: Streptococcus oralis - 33 % детей, Streptococcus mitis - у 21 % обследуемых, Streptococcus pneumoniae -у 5 % детей, Streptococcus pseudopneumoniae - у 1 % обследованных. Был отмечен рост положительной флоры: L. Acidophilus - 28 % пациентов, L. Casei - 17 % пациентов и L. Plantarum - 12 %, у остальных детей статус микробиоты остался без изменений.
Следует отметить значимый положительный эффект психолого-педагогических и гигиенических стоматологических профилактических мероприятий, в комплекс которых входили: санитарно-просветитель-ская работа; гигиенический уход за полостью рта; рациональное питание; системное и местное применение фторидов и пробиотиков. Следует остановиться на особенностях рекомендуемых реабилитационных методик. Метод Басс проводился следующим образом: щетинки щетки, расположенные под углом 45 градусов к оси зуба, частично проникают в десневую
бороздку и межзубные пространства. Чистку вестибулярной и оральной поверхностей зубов производят вибрирующими движениями без передвижения концов щетины. Жевательные поверхности чистят движениями вперед-назад. Данный метод позволяет хорошо очистить пришеечную область моляров. В свою очередь метод Фонеса проводился следующим образом: при сомкнутых зубных рядах щетинками щетки, расположенными перпендикулярно к вестибулярной поверхности зубов, выполняют круговые движения. Язычные и жевательные поверхности зубов очищают теми же движениями при несомкнутых зубных рядах поочередно на верхней и нижней челюсти. Метод Басс был для поздних недоношенных детей более понятным и показал снижение патологической флоры на 40 % после его применения, в сравнении с методом Фонеса, который патофлору снизил на 20 %.
Обсуждение
Изучение состава и свойств микроорганизмов из смешанных микробных сообществ слюны позволило получить новые данные о микрофлоре полости рта поздних недоношенных детей после стоматологической профилактики и детей, которым не проводились профилактические мероприятия. Полученные результаты исследования послужили основой для использования характеристики микро-биоты как патогенетического маркера развития патологических процессов инфекционного и не инфекционного генеза.
Определены подходы к выделению и получению в виде чистых культур бактерий, не поддающихся культивированию в стандартных условиях, дополняющие характеристику микробиоты ротовой полости.
Разработанная в ходе исследования психолого-педагогическая профилактическая программа стоматологической помощи позволяет оперативно суммировать, сохранять и анализировать информацию
для пациентов и проводить профилактику микробных популяций у поздних недоношенных детей.
Выводы
Проведенные исследования показали, что сформировались различия в составе микробиоты ротовой полости поздних недоношенных детей после профилактических стоматологических мероприятий и детей без проведенной профилактики. Бактерии микробиоты полости рта у детей без профилактических мероприятий содержат больше генов, контролирующих антибиотикоустойчивость.
Кроме того, в составе их микробиоты обнаружены ранее неизвестные бактерии, которые после комплексного изучения были идентифицированы как представители неизвестного ранее вида стрептококков. Геном этих бактерий содержит гены, присущие патогенным и условно-патогенным бактериям, в первую очередь, кодирующие экзотоксин - гемолизин, адгезины и антибиотикоустойчивость.
Обращает на себя внимание наличие большого числа генов, кодирующих устойчивость к широкому спектру лечебных препаратов, включая сравнительно редко применяемые пептидные препараты типа тейкопланина. Наличие большого количества генов устойчивости к различным препаратам у бактерий в микрофлоре полости рта у детей позволяет предполагать, что данный штамм перси-стирует и передается среди поздних недоношенных детей, которым не проводятся соответствующие гигиенические стоматологические мероприятия.
Следовательно, разработанная в ходе исследования психолого-педагогическая профилактическая программа стоматологической помощи позволяет проводить профилактику развития и распространения патогенных микробных популяций у поздних недоношенных детей.
Литература/References
2.
5.
6.
Sommer F., Biickhed F. The gut microbiota - masters of host devel- 7. opment and physiology. Nature Reviews Microbiology. 2013;(4):227-238.
Lewis K. Persisters, Biofilms, and the Problem of Cultivability. 8. Microbiology Monographs. Ed by Epstein S. S. Berlin: Springer, 2019. Epstein S. General Model of Microbial Uncultivability. Microbiology Monographs. Ed by Epstein S. S. Berlin: Springer. 2019. 9.
Harding M. W.. Lyriam L. R. M.. Howard R. I. Olson M. E. Can filamentous fungi form biofilms? Trends in Microbiology. 2019:17(11):475-480. ' 10.
Thoulouze M.-I., Alcover A. Can viruses form biofilms? Trends in Microbiology. 2021;19(6):257-262.
Harriott M.M., Noverr M.C. Importance of Candida-bacterial polymicrobial biofilms in disease. Trends in Microbiology. 2021;19(11):557-563.
Shillitoe E., Weinstock R., Kim T., Simon H., Planer J., Noonan S., Cooney R. The oral microflora in obesity and type-2 diabetes. Journal of Oral Microbiology. 2022;4. 10.3402/jom.v4i0.19013. Li X., Kolltveit K. M., Tronstad L. Systemic diseases caused by oral infection. Clinical Microbiology Reviews. 2020;13(4):547-558.
De Benedetto A., Agnihothri R., McGirt L. Y., Bankova L. G., Beck L. A. Atopic dermatitis: a disease caused by innate immune defects? The Journal of Investigative Dermatology. 2019;129(1):14-30. Neibuhr M., Scharonow H., Gathmann M., Mamerow D., Werfel T. Staphylococcal exotoxins are strong inducers of IL-22: A potential role in atopic dermatitis. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 2020;126(6):1176-1183.
Сведения об авторе:
Вальдхайм Татьяна Александровна - Факультет последипломного образования Маиуса, Медицинский университет имени Карла Марциновского, 61701, ул. Фреды, 10, г. Познань, Польша, E-mail: tetyana.waldheim0@gmail.com
Information about author:
Waldheim T. A. - https://orcid.org/0000-0002-0519-9886
Конфликт интересов. Автор данной статьи заявляет об отсутствии конфликта интересов, финансовой или какой-либо другой поддержки, о которой необходимо сообщить.
Conflict of interest. The author of this article confirmed financial or any other support with should be reported.
Поступила 27.07.2022 г.
Received 27.07.2022
