CC BY
44
АБИСИЛИН ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА АБИСИЛИНОО 29
УДК 616.24-006.6-033.2:616-036.87:615.277.3
Л.А. Лацерус1, Н.М. Пинигина1, А.М. Козлов2, А.Ю. Барышников2 ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА АБИСИЛИН®
НА ПРОЦЕСС ИСКУССТВЕННОГО РЕЦИДИВИРОВАНИЯ И МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ КАРЦИНОМЫ ЛЕГКОГО ЛЬЮИС МЫШЕЙ
1ООО «Инитиум-Фарм», Москва 2РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
Контактная информация
Лацерус Людмила Анатольевна, кандидат медицинских наук, генеральный директор ООО «Инитиум-Фарм» адрес: 142000, Московская область, г. Домодедово, Каширское ш., д. 7, тел.: +7(499)-722-2357 e-mail: initium-pharm@yandex.ru
Статья поступила: 24.11.2009, принята к печати 25.03.2010.
Резюме
Проведено экспериментальное изучение влияния препарата Абисилин®, содержащего в своем составе природный комплекс терпеноидов хвойных деревьев, на развитие процесса искусственного рецидивирования и метастазирования LLC. Показано, что препарат Абисилин® обладает способностью ингибировать процесс искусственного рецидивирования LLC и подавлять метастазирование рецидивных опухолей на 25-46 %. Наилучший эффект достигался при пероральном и местном применении препарата в течение 7-10 дней в дозе 100-120 мг/кг. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о перспективной возможности использования препарата Абисилин® как агента, способного повысить эффективность хирургического лечения злокачественных новообразований.
Ключевые слова: Абисилин®, перевиваемые опухоли, антирецидивная и антиметастатическая активность.
L.A. Latseruz1, N.M. Pinigina1, A.M. Kozlov2, A.Yu. Baryshnikov2 THE INFLUENCE OF ABISILIN®
ON ARTIFICIAL RECURRENCE
AND METASTASIS FORMATION IN MICE WITH LLC
'Initium-Parm, LTD, Moscow
2N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center of RAMS, Moscow Abstract
In this study we have studied the effect of Abisilin® on the metastasis formation and artificial recurrence. We observed that Abisilin® inhibited the artificial recurrence and reduce the number of metastasis for about 25-46 %. Here we show that the local treatment with Abisilin® at the dose 100-120 mg/kg of body weight for 7-10 days or per os administration was more effective. Based on the data obtained, we conclude that Abisilin® could be used as an agent to increase the efficacy of surgical treatment of malignant tumors.
Key words: Abisilin®, transplanted tumor, anti-metastatic and anti-recurrent activity.
Введение
Лекарственный пероральный препарат Абисилин® содержит в своем составе природный комплекс терпеноидов, полученный из хвойных деревьев семейства Pinaceae [6]. Субстанция препарата (Абисил - пихты сибирской терпены) и его лекарственная форма для местного и наружного применения, включенные в Государственный реестр лекарственных средств, проявляют антимикробные, противовоспалительные, ранозаживляющие, иммуномодулирующие и другие фармакологически значимые эффекты [1; 5]. При использовании лекарственной формы Абисила для местного и наружного применения в лечении гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей и кожи было установлено, что это средство обладает многонаправленным действием, обеспечивающим снижение болевых ощущений, предотвращение бактериального загрязнения, ускоренное завершение стадии воспаления и стимуляцию процессов регенерации тканей [4].
Применение Абисила при разных путях введения может оказывать эффективное действие в профилактике и лечении гнойно-септических осложнений, которые наиболее часто возникают у он-
кологических больных со сниженными компенсаторными возможностями различных органов и систем. В связи с этим представляется целесообразным изучить его влияние на развитие опухолевого процесса при моделировании на животных.
Цель настоящего исследования - экспериментальное изучение влияния перорального терпе-ноидсодержащего препарата Абисилин® на процесс искусственного рецидивирования и метастази-рования LLC мышей.
Материалы и методы
В экспериментах использовали мышей линии C57BL6 и гибридов первого поколения BDFj с массой тела 20-25 г с подкожно трансплантированной LLC. Мышей получали из отдела лабораторных животных РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН и содержали на обычном рационе питания.
Все экспериментальные процедуры проводили в соответствии с международными правилами работы с животными.
Препарат Абисилин® применяли перорально (per os) и в некоторых опытах местно в виде масляного раствора в диапазоне доз от 60 до 400 мг/кг.
Влияние Абисилина® на сроки появления искусственных рецидивов LLC у мышей BDF t
N Воздействие Частота рецидивирования
Сутки опыта
7 10 12 14 17 21 26 30
1 Масло 0,1 мл/мышь 5/6 6/6 6/6 6/6 6/6 6/6 6/6 6/6
2 Абисилин® 400 мг/кг 5/7 5/7 5/7 5/7 6/6* 6/6 6/6 6/6
3 Абисилин® 100 мг/кг 3/7 3/7 3/7 3/7 3/7 3/7 3/7 3/7
Абисилин® и масло вводили per os всего 10 дней на 3-7 сутки и затем на 10-14 сутки; * 1 мышь пала раньше контрольной
Таблица 2
Влияние Абисилина® на рост искусственных рецидивов LLC у мышей BDFt
N Воздействие Торможение роста опухоли, %
Сутки опыта
7 10 12 14 17 21 26 30
1 Масло* 0,1 мл/мышь 36,0±64,7 104,0±117,8 394,8±367,2 677,3±495,2 1532,7±934,6 3207,7±1949,7 7337,7±3453,0 9455,0±3871,8
2 Абисилин® 400 мг/кг 86 31 47 2 +21 +3 3 15
3 Абисилин® 100 мг/кг 64 51 44 42 14 4 5 9
Абисилин® и масло вводили per os всего 10 дней на 3-7 сутки и затем на 10-14 сутки *в данной группе указан средний объем опухоли в мм3
Таблица 3
Влияние Абисилина® на продолжительность жизни животных при искусственном рецидивировании ЬЬС у мышей ВРБ;
N Воздействие п мышей, павших раньше контроля п мышей без рецидивов более 90 суток СПЖ, дни УПЖ, % Рецидив Частота метастазирования
Ср. масса, г ТРО, %
1 Масло 0,1 мл/ - 0/6 42,6±3,5 - 8,9 - 6/6 1+;2++; 3+++
2 Абисилин® 100 мг/кг 0/7 3/7 61,0±19,1 43 5,7 36 4/4 1++; 3+++
3 Абисилин® 400 мг/кг 1/7 0/7 35,9±8,7 16 5,8 35 6/6 2++:4+++
Абисилин® и масло вводили per os всего 10 дней на 3-7 сутки и затем на 10-14 сутки *- у 3/7 мышей рецидивы не возникли в течение 90 суток после трансплантации опухолевых клеток.
Таблица 4
Влияние перорально го и местного применения Абисилина® на рост искусственных рецидивов ЬЬС у мышей ВРБ1
N Воздействие Торможение роста рецидивной опухоли, %
Сутки опыта
10 13 16 18 22 25
1 Контроль* 8,1 181,3 847,0 1297,0 2704,0 4996,7
2 Операция + масло на шов 0,3 мл/мышь +39 +64 + 52 + 76 + 75 + 56
3 Операция + Абисилин® 100 мг/кг per os 78 67 47 23 10 8
4 Операция + Абисилин® 100 мг/кг (на шов 0,3 мл/мышь) + 95 +55 + 54 + 37 + 60 + 95
5 Операция + Абисилин® per os 100 мг/кг + на шов 0,3 мл/мышь 34 62 48 7 + 5 34
*в данной группе указан средний объем опухоли в мм’
Влияние перорально го и местного применения Абисилина® на метастазирование искусственных рецидивов LLC у мышей BDF|
N Воздействие Забой животных на 42 сутки Частота метастазирования
Опухоль Легкие
mCD г ТРО, % mCD мг ТРМ, %
1 Контроль 6,5±1,8 - 312,1+27,1 - 8/8Г1+;6++; 1+++1
2 Операция + масло на шов 0,3 мл/мышь 10,8±1,9 8 251,1+28,7 10 6/7Г1-;1+(++);5++1
3 Операция + Абисилин® per os 100 мг/кг 6,0±2,3 +8 271,3+38,1 13 9/9 Г3+;6++; 1+++1
4 Операция + Абисилин® 100 мг/кг 0,3 мл на шов 8,3±1,9 +27 225,4+11,4 28 7/8Г1-;1+;4+(++);2++1
5 Операция + Абисилин® 100 мг/кг per os + 100 мг/кг х 0,3 мл на шов 8,0±1,8 +23 235,2+19,9 25 10/10Г1+;3+; 1+(++); 5++1
Таблица 6
Влияние Абисилина® на динамику появления искусственных рецидивов LLC у мышей C57BL6
N Воздействие Сутки после прививки
6 10 13
1 Операция + масло per os 0,1 мл/мышь 2/7 (29 %) 7/7(100%) 7/7 (100 %)
2 Операция + Абисилин® per os 60 мг/кг 2/7 (29 %) 6/7 (86 %) 7/7 (100 %)
3 Операция + Абисилин® per os 120 мг/кг 1/7 (14 %) 4/7 (57 %) 5/7 (71 %)
4 Операция + Абисилин® per os 360 мг/кг 4/7 (57 %) 7/7(100%) 7/7 (100 %)
5 Операция + Абисилин® per os 360 мг/кг + наружно 0,3 мл/мышь 4/7 (57 %) 7/7(100%) 7/7 (100 %)
Таблица 7
Влияние Абисилина® на рост искусственных рецидивов LLC у мышей С57В1/6
N Воздействие Торможение роста опухоли, %
Сутки опыта
10 13 18 21 26
1 Операция + масло per os* 0,1 мл/мышь 158,0 964,6 2466,3 4260,0 7212,9
2 Операция + Абисилин® per os 360 мг/кг 15 +19 +42 +5 +10
3 Операция + Абисилин® per os 120 мг/кг 67 39 38 10 10
4 Операция + Абисилин® per os 60 мг/кг 40 38 28 15 9
5 Операция + Абисилин® per os 360 мг/кг + наружно 0,3 мл/мышь +39 +34 +1 15 3
*в данной группе указаны объемы р-ра препарата, мм3
Таблица 8
Влияние Абисилина® на рост и метастазирование искусственных рецидивов LLC у мышей С57В1/6
N Воздействие Забой животных на 33 сутки Частота метастазирования
Пали ранее Рецидив Легкие
mCD г ТРО, % mCD мг ТРМ, %
1 Операция + масло per os 0,1 мл/ мышь 1/7 5,7+2,0 - 449,7+146,1 - 7/7 1+;5++;1+++
2 Операция + Абисилин® per os 60 мг/кг 0/7 4,8+2,3 25 438,9+228,2 2 7/7 4+;1++; 2+++
3 Операция + Абисилин® per os 120 мг/кг 0/7 5,1+1,2 20 241,0+36,0 46 7/7 5+;2++
4 Операция + Абисилин® per os 360 мг/кг + наружно 0,3 мл/мышь 1/7 4,5+2,8 30 406,0+41,0 10 7/7 1+;3++; 3+++
В качестве растворителя использовали подсолнечное масло. Изучение влияния препарата Абисилин® на частоту и сроки появления экспериментальной опухоли и динамику последующего развития проводили после имплантации 1 х 105 клеток ЬЬС в 0,1 мл культуральной среды под хирургический шов, наложенный на предварительно произведенный разрез кожного покрова мыши [3].
После этого из общего числа животных формировали контрольную и терапевтические группы. В контрольной группе и в группе особей, получавших лечение, было от 7 до 10 животных. Оценку противоопухолевой, антирецидивной и антимета-статической активности препарата Абисилин® проводили в соответствии с методическими рекомендациями, изложенными в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [2; 3]. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием критерия Стьюдента, различия считали достоверными при р<0,05.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных исследований установлено, что применение Абисилина® перорально в дозах 400 и 100 мг/кг в течение 10 дней (пятидневный курс, затем двухдневный перерыв и еще один пятидневный курс) оказывало выраженное влияние на частоту и сроки появления искусственных рецидивов ЬЬС после трансплантации под шов опухолевых клеток (табл. 1). При этом антиреци-дивный эффект терапии был выражен в значительно большей степени в случае использования препарата в дозе 100 мг/кг.
Так, в группе животных, получавших Аби-силин® в дозе 400 мг/кг, у 2 из 7 рецидивы появились только спустя 14 дней после трансплантации под хирургический шов опухолевых клеток, в то время как в группе животных, получавших Абиси-лин® в дозе 100 мг/кг, к 12 суткам опыта рецидивы появились у 3 из 7 животных, а у оставшейся части искусственные рецидивы не были обнаружены в течение 90 дней наблюдения. Изучение динамики развития рецидивных опухолей на фоне проведенного лечения препаратом Абисилин® показало наличие ингибирующего влияния терапии в случае индукции искусственных рецидивов трансплантацией под шов 1х105 опухолевых клеток, которое продолжалось в течение 10-12 дней после начала эксперимента (табл. 2).
Применение Абисилина® в разовой дозе 100 мг/кг в течение 10 дней увеличивало среднюю продолжительность жизни животных после индукции искусственных рецидивов после трансплантации 1х105 опухолевых клеток на 43 % по сравнению с контролем (табл. 3). Контрольные животные прожили в среднем 42,6±3,5 дня; животные, леченные Абиси-лином® в дозе 100 мг/кг - 61,0±19,1 день. Применение препарата по той же схеме в дозе 400 мг/кг было менее эффективно. Для усиления антирецидивного эффекта в ряде экспериментов Абисилин® применяли перорально и местно, нанося его на шов, под который трансплантировали опухолевые клетки.
Для перорального применения использовали дозу 100 мг/кг, местно применяли препарат в той же дозе, разведенной в 0,3 мл подсолнечного масла. Перорально и местно препарат Абисилин® применяли с 1-го по 9-й дни после индукции искусственных рецидивов. Полученные результаты представлены в табл. 4 и 5.
Как видно из данных, представленных в табл. 4, пероральное применение Абисилина® умеренно ингибировало развитие рецидивов, в то время как ежедневное в течение 9 последующих дней нанесение масляного раствора Абисилина® на хирургический шов, наложенный на разрез кожного покрова, под который имплантировано 1*105 опухолевых клеток, также, как и в случае применения только растительного масла, значительно стимулировало развитие искусственных рецидивов. На фоне одновременного перорального и местного применения препарата отмечен небольшой ингибирующий эффект, однако выраженный в меньшей степени, чем в случае только его перорального применения. В табл. 5 представлены данные, полученные при вскрытии животных на 42-й день после индукции искусственных рецидивов, характеризующие влияние проведенной терапии на процесс метастазирования рецидивных опухолей.
Представленные данные свидетельствуют о способности Абисилина® при местном применении стимулировать развитие рецидивных опухолей на 27 %. Однако на этом фоне стимуляция метастазирования не выявлена. Более того, в группах животных, получавших Абисилин® местно, отмечено ингибирование процесса метастазирования рецидивных опухолей на 28 %, а в группе животных, получавших Абисилин® местно и перорально, - на 25 %. В серии экспериментов, выполненных с целью воспроизведения представленных выше данных, препарат Абисилин® вводили животным в течение 10 последующих дней, начиная сразу после индукции искусственных рецидивов. При этом были использованы 3 возрастающие дозы препарата: 60; 120 и 360 мг/кг. Животные одной группы получали одновременно большую дозу Абисилина® перорально и местно ежедневно в течение 10 дней в зону хирургического шва (табл. 6), пероральное применение Абисилина® ингибировало динамику появления искусственных рецидивов ЬЬС.
Так, у в контрольной группе на 6-е сутки рецидивы появились у 2/7 животных (29 %), а на 10-е - у всех 7/7 (100 %). В то же время в группе животных, получавших Абисилин® в дозе 120 мг/кг на 6-е сутки, рецидивы были выявлены у 1/7 мышей, а на 10-е сутки - у 4/7 (соответственно в 14 и 57 % случаев). Более того, даже на 13-е сутки рецидивы были выявлены только у 5/7 (71%) случаев. Применение Абисили-на® в меньшей и большей дозах было менее эффективно. Дополнительное местное применение препарата не повышало антирецидивного эффекта терапии. Проведенное лечение Абисилином® в дозе 120 мг/кг не только ингибировало динамику появления искусственных рецидивов, но и тормозило темпы роста развившихся рецидивных опухолей (табл. 7).
На 10-18-е сутки средний объем рецидивных опухолей мышей, получавших Абисилин® в дозе 120 мг/кг, был на 38-67 % меньше по сравнению с таковыми контрольных животных. Дополнительное местное применение Абисилина® не улучшало результаты лечения. Применение Абисилина® в дозе 120 мг/кг перорально в течение 10 последующих дней снижало интенсивность метастазирования рецидивных опухолей на 46 % (табл. 8). Средняя масса легких, пораженных метастазами, у животных, получавших Абисилин® в дозе 120 мг/кг, была равна 241,0±36,0 мг по сравнению с 449,7±146,1 мг у таковых контрольной группы. Таким образом, полученные в эксперименте результаты, свидетельствуют о том, что препарат Абисилин® обладает способностью умеренно ингибировать процесс рецидивирования и метастазирования опухолей.
Выводы
1. В экспериментах установлено, что препарат Абисилин® обладает способностью ингибировать частоту искусственного рецидивирования КЬС и снижает темпы роста развившихся рецидивных опухолей (ТРО=38-67 %).
2. Выявлено ингибирование процесса метастазирования рецидивных опухолей карциномы легкого Льюис при пероральном и местном применении препарата Абисилин® (ТРМ=25-4б %).
Литература
1. Государственный реестр лекарственных средств. - М., 2004. - Т. 1. - С. 93.
2. Зуева Е.П., Козлов А.М., Герасимова Г.К. и др. Методические указания по доклиническому изучению средств, обладающих способностью ингибировать процесс метастазирования и повышать эффективность цитостатической терапии опухолей. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под ред. Хабриева Р.У. - М.: Медицина, 2005. - С. 674-82.
3. Козлов А.М., Перетолчина Н.М., Киселев С.М. и др. Методические рекомендации по доклиническому изучению средств, способных ингибировать рецидивирование злокачественных опухолей. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под ред. Хабриева Р.У. - М.: Медицина, 2005. - С. 669-74.
4. Лацерус Л.А., Носков А.П., Пинигина Н.М. Биологическая активность и клиническая эффективность нового фитопрепарата «Абисил-1» // Современные проблемы педиатрии и детской хирургии: Материалы Сибирско-Американской научно-практической конференции. 7-8 октября 1998 г. - Иркутск: Изд-во Иркут. ун-та, 1998. - С. 233-8.
5. Пинигина Н.М., Лацерус ЛА., Брайн Э.В. и др. Средство «Абисил-1», обладающее противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активностью. Патент РФ №2054945 от 27.02.1996. PCT/RU2008/000147. Pub.No.: W0/2009/113902, 17.09.2009. Pinigina N.M., Latserus L.A., Baryshnikov F.U. et. al. Antitumoral terpenoid pharmaceutical composition “Abisilin” exhibiring angiogenesis-inhibitig action.
Издание 2-е, переработанное и дополненное
ЭНЦИКЛОПЕДИЯ
КЛИНИЧЕСКОЙ
ОНКОЛОГИИ
Готовится к печати Издательская группа РОНЦ
