ВЛИЯНИЕ ПРЕНАТАЛЬНОЙ ГИПОКСИИ НА ХАРАКТЕР НЕЙРОТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА ТОЛУОЛА У КРЫС Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Токсикологический вестник (121)

Бюллетень

Российского регистра потенциально опасных химических и биологических веществ

►

новые сведения о токсичности и опасности химических и биологических веществ

УДК:615.9(547.533):616-001.8

Влияние пренатальной гипоксии на характер нейротоксического эффекта толуола у крыс

Рассматриваются вопросы изменений биоэлектрической активности коры головного мозга белых крыс после ингаляционного воздействия толуола. Установлены особенности нарушений показателей ЭЭГ при интоксикации у животных с нормальным и нарушенным течением эмбрионального развития. Показано, что острое гипоксическое воздействие на ранних этапах органогенеза (13-14-й день беременности) приводит к выраженным изменениям биопотенциалов головного мозга у животных, подвергавшихся в половозрелом возрасте воздействию толуола, являясь при этом отягощающим фактором. Вероятно, этот эффект связан с нарушением баланса процессов торможения и возбуждения подкорковых нейронов зрительной зоны коры головного мозга крыс.

Ключевые слова: толуол; белые крысы; электроэнцефалография; прена-

В.А Вокина, Л.М. Соседова, Е.В. Катаманова, В.С. Рукавишников, О.М. Журба

Ангарский филиал ФГБУ «ВСНЦЭЧ» СО РАМН - НИИ медицины труда и экологии человека, 665827, г. Ангарск

шальная гипоксия.

Введение. Современный человек на протяжении всей жизни подвержен влиянию множества вредных нейротропных факторов, при этом степень выраженности нарушений ЦНС может варьировать в зависимости от исходного состояния его здоровья. Высокая чувствительность отдельных лиц к действию нейротоксикантов может быть определена генетическими особенностями, наличием каких-либо хронических заболеваний и т.п. Нами выдвинута гипотеза о внутриутробной гипоксии как факторе возможного риска формирования нарушений нервной системы при последующем воздействии токсикантов в процессе онтогенеза человека. То есть, последствия внутриутробной гипоксии могут оказывать влияние на течение нейро-интоксикации у взрослого организма. Известно, что гипоксические повреждения в период эмбриогенеза приводят к гибели или увеличивают риск возникновения психических и нейродегенеративных заболеваний с возрастом [2, 5]. Одним из распространенных веществ, действующих преимущественно на нервную систему, является толуол, входящий в состав многочисленных потребительских товаров и применяемый в качестве растворителя во многих технологических процессах. В связи с этим возможно загрязнение им атмосферного воздуха и воздуха производственных и жилых помещений и, как следствие, возникновение острых и хронических отравлений [3, 6]. Целью настоящей работы являлось изучение подострого

влияния толуола на уровне 150 ррт на биоэлектрическую активность головного мозга белых крыс, подвергавшихся острой пренатальной гипоксии.

Материалы и методы исследования. Опыты поставлены на 30 нелинейных белых крысах-самках и 60 самцах их половозрелого потомства, массой 180-240 г. Фиксированный срок беременности определяли общепринятым методом по наличию сперматозоидов во влагалищных мазках. Беременным самкам подкожно вводили раствор нитрита натрия на 13-14-й день беременности в дозе 50 мг/кг. Самки контрольной группы получали инъекции физиологического раствора в том же режиме. За два дня до предполагаемой даты родов крыс рассаживали в отдельные клетки. Крысята всех групп были отсажены от матерей и разделены по полу на 30-й день жизни. В дальнейшем из полученного потомства в эксперименте использовались только самцы. В возрасте 2,5-3 месяцев часть контрольных животных и животных с пренатальной гипоксией (по 20 крыс), подвергали динамическому ингаляционному воздействию толуола в затравочных камерах объемом 200 л, в дозе 560 мг/ м3, 4 часа в день, 5 дней в неделю, в течение 4 недель. В итоге было сформировано 3 группы крыс: 1) животные без пренатальной гипоксии, подвергавшиеся воздействию толуола в половозрелом возрасте; 2) крысы, перенесшие острую гемическую гипоксию на 13-14-й день эмбрионального развития и подвергавшиеся воздей-

Вокина Вера Александровна (Vokina Vera Aleksandrovna), младший научный сотрудник лаборатории токсикологии, Ангарский филиал ФГБУ СО РАМН - НИИ медицины труда и экологии человека, [email protected]

СвсЙоВэчариса Михайловна (Sosedova Larisa Michailovna), зав. лабораторией токсикологии, д.м.н., профессор, Ангарский филиал ФГБУ СО РАМН - НИИ медицины труда и экологии человека, [email protected]

Катаманова Елена Владимировна (Katamanova Elena Vladimirovna), зам. главного врача по медицинской части, к.м.н., Ангарский филиал ФГБУ «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН - НИИ медицины труда и экологии человека, [email protected]

Рукавишников Виктор Степанович - директор института, член-корр. РАМН, д.м.н., профессор, Ангарский филиал ФГБУ «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН - НИИ медицины труда и экологии человека, [email protected]

Журба Ольга Михайловна (Ghurba Olga Mikhailovna), зав. лабораторией физико-химических методов исследования, к.б.н., Ангарский филиал ФГБУ «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН - НИИ медицины труда и экологии человека, [email protected]

47

и юл ь

- август 201 3

ссон

ствию толуола в половозрелом возрасте; 3) контрольные животные.

Исследование ритмической электрической активности коры головного мозга животных проводили через 4 недели после окончания экспозиции. Стереотакси-ческие манипуляции выполняли с использованием координат стереотаксическо-го атласа мозга взрослой крысы [12] под анестезией (кетамин внутрибрюшинно 0,15 мл/100 г, рометар внутрибрюшинно 0,075 мл/100 г массы). Электроды вживляли в сенсомоторную и зрительную зоны коры головного мозга белых крыс. Индифферентный электрод вживляли в носовые кости. Регистрацию ритмической электрической активности коры головного мозга белых крыс проводили на 3-4-й день после вживления электродов с использованием многофункционального комплекса для исследования ЭЭГ и ВП «Нейрон-Спектр-4» (ООО «Нейрософт», Россия). Определяли мощность отдельных диапазонов, деление на диапазоны проводили в пределах следующих значений частот: § - диапазон 0,5^,0 Гц, 0 - диапазон

4,0-8,0, а - диапазон 8,0-3,0, 01 - диапазон 13,0-22,0 и \к - диапазон - 22,0-32,0 Гц [2], а также оценивали зрительные и слуховые вызванные потенциалы (ЗВП и СВП).

Животные содержались в стандартных условиях вивария со свободным доступом к воде и пище. Все исследования проводили в соответствии с «Правилами лабораторной практики» (Приказ Минздравсоцразвития России от 26 августа 2010 г. № 708н).

Полученные материалы исследований обработаны методами непараметрической (метод Краскела-Уоллиса и критерии Манна-Уитни) статистики с использованием ППП Statists 6.0. (StatSoft) (лиц. № AXXR004E642326FA). Результаты представлены в виде медианы и интерквантильного интервала.

Результаты и обсуждения. Анализ амплитудных показателей основных диапазонов ЭЭГ в отведении из проекции зрительной зоны коры в фоновой записи показал, что у белых крыс после интоксикации толуолом (группа №1) выявлено

статистически значимое повышение индексов В- и 01-ритмов и снижение индекса

S-ритма по сравнению с контролем (табл. 1). В отведении из проекции сенсомотор-ной зоны коры статистически значимых изменений не было выявлено.

В пробе со СВП у животных данной группы выявлено снижение амплитуды пика N1 в 8,7 раза и пика Р3 в 4 раза по сравнению с группой контроля (р = 0,02 и р = 0,04 соответственно, табл. 2). При проведении проб с применением ЗВП наблюдалось снижение амплитуды пика Р2 по сравнению в данным показателем в контрольной группе (р = 0,04, табл. 2).

При воздействии толуола на крыс, нормальное течение эмбриогенеза которых было нарушено гипоксией (группа №2), статистически значимых изменений амплитудных показателей основных диапазонов ЭЭГ в отведениях со зрительной и сенсомоторной зон в фоновой записи по сравнению с группой контроля выявлено не было. Однако анализ результатов при проведении стимуляционных проб показал, что после интоксикации толуолом у животных, подвергавшихся внутриутробной гипоксии, наблюдались изменения показателей ЗВП и СВП. Следует отметить, что действие толуола на животных этой группы привело к более выраженному повышению некоторых показателей, по сравнению с результатами у животных с нормальным течением эмбрионального развития. Латентность пиков N1, P2, N2 и P3 как слухового, так и зрительного ответа была в 1,4-2,3 раза выше соответствующих показателей животных контрольной группы и группы крыс с нормальным течением эмбрионального развития, подвергавшихся воздействию толуола. При этом амплитуда пика N1 слухового ответа и N1 и Р3 зрительного ответа значительно превышали показатели животных группы №1 «толуол» (р < 0,05).

Опасность развития последствий воздействия толуола на ЦНС недостаточно изучена, хотя данный токсикант широко используется на промышленных предприятиях. Согласно результатам исследований 70-80-х годов по изучению влияния толуола на изменение электроэнцефалограммы (ЭЭГ) и ритмов сна, проведенных при высоких уровнях воздействия (свыше 3750 мг/м3) наблюдалась начальная фаза возбуждения с последующей фазой подавления активности коры головного мозга, приводящей к коме [13, 14]. При высоких уровнях воздействия (7500-15000 мг/м3) отмечалась судорожная активность мозга. Дозозависимое влияние толуола (5300 и 4500 мг/м3) на вызванные потенциалы и ЭЭГ выявлено Rebert с соавт. при исследовании в различных зонах коры головного мозга крыс. Авторами отмечено, что при вдыхании паров данного токсиканта отмечалось усиление высокочастотных

осцилляций, особенно после вспышек света, а также возрастание мощности 0-рит-ма. Полученные в результате настоящего исследования данные о влиянии толуола на показатели ЭЭГ белых крыс свидетельствуют о том, что нейротоксический эффект данного соединения проявляется при относительно низких концентрациях (560 мг/м3). При этом на последствия интоксикации оказывает влияние течение пренатального периода развития. Так, воздействие толуола на крыс с нормальным

течением эмбрионального развития характеризовалось повышением индекса 0- и

01-ритмов в фоновой записи в проекции зрительной зоны коры и отсутствием значимых изменений показателей при проведении стимуляционных проб. В то время как внутриутробная гипоксия приводила к выраженным изменениям биопотенциалов головного мозга у животных, подвергавшихся воздействию толуола, являясь

48

при этом отягощающим фактором. Наиболее выраженные изменения показателей зафиксированы при проведении проб с применением ЗВП и СВП. Так, экспонированные крысы с нарушенным течением эмбриогенеза демонстрировали значительное увеличение латентности пиков N1, P2, N2 и P3 по сравнению с группой животных с нормальным течением эмбриогенеза, подвергавшихся воздействию толуола. Наблюдаемые изменения биоэлектрической активности могут служить подтверждением нарушений корково-подкоркового взаимодействия и, тем самым, отражать снижение когнитивных функций у животных [2, 4]. Следует отметить, что изучению ототоксичности данного соединения были посвящены многочисленные исследования. Вызванные толуолом нарушения слуха у крыс были описаны в работах Pryor (1991), Li (1992), Loquet (1999), Fechter (2007), при этом уровень воздействия токсиканта был значительным и составлял около 1500-7600 мг/м3 [8, 9, 10, 11]. Возможно, нарушение биоэлектрической активности головного мозга крыс при регистрации слуховых вызванных потенциалов обусловлены в том числе и поражением слухового нерва при интоксикации толуолом в исследуемой дозе.

Заключение. Таким образом, выдвинутая гипотеза подтверждена результатами проведенного исследования, согласно которым чувствительность животных к действию толуола изменяется при нарушении течения их эмбрионального развития. Экспозиция толуола в исследуемой дозе (560 мг/м3) оказала влияние на параметры компонентов слуховых и зрительных вызванных потенциалов только у особей, подвергавшихся гипоксическому воздействию в пренатальный период. Полученные результаты экспериментального моделирования свидетельствуют, что острое гипоксическое повреждение головного мозга в ранний период органогенеза (13-14-е эмбриональные сутки) является фактором, отягощающим течение интоксикации и повышающим чувствительность крыс к действию толуола.

Работа выполнена в Ангарском филиале Федерального государственного бюджетного учреждения «Восточно-Сибирский научный центр экологии человека» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук - Научно-исследовательском институте медицины труда и экологии человека.

Токсикологический вестник (121)

Таблица 1

Фоновые показатели спектральной мощности ритмических составляющих биоэлектрической активности разных зоны коры головного мозга (Ме (Ь0;У0)

№ групп Вариант исследования Средняя амплитуда, мкВ Характеристика диапазонов, %

5 е а Р1 Р2

Сенсомоторная кора

1 Толуол 91 (80; 112) 76(74; 82) 15 (12; 18) 5 (3; 5) 2 (1; 3) 2 (1;2,5)

2 Гипоксия + толуол 119 (79;161) 82 (70; 88) 13 (9; 16) 3 (2; 6) 1 (1; 3) 1 (0; 3)

3 Контроль 111 (89; 124) 83 (82; 89) 12 (8; 13) 3 (2; 3) 1(0,5;1) 1(0,5;1)

Зрительная зона

1 Толуол 82 (69; 102) 82 (73; 87)* 11 (10;16)* 4 (2,5;6) 1(1; 3)* 1 (1; 3)

2 Гипоксия + толуол 87,5(70; 182) 86 (81; 90) 10 (7; 13) 2 (2; 3) 1 (0; 2) 1 (0; 2)

3 контроль 89 (78; 138) 88 (86; 90) 8 (7; 9) 3 (2; 3) 1(0,5;1) 1 (0; 1)

Примечания. * - различия статистически значимы по сравнению с контролем при р < 0,05; # - различия статистически значимы по сравнению с группой «толуол» при р < 0,05.

Таблица 2

Показатели слуховых и зрительных вызванных потенциалов головного мозга белых крыс (Ме (Ь0;У0)

№ Характеристика диапазонов

N1 Р2 N2 Р3

исследования Латентность, мс / Амплитуда, мкВ

Слуховые вызванные потенциалы

1 Толуол 81 (77; 83) 4 (1; 14)* 120 (113; 126) 8 (2; 26) 151 (148; 175) 18 (3; 26) 234 (212; 253) 4 (2; 25)*

2 Гипоксия + толуол 170 (134; 198)#* 20 (7; 37)# 227 (205; 261)#* 11 (4; 36) 296 (251;309)#* 16 (11; 28) 336 (313; 341)#* 21 (6; 37)

3 Контроль 72 (71; 80) 35 (8; 70) 111(108; 119) 11 (5; 34) 151 (149; 166) 15 (11; 25) 238 (265; 257) 17 (15; 28,5)

Зрительные вызванные потенциалы

1 Толуол 72 (68; 83) 7 (4; 10,5) 107 (106; 116) 5 (2,5; 11)* 154 (144; 160) 5,5 (4,5; 9,5) 232 (221; 256) 8 (6; 13)

2 Гипоксия +толуол 167 (105; 202)#* 15 (10; 25)# 218 (178; 52)#* 6 (4; 17,5) 300 (238; 308)#* 8 (6; 18,5) 340 (302; 345)#* 18 (11; 30,5) #

3 Контроль 72 (68; 82) 19 (5; 34) 108 (105; 120) 17 (12,5; 23) 155 (143; 168,5) 5 (4; 16) 205 (198; 233) 19 (3,5; 31)

Примечание: над чертой - латентность (мс), под чертой - амплитуда (мкВ); * - различия статистически значимы по сравнению с контролем при р < 0,05; # - различия статистически значимы по сравнению с группой «толуол» при р < 0,05.

49

и юл ь

- август 201 3

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Власов В.Н. Сочетанное и изолированное воздействие толуола и общей вибрации на организм // Гигиена и санитария. - 2006. - № 2 - С. 63-65.

2. Гнездицкий В.В. Обратная задача ЭЭГ и клиническая электроэнцефалография: Учеб. для врачей. - Таганрог: ТРТУ 2000. - 640 с.

3. КаримоваЛ.К, Бакиров А.Б., Валеева Э.Т. и др. Смертность среди лиц трудоспособного возраста на нефтехимических производствах // Здравоохранение Российской Федерации. - 2009. - № 4. - С. 46-48.

4. Катаманова ЕВ., Якимова Н.Л., Соседова Л.М. Значимые критерии изменений ЭЭГ при экспериментальном ртутном повреждении нервной системы // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - № 4 (74).

- С. 32-36.

5. Пальчик А.Б. Шабанов Н.П. Гипоксически-ишеми-ческая энцефалопатия новорожденных: Руководство для врачей. - СПб.: «Питер», 2000. - 140 с.

6. Тимашева Г.В., Валеева О.В. Диагностическая значимость биохимических и гематологических изменений у работников нефтехимической промышлен-

ности // Медицина труда и промышленная экология. - 2009. -№ 11. - С. 20-23.

7. Cannon T., van Erg T., Rosso I. et al. Fetal hypoxia and structural brain abnormalities in schizophrenic patients, their siblings, and controls // Arch. Gen. Psychiatry. - 2002. - Vol. 59, № 1. - P. 35^1.

8. Fechter L. D., Gearhart C., Fulton S. et al. Promotion of Noise-Induced Cochlear Injury by Toluene and Ethylbenzene in the Rat // Toxicol. Sci. - 2007. - Vol. 98, № 2. -

P. 542-551.

9. Li H.S., Johnson A.C., Borg E., Hoglund G. Auditory degeneration after exposure to toluene in two genotypes of mice // Arch Toxicol. - 1992. - Vol. 66, № 6. - P 382-388.

10. Loquet G., Campo P., Lataye R. Comparison of toluene-induced and styrene-induced hearing losses // Neurotox. Teratol. - 1999. - Vol. 21, № 6. - P. 689-697.

11. Pryor G., Rebert C.., Kassay. K et al The hearing loss associated with exposure to toluene is not caused

by a metabolite // Brain Res. Bull. 1991. - Vol. 27. - P. 109-113.

12. Raxinos G., Watson C. The rat brain in stereotaxic coordinates. - Sydney, 1982. - 480 p.

13. Rebert Ch.S., MatteucciM.J., Pryor G.T. Acute electrophysiologic effects of inhaled toluene on adult male Long-Evans rats // Pharmacol. Biochem. and Behavior. -1989. - Vol. 33. - P. 157-165.

14. Takeuchi Y., Hisanaga N. The neurotoxicity of toluene: EEG changes in rats exposed to various concentrations // Brit. J Indus. Med. - 1977. Vol. 34. - P. 314-324.

50

Токсикологический вестник (121)

V.A. Vokina, L.M. Sosedova, E.V. Katamanova, V.S. Rukavishnikov, O.M. Ghurba Impact of prenatal hypoxia on the character of toluene neurotoxic effects in rats

Research Institute of Occupational Medicine and Human Ecology, Angarsk Branch of the East-Siberian Research Center for Human Ecology, Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, 665826, Angarsk, Russian Federation

Changes in bioelectrical activity of the cerebral cortex of albino rats following inhalation exposure to toluene were examined. Specific features of EEG disturbances in the cerebral cortex in animals with normal and abnormal embryonic development were established. It was shown that acute hypoxia at the early stages of organogenesis (gestation days 13-14) leads to significant changes in the brain biopotentials in toluene-exposed mature rats and presents an aggravating factor. It appears that this effect is associated with imbalance of excitation and inhibition processes in subcortical neurons in the rat visual cortex.

Key words: electroencephalography (EEG), prenatal hypoxia, toluene, white rats

Материал поступил в редакцию 09.11.2012 г.

УДК: 615.9 [567.242]: 591.111.1

цитохимическая оценка влияния этанола на активность ферментов в лейкоцитах крыс

Изучали динамику активности ферментов в лейкоцитах крови при воздействии 30 % водного раствора этанола, который вводили животным перорально в течение четырех недель, в ежедневной дозе 3 г/кг. Метаболические сдвиги, включающие ингибирование миелопероксидазы и активацию кислой фосфатазы в нейтрофилах, угнетение эстеразы в нейтрофилах и лимфоцитах, проявлялись в виде стабильной реакции на алкоголь, тогда как изменения активности дегидрогеназ в лимфоцитах и щелочной фосфатазы в нейтрофилах имели фазовый характер, показывая зависимость от продолжительности экспозиции.

Ключевые слова: этанол; токсические эффекты; лейкоциты; ферменты; цитохимия

М.В. Долгушин, Н.А. Малышкина, Г.Г. Юшков

НИИ биофизики ФГБОУ ВПО Ангарской государственной технической академии Министерства образования и науки РФ, 665830, Иркутская обл., г. Ангарск

Введение. Потребление алкоголя оказывает существенный ингибиру-ющий эффект на функциональный статус лимфоцитов и нейтрофилов, что, очевидно, связано со способностью этилового спирта и его метаболитов индуцировать нарушения иммунных и неспецифических реакций организма [5, 12, 16-18]. В этом смысле следует признать актуальной оценку характера обменных процессов в лейкоцитах крови в рамках исследования механизмов интоксикации этанолом.

Цитоэнзимохимический анализ нейтрофилов и лимфоцитов позволяет выявить диагностически значимые признаки отравления этиловым спиртом, которые могут быть использованы как в клинике (при алкогольной болезни), так и в эксперименте [1, 9, 13]. В настоящей работе была поставлена цель: изучить направленность изменений в цитохимических показателях активности ферментов у животных, подвергнутых многократному воздействию этанола в относительно низкой дозе. При этом предполагалось рассмотреть динамические особенности ранней клеточно-метаболической реакции на алкоголь, учитывая возможные различия в зависимости ферментативных сдвигов от продолжительности экспозиции.

Материалы и методы исследования. Для исследования были взяты белые неинбредные крысы-самцы массой 170-230 г, схема опыта и условия содержания крыс соответствовали «Правилам лабораторной практики» (Приказ Минздравсоцразвития РФ от 26 августа 2010 г. №708н). Все животные были разделены на две группы (контрольную и опытную), по 10 особей в

каждой. Животным из опытной группы ежедневно в течение четырёх недель перорально вводили 30%-ный водный раствор этанола в дозе 3 г/кг. Воздействующая концентрация алкоголя была выбрана как средняя (варьирующая в крепких спиртных напитках примерно от 20 до 40%). Животным из контрольной группы вводили дистиллированную воду. Забор крови для снятия показателей проводили через 7, 14 и 28 дней после начала введения вещества. Из взятых образцов крови готовили мазки, которые были использованы для цитохимического анализа активности миелопероксидазы (МП), щелочной фосфатазы (ЩФ) и кислой фосфатазы (КФ) в нейтрофилах, сукцинатдегидро-

геназы (СДГ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и (Х-глицерофосфатдегидрогеназы (ГФДГ) в лимфоцитах, неспецифической нафтол-AS-ацетатэстеразы (НЭ) в нейтрофилах и лимфоцитах. Реакцию на МП выявляли бензидиновым методом [10], на дегидрогеназы - методом Р.П. Нарциссова [8], на ЩФ и КФ -методом азосочетания по Берстону [14], на НЭ - методом азосочетания по Леффлеру [7]. Результаты определения активности дегидрогеназ и НЭ в лимфоцитах выражали в среднем числе гранул продукта реакции на клетку, а уровень активности МП, ЩФ и НЭ в нейтрофилах и КФ в нейтрофилах и лимфоцитах - в условных единицах среднего цитохимического коэффициента по L. Kaplow [7]. Статистическую достоверность выявленных метаболических сдвигов у животных опытной группы по отношению к контролю оценивали при помощи и-критерия (Манна-Уитни).

Результаты и обсуждение. Изменения в ферментативном статусе ней-

Долгушин Максим Валерьевич (Dolgushin Maxim Valerievich), канд. биол. наук, старший научный сотрудник отдела токсикологии НИИ биофизики ФГБОУ ВПО Ангарской государственной технической академии Министерства образования и науки РФ [email protected] Малышкина Наталья Александровна (Malyshkina Natalia Aleksandrovna), мл. научн. сотр. отдела токсикологии НИИ биофизики ФГБОУ ВПО Ангарской государственной технической академии Министерства образования и науки РФ

Юшков Геннадий Георгиевич( Yushkov Gennady Georgievich), канд. мед. наук, зав. отделом токсикологии НИИ биофизики ФГБОУ ВПО Ангарской государственной технической академии Министерства образования и науки РФ

51