CC BY
25
что L-Glu (10''°-10ц М) не влияет на жизнеспособность макрофагов, но, в то же время, снижает их способность к адгезии и распластыванию. При концентрации 1 мкМ L-Glu подавляет переваривающую функцию макрофагов при фагоцитозе авирулентного штамма S. typhimurium В 416/71: к шестому часу фагоцитоза более 45% фагоцитов в монослое было разрушено, в то время как в контроле этот показатель был равен нулю.
Заключение: полученные результаты свидетельствуют об универсальности действия L-глутаминовой кислоты в организме: она является регулятором важнейших функций нервной, эндокринной и иммунной систем.
Влияние полиреашвных антител на адгезию и миграцию клеток in vitro
Петрова Ю.И.
Институт биохимии им А.В.Папладииа НАН Украины Киев, Украина
Полиреактивные антитела (ПАТ), которые способны реагировать с широким спектром как собственных, так и чужеродных антигенов, содержатся в сыворотке нормальных, неиммунизированных животных и человека. Такая реактивность объясняется не только поликлональ-ностью сыворотки. В начале 80-х годов были впервые описаны моноклональные ПАТ. Клетки, синтезирующие ПАТ, часто экспрессируют на поверхности маркер CD5 и составляют значительный процент В-лимфоцитов. Функция ПАТ in vivo все еще не ясна.
Целью данной работы было изучить влияние ПАТ на миграцию как нормальных, так и злокачественных клеток in vitro и определить механизм такого влияния. Скорость миграции клеток определяется силой адгезивных взаимодействий с субстратом, осуществляемых интегринами, составом адгезивных комплексов и внешними сигналами от цитокинов и ростовых факторов. Задачей данной работы было выяснить, какой из перечисленных механизмов регуляции может подвергаться влиянию ПАТ.
Материалы н методы.
1. ПАТ были получены в отделе молекулярной иммунологии института биохимии НАН Украины. Остальные антитела (АТ), используемые в работе, являются коммерческими.
2. Нормальные человеческие фибробласты получали из кусочков кожи и культивировали не более 15 пассажей.
3. Иммуноцитохимическое окрашивание клеток, фиксированных на слайдах, проводили при помощи РАР-и АРААР-комплексов.
4. Миграцию изучали при помощи фагокинетического метода, адаптированного для 96-луночного планшета. Коллоидное золото получали путем восстановления AuCI04. Миграционные треки фотографировали и после сканирования вычисляли миграционные индексы.
5. Адгезию измеряли в динамике. Для каждой временной точки использовали отдельный 96-луночный планшет из бактериологического пластика с сорбированными на нем адгезивными белками. Количество клеток оценивали по включению МТТ.
Основные результаты. ПАТ стимулировали миграцию как нормальных, так и злокачественных клеток в дозо-зависимой манере. Миграция клеток человеческой фибросаркомы НТ1080 на фибронектине в присутствие Г1АТ усиливалась в 4.6 раза, а нормальных человеческих фибробластов — на 20%. ПАТ также усиливали миграцию слабомигрирующих клеток меланомы Бовеса. АТ к фибронектиновому рецептору подавляли миграцию нормальных человеческих фибробластов на 77%. При изучении адгезии клеток было показано, что ПАТ дозозависимо ослабляют адгезию различных типов клеток к фибронектину, коллагену I типа и фибриногену, что, по-видимому, является причиной усиления миграции. ПАТ не препятствовали связыванию интегринов с субстратом, т.к. не влияли на форму и распластывание клетки.
Важным компонентом адгезивного комплекса быстромигрирующих клеток (особенно злокачественных) является рецептор урокиназы. Оказалось, что урокина-за, как и ПАТ, усиливала миграцию НТ1080. Урокиназа, сорбированная на коллагене I типа, ослабляла адгезию клеток к коллагену. В присутствие ПАТ действие урокиназы как на адгезию, так и на миграцию усиливалось.
ПАТ не взаимодействовали с рецептором тромбо-цитарного ростового фактора (PDGF), т.к. оказывали противоположное воздействие на пролиферацию, адгезию и миграцию клеток.
Заключение: ПАТ способны усиливать миграцию клеток in vitro путем ослабления адгезии к субстрату. Т.о., ПАТ MOiyr служить дополнительным регуляторным механизмом при заживлении ран и при других процессах, требующих миграции клеток. В то же время, они могут являться фактором риска при метастазировании опухолей, т.к. уровень ПАТ в крови при некорых видах рака значительно повышен.
Изучение функциональной активности нейтрофилов мышей разного возраста
Плешакова О.В., Рассказова Е. А., Садовников В.Б.
Филиал Института биоорганической химии им. М.М. Шемякиной Ю.А. Овчинникова РАН Пущино, Московская область, 142292 Россия
Нейтрофилы играют важную роль в неспецифической защите организма от патогенных микроорганизмов, участвуют в противоопухолевом иммунитете. Недавно мы исследовали роль нейтрофилов как источника “рестрикционных протеаз”, участвующих в поддержании иммунологической толерантности [1]. Известно, что с возрастом повышается восприимчивость к инфекционным заболеваниям и частота аутоиммунных заболеваний. В этой связи представляется актуальным изучение изменения активности нейтрофилов при старении. Описанные в литературе
